乳胶凝集试验检测H5亚型禽流感病毒血凝素抗体的研究

利用原核表达并经过纯化的H5亚型禽流感病毒的血凝素蛋白做为抗原,经碳二亚胺(EDAC)将表达产物和羧基化的乳胶共价偶联,并对偶联乳胶的蛋白量和偶联时间进行合理选择,建立H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白乳胶凝集试验的方法。临床检测H5亚型禽流感病毒实验免疫鸡血清126份,同血凝抑制试验相比,其敏感性为87.03%,特异性为88.8%,两者的符合率为87.30%。结果证明建立的方法可用于H5亚型禽流感抗体水平监测和流行病学调查。

乳胶凝集试验检测鸡新城疫病毒血清抗体的研究

用硫酸铵沉淀、透析浓缩的鸡新城疫病毒 (NDV)抗原致敏乳胶 ,然后与鸡新城疫阳性血清进行方阵滴定 ,选择出最佳致敏条件并制成新城疫病毒乳胶抗原 ,由此建立起乳胶凝集试验 (LAT) ,用来检测新城疫血清抗体 ;用所建立的乳胶凝集试验 (LAT)和血凝抑制试验 (HI)同步检测 6 9份鸡血清 ,结果乳胶凝集试验阳性 6 2份 ,阴性 7份 ;血凝抑制试验阳性 6 6份 ,阴性 3份 ,两者的总符合率为 94.2 % (6 5 / 6 9) ,且两者的检出率基本一致。结果表明 ,乳胶凝集试验具有操作简便、快速、敏感性高、特异性强且可用于现场检测等优点 。

伪狂犬病病毒gE基因在昆虫细胞中的高效表达

In order to develop a simple and safe test for the detection of vaccinated as well as wild type Pseudorabies virus (PRV) infected pigs,the modified gE gene of PRV Ea strain,obtained by cutting the 5’ UTR using PCR and DNA recombinant technique,was inserted into baculovirus expression vector pFastBac 1,resulting the trans-position plamid pFE1.75.After homologous recombination,recombinant baculovirus rvBacE1.75 was gained and high level expression of glycoprotein E (gE) was observed after the infection of rvBacE1.75 to Tn-5B1-4 cells.The expression product was 80～88kD and was specific to antisera against PRV Ea strain by Western-blotting.Purified recombinant proteins were used as an antigen in Latex Agglutination Test(gE-LAT) and the test was specific,sensitive,safe and simple.

检测鸭坦布苏病毒乳胶凝集试验的建立及初步应用

以制备的鸭坦布苏病毒单克隆抗体致敏乳胶,建立检测鸭坦布苏病毒抗原的乳胶凝集方法。经优化后确定其最佳致敏抗体量为300μg、最佳致敏时间为3h、致敏温度为37℃。以乳胶凝集试验和RT-PCR对73份自然感染病例进行检测,分别检出阳性27、31份,两者检出的阳性符合率为87.1%。本方法快速、简便,适用于基层应用。

乳胶凝集试验方法在检测鸭坦布苏病毒抗体中的应用

以经超速和密度梯度离心浓缩纯化的鸭坦布苏病毒抗原进行方阵滴定,筛选出致敏乳胶的最佳条件,并制备成鸭坦布苏病毒乳胶凝集试验(LAT)用抗原,与特异性的鸭坦布苏病毒阳性血清反应出现肉眼可见的凝集颗粒,进而建立检测鸭坦布苏病毒抗体的乳胶凝集试验方法。经试验测定该致敏的抗原与鸭流感病毒阳性血清、鸭副粘病毒阳性血清、鸭肝炎病毒阳性血清、鸭产蛋综合症病毒阳性血清和鸭呼肠孤病毒阳性血清均不出现凝集现象,表明具有良好的特异性。以建立的LAT方法和间接ELISA同时分别对80份鸭血清进行检测,结果 LAT方法检出阳性58份、阴性22份,而间接ELISA方法检出阳性68份、阴性12份,两者阳性符合率达85.3%。以上结果表明,本方法具有简便、快速、特异等优点,可用于临床样品的快速诊断和血清流行病学调查。

