重症哮喘并发沉默肺患者的急救护理

总结1例呈暴发性发作特征的重症哮喘并发沉默肺患者的急救护理体会。护理要点:针对患者病情急剧进展,需要及时识别沉默肺,缩短发作时间;采取紧急气管插管,实施集束化气道管理策略、精细化镇痛镇静、把握撤机时机及积极处理相关并发症等措施。经过7 d的抢救和护理,患者从ICU转入普通病房,入院第15天出院。随访3个月,患者遵医嘱规律用药,状况良好。

沉默信息调节因子2相关酶1在急性呼吸窘迫综合征/急性肺损伤中的研究进展

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)/急性肺损伤(ALI)是以不可控炎症反应导致肺泡屏障损伤为发病机制的临床疾病。肺部严重炎症反应时,肺泡内皮细胞和上皮细胞屏障破坏,引起微血管屏障通透性增加,进而导致肺水肿。因此,炎症介质的过度生成在破坏肺泡-毛细血管屏障和通透性中起着关键作用。沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)可通过去非组蛋白/组蛋白的去乙酰化作用影响细胞代谢、基因转录、细胞凋亡、炎症反应等生物学过程,减轻肺损伤严重程度。本文将近年来有关SIRT1在各种肺损伤模型下作用的研究进展进行综述,以期能够通过SIRT1对ARDS/ALI的治疗提供新思路。

脓毒症所致的ALI/ARDS患者血浆SIRT-1、syndecan-1的表达水平及其对预后的影响

目的分析脓毒症所致的急性肺损伤(ALI)/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者血浆沉默信息调节因子1(SIRT-1)、多配体蛋白聚糖-1(syndecan-1)的表达水平及其对预后的影响。方法选取ALI/ARDS患者106例作为ALI/ARDS组,统计所有患者入院1个月内的生存情况,并根据其生存情况将其分为生存组66例和死亡组40例。另选取健康志愿者50作为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测所有研究对象血浆SIRT-1、syndecan-1的表达,同时收集患者的急性生理学及慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)以及肺损伤评分(LIS)。结果ALI/ARDS组的血浆SIRT-1水平低于对照组,血浆syndecan-1水平高于对照组(P<0.05)。死亡组的血浆SIRT-1水平低于生存组,APACHEⅡ、LIS及血浆syndecan-1水平均高于生存组(P<0.05)。ALI/ARDS患者的血浆SIRT-1水平与syndecan-1、APACHEⅡ、LIS均呈负相关,血浆syndecan-1水平与APACHEⅡ、LIS呈正相关(P<0.05)。较高水平APACHEⅡ、LIS及血浆syndecan-1是ALI/ARDS患者死亡的危险因素,而较高水平血浆SIRT-1则是ALI/ARDS患者死亡的保护因素(P<0.05)。血浆SIRT-1、syndecan-1对ALI/ARDS患者预后的评估价值较高,曲线下面积分别为0.860(95%CI:0.791~0.930)、0.870(95%CI:0.800~0.940)。结论ALI/ARDS患者血浆SIRT-1水平呈异常低表达、syndecan-1水平呈异常高表达,两者的表达水平与患者的预后情况密切相关。

