水飞蓟Silybum marianum (L.) Gaertn.试管苗组织培养研究

本文报道了采用组织培养方法首次成功地获得了水飞蓟试管苗。试验结果表明：在选用的１／２ＭＳ、ＭＳ和改良ｗｈｉｔｅ３种愈伤组织诱导培养基中，筛选出１／２ＭＳ＋ＮＡＡ１．０＋ＢＡ０．５＋ＺＴ０．５为适宜的培养基。选用的芽诱导培养基为：１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．２＋ＢＡ２．０；不定根诱导培养基为：ＭＳ＋ＮＡＡ１．０。在根、节间、节部和叶等４种外植体中，筛选出节部为适宜的外植体。

水飞蓟果实、果皮及其提取物质量评价法的研究

目的建立水飞蓟果实、果皮及其提取物综合质量评价方法。方法用UV法在 2 87nm下测定水飞蓟素的含量 ;并以HPLC法测定指标成分水飞蓟宾的含量 :采用HypersilC1 8(2 5 0mm×4 6mm ,5 μm)色谱柱 ;以甲醇 乙腈 磷酸二氢铵缓冲液 (2 4∶2 4∶5 0 ,pH =5 )为流动相 ;流速为1 0mL min ;柱温为 4 0℃ ;检测波长为 2 87nm。结果UV法和HPLC法线性分别在 8 0 4～4 0 2 μmol L和 0 2 76～ 1 3 8μg;加样回收率 :UV法 98 5 % ,HPLC法 97 3 % ;水飞蓟果实、果皮中水飞蓟素和水飞蓟宾含量分别为 3 88%和 1 3 2 %、8 0 1 %和 2 77% ;3种水飞蓟提取物中水飞蓟素含量均在 80 %以上 ,但水飞蓟宾含量在 2 8 7%～ 3 2 8% ,有明显差异。结论

水飞蓟萌发期和苗期对盐胁迫的生长生理响应

为了探讨水飞蓟萌发期和苗期对盐胁迫的响应,比较不同水飞蓟类型耐盐性的强弱,以黑色果皮(SD)和白色果皮(HW)2个类型水飞蓟为材料,用不同浓度NaCl(0、0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%)溶液处理种子和幼苗,观察种子发芽势、发芽率和芽苗和幼苗生长及其生理生化特征。结果表明:(1)NaCl胁迫下,水飞蓟种子发芽率、发芽势下降,芽苗生长表现为低浓度促进高浓度(HW为≥0.5%,SD为≥0.3%)抑制,且盐分对子叶长、胚轴长和鲜重影响较大,对干重无显著影响。(2)盐胁迫下水飞蓟幼苗叶片中MDA含量升高,光合色素(Chl a、Chl b、Car)含量下降,幼苗生长表现为低浓度促进高浓度(HW为≥0.9%,SD为≥0.7%)抑制;植株体内可溶性蛋白、可溶性糖含量及保护酶(SOD、POD、CAT)活性先升高后降低,脯氨酸含量则持续增加,其中保护酶活性在0.7%NaCl处理下较对照显著下降,可溶性蛋白和可溶性糖含量在0.9%NaCl处理下较对照显著下降。研究发现,在水飞蓟种子萌发期,盐分主要通过改变种子吸涨能力来影响芽苗生长;在苗期,水飞蓟幼苗主要通过提高渗透物质含量和保护酶活性来缓解盐分造成的伤害;水飞蓟萌发期和苗期耐盐性有所差别,萌发期耐盐能力明显低于苗期,2个类型水飞蓟耐盐性强弱表现为白色果皮类型>黑色果皮类型。

水飞蓟花粉母细胞减数分裂及核型分析

采用压片法对水飞蓟的花粉母细胞减数分裂及体细胞核型进行了研究,结果表明,水飞蓟的绝大多数花粉母细胞减数分裂染色体行为正常,终变期可形成17个二价体,佐证其染色体数目为34条,且为二倍体;其减数分裂为同时型。水飞蓟的染色体数目为2n=2x=34,核型公式为K(2n)=2x=34=34m(4SAT),染色体相对长度组成为2n=8S+12M1+6M2+8L,其核型为"1A"型。