胶乳凝集试验在家蚕浓核病毒检测中的应用

应用抗体致敏的胶乳进行凝集试验检测提纯的家蚕浓核病毒,可检测出的最小量为1×10^(-3)OD,比对流免疫电泳法和双向免疫扩散法的灵敏度高100倍,但比斑点免疫结合测定法低10倍;检测蚕体样品时,比对流免疫电泳法检出病毒时间早,检出阳性率高。致敏胶乳的最适IgG量为0.5～1mg/ml,致敏胶乳的最适密度为1％。为排除非特异性反应,致敏胶乳应含有0.1％的BSA;以含0.05％Tween-20的Tris-HCl缓冲液制备检样组织匀浆,静置10～15分钟取上清待检。样品与致敏胶乳混合后10分钟内即可判断结果。

伪狂犬病病毒gE基因主要抗原表位区在大肠杆菌中的表达与gE乳胶凝集鉴别诊断方法的建立

将伪狂犬病病毒 (PRV)Ea株 gE 基因主要抗原表位区段融合到原核表达载体 pET2 8b的T7启动子下游 ,构建成原核表达质粒 ,经IPTG诱导 ,SDS -PAGE和Westernblot印迹分析 ,证实 gE 基因主要抗原表位区在大肠杆菌中获得了表达 ,表达产物具有抗原性 ,分子量为 38kD ,位于包涵体中。包涵体经变性、复性处理 ,复性产物致敏乳胶 ,并对抗原致敏浓度、致敏时间、致敏温度进行优化 ,建立了gE乳胶凝集试验 (gE -LAT)。该方法不仅能显著区分 gE 基因缺失疫苗免疫猪血清和野毒感染猪血清 ,而且具有简便、快速等优点。检测临床 36 0份猪血清 ,阳性率为 5 7 78% (2 0 8/ 36 0 ) ,比国外阻断 gE -ELISA的 5 8 0 6 % (2 0 9/ 36 0 )略低 ,阳性符合率为 94 86 % (2 0 3/ 2 14 ) ,总符合率为 96 94 % (349/ 36 0 ) ,两种检测方法结果差异不显著 (P >0 0 5 )。

猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因和流感病毒HA基因的联合表达及应用

参照已公布的流感病毒血凝素基因(HA基因)及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列,设计并合成一对引物P1、P2,以RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORF7片段(约410bp),其中含HA基因主要核苷酸序列(33bp)。用BamH Ⅰ、Xho Ⅰ分别对扩增出的片段及pET32a质粒进行酶切,连接后构建了重组质粒pETHN并转化到BL21(DE3)宿主菌中诱导表达。用纯化后的表达产物与流感病毒血凝素单抗及乳胶建立了诊断猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的乳胶凝集试验。检测结果显示:该方法有良好的特异性及敏感性,与IDEXX公司FLISA检测试剂盒符合率达93.8％。

三种检测猪伪狂犬病抗体的方法比较

应用血清中和试验(SNT)、乳胶凝集试验(LAT)和PRVgpI抗体鉴别ELISA三种方法检测了42份猪血清中的伪狂犬病抗体效价并进行了比较。结果表明SNT与LAT二种方法的阳性符合率为87.1%(27/31),阴性符合率为90.1%(10/11),总符合率为88.1%(37/42),且SNT的敏感性高于LAT,但PRVgpI抗体与SN和LA抗体无相关性。

乳胶凝集试验检测猪场猪PPV、JBEV和PrV血清抗体

用乳胶凝集试验(LAT)对两个规模化猪场的后备母猪进行猪细小病毒病(PPV)、猪乙型脑炎(JBEV)和猪伪狂犬病(PrV)血清流行病学调查,共检查血清样本67头份,结果检出PPV抗体阳性血清28份,阳性率为41.79％;JBEV抗体阳性血清18份,阳性率为26.87％;PrV抗体阳性血清19份,阳性率为28.63％;但两个规模化猪场的PPV、JBEV和PrV阳性率不一致,甲猪场的PPV、JBEV和PrV的阳性率分别为51.2％、30.2％和39.5％,乙猪场为25.0％、20.83％和8.32％。对3种病毒阳性血清进行抗体滴度测定,其抗体滴度在甲猪场均不高于1:16,乙猪场不高于1:8。