外周血沉默信息调节因子1表达对非小细胞肺癌患者预后生存结局的评估作用

目的分析外周血沉默信息调节因子1(SIRT1)mRNA和SIRT1蛋白表达水平对非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后生存结局的评估作用。方法选取2017年3月至2019年3月商丘市中心医院收治的105例NSCLC患者为研究对象(NSCLC组),另选取同时期来院进行健康体检的68例健康志愿者为对照组。外周血SIRT1 mRNA和蛋白表达水平分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot法检测。比较NSCLC组和对照组外周血SIRT1 mRNA和SIRT1蛋白表达水平。对NSCLC组患者进行随访,随访截止日期为2022年3月31日,并根据随访结果将NSCLC组患者分为生存组和死亡组。比较生存组和死亡组患者外周血SIRT1 mRNA和SIRT1蛋白表达水平及其他相关因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血SIRT1 mRNA和SIRT1蛋白表达水平对NSCLC患者预后生存结局的预测价值。采用Kaplan-Meier生存曲线分析患者生存情况,并采用Cox比例风险回归模型分析影响NSCLC患者预后的危险因素。结果NSCLC组患者外周血SIRT1 mRNA和SIRT1蛋白表达水平均高于对照组(P>0.05)。死亡组患者TNM分期(Ⅲ~Ⅳ期)占比、肿瘤直径、外周血SIRT1 mRNA及SIRT1蛋白水平均高于生存组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,外周血SIRT1 mRNA和SIRT1蛋白水平联合预测NSCLC患者预后生存结局的特异度、曲线下面积(AUC)分别为91.26%、0.821,均高于外周血SIRT1 mRNA、SIRT1蛋白单独预测(P<0.05)。SIRT1 mRNA高表达组患者生存率低于SIRT1 mRNA低表达组(P<0.05)。SIRT1蛋白高表达组患者生存率低于SIRT1蛋白低表达组(P<0.05)。Cox回归分析显示肿瘤直径、TNM分期(Ⅲ~Ⅳ期)、外周血SIRT1 mRNA、SIRT1蛋白水平均是影响NSCLC患者预后生存结局的危险因素(P<0.05)。结论外周血SIRT1 mRNA、SIRT1蛋白在NSCLC患者体内异常高表达,是影响NSCLC患者预后生存结局的危险因素。外周血SIRT1 mRNA、SIRT1蛋白对NSCLC患者预后生存结局具有一定的评估价值,且二者联合检测的评估价值更高。

尿毒症患者肺泡灌洗液SIRT1、IL⁃19的表达对肺功能预测评估价值

目的研究尿毒症患者肺泡灌洗液沉默信息调节因子1(SIRT1)、白细胞介素⁃19(IL⁃19)的表达对肺功能预测评估价值。方法纳入2020年1月至2022年12月徐州医科大学附属淮安医院收治的尿毒症患者102例作为研究组,匹配性别、年龄、体质量指数获取同期因排除肺部疑似病而进行过肺泡灌洗的非尿毒症患者102例作为对照组。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定肺泡灌洗液SIRT1和IL⁃19的表达水平,采用肺功能仪获取第1秒用力呼气容积(FEV1)、用力肺活量(FVC)、FEV1/FVC%、FEV1占预计值百分比(FEV1%pred),依据肺功能指标对尿毒症患者肺功能进行分级。观察比较研究组和对照组的肺泡灌洗液SIRT1、IL⁃19的表达水平及肺功能指标差异,以及不同肺功能分级的尿毒症患者肺泡灌洗液SIRT1、IL⁃19的表达水平差异,分析尿毒症患者肺泡灌洗液SIRT1、IL⁃19的表达水平与肺功能指标的相关性。结果研究组患者的肺泡灌洗液SIRT1、IL⁃19的表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(t=22.096、16.316,P<0.05)。研究组患者的肺功能指标FEV1、用力肺活量FVC、FEV1/FVC%、FEV1%pred均显著低于对照组,差异有统计学意义(t=7.800、14.905、18.077、25.669,P<0.05)。不同肺功能分级的尿毒症患者肺泡灌洗液SIRT1、IL⁃19的表达水平比较:肺功能3级>肺功能2级>肺功能1级。研究组患者肺泡灌洗液SIRT1、IL⁃19的表达水平与肺功能指标FEV1、FVC、FEV1/FVC%、FEV1%pred呈显著负相关(r=-0.199、-0.624、-0.546、-0.590,r=-0.571、-0.711、-0.603、-0.498,P<0.05)。结论尿毒症患者的肺泡灌洗液SIRT1、IL⁃19的表达水平上调,上调表达越明显,肺功能越差,对尿毒症患者肺功能具有一定的预测评估价值。

非小细胞肺癌患者PBMC中SITR1、Nrf2表达的临床意义及与预后的相关性

目的 探究非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中沉默信息调节因子1(SITR1)、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)表达的临床意义及与预后的相关性。方法 选取84例NSCLC患者及同期健康体检的84例受试者为研究对象,检测2组受试者PBMC中SITR1、Nrf2表达,分析其表达与NSCLC患者临床病理特征的关系。随访3年,采用Kaplan-Meier法分析SITR1、Nrf2表达与预后的关系。结果 NSCLC患者PBMC中SITR1、Nrf2蛋白阳性表达量高于健康体检组(P<0.05)。NSCLC患者PBMC中SITR1、Nrf2阳性表达量与淋巴结转移、肿瘤直径、TNM分期情况有关(P<0.05)。随访至截止至2021年12月,总生存率为39.29%(33/84),以SITR1、Nrf2蛋白中位阳性表达量为界将NSCLC患者分为高表达组和低表达组,SITR1高表达组3年累计生存率(16.67%)显著低于SITR1低表达组(61.90%),差异有统计学意义(χ^(2)=18.018,P<0.001);Nrf2高表达组3年累计生存率(23.81%)显著低于Nrf2低表达组(54.76%),差异有统计学意义(χ^(2)=8.435,P=0.004)。结论 SITR1、Nrf2表达在NSCLC患者PBMC中明显升高,其与淋巴结转移、肿瘤直径、TNM分期显著相关,且高表达SITR1、Nrf2患者的3年生存率显著降低。

