肿瘤微环境免疫细胞浸润在肺腺癌进展中的作用机制研究

目的通过生物信息学技术,筛选出与肺腺癌(LUAD)复发相关的关键基因和信号通路,为探讨LUAD复发的分子机制提供理论支持。方法从TCGA和GEO数据库中下载LUAD相关数据集,利用加权基因共表达网络分析(WGCNA)算法挑选关键基因模块,采用LASSO-Cox回归分析构建预后模型;Limma算法筛选差异表达基因;Estimate和MCP算法评估免疫细胞浸润。结果共筛选出29个相关基因模块。单因素Cox分析结果显示,仅有4个基因与患者预后显著相关。基于该基因集进行的LASSO-Cox预后模型显示,风险评分高的患者其预后差,提示该模型具有良好的预测能力。该模型筛选出4个关键基因,分别为丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白(STRAP)、G蛋白亚基γ12(GNG 12)、线粒体甘油-3-磷酸酰基转移酶(GPAM)、锚蛋白重复和泛素结构域蛋白1(ANKUB 1)。本研究对STRAP进行了深入分析,结果显示,STRAP在泛癌中呈现广泛高表达,且与多种肿瘤的不良预后及临床病理特征显著相关。STRAP与免疫抑制分子的表达呈显著正相关。高表达STRAP的患者其微环境CD8+T细胞、NK细胞等多种免疫细胞浸润降低,抑癌基因的单核苷酸多态性(SNP)显著升高,呈现“冷肿瘤”表型。此外,免疫组织化学表明,STRAP在肿瘤组织中显著高表达。结论基因模型能够较好地预测患者复发风险,其中STRAP在LUAD发展中可能发挥重要作用。

BRAF、TP53、Pax8-PPARγ在甲状腺癌中的表达及疗效预测价值

目的探讨肿瘤蛋白P53(TP53)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(BRAF)、配对盒基因8-过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Pax8-PPARγ)在甲状腺癌中的表达及疗效预测价值。方法将2020年4月至2022年4月该院收治的150例甲状腺癌患者纳入研究。检测患者甲状腺癌组织及癌旁组织中TP53、BRAF、Pax8-PPARγmRNA的表达水平,分析其与临床病理因素的关系,基于受试者工作特征(ROC)曲线及决策曲线分析TP53、BRAF、Pax8-PPARγmRNA表达水平预测^(131)I治疗效果的价值。结果甲状腺癌组织中的TP53、BRAF、Pax8-PPARγmRNA表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。甲状腺癌患者淋巴结转移、肿瘤最大径、包膜浸润与TP53、BRAF、Pax8-PPARγmRNA表达水平有关(P<0.05)。采用放射性^(131)I清除术后残留的甲状腺组织(简称清甲)失败患者组织TP53、BRAF、Pax8-PPARγmRNA表达水平均高于清甲成功患者(P<0.05)。ROC曲线分析显示,TP53、BRAF、Pax8-PPARγmRNA联合预测甲状腺癌患者清甲失败的曲线下面积优于三者单独预测(P<0.05)。决策曲线显示,三者联合预测甲状腺癌清甲失败发生的净收益率优于单一预测(P<0.05)。结论TP53、BRAF、Pax8-PPARγ在甲状腺癌组织中呈高表达,联合检测有助于预测^(131)I治疗效果,为临床确定合理治疗方案及时机提供参考。

