黑水虻生物转化蚕沙的研究

为实现蚕沙资源化、无害化和减量化,本试验利用黑水虻幼虫对蚕沙进行生物转化研究。以5龄蚕鲜蚕沙为原料,1)分别将4日龄黑水虻幼虫按20 g/kg(幼虫重/蚕沙重)投喂到蚕沙水分含量分别为47%(对照组)、55%(A55组)、60%(A60组)、65%(A65组)、70%(A70组)和75%(A75组)的6个组,每组5个重复,对黑水虻幼虫生长性能和蚕沙减重率进行研究。2)将4日龄黑水虻幼虫分别按10(B10组)、15(B15组)、20(B20组)、25(B25组)和30 g/kg(B30组)(幼虫重/蚕沙重)投喂到蚕沙水分含量为65%的5个组,每组5个重复,对蚕沙减重率、营养物质变化及黑水虻幼虫生长性能、营养成分进行研究。结果表明:1)A65组的100头幼虫重显著高于A55、A0组(P<0.05);A65组的蚕沙减重率极显著高于A0、A55组(P<0.01),显著高于A60组(P<0.05)。2)B25组的蚕沙减重率显著高于B10、B15组(P<0.05)。B20、B25、B30组的粗蛋白质降幅显著高于B10、B15组(P<0.05),B25、B30组的粗脂肪降幅显著高于B10、B15、B20组(P<0.05),B25、B30组的粗纤维、钙降幅显著低于B10、B15组(P<0.05),B15、B20、B25、B30组的粗灰分降幅显著低于B10组(P<0.05)。3)B15、B20、B25、B30组的黑水虻幼虫粗脂肪含量显著低于B10组(P<0.05)。各组的黑水虻幼虫总氨基酸(TAA)、必需氨基酸(EAA)、非必需氨基酸(NEAA)含量差异不显著(P>0.05)。4)各组的蚕沙残渣重金属(砷、汞、铅、铬)含量及细菌、霉菌、沙门氏菌总数差异不显著(P>0.05)。各组的蚕沙残渣总养分、有机质含量及pH符合《有机肥料标准》(NY 525—2012)。各组的黑水虻幼虫砷、汞、铅、铬含量及细菌、霉菌、沙门氏菌总数均低于《饲料卫生标准》《GB 103078—2017》。由此可见,本试验条件下,以25 g/kg(幼虫重/蚕沙重)的4日龄黑水虻幼虫投喂水分含量为65%的蚕沙,能有效吸收蚕沙中的营养物质,达到减量化、无害化目的,可为蚕沙高值化利用提供数据支撑。

不同蛹虫草菌株栽培蚕蛹虫草的形态性状及活性成分含量比较

选择5株蛹虫草菌株感染家蚕5龄第3天幼虫生产蚕蛹虫草,通过观察检测蚕蛹虫草的形态性状及采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定虫草素和腺苷的含量,为筛选高产优质蛹虫草菌株提供依据。不同菌株栽培生产的蚕蛹虫草的外观形状、生长状况以及活性成分含量均有明显差异:1-Y菌株栽培的蚕蛹虫草整体形状较接近于野生的冬虫夏草,MS菌株栽培的蚕蛹虫草子座形状较佳,17-3菌株栽培的蚕蛹虫草僵虫体形状较佳;1-1菌株栽培的蚕蛹虫草总质量和僵虫体质量均最高,干质量分别达到1.460 g和1.170 g;MS菌株栽培的蚕蛹虫草子座总数量、子座总长度及子座质量占虫草总质量的比率等指标均极显著高于其他菌株(P<0.01),分别达15.100根、44.877 cm和41.357%;1-Y菌株栽培的蚕蛹虫草整体所含虫草素最高,达8.92 mg/g,MS菌株栽培的蚕蛹虫草整体所含腺苷最高,达2.22 mg/g,并且5株供试菌株栽培的蚕蛹虫草僵虫体中的虫草素含量均高于子座,而子座中的腺苷含量均高于僵虫体。研究结果表明,蛹虫草菌株是影响人工栽培蚕蛹虫草形态性状及活性成分含量的重要因素,初步认为1-Y菌株和MS菌株具有较高的生产应用价值。