高良姜素对非小细胞肺癌A549细胞SIRT1/mTOR通路及放射敏感性的影响

目的:探讨高良姜素对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路及放射敏感性的影响。方法:体外培养NSCLC A549细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测不同浓度(10,20,40,60,80,100μmol·L^(-1))高良姜素处理的A549细胞的增殖抑制率;将A549细胞经不同剂量(0,1,2,4,6,8 Gy)放射处理,并设置各剂量与35μmol·L^(-1)高良姜素联用组,克隆形成实验观察高良姜素的放射增敏作用;将A549细胞分为高良姜素+放射线组(35μmol·L^(-1)+6 Gy)、高良姜素组(35μmol·L^(-1))、放射线组(6 Gy)及对照组,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法检测增殖蛋白细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞增殖核抗原(Ki67)、凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9及STRT1/mTOR通路蛋白SIRT1、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、mTOR的表达。结果:与对照组比较,随着高良姜素浓度的增加,A549细胞增殖抑制率逐渐增加(P<0.05);与各剂量射线单独处理的A549细胞相比,35μmol·L^(-1)高良姜素+各剂量射线处理的A549细胞存活分数降低(P<0.05),辐射增敏比(SER)=1.522;与对照组比较,高良姜素组、放射线组、高良姜素+放射线组A549细胞凋亡率、Caspase-3、Caspase-9、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高,CyclinD1、Ki67、SIRT1、p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低(P<0.05);与高良姜素组、放射线组比较,高良姜素+放射线组A549细胞凋亡率、Caspase-3、Caspase-9、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高,高良姜素+放射线组CyclinD1、Ki67、SIRT1、p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:高良姜素可能通过调控SIRT1/mTOR通路影响A549细胞的增殖凋亡及放射敏感性,可能是治疗NSCLC的潜在药物。

SIRT6调控细胞糖代谢对非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性的影响

目的探讨沉默信息调节蛋白6(SIRT6)调控细胞糖代谢对非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性的影响。方法构建过表达SIRT6的腺病毒载体Ad-SIRT6,采用荧光实时定量PCR(QPCR)检测经不同转染强度(0、25、50、100、200pfu/细胞)Ad-SIRT6转染24 h后的SIRT6 mRNA水平;根据实验设计分为对照组、空载体(Ad-null)组及过表达(Ad-SIRT6)组,Ad-null组和Ad-SIRT6组的病毒浓度均为200 pfu/细胞;采用克隆形成实验检测3组经0、2、4、6、8和10 Gy X线照射后的存活分数(SF),根据多靶单击模型绘制细胞存活曲线并计算增敏比(SER);流式细胞术检测3组经4 Gy X线照射48 h的细胞周期和凋亡情况;采用QPCR检测经4 Gy X线照射48 h各组丙酮酸激2(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)和己糖激酶(HK)的表达水平;葡萄糖试剂盒检测转染12、24、36、48 h后的培养基葡萄糖消耗水平。结果 QPCR检测显示,在25~200 pfu/细胞的范围内,随转染强度的增加,A549细胞的SIRT6 mRNA水平升高(P<0.001),0、25、50、100、200 pfu/细胞对应的SIRT6mRNA水平依次为1.012±0.016、1.356±0.185、2.243±0.695、4.887±1.169和7.241±1.425,50、100、200 pfu/细胞对应的SIRT6 mRNA水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。后续实验选择过表达效果最强的200 pfu/细胞转染量。克隆形成实验显示,Ad-null组和对照组经0、2、4、6、8、10 Gy X线照射后SF的差异无统计学意义(P>0.05);而Ad-SIRT6组经4~10 Gy X线照射后的SF均低于Ad-null组和对照组(P<0.05)。多靶单击模型拟合细胞存活曲线提示SER为1.76。与对照组和Ad-null组比较,Ad-SIRT6组的G0/G1期细胞比例和凋亡率升高,S期细胞比例及PKM2、LDHA和HK mRNA水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05);Ad-SIRT6组转染12、24、36、48 h的葡萄糖消耗量降低,低于对照组和Ad-null组(P<0.05)。结论SIRT6过表达可抑制A549细胞糖酵解过程中关键酶生成来抑制糖酵解过程,同时具有放射增敏作用,并可导致G0/G1期阻滞和细胞凋亡。