基于网络药理学与分子对接技术探讨脊髓伤方治疗脊髓损伤的作用机制

目的采用网络药理学与分子对接技术探讨脊髓伤方治疗脊髓损伤(SCI)的作用机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)与中国知网(CNKI)数据库筛选脊髓伤方的活性成分及其作用靶点,运用人类基因数据库(GeneCards)、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)和治疗靶标数据库(TTD)等数据库挖掘SCI的疾病相关靶点;最终获取中药复方活性成分作用靶点与疾病相关靶点的交集靶点。运用Cytoscape 3.7.2软件与STRING数据库分别构建“活性成分-潜在作用靶点”和蛋白互作网络(PPI),筛选出潜在核心靶点;运用R软件和Metascape平台分别用于分析基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)途径的富集;对潜在靶点进行GO和KEGG富集分析。利用AutoDock Tools 1.5.6软件对关键化合物与核心靶点进行分子对接验证。结果共筛选获取138个活性成分及111个潜在作用靶点;获取到槲皮素、木犀草素、山柰酚、汉黄芩素、β-胡萝卜素等核心活性成分,白蛋白(ALB)、白介素6(IL-6)、丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)、管内皮生长因子A(VEGFA)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(CASP3)、表皮生长因子受体(EGFR)、表皮生长因子(EGF)、转录因子AP-1(JUN)、白介素1B(IL1B)、转录3的信号换能器和激活子(STAT3)等核心靶点;共筛选获取179条信号通路,关键通路包括糖尿病并发症中晚期糖基化终产物及其受体(AGE-RAGE)信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-AKT)信号通路、缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路、松弛素(RLX)信号通路、甲状腺激素(TH)信号通路、叉头盒O(FoxO)信号通路、阿佩林(AP)信号通路等。分子对接结果的最小结合能均<-5.0 kJ/mol,提示对接较良好。结论脊髓伤方可能是通过槲皮素、木犀草素、山柰酚、汉黄芩素、β-胡萝卜素等关键活性成分,调控ALB、IL-6、AKT1、VEGFA、CASP3等潜在核心靶点,调控AGE-RAGE、PI3K-AKT、HIF-1、RLX、TH、FoxO、AP等信号通路,进而发挥治疗SCI的作用。

健脾化痰祛湿方对非小细胞肺癌患者的临床疗效及血清EGFR、Akt和MMP-9水平的影响

目的:探讨健脾化痰祛湿方对非小细胞肺癌(NSCLC)患者的临床疗效及血清表皮生长因子受体(EGFR)、苏氨酸激酶(AKT)和基质金属蛋白酶(MMP-9)水平的影响。方法:选取2019年1月~2021年6月在我院收治的NSCLC患者82例,简单随机分组为观察组(n=41)与对照组(n=41)。对照组予以PP方案化疗(培美曲塞+顺铂),观察组在对照组基础上联合应用健脾化痰祛湿方口服,持续用药直至2个化疗周期结束。比较两组临床疗效、中医证候评分和化疗期间不良反应,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清EGFR、AKT和MMP-9水平。结果:治疗后,观察组治疗总有效率为95.12%,显著高于对照组的80.49%(P<0.05);治疗后,观察组食少乏力、午后腹胀和腹痛脘闷中医证候评分低于对照组(P<0.05),血清EGFR、Akt、MMP-9水平低于对照组(P<0.05),观察组化疗期间总不良反应发生率为7.32%,低于对照组的24.39%(P<0.05)。结论:健脾化痰祛湿方辅助治疗NSCLC的疗效显著,可有效改善患者临床症状,安全性较高,其作用机制可能与降低血清EGFR、Akt和MMP-9水平有关。

