HPLC法同时测定水飞蓟果实不同部位及其提取物中水飞蓟亭等7种黄酮类成分的含量

目的建立水飞蓟果实、果皮、果仁及其提取物中花旗松素、水飞蓟亭、水飞蓟宁、水飞蓟宾A、水飞蓟宾B、异水飞蓟宾A和异水飞蓟宾B等7种黄酮类成分的含量测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱为Kromasil C18（200 mm×4.6 mm,5μm）柱,以甲醇-水-甲酸为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 m L·min^-1,检测波长为288 nm,柱温为40℃,进样量为20μL。结果花旗松素、水飞蓟亭、水飞蓟宁、水飞蓟宾A、水飞蓟宾B、异水飞蓟宾A和异水飞蓟宾B的质量浓度分别在1.00-25.0、3.96-99.0、1.96-49.0、4.00-100、4.08-102、2.00-50.0和1.04-26.0 mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r≥0.999 0）,平均加样回收率为96.4%-103.3%,RSD均小于3.1%。不同水飞蓟果实、果皮、果仁及提取物中7种成分含量及总水飞蓟素含量均显示出一定差异。结论本法可为水飞蓟药材及其提取物质量的综合评价提供准确的定量方法。

水飞蓟果实、果皮及其提取物质量评价法的研究

目的建立水飞蓟果实、果皮及其提取物综合质量评价方法。方法用UV法在 2 87nm下测定水飞蓟素的含量 ;并以HPLC法测定指标成分水飞蓟宾的含量 :采用HypersilC1 8(2 5 0mm×4 6mm ,5 μm)色谱柱 ;以甲醇 乙腈 磷酸二氢铵缓冲液 (2 4∶2 4∶5 0 ,pH =5 )为流动相 ;流速为1 0mL min ;柱温为 4 0℃ ;检测波长为 2 87nm。结果UV法和HPLC法线性分别在 8 0 4～4 0 2 μmol L和 0 2 76～ 1 3 8μg;加样回收率 :UV法 98 5 % ,HPLC法 97 3 % ;水飞蓟果实、果皮中水飞蓟素和水飞蓟宾含量分别为 3 88%和 1 3 2 %、8 0 1 %和 2 77% ;3种水飞蓟提取物中水飞蓟素含量均在 80 %以上 ,但水飞蓟宾含量在 2 8 7%～ 3 2 8% ,有明显差异。结论

超声辅助双水相体系提取水飞蓟中水飞蓟宾的工艺优选

为优化水飞蓟中水飞蓟宾的提取工艺,以乙醇体积分数、硫酸铵用量、料液比和超声时间为自变量,水飞蓟宾含量为因变量,采用星点设计-响应面法优选超声辅助双水相体系提取工艺参数。研究结果表明,最佳工艺条件为:乙醇体积分数为57%,硫酸铵的用量为0.26 g·m L^(-1),料液比为25 m L·g-1,超声时间为19 min,水飞蓟宾含量为10.18 mg·g-1。该工艺适用于水飞蓟中水飞蓟宾的提取,方法简单,预测性较好。

水飞蓟有效成分的研究──水飞蓟宾的提取、分离鉴定

采用有机溶剂和柱层析两种方法提取分离水飞蓟果实中的有效药理成分，经定性反应和薄层层析等方法鉴定，主要药理成分为水飞蓟宾（Ｓｉｌｙｂｉｎ）。４００ｇ水飞蓟油渣用两种方法分别提取３．８４ｇ（得率０．９６％）和２．６９（得率０．６５％）水飞蓟宾。

水飞蓟悬浮培养体系的建立及不同因子对水飞蓟宾量的影响

目的建立水飞蓟Silybum rnarianum悬浮培养体系,测定不同影响因子对水飞蓟宾量的影响。方法采用正交试验确定水飞蓟悬浮培养体系,采用HPLC法测定水飞蓟宾的量。结果激素配比6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L+ZT 1.5 mg/L的MS培养基、光照12 h/d、p H值为7、转数110 r/min,为水飞蓟悬浮培养的最佳生长条件。当水杨酸、壳聚糖、硝普钠质量浓度分别为0.05、3、1μg/L时水飞蓟增长量达到最大值,水飞蓟宾量也达到最大值。结论建立的悬浮培养体系可用于水飞蓟的快速繁殖,适宜质量浓度的壳聚糖和硝普钠利于悬浮细胞的生长及水飞蓟宾的积累。

基于系统药理学研究水飞蓟治疗肺癌的作用机制

目的研究水飞蓟Silybum marianum对肺癌的作用及其机制。方法利用中药系统药理学数据库(traditional Chinese medicine systems pharmacology,TCMSP)筛选水飞蓟的活性成分,并利用加权整体相似度法(weighted ensemble similarity,WES)和系统药物靶向工具(systematic drug targeting,SysDT)模型预测候选活性成分的靶点;进行基因本体论生物学过程(gene ontology biological process,GO BP)与京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析揭示靶点所涉及BP以及通路。选取水飞蓟主要活性成分水飞蓟宾进行体内外实验验证,首先验证水飞蓟宾对人肺腺癌H1975细胞与小鼠肺癌LLC细胞的体外抑制率;其次用流式细胞术评估水飞蓟宾对肿瘤细胞系的促凋亡作用;随后在LLC肺癌动物模型进行体内抑瘤验证,并检测瘤内细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T cell,CD8+T)的浸润量;最后通过Western blotting法检测凋亡相关蛋白表达。结果经过筛选得到12个活性成分与355个靶点,并构建了活性成分-靶点网络。CCK-8检测结果显示水飞蓟宾能够抑制肺癌细胞的增殖,且呈剂量相关性;体内外流式实验表明水飞蓟宾能通过促进瘤内CD8+T细胞的浸润从而促进癌细胞的凋亡来发挥抗肿瘤作用;水飞蓟宾能够上调肿瘤细胞和肿瘤组织p53蛋白表达水平(P<0.001),下调B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)蛋白表达水平(P<0.05、0.001)。结论水飞蓟主要通过调控凋亡相关通路发挥抗肿瘤作用。

水飞蓟宾及其衍生物生物活性及作用机制的研究进展

水飞蓟宾从水飞蓟Silybum marianum的种子中提取分离得到,属于黄酮木脂素类化合物,临床上常用于治疗急、慢性肝炎或肝功能异常的恢复。近年来研究发现水飞蓟宾具有抗肿瘤和抗代谢功能失调作用,通过调节活性氧水平实现对肿瘤的抑制作用,对糖尿病的治疗作用主要是通过保护靶器官和提高胰高血糖素样肽受体的表达实现的。对水飞蓟宾及其衍生物在治疗肝病、肿瘤、糖尿病等方面的生物活性及作用机制的研究进展进行综述,为深入研究水飞蓟宾及其衍生物的生物活性以及拓展其临床应用提供依据。