虎杖苷通过沉默信息调节因子2相关酶3上调PINK1-Parkin线粒体自噬减轻脓毒症小鼠急性肺损伤机制研究

目的探讨虎杖苷通过沉默信息调节因子2相关酶3(SIRT3)上调PINK1-Parkin线粒体自噬并减轻急性肺损伤的机制。方法通过气管内滴注脂多糖建立脓毒症急性肺损伤(ALI)模型。SPF级野生型C57BL/6小鼠24只随机分为4组:对照组(建立假ALI模型)、模型组(建立ALI模型)、治疗组(建立ALI模型后予以虎杖苷处理)、抑制组(建立ALI模型后予以虎杖苷及3-TYP处理)。蛋白免疫印迹实验检测SIRT3、PINK1、细胞质及线粒体Parkin表达;免疫共沉淀法检测叉头框蛋白O3(FOXO3)乙酰化;检测肺组织SIRT3去乙酰化酶活性;检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1、IL-6;HE染色观察肺组织病理变化;组织湿干重比(W/D)反映肺水肿程度。结果与模型组比较,治疗组SIRT3活性、SIRT3、PINK1及线粒体Parkin表达分别显著增加为(86.0%±4.8%)、(88.0%±4.4%)、(248.0%±18.7%)、(368.0%±14.7%),FOXO3乙酰化、细胞质Parkin表达、W/D、血清TNF-ɑ、IL-1及IL-6分别显著下降为(216.0%±17.6%)、(62.0%±6.8%)、(4.6±0.3)、(242.0±31.0)pg/ml、(142.0±26.5)pg/ml及(752.0±78.1)pg/ml;与治疗组比较,抑制组SIRT3活性、PINK1及线粒体Parkin表达分别显著下降为(70%±4.6%)、(176%±7.5%)及(173%±17.1%),FOXO3乙酰化、细胞质Parkin表达、W/D、血清TNF-ɑ、IL-1及IL-6分别显著增加为(297.0%±30.9%)、(79.0%±4.0%)、(5.7±0.3)、(404.0±42.2)pg/m、(247.0±19.2)pg/m及(983.0±97.9)pg/m。结论虎杖苷通过SIRT3去乙酰化修饰FOXO3促进PINK1-Parkin线粒体自噬,并减轻脓毒症小鼠ALI。减轻ALI小鼠氧化应激及炎症反应。

SIRT2在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨沉默信息调节因子2(SIRT2)蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法采用免疫组化法检测2011年1月至2013年12月243例NSCLC组织及120例癌旁组织中SIRT2的表达,分析其表达水平与临床病理特征的关系,采用Cox风险比例回归模型分析影响预后的因素。结果SIRT2在NSCLC组织中的高表达率为31.3%(76/243),低于癌旁组织的57.5%(69/120),差异有统计学意义(P<0.001)。SIRT2表达与分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤大小和TNM分期均无关(P>0.05)。SIRT2高表达患者的中位无病生存期(DFS)为37.0个月(95%CI:25.3~48.7个月),长于低表达者的31.0个月(95%CI:27.3~34.8个月),差异有统计学意义(P=0.026);SIRT2高表达患者的中位总生存期(OS)为54.0个月(95%CI:40.7~67.3个月),长于低表达者的41.0个月(95%CI:33.6~48.5个月),差异有统计学意义(P=0.023)。Cox多因素回归分析结果显示,分化程度、淋巴结转移是影响NSCLC患者DFS和OS的独立因素(P<0.05),而SIRT2表达对NSCLC患者的预后无独立预测作用(P>0.05)。结论SIRT2在NSCLC组织中低表达,其高表达与NSCLC更好的临床病理特征及预后有关。