RIPK3介导的巨噬细胞M2型极化在结直肠癌肝转移中的研究

目的:探究受体相互作用丝氨酸/苏氨酸激酶3(RIPK3)介导的巨噬细胞M2型极化在结直肠癌肝转移(CRLM)中的作用及其相关机制。方法:收集CRLM患者结肠肿瘤及其癌旁组织,对肿瘤组织进行病理分析。通过RT-qPCR法检测RIPK3、CD68、精氨酸酶-1(Arg-1)表达量。采集CRLM患者和结肠癌患者外周血,通过流式细胞术检测巨噬细胞分型,利用ELISA检测血清白介素(IL)-1β、IL-6、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、IL-4、转化生长因子-β(TGF-β)、IL-10含量。使用慢病毒将PLKRIPK3和PLK-NC转染至THP-1细胞,采用PMA/IL4诱导为M2型巨噬细胞,通过RT-qPCR和Western blotting检测两组细胞极化程度。将两组细胞分别与人结肠癌细胞系WiDr共孵育,检测WiDr细胞迁移、侵袭变化和结肠癌相关转移1(MACC1)、原癌基因MYC(c-MYC)表达情况。结果:CRLM患者结肠肿瘤病理结构符合肠腺癌肝转移。与癌旁组织相比,RIPK3在CRLM肿瘤组织表达降低,CD68、Arg-1表达增加。与结肠癌患者相比,CRLM患者外周血中富集更多的M2型巨噬细胞,血清中IL-4、TGF-β、IL-10含量增加,IL-1β、iNOS含量减少。与WiDr+PLK-NC-THP-1组相比,WiDr+PLK-RIPK3-THP-1组被诱导为M2型巨噬细胞的程度减少,对WiDr细胞的促迁移和侵袭能力降低,MACC1、c-MYC表达量减少。结论:RIPK3表达降低通过诱导巨噬细胞向M2型极化,促进结直肠癌细胞MACC1、c-MYC表达和肿瘤转移。

TGF-β1-Smad/p38 MAPK信号通路及炎症因子指标与脓毒症肾损伤患者肾功能的相关性分析

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)-丝/苏氨酸激酶受体(Smad)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路及炎症因子指标与脓毒症肾损伤患者肾功能的相关性。方法回顾性分析2019年1月至2022年12月联勤保障部队第970医院收治的82例脓毒症患者的临床资料,根据患者是否发生急性肾损伤分为观察组(脓毒症肾损伤,n=25)和对照组(脓毒症无肾损伤,n=57)。比较两组患者肾功能指标(尿素氮、肌酐)、信号通路(TGF-β1、Smad7、p38 MAPK)、炎症因子指标[白细胞介素17(IL-17)、降钙素原]的水平,分析TGF-β1-Smad/p38 MAPK信号通路及炎症因子指标与肾功能的相关性。结果观察组尿素氮、肌酐水平分别为(10.56±2.89)mmol/L、(141.25±20.49)μmol/L,均显著高于对照组[(5.42±1.07)mmol/L、(101.14±12.71)μmol/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组TGF-β1、p38 MAPK蛋白水平分别为(42.04±9.04)μg/L、40.68±4.18,均显著高于对照组[(33.21±7.48)μg/L、21.12±3.07],Smad7蛋白水平为(102.26±6.32)ng/L,显著低于对照组[(125.74±9.77)ng/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组IL-17、降钙素原水平分别为(44.21±12.63)、(4.79±1.04)μg/L,均显著高于对照组[(32.36±8.27)、(4.02±0.87)μg/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。经相关性分析,TGF-β1、p38 MAPK、IL-17、降钙素原与尿素氮、肌酐呈正相关(P<0.05),Smad7与尿素氮、肌酐均呈负相关(P<0.05)。结论TGF-β1-Smad/p38 MAPK信号通路可激活炎症因子,影响肾功能,TGF-β1、Smad7、p38 MAPK、IL-17、降钙素原水平能够反映脓毒症肾损伤患者的病情发展程度。