人工培育条件对蚕蛹虫草主要活性成分含量的影响

虫草素和腺苷是蛹虫草(Cordyceps militaris)最主要的药用活性成分。以家蚕幼虫为寄主人工培育蚕蛹虫草,研究不同培育条件对蚕蛹虫草中虫草素和腺苷含量的影响,为建立不同药用需求的高品质蚕蛹虫草栽培技术提供试验依据。不同培育环境条件下的试验结果是:培养温度在24℃时蚕蛹虫草中的虫草素含量最高,22、24℃时腺苷的含量较高;每天以10℃的温差处理8 h,蚕蛹虫草中的虫草素含量最高(P<0.01),而以此温差处理2 h与处理8 h腺苷的含量差异不显著(P>0.05);光质为黄光最有利于虫草素和腺苷的形成(P<0.01),其次是白光和蓝光;光照度在240~1 200 lx之间虫草素含量的差异不显著(P>0.05),光照度在600~1 200 lx之间腺苷的含量差异显著(P<0.05)。此外,以饥饿处理(接种后每天只给1次饲料)的家蚕幼虫作寄主有利于虫草素的形成,而以饱食的家蚕幼虫作寄主则更有利于腺苷的形成;以5龄第2天幼虫接种有利于虫草素的形成,以5龄起蚕接种有利于腺苷的形成。根据培养蚕蛹虫草的药用目的,可以对培养温度、温差处理时间、光照以及寄主家蚕幼虫的龄期和取食量等条件进行调节。

家蚕幼虫体中黄酮类化合物含量的变化规律

用紫外分光光度法研究了家蚕幼虫体中黄酮类化合物含量在品种、生长发育阶段、性别间的变化规律。家蚕幼虫体富含黄酮类化合物,其含量在蚕品种及杂交组合间存在显著差异,高低相差3.13倍;在性别间,雄蚕体高于雌蚕体;在龄期间,随龄期增大而逐渐增加;在5龄期,随生长而逐渐增加,至第3天达最高值,此后除第5天有一小波动外,随生长而逐渐下降,至成熟时又稍有上升。

人促红细胞生成素基因在家蚕体中的高效表达

人促红细胞生成素(EPO)是一种调控红系干细胞增殖、分化和成熟的糖蛋白激素。将合成的EPOcDNA插入杆状病毒转移载体pBlueBacⅢ,使其置于Ph基因强启动子控制之下,获得了转移载体pBlueBacEPO。将pBlueBacEPODNA与野生型BmNPVDNA共转染BmN细胞,经空斑纯化,获插入EPOcDNA的重组病毒rBmNPVEPO。经Sonthern杂交和PCR扩增鉴定证明人EPO基因已正确组建于BmNPV的预定位置。将重组病毒rBmNPVEPO穿刺接种5龄幼虫和蛹,收集感染第3～5d的幼虫血淋巴和3～65d蛹血淋巴。用ELISA检测幼虫血淋巴中EPO表达量高达62800u/mL,蛹血淋巴中表达量达74000u/mL。Westernblot结果显示幼虫血淋巴和蛹血淋巴均有一条明显的免疫杂交带,分子量均约为26kD。用TF1细胞对幼虫表达产物进行了生物活性测定,每毫升血淋巴中EPO活性约为63000u。

微波辅助萃取法提取家蚕幼虫总黄酮的工艺研究

采用微波辅助萃取法对家蚕幼虫中的总黄酮进行提取,以芦丁为对照品,采用紫外分光光度法测定家蚕幼虫中总黄酮的含量,以总黄酮的含量为考察指标,考察微波功率、微波时间、微波温度、乙醇浓度及料液比对总黄酮提取量的影响,在单因素的基础上,采用L9(34)正交试验设计优化家蚕幼虫中总黄酮的提取工艺。结果表明,微波辅助萃取法提取家蚕幼虫总黄酮的最佳工艺条件为:乙醇体积分数40%、提取时间20 min、料液比1∶15和提取温度80℃。

融合gp67信号肽的慈菇蛋白酶抑制剂基因在蚕体内表达

用ＡｃＭＮＰＶ的ｇｐ６７信号肽与慈菇蛋白酶抑制剂基因（ＡＰＩ２）融合，并整合到昆虫病毒表达载体ＢｍＢａｃＰＡＫ６中，受多角体蛋白基因启动子控制。慈菇蛋白酶抑制剂在蚕体内成功地得到了高效表达。比较了ｇｐ６７信号肽和慈菇蛋白酶抑制剂信号肽在昆虫表达系统中对表达产物的影响，发现表达产物都能分泌到血淋巴中，表达量很相似，但这两种信号肽在表达过程中都没有被切除，且不同信号肽对表达产物的生物活性有很大影响。

僵蚕白僵菌生物学特性的基础研究

4椿家蚕白僵菌(Bb1、Bb2、Bb3和Bb4)在不同培养基上的菌落生长速率和产孢量有较显著差异,菌丝生长速率与产孢量呈负相关。Bb2生长速率最快,Bb3产孢量最多。在PDA培养基上产孢量最少,其培养物对蚕幼虫的毒力较弱;而在CPDA培养基上产孢量最多,其培养物的毒力最强。4种菌株最适生长温度在25—30℃之间。菌株Bb1和Bb2最适生长pH值为5.0,Bb3和Bb4的最适生长pH值均为6.0。