miR-181a靶向SIRT1对脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤的影响及作用机制

目的探究miR-181a通过靶向沉默信号调控因子1(SIRT1)对脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤的影响及作用机制。方法脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤A549细胞模型,并通过miR-181a inhibitor和inhibitor阴性对照(NC)转染细胞;盲肠结扎穿孔术法(CLP)建立小鼠脓毒症急性肺损伤模型,并通过miR-181a antagomir和antagomir NC静脉注射,检测生存率、肺湿重/干重比。荧光素酶报告实验检测miR-181a和SIRT1靶向关系。RT-PCR检测miR-181a、SIRT1在体内体外的基因表达,Western blotting检测SIRT1在体内体外的蛋白水平,以及凋亡标志物蛋白B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bax及活化半胱天冬酶3(cl-CASP3)在体内蛋白水平,流式细胞术检测细胞凋亡,CCK-8检测体外细胞活力,试剂盒检测CASP3体外活性,HE染色检测肺组织病理变化,TUNNEL染色检测体内细胞凋亡,ELISA检测体内血清炎症细胞因子水平。结果在细胞实验中,与Control组比较,LPS组细胞中miR-181a表达升高,SIRT1表达降低(P<0.01),同时细胞凋亡率升高,CASP3活性升高,细胞活力下降;miR-181a inhibitor可扭转上述各指标的改变(P<0.01);在动物实验中,与Sham组比较,CLP组小鼠生存率下降,肺湿重/干重比上升,出现明显的病理性改变及细胞凋亡,同时炎症细胞因子水平升高,组织内miR-181a、Bax、cl-CASP3蛋白水平升高,SIRT1、Bcl-2蛋白水平降低(P<0.01),经过miR-181a antagomir处理可扭转上述各指标的改变(P<0.05,P<0.01)。结论miR-181a可靶向作用于SIRT1,抑制miR-181a表达可提高SIRT1表达,从而对脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤起保护作用。

SIRT1基因与肺癌免疫浸润水平及临床预后分析

目的:通过生物信息学分析沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)基因在肺癌与正常组织的差异表达,并分析其与肺癌预后和免疫浸润水平的关系。方法:通过生物信息数据库获取SIRT1基因在肺癌中的表达情况,并分析SIRT1基因与肺癌肿瘤免疫浸润水平及预后的影响。结果:与正常组织相比,SIRT1基因在肺癌中表达下降(P<0.05)。SIRT1基因的表达与肺癌患者中B细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞的免疫浸润水平呈正相关关系(P<0.05)。SIRT1基因的表达还与肺癌中多种免疫标志物关系密切。此外,SIRT1基因的低表达与肺癌的整体生存率(OS)、首次渐进生存期(FP)及再次进展生存期(PPS)相关(OS HR=0.7,P=0.000;FP HR=0.75,P=0.004;PPS HR=0.73,P=0.017)。结论:SIRT1基因在肺癌中表达下调,从而影响肺癌肿瘤免疫浸润细胞水平,导致免疫微环境失衡,进而造成不良的临床预后。这些发现表明,SIRT1可用作确定肺癌的预后和免疫浸润的预后生物标志物。

NSCLC患者组织中SIRT2、ProGRP、CHCHD2表达情况与临床病理特征及预后的关系

目的分析沉默信息调节因子2(SIRT2)、胃泌素释放肽前体(ProGRP)、CHCHD2在非小细胞肺癌(NSCLC)患者组织中的表达情况与临床病理特征及预后的关系。方法选取该院2016年1月至2017年6月收治的NSCLC患者97例为研究对象,采用免疫组织化学法检测SIRT2、ProGRP、CHCHD2的表达情况;采用Spearman相关分析各指标与患者临床病理特征的关系;随访患者3年,记录患者生存及死亡情况,采用Cox风险比例回归模型分析影响其预后的因素。结果NSCLC患者肿瘤组织中SIRT2、ProGRP、CHCHD2阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);不同分化程度、淋巴结转移情况和肿瘤最大径患者肿瘤组织中SIRT2、ProGRP、CHCHD2阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05);NSCLC患者肿瘤组织中SIRT2、ProGRP、CHCHD2的阳性表达与患者肿瘤分化程度、淋巴结转移和肿瘤最大径呈正相关(P<0.05);死亡患者的SIRT2、ProGRP、CHCHD2阳性表达率明显高于存活患者,差异有统计学意义(P<0.05);SIRT2、ProGRP、CHCHD2阳性表达是影响NSCLC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论临床上检测SIRT2、ProGRP、CHCHD2可对患者及时进行干预,从而降低NSCLC患者术后复发和转移的可能性。