骨化三醇通过B细胞受体/PI3K/AKT/NF-κB通路抑制大鼠高原肺水肿的发生

目的 :探讨骨化三醇通过B细胞受体/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/核因子κB(NF-κB)通路抑制大鼠高原肺水肿的发生及其机制。方法 :雄性SD大鼠随机分为常氧组、低氧组、低氧+骨化三醇组(0.252μg/kg),连续灌胃给药5 d后,除常氧组外,其余2组均置于模拟海拔6 000 m的低压氧舱内低氧胁迫48h,建立高原肺水肿大鼠模型。干湿比重法测定肺含水量;H-E染色观察大鼠肺组织病理变化,并进行炎症评分;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡率;ELISA检测肺组织B细胞激活因子(BAFF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)含量;免疫荧光染色观察肺组织CD21和核因子κB抑制蛋白α(IκBα)的表达;免疫印迹检测肺组织PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)的表达。结果 :与常氧组比较,低氧组大鼠肺组织见轻微肺泡隔增宽,炎症细胞浸润;肺含水量升高,肺组织细胞凋亡率、BAFF、TNF-α、IL-6、IFN-γ含量及CD21、p-PI3K、p-AKT表达明显升高;肺组织IL-4、IL-10含量及IκBα、p-IκBα表达明显降低。与低氧组比较,低氧+骨化三醇组炎症细胞浸润减轻;肺含水量降低、肺组织细胞凋亡率、BAFF、TNF-α、IL-6、IFN-γ含量及CD21、p-PI3K、p-AKT表达明显降低;肺组织IL-4、IL-10含量及IκBα、p-IκBα表达明显升高。结论 :骨化三醇可抑制高原肺水肿炎症反应,其作用机制可能与抑制B细胞受体/PI3K/AKT/NF-κB信号通路有关。

超声引导下甲状腺FNAB联合BRAF V600E基因检测对甲状腺微小结节的诊断价值

目的:探讨超声引导下甲状腺细针穿刺活检(FNAB)联合丝/苏氨酸特异性激酶基因突变基因V600E(BRAF V600E)检测对甲状腺微小结节的诊断价值。方法:选取2020年10月~2021年10月于我院进行甲状腺切除术患者67例,术前均接受甲状腺FNAB及BRAF V600E基因检测,并与术后病理结果进行比对分析。结果:与术前单一进行FNAB相比,术前FNAB联合BRAF V600E基因检测的术后病理符合率(94.03%),特异度(97.14%),敏感度(90.63%)均高于单一FNAB检查,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:超声引导下甲状腺FNAB联合BRAF V600E检测可提高甲状腺微小结节术前检出率,对患者治疗及疾病诊断具有较高的参考价值。

乳腺癌组织STRAP表达及临床意义

目的探讨丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白(STRAP)在乳腺癌中的表达情况与病理意义、预后关系分析。方法回顾性选取2018-01—2020-03河北中石油中心医院收治的100例乳腺癌患者作为观察组,及2018-01—2020-03乳腺良性病变者70例作为对照组,采用免疫组化染色法检测两组STRAP表达,分析STRAP表达与临床病理的关系、采用回归分析STRAP表达与患者预后的关系。结果观察组STRAP阳性表达率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);STRAP阳性表达率与病理分期、淋巴结转移、雌激素受体、HER2有关(P<0.05);STRAP表达与ER、HER2表达有相关性(P<0.05)。STRAP阳性表达乳腺癌患者平均无进展生存时间为33个月(95%CI:31.66~34.34),明显短于STRAP阴性表达乳腺癌患者(P<0.05);Cox比例风险回归显示:TNM分期、淋巴结转移、STRAP表达是乳腺癌患者预后的影响因素(HR=2.011、1.722,P<0.05)。结论乳腺癌组织中STRAP表达上调,在疾病发生发展中有一定作用,同时是患者预后的影响因素。