秦巴虫草的人工培养研究

经过 3 a调查研究 ,从秦巴山区的野生虫草中分离出新的虫草菌种 ,通过在家蚕蛹和 5龄蚕体上培养 ,获得了与天然虫草形态相似的家蚕蛹虫草和 5龄蚕虫草 ,暂定名为秦巴虫草。试验证明其生物转化率在80 %以上 ,定向培养子座发生率在 48%左右 ,家蚕蛹虫草干重为 0 .2 1～ 0 .2 8g/个 ,5龄蚕虫草单个体重为0 .3 2～ 0 .40 g/条。

北虫草菌种感染家蚕幼虫的研究

采用北虫草菌种接种家蚕幼虫进行蚕虫草的人工栽培试验，调查菌种、家蚕品系、孢子数量对家蚕幼虫接种后的感染情况。结果表明：家蚕幼虫接种北虫草菌种之后，随着感染率的增加体重逐日下降，大批感染的时间一般都集中在第3～7天；菌种是决定人工栽培是否成功的主要因素，蚕品种的影响不大，日系原蚕对北虫草菌种的感染率略高于杂交蚕；采用孢子数量多的孢子液接种，家蚕的感染速度快且感染率高，孢子液的孢子数量以106/mL范围以上较好。

白僵蚕化学成分的分析

本研究测定了白僵蚕中１８种微量元素及１７种氨基酸的含量。白僵蚕含有Ｆｅ、Ｚｎ、Ｃｕ、Ｍｎ、Ｃｒ、Ｎｉ等６种人体必需的微量元素，其氨基酸的含量以甘氨酸（Ｇｌｙ）为最高（１６．０１％），丙氨酸（Ａｌａ）、丝氨酸（Ｓｅｒ）及酪氨酸（Ｊｙｒ）的含量亦较高。

温敏性品种雌雄蚁蚕蛋白质双向电泳图谱差异分析

为探讨温敏性品种限伴雌雄蚁体蛋白组分的差异,对刚孵出的雌(黑色)、雄(赤色)蚁体蛋白用双向电泳的技术和方法进行蛋白组分的比较分析。结果显示:在易溶蛋白中,雄蚁和雌蚁分别检测到269和250个蛋白点,能相互匹配的蛋白点占86.71%,特异蛋白雄蚁有43个,雌蚁有25个。在难溶蛋白中,雄蚁和雌蚁分别检测到370和427个蛋白点,能互相匹配的占80.10%,雄、雌蚁的特异蛋白分别为52个和106个。结果表明雌雄蚁体的蛋白组成存在差异。

桑蚕幼虫培育蛹虫草复合体的研究初报

应用桑蚕幼虫体人工培育蛹虫草复合体,对不同虫龄桑蚕幼虫体的头部或腹部采用2个蛹虫草菌种进行人工接种后室内培养。结果表明:在不同虫龄的桑蚕幼虫体上接种蛹虫草菌均能长成蛹虫草复合体[由虫体和子实体(草)组成];蛹虫草复合体得率桑蚕幼虫体头部接种高于腹部接种,4龄虫体接种高于其他虫龄,菌种824高于菌种002,蛹虫草复合体得率最高为72.0%。不同菌株、虫龄和虫体部位长成菌丝率与蛹虫草复合体率之间存在线性相关关系。

家蚕幼虫化学成分初步研究

目的:采用系统预试法对家蚕幼虫可能的化学成分进行预试验,初步探索家蚕幼虫的化学成分。方法:采用圆形滤纸层析预试法和试管预试法对家蚕幼虫的水提取液、95%乙醇提取液、乙醚提取液进行研究,通过多种指示剂和显色剂的显色反应或沉淀反应,对家蚕幼虫可能含有的化学成分进行初步研究。结果:家蚕幼虫含有生物碱类、黄酮类、酚类、内酯及香豆素类、鞣质、氨基酸、蛋白质、有机酸、糖及苷类、挥发油及油脂类成分。结论:初步确定家蚕幼虫含有多种有效成分,为进一步研究家蚕幼虫的生物活性成分及开发利用提供了实验基础。