SIRT6调节CDK4去乙酰化增加A549细胞放射敏感性的实验研究

目的探讨上调沉默信息调节蛋白6(SIRT6)表达对A549细胞放射敏感性的影响以及可能作用机制。方法体外构建SIRT6过表达或细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)过表达重组慢病毒载体,分别转染A549细胞。将A549细胞分为空白对照组、阴性对照组、SIRT6过表达组、SIRT6/CDK4过表达组。MTT法和流式细胞术检测不同放射剂量(2、4、6、8、10 Gy)照射对A549细胞增殖、细胞周期以及凋亡的影响,并计算增敏比(SER)。采用Western blotting法和免疫共沉淀法检测各组细胞CDK4、G1/S-特异性周期蛋白-D1(CCND1)抗体、M2型丙酮酸激酶(PKM2)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)蛋白表达量以及CDK4乙酰化水平。结果经照射后,SIRT6过表达组细胞增殖抑制率高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),SIRT6过表达组SER为1.265;SIRT6过表达组细胞凋亡率为(31.15±3.69)%,G1期细胞比例为(49.35±4.27)%,均高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。与空白对照组比较,SIRT6过表达组A549细胞CDK4(0.29±0.03)、CCND1(0.14±0.01)、PKM2(0.07±0.01)、GLUT1(0.20±0.03)蛋白相对表达量降低;而与SIRT6过表达组比较,SIRT6/CDK4过表达组A549细胞CDK4(1.20±0.11)、CCND1(0.37±0.01)、PKM2(0.27±0.02)、GLUT1(0.87±0.08)蛋白相对表达量升高(P<0.05)。经coIP实验,CDK4蛋白和SIRT6蛋白可共同沉淀。SIRT6过表达组CDK4乙酰化程度(Ac-CDK4:0.41±0.07)较空白对照组(1.35±0.22)和阴性对照组(1.30±0.24)降低(P<0.05)。结论上调SIRT6表达可诱导CDK4蛋白赖氨酸脱乙酰化,导致细胞G1期阻滞,并降低糖酵解过程相关酶类的表达,抑制肿瘤细胞增殖活力,进而增加A549细胞对放射线的敏感性。

过表达和敲除沉默信息调节蛋白6质粒的构建及稳定肺癌A549细胞株的筛选

目的构建过表达和敲除沉默信息调节蛋白6(SIRT6)基因质粒,并筛选过表达和敲除稳定肺癌A549细胞株。方法采用PCR技术扩增SIRT6基因序列,通过中间质粒p SK连接在慢病毒质粒CD513B上,鉴定正确后进行慢病毒包装,收集含慢病毒颗粒的上清感染A549细胞,加入嘌呤霉素筛选出过表达SIRT6基因的稳定细胞株,蛋白质印迹法检测细胞SIRT6蛋白表达水平。利用规律成簇间隔短回重复/Cas9基因编辑技术敲除SIRT6基因,确定敲除靶点位置为SIRT6基因的第一外显子和第二外显子,分别构建第一个显子,第二外显子的SIRT6-小向导RNA(sgRNA),将SIRT6-sgRNA连接到有Cas9的质粒CD513B上后转染A549细胞,加入嘌呤霉素筛选出转染成功的细胞,通过无限稀释法筛选出SIRT6敲除基因的A549细胞系,蛋白印迹法检测细胞SIRT6蛋白表达情况。结果 A549细胞的感染荧光效率接近100%,蛋白质印迹法检测过表达SIRT6基因A549细胞的SIRT6蛋白呈高表达。DNA测序检测敲除SIRT6基因A549细胞系有移码突变,蛋白质印迹法检测无SIRT6蛋白表达。结论成功构建过表达和敲除SIRT6基因质粒,并筛选出过表达和敲除SIRT6基因的稳定肺癌A549细胞株。