非小细胞肺癌组织中AKT1、PDCD4蛋白表达变化及意义

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)组织中丝/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)和程序性细胞死亡因子4(PDCD4)蛋白表达变化,并探讨其临床意义。方法收集65例NSCLC患者的手术切除肿瘤组织为NSCLC组,30例受检者的正常肺泡组织为肺泡对照组,30例受检者的正常支气管断端组织为支气管对照组。用免疫组化法检测三组标本中的AKT1、PDCD4,并分析NSCLC组二者表达与肿瘤临床病理参数的关系。结果与支气管对照组和肺泡对照组相比,NSCLC组AKT1表达升高,PDCD4表达降低,P均<0.05。NSCLC组AKT1表达与NSCLC分化程度、淋巴结转移及TNM分期有关(P均<0.05),与患者的性别、年龄和肿瘤的大小、组织学类型无关;NSCLC组中PDCD4表达与NSCLC组织学类型有关(P<0.05),与患者的性别、年龄和肿瘤的大小、分化程度、淋巴结转移及TNM分期无关;AKT1和PDCD4在肺腺癌组织中表达呈负相关(r=-0.436,P=0.021),在肺鳞癌组织中无关(r=-0.012,P=0.931)。结论 NSCLC组织中AKT1表达升高、PDCD4表达降低,联合检测两者有助于NSCLC的诊治和预后判断。

ActRIPs在激活素受体信号传导中的作用

激活素属于TGF-β超家族成员的多功能因子,其受体属于TGF-β超家族的Ser/THr激酶型受体,由Ⅰ型和Ⅱ型组成,Ⅱ型受体与配体激活素特异结合,再激活Ⅰ型受体,进一步通过Smad蛋白家族的级联反应将信号传入胞核。最新的研究发现Ser/THr激酶型受体介导的信号传导实际上受控于Ⅱ型受体,细胞内激活素受体相互作用蛋白(ActRIPs)参与了Ⅱ型受体的活性调控,ActRIPs蛋白家族具有与激活素Ⅱ型A受体(ActRⅡA)C末端特异结合的活性,不同的ActRIPs具有不同的作用,Ac-tRIP1以脚手架形式与ActRⅡA及Smad3结合,抑制细胞内Smad途径信号传导;ActRIP2与ActRⅡA结合后,通过其C末端介导受体内吞作用,对信号传导也具有抑制作用;ActRIP3则与ActRIP1,2不同,其与ActRⅡA结合后,具有促进信号传导的作用。ActRIPs的发现,使人们更清晰地认识到Ser/THr激酶型受体介导的信号传导调控机制。

PI3K/AKT激动剂和抑制剂对巨噬细胞炎症反应的影响

背景:近年发现磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶(PI3K/AKT)在重度急性胰腺炎(SAP)的发病中发挥重要作用,但机制尚未明确。目的:探讨PI3K/AKT激动剂胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和抑制剂wortmannin对巨噬细胞株RAW264.7 Toll样受体4(TLR4)信号通路的影响,阐明PI3K/AKT参与调节SAP炎症反应的作用机制。方法:分别以不同浓度脂多糖(LPS)、IGF-Ⅰ、wortmannin处理RAW264.7细胞,采用CCK-8实验检测细胞活性。RAW264.7细胞分为空白对照组(不予处理)、LPS组(LPS 1μg/mL)、IGF-Ⅰ组(IGF-Ⅰ100 ng/mL+LPS 1μg/mL)、wortmannin组(wortmannin 100 nmol/L+LPS 1μg/mL)和IGF-Ⅰ+wortmannin组(wortmannin 100 nmol/L+IGF-Ⅰ100 ng/mL+LPS 1μg/mL),采用ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)蛋白表达,采用real-time PCR检测TLR4、髓样分化因子88(MyD 88)、AKT、PI3K、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、核因子-κB(NF-κB)mRNA表达。结果:RAW264.7细胞经不同浓度LPS、IGF-Ⅰ、wortmannin处理后,各浓度组间细胞活性无明显差异(P>0.05)。LPS组、IGF-Ⅰ组、wortmannin组、IGF-Ⅰ+wortmannin组TNF-α、IL-6表达水平均较空白对照组显著升高(P<0.05);wortmannin组TNF-α、IL-6表达水平较LPS组和IGF-Ⅰ组显著降低(P<0.05);IGF-Ⅰ+wortmannin组TNF-α、IL-6表达水平较IGF-Ⅰ组显著降低(P<0.05)。LPS组AKT、PI3K、TLR4及其下游分子MyD 88、p38MAPK、NF-κB mRNA表达均显著高于空白对照组(P<0.05);IGF-Ⅰ组上述指标较LPS组进一步升高,差异有统计学意义(P<0.05);wortmannin组上述指标较LPS组和IGF-Ⅰ组显著降低(P<0.05);IGF-Ⅰ+wortmannin组上述指标显著高于wortmannin组(P<0.05),但较IGF-Ⅰ组显著降低(P<0.05)。结论:PI3K/AKT可能通过调节巨噬细胞中的TLR4及其下游分子影响促炎细胞因子表达,从而参与SAP炎症反应的发生。