HCVCE2融合蛋白在家蚕培养细胞、蚕幼虫中的表达及其初步应用

目的:高效表达HCVCE2融合蛋白并进行初步应用.方法:将2a型HCV全长CE2基因的cDNA重组于质粒pBacPAK8,构建重组转移载体pBacPAK CE2,与经线性化修饰的家蚕核型多角体病毒(BmNPV)DNA共转染家蚕培养细胞株,构建重组病毒.双酶切及PCR鉴定重组病毒基因组中目的片段的表达.重组病毒感染BmN细胞株及五龄家蚕幼虫后,SDS PAGE分析细胞培养上清、细胞抽提物及幼虫体液样品中,HCVCE2融合蛋白的特异性条带.并用间接ELISA法初步检测表达产物的生物活性.结果:双酶切及PCR鉴定重组病毒基因组含有约1.6kb的目的片段,重组病毒感染后的BmN细胞培养上清、细胞抽提物及幼虫体液样品中,均可见一Mr约90×103的特异性条带;用间接ELISA检测证明表达产物具有较好的免疫原性.结论:HCVCE2融合基因在家蚕培养细胞及蚕幼虫中获得了高效表达,并具有生物活性,为进一步进行疫苗的研究及临床诊断试剂的开发奠定基础.

桑蚕幼虫中肠细胞腺苷三磷酸酶活性的细胞化学

用电镜细胞化学技术研究了桑蚕五龄幼虫中肠组织细胞中ＡＴＰａｓｅ的亚细胞分布。ＡＴＰａｓｅ仅大量分布在中肠圆筒形细胞的微绒毛和杯形细胞在肠腔的开口处、肠壁肌肉的肌质膜上、部分细胞的细胞质膜和细胞器及细胞质中．ＡＴＰａｓｅ的这种分布状态与细胞的功能紧密相关．

采用微波消解-火焰原子吸收光谱法测定家蚕幼虫体中6种金属元素的含量

采用微波消解-火焰原子吸收光谱法,测定家蚕幼虫体中Ca、Mg、Fe、Cu、Mn、Zn 6种金属元素含量。结果表明家蚕幼虫体中不仅含有大量的常量元素Ca和Mg,同时也含有丰富的人体必需微量元素Fe、Cu、Mn、Zn,Ca、Mg、Fe、Cu、Mn、Zn 6种金属元素在家蚕幼虫体中的质量比分别为1 907.122、1 319.753、35.109、4.133、6.592、74.116μg/g。因此认为家蚕幼虫体适于作为药食资源进行开发。

家蚕品种云蚕8的复壮与改良

家蚕品种云蚕8与云蚕7的杂交组合已在云南蚕区大面积推广10多年。针对云蚕8的强健性和茧层率性状明显退化的问题,将分点保存的云蚕8多个品系的母种采用循环杂交及回交等方法进行复壮改良,选择的优良组合经过5个世代定向选育重新建立了云蚕8母种的新系统。复壮改良后的云蚕8母种平均虫蛹率和茧层率分别达到93.54%、23.46%,较原品系分别提高5.19%、0.38%,原种的虫蛹率和茧层率分别达到98.11%、24.48%。将复壮改良后的云蚕8与先期复壮改良的云蚕7组配新组合f2云7×f4云8,其健康性和产茧量等与原杂交组合云蚕7×云蚕8相比均得到提高,虫蛹率从95.80%提高到99.09%,茧层率从23.05%提高到24.27%,万蚕茧层量从3.73 kg提高到4.68 kg,万蚕产茧量从16.25 kg提高到20.79kg,有效地实现了对云蚕8母种、原种的复壮改良。

常用消毒药剂对不同存在状态微孢子虫孢子的消毒效果

研究了甲醛制剂 (福尔马林液 )和含氯制剂 (漂白粉液 )对蚕粪、地表层土、蚕体、蛹体、蛾体内微孢子虫 (N osema bombycis)孢子的消毒效果 .结果表明福尔马林液的消毒效果明显优于漂白粉液的消毒效果 .但是在养蚕生产常规消毒条件下 ,两种消毒药剂对蚕体、蛹体、蛾体、深处土层、蚕粪 (除福尔马林液外 )中微孢子虫孢子均没有彻底的消毒效果 .

云南省主要桑品种饲养原蚕的对比试验

[目的]通过对引进的几个桑品种的原蚕饲育成绩进行了初步调查,研究云南省主要桑树品种对原蚕饲育成绩的影响。[方法]用不同桑品种在相同饲育条件下分别饲养原蚕,测定调查龄期经过、蛹期经过、全茧量、茧层量、茧层率、幼虫生命率、虫蛹统一生命率、死笼率、单蛾产卵数、单蛾良卵数、良卵率等指标。[结果]蚕期发育经过及幼虫生命率、虫蛹统一生命率等无显著差异;但死笼率盛东1号较高,育71-1较低的倾向。春期用育71-1的桑叶饲育原蚕的全茧量、茧层量均高于对照,茧层率略高于对照。[结论]春期原蚕繁育用桑适宜选择的桑品种依次为育71-1、农桑14号、湖桑32号、盛东1号;秋期原蚕繁育用桑适宜选择的桑品种依次为湖桑32号、育71-1、农桑14号、盛东1号。