宣白承气汤调控sirt1/FOXO1通路对脂多糖致大鼠急性肺损伤的影响

目的:探讨宣白承气汤对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤大鼠的影响以及可能机制。方法:清洁级SD雄性大鼠50只,尾静脉注射LPS制备急性肺损伤模型,随机分为模型组、阳性对照组(地塞米松)、低剂量宣白承气汤组(2g生药/kg)、中剂量宣白承气汤组(5g生药/kg)、高剂量宣白承气汤组(8g生药/kg),每组10只,另设正常对照组10只,模型制备成功后连续7d给药,末次给药后通过HE染色法观察肺组织病理变化,通过考马斯亮蓝法检测大鼠肺泡灌洗液蛋白含量,通过酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)水平,采用免疫印迹法(WB)检测大鼠肺组织sirt1/FOXO1通路相关蛋白表达。结果:模型组大鼠肺泡腔内充满炎性渗出物和出血,低、中、高宣白承气汤组炎症细胞浸润及出血情况有所改善;与正常组相比,模型组大鼠肺泡灌洗液蛋白、肺体指数、血清TNF-α、NO水平、大鼠肺组织FOXO1蛋白水平显著升高(P<0.05),大鼠肺组织sirt1蛋白水平显著下降(P<0.05);与模型组相比,低、中、高剂量宣白承气汤组肺泡灌洗液蛋白、肺体指数、血清TNF-α、NO水平、大鼠肺组织FOXO1蛋白水平均依次降低(P均<0.05),大鼠肺组织sirt1蛋白水平依次升高(P<0.05),且高剂量宣白承气汤组肺泡灌洗液蛋白、肺体指数、血清TNF-α、NO水平、大鼠肺组织FOXO1、sirt1蛋白水平与阳性对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:宣白承气汤可能通过激活sirt1表达抑制FOXO1转录,进而降低炎症反应,减轻LPS诱导的大鼠急性肺损伤。

慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者血清SIRT1、内毒素水平表达与肺功能的相关性

目的探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重期(Acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)患者血清沉默信息调节因子2相关酶1(Silent information regulator factor 2 related enzyme 1,SIRT1)、内毒素(Endotoxin,ET)水平表达与肺功能的相关性。方法选择2018年2月至2020年2月本院AECOPD患者98例作为研究对象,检测患者的血清SIRT1、ET水平,治疗1疗程后,根据肺功能下降程度分为重度组(n=16)和轻中度组(n=82),比较两组血清SIRT1、ET表达水平,分析血清SIRT1、ET水平对AECOPD患者肺功能的影响与预测价值。结果98例AECOPD患者经治疗后,肺功能重度、极重度下降占比16.33%;对比重度组与轻中度组基线资料发现,重度组SIRT1水平低于对照组,ET、白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平高于轻中度组(P<0.05);经二元Logistic回归分析后建立多元回归模型,结果显示,血清SIRT1低表达、ET过表达是AECOPD患者肺功能重度下降的影响因素(OR>1,P<0.05);绘制ROC曲线发现,血清SIRT1、ET水平预测AECOPD患者肺功能重度下降风险的AUC分别为:0.885、0.911,均有一定预测价值。结论AECOPD患者血清SIRT1低表达、ET过表达可能提示患者肺功能持续下降,且有重度或极重度下降风险,早期检测AECOPD患者血清SIRT1、ET水平可预测患者肺功能下降程度及风险,对指导早期干预可能有一定应用价值。

斑蝥酸钠联合化疗方案对非小细胞肺癌患者microRNA-21和SIRT1表达的影响

目的探讨斑蝥酸钠联合化疗方案对非小细胞肺癌患者微RNA-21(miR-21)和沉默信息调节因子1(SIRT1)表达的影响。方法回顾性分析2008年8月至2014年10月武装警察部队吉林省总队医院收治的87例晚期非小细胞肺癌患者的临床资料,依据治疗方法不同分为研究组(45例)和对照组(42例)。研究组采用斑蝥酸钠联合化疗方案治疗,对照组采用化疗方案。使用实时定量聚合酶链反应法检测miR-21的表达水平,使用免疫组织化学法检测SIRT1的阳性表达率。比较两组患者术前、术后miR-21与SIRT1表达情况。结果治疗后研究组患者的miR-21和SIRT1的表达水平低于对照组[(2.1±1.2)比(2.8±1.4),(40.2±3.1)%比(48.3±3.0)%],差异有统计学意义(P<0.05);研究组患者治疗的总有效率高于对照组[55.6%(25/45)比26.2%(11/42)],差异有统计学意义(P<0.05)。结论使用斑蝥酸钠联合化疗治疗非小细胞肺癌患者可以明显降低患者miR-21与SIRT1的表达,明显改善患者的症状,提高患者的治疗效果,应推广临床应用。