STRAP异常表达对胃癌细胞分化的作用

目的:探讨丝苏氨酸激酶受体相关蛋白(serine-threonine kinase receptor-associated protein,STRAP)异常表达对胃癌细胞分化的影响。方法:收集北京大学肿瘤医院消化肿瘤外科于1991年1月至2009年1月手术切除的胃癌标本253例,同时另取103例同批胃癌患者癌旁组织标本作为对照,制备组织芯片。采用免疫组化检测胃癌组织和癌旁组织中STRAP蛋白的表达,分析其表达与胃癌组织细胞分化、临床分期等临床病理因素的关系,采用Kaplan-Meier生存分析探讨STRAP蛋白的异常表达与胃癌患者预后的关系;将STRAP真核表达载体转染胃癌细胞SGC7901,采用Western blotting检测转染后胃癌SGC7901细胞中STRAP蛋白的表达情况,MTT法检测SGC7901细胞的增殖能力,免疫荧光染色法检测胃癌组织细胞分化相关蛋白胃蛋白酶原C(pepsinogen C,PGC)在SGC7901细胞中的表达情况,同时分析碱性磷酸酶(alkaline phosphatases,AKP)在STRAP过量表达细胞中的活性。结果:胃癌组织中STRAP蛋白的阳性表达率明显低于癌旁组织[33.6%(75/223)vs 59.3%(51/86),P<0.01],且其表达水平与胃癌细胞分化程度密切相关(P<0.05),STRAP蛋白表达较高的患者预后生存期明显长于低表达患者(P<0.05)。胃癌SGC7901细胞过表达STRAP蛋白后,其增殖能力明显减弱(P<0.05);胃癌组织细胞分化相关蛋白PGC表达水平显著升高(P<0.05),而AKP活性明显下降(P<0.05)。结论:STRAP蛋白在胃癌组织中的表达水平与胃癌组织细胞分化密切相关,其可能作为分子标志物对胃癌组织细胞分化程度和预后的辅助判断具有良好的临床价值。

内脂素调节EGFR通路及其对心肌细胞肥大的影响

目的:探究内脂素对表皮生长因子受体(EGFR)通路的调节及其对心肌细胞肥大的影响。方法:将60只Wistar雄性大鼠随机分为对照组、内脂素组和内脂素+AG1478组,每组各20只大鼠。统计各组大鼠的心脏重量指数、左心室重量指数和心肌细胞体积。采用考马斯亮蓝染色法检测每组心肌细胞的总蛋白含量,采用蛋白免疫印迹(Western blotting)检测各蛋白表达量。结果:与对照组相比,内脂素组大鼠心脏重量指数、左心室重量指数、心肌细胞体积、蛋白含量、心钠素(ANP)和脑钠肽(BNP)蛋白相对表达量均明显升高(P<0.05)。与对照组和内脂素+AG1478组大鼠相比,内脂素组大鼠心肌细胞中EGFR、磷酸化-丝氨酸-苏氨酸激酶(p-AKT)、磷酸化-细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、磷酸化-信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)、ANP和BNP蛋白相对表达量均明显升高(P<0.05)。结论:内脂素通过激活EGFR信号通路诱导心肌细胞肥大的发生。

丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白在健康人和系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的差异表达

目的分析丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞中的表达水平,探讨该蛋白检测在系统性红斑狼疮病情判断中的可能应用。方法实验分为3组:SLE稳定组、SLE活动组和健康对照组,每组6例,分别收集其外周血单个核细胞,用相对和绝对定量的等量异位标签串联质谱技术对丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白进行鉴定和相对定量分析,用Western blot技术对该蛋白的表达水平进行较大样本的独立验证。结果基于质谱分析的蛋白组学结果表明,丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白在系统性红斑狼疮活动期患者外周血单个核细胞中表达显著下调(与正常人的相对比值为0.2906),且该蛋白的低表达为Western blot实验进一步证实。临床资料分析表明,该蛋白的表达水平与系统性红斑狼疮疾病活动指数呈负相关(r=-0.607,P<0.05)。结论丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白可能参与SLE的发病,该蛋白有望作为系统性红斑狼疮的活动阶段特异性标志物。

E6-AP在前列腺癌LNCaP细胞基因表达调控中的作用

目的:探讨前列腺癌LNCaP细胞中E6相关蛋白(E6-AP)对雄激素受体(AR)和丝苏氨酸激酶(Akt)表达的调节作用,阐明E6-AP的作用机制。方法:应用双稳定表达的人前列腺癌细胞株LNCaP/E6-AP细胞,通过Western blotting分析E6-AP过表达对细胞中AR和Akt蛋白表达水平的影响;利用免疫荧光技术观察E6-AP与AR在细胞中的定位关系。结果:与E6-AP低表达的LNCaP细胞比较,E6-AP过表达的LNCaP细胞中AR蛋白和磷酸化的AR蛋白的表达量明显降低(P<0.05);Akt蛋白和磷酸化的Akt蛋白的表达量明显升高(P<0.01)。免疫荧光法检测结果显示:E6-AP和AR在细胞中定位情况相似。结论:E6-AP过表达可下调AR蛋白和磷酸化AR蛋白的表达,并上调Akt蛋白及磷酸化Akt蛋白的表达,且E6-AP与AR在细胞中定位基本一致,E6-AP可能与前列腺癌的发生和发展密切相关。

非小细胞肺癌EGFR突变与磷酸化信号传导蛋白表达的关系

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与其下游磷酸化信号通路蛋白表达的关系。方法:利用PCR和基因测序检测NSCLC患者EGFR第19和21外显子突变,辅以免疫组化染色检测下游信号传导蛋白p-Akt、p-ERK1/2和p-STAT3的表达。结果:66例NSCLC中有11例发生EGFR突变,女性和伴细支气管肺泡特征的腺癌突变率较高。p-Akt、p-ERK1/2和p-STAT3的表达阳性率分别为54.5%、25.8%和33.3%,EGFR突变患者p-Akt阳性率(81.8%)显著高于无突变者(49.1%,P<0.05),且在伴细支气管肺泡特征的腺癌中呈高表达,两者之间p-ERK1/2和p-STAT3表达差异无统计学意义;p-ERK1/2表达与患者年龄相关,p-STAT3在腺癌、小肿瘤(≤3cm)和I期NSCLC中的表达均显著上调(P<0.05)。结论:EGFR突变后的下游信号传导主要以激活Akt途径为主,检测下游信号传导蛋白表达是EGFR基因检测的重要补充,对NSCLC基因分型、疗效监测及预后评估具有重要意义。