沉默信息调节因子6介导的IGF1R/AKT通路在非小细胞肺癌中的调节机制

目的探讨沉默信息调节因子6(SIRT6)介导的胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)/蛋白激酶B(AKT)通路在调节非小细胞肺癌(NSCLC)生物学行为中的作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)、蛋白质免疫印迹(Western blot)检测12例NSCLC患者癌组织、癌旁组织以及NSCLC细胞株(A549)、人支气管上皮细胞(16HBE)中SIRT6表达;将A549细胞分为过表达组(Ad-SIRT6)及其对照组(GFP-SIRT6)、干扰组(Si-SIRT6)及其对照组(Si-NC)、正常对照组(Mock组),分别用相应载体进行感染,同时设置16HBE细胞干扰组进行对照;Western blot检测各细胞株SIRT6蛋白表达情况,CCK-8法检测细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡,采用qPCR、Western blot法检测各组细胞IGF1R、AKT mRNA和蛋白表达情况。结果 NSCLC癌组织SIRT6 mRNA和蛋白相对表达量均明显低于癌旁组织,A549细胞株SIRT6 mRNA和蛋白相对表达量明显低于16HBE细胞株,差异具有统计学意义(P<0.05);转染24、36、48 h时,Ad-SIRT6组细胞增殖能力明显低于Si-SIRT6组细胞,差异具有统计学意义(P<0.01);Si-SIRT6-16HBE组细胞增殖能力明显高于Si-NC-16HBE组细胞,差异具有统计学意义(P<0.01);Ad-SIRT6组凋亡细胞数明显高于Si-SIRT6组细胞,差异具有统计学意义(P<0.01);Si-SIRT6-16HBE组凋亡细胞数明显低于Si-NC-16HBE组细胞,差异具有统计学意义(P<0.01);Si-SIRT6组IGF1R、AKT mRNA和蛋白均明显高于Mock组和Ad-SIRT6组,差异具有统计学意义(均P<0.01)。结论 SIRT6在NSCLC组织和细胞中呈低表达,SIRT6可能是通过抑制IGF1R/AKT信号通路的活化而发挥抑癌作用。

莪术醇通过SIRT1/FOXO1通路改善重症急性胰腺炎大鼠肺损伤及诱导肺泡巨噬细胞凋亡的机制

目的:探讨莪术醇通过沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头转录因子1(FOXO1)通路对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠肺损伤的改善作用及其对肺泡巨噬细胞凋亡的影响。方法:按照体重排序法将75只大鼠随机分为对照组、模型组、莪术醇低剂量组(4 mg·kg^(-1))、莪术醇高剂量组(16 mg·kg^(-1))和拮抗剂组(莪术醇16 mg·kg^(-1)+EX5272 mg·kg^(-1)),每组15只。除对照组外均建立急性胰腺炎大鼠模型,然后立即灌胃相应药物或生理盐水,12 h后再次给药1次。72 h后处死大鼠,比较各组血清淀粉酶(AMS)、内毒素水平,肺组织病理评分,肺泡巨噬细胞凋亡率,肺泡巨噬细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)水平,以及肺泡巨噬细胞中SIRT1、FOXO1、乙酰化FOXO1(Ac-FOXO1)、核因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白表达量。结果:与对照组比较,模型组血清AMS、内毒素水平,肺组织病理学评分和肺泡巨噬细胞TNF-α、NO水平、NF-κB p65蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05);与模型组比较,莪术醇低剂量组、莪术醇高剂量组、拮抗剂组上述指标均显著降低(P<0.05),且莪术醇高剂量组低于莪术醇低剂量组和拮抗剂组(P<0.05)。与对照组比较,模型组肺泡巨噬细胞凋亡率及肺泡巨噬细胞SIRT1、Ac-FOXO1蛋白相对表达量降低(P<0.05);与模型组比较,莪术醇低剂量组、莪术醇高剂量组、拮抗剂组上述指标升高(P<0.05),且莪术醇高剂量组高于莪术醇低剂量组和拮抗剂组(P<0.05)。结论:莪术醇有助于改善SAP大鼠肺损伤,其调控机制可能与激活SIRT1/FOXO1信号通路诱导肺泡巨噬细胞凋亡有关。