核受体NR6A1通过上调RIPK3基因表达诱导血管平滑肌细胞凋亡

目的:探讨核受体亚家族6A1(NR6A1)对血管平滑肌细胞凋亡的影响及可能的分子机制。方法:将腺病毒Ad-NR6A1感染大鼠血管平滑肌细胞,分别在感染后0 h、24 h和48 h时进行MTT实验,以时间为横坐标,A570为纵坐标绘制细胞生长曲线,观察NR6A1对细胞生长的影响;进行DAPI染色、TUNEL染色及caspase活性检测,观察细胞凋亡情况;进一步通过基因芯片技术,寻找NR6A1的靶基因;采用siRNA介导的基因沉默技术,观察受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3(RIPK3)基因沉默对NR6A1诱导的血管平滑肌细胞凋亡的影响。结果:腺病毒Ad-NR6A1感染细胞48 h时,NR6A1过表达组细胞数量较对照组(重组腺病毒载体Ad-Lac Z)明显减少;DAPI染色显示NR6A1过表达诱导血管平滑肌细胞出现核浓缩和核碎裂的凋亡表型,TUNEL染色显示NR6A1过表达引起细胞凋亡,caspase活性检测结果显示NR6A1过表达细胞内caspase-3、caspase-8和caspase-9活性均较对照组高;基因芯片技术检测发现,NR6A1过表达上调血管平滑肌细胞中RIPK3基因表达;RIPK3基因沉默可以显著抑制NR6A1诱导的平滑肌细胞凋亡。结论:NR6A1通过上调RIPK3基因表达诱导血管平滑肌细胞凋亡。

超声引导下FNAC+BRAF^V600E检测对甲状腺乳头状癌患者诊断效能的影响

目的:探讨超声引导下细针穿刺细胞学检查(FNAC)+丝/苏氨酸特异性激酶突变基因V600E(BRAFV600E)检测对甲状腺乳头状癌患者诊断效能的影响。方法:选取2017年1月至2019年6月我院疑似甲状腺乳头状癌患者92例,均行超声引导下FNAC、BRAFV600E检测,以术后病理学诊断为"金标准",分析超声引导下FNAC、BRAFV600E检测单独与联合诊断甲状腺乳头状癌的结果,比较两种检测方法单独与联合诊断甲状腺乳头状癌的敏感度、特异度、准确率。结果:超声引导下FNAC、BRAFV600E检测联合诊断甲状腺乳头状癌敏感度为93.83%(76/81)、准确率为92.39%(85/92),均高于超声引导下FNAC单独诊断79.01%(64/81)、79.35%(73/92),BRAFV600E检测单独诊断80.25%(65/81)、81.52%(75/92)(P<0.05),联合诊断与单一方法诊断特异度比较均无显著差异(P>0.05)。结论:超声引导下FNAC+BRAFV600E检测可显著提高甲状腺乳头状癌诊断敏感度及准确率,具有较高诊断效能。

GDF-15治疗对肝癌化疗敏感性影响的分析

目的探讨生长分化因子-15（GDF～15）治疗对于肝癌化疗敏感性的影响。方法通过采用免疫组织化学方法SP分别检测行GDF-15治疗与未行GDF-15治疗的肝癌组织中丝氨酸，苏氨酸蛋白激酶受体（RSK）及多药耐药相关蛋白（NRPI）的表达情况，从而探讨GDF-15对于肝癌化疗敏感性的影响。结果在20例行GDF-15治疗组，其丝氨酸，苏氨酸蛋白激酶受体（RSK）表达强度为：0．4358±0．01246，15例未行GDF-15治疗组，其丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶受体（RSK）表达强度为：0．3012±0．01278，前者表达强度明显高于后者（P〈0．05），因此GDF-15治疗组，其疗效好于非GDF-15治疗组；在20例行GDF-15治疗组，其多药耐药相关蛋白（MRPI）表达强度为：0．3574±0．02159，15例未行GDF-15治疗组，其多药耐药相关蛋白（MRPI）表达强度为：0．3101±0．01108，前者表达强度明显高于后者（P〈0．05），因此GDF-15治疗组，其可增加肝癌对药物的耐药性。结论在行肝癌化疗时，加用GDF-15的治疗可增强机体抗肿瘤免疫，但是另一方面可以增加肝癌对化疗药物的耐药性，减低其敏感性，因此，对于肝癌的化疗，加用CDF-15的治疗可降低其效果。