水飞蓟在我国的栽培研究进展

就水飞蓟在我国近年来栽培方面的研究状况作一概述,并提出以后栽培研究的关键问题及展望。

超声辅助双水相体系提取水飞蓟中水飞蓟宾的工艺优选

为优化水飞蓟中水飞蓟宾的提取工艺,以乙醇体积分数、硫酸铵用量、料液比和超声时间为自变量,水飞蓟宾含量为因变量,采用星点设计-响应面法优选超声辅助双水相体系提取工艺参数。研究结果表明,最佳工艺条件为:乙醇体积分数为57%,硫酸铵的用量为0.26 g·m L^(-1),料液比为25 m L·g-1,超声时间为19 min,水飞蓟宾含量为10.18 mg·g-1。该工艺适用于水飞蓟中水飞蓟宾的提取,方法简单,预测性较好。

水飞蓟的个体发育形态学研究

[目的]研究水飞蓟的个体发育形态学特征。[方法]在实验室内培育幼苗发育研究材料,成株形态发育及解剖材料以露地栽培获得,采用观察记录法研究水飞蓟的外部形态和生长发育节律,然后采用徒手切片法和临时装片法观察叶和根新鲜状态下的结构,采用常规石蜡切片技术研究幼苗、根、茎和叶的形态学特征。[结果]种子的萌发方法为子叶出土萌发,适宜浅播;幼苗及成株营养器官结构为典型的草本双子叶植物结构;聚药雄蕊稍短于花冠裂片;雌雄蕊异熟明显,生育期为125～140 d。[结论]该方法对水飞蓟的个体发育形态学特征进行了研究,为水飞蓟规范栽培提供了依据。

水飞蓟的经济价值和栽培技术

水飞蓟是集药用及观赏于一体的经济型草本植物。由于其播期早、成熟期短、要求积温不高、生产成本较低,已成为农民调整种植结构、发展经济作物的首选,也成为了北药发展的一项重要产业。针对这种形势,分析了水飞蓟的经济价值,总结了水飞蓟的综合栽培技术,以期为生产提供参考。

种子前处理对水飞蓟生长及水飞蓟素含量的影响

[目的]考察不同水飞蓟种子处理方法对植株生长及所结果实中水飞蓟素含量的影响,确定种子的最佳处理方法。[方法]将水飞蓟种子分别经冷藏、冷冻等方法处理后播种,考察种子的发芽率、株高、株幅、现蕾时间及单株产量,并比较所结果实中水飞蓟素的含量,筛选种子的最佳处理方法。[结果]水飞蓟种子经超低温处理后播种发芽率最低,生长最弱,果实中水飞蓟素含量最低;自然越冬处理(秋季播种)的种子萌发后长势好,产量最高,且所结果实中水飞蓟素的含量最高。[结论]水飞蓟种子在秋季播种后植株的生长状况较好,产量高,值得进一步研究和推广。

水飞蓟提取物的光稳定性研究

目的研究水飞蓟90%乙醇提取液中主要成分的光稳定性。方法在光照前后、不同光照强度和时长、不同含氧量的条件下,对水飞蓟壳90%乙醇提取液中的主要成分进行检测,通过LC-MS法对避光和强光照射5 d的提取液样品进行质谱对比分析,强光照射5 d后的提取液样品用半制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果水飞蓟亭A、水飞蓟亭B、水飞蓟宾A、水飞蓟宾B、异水飞蓟宾A、异水飞蓟宾B对光照均稳定,水飞蓟宁在光照条件下发生氧化反应,具有光不稳定的特点。结论水飞蓟宁在光照条件下不稳定,其氧化产物为silyamandin。

水飞蓟种子生物学特性初探

[目的]研究水飞蓟种子的生物学特性。[方法]以来自3个栽培地点的水飞蓟种子为试验材料,分别进行种子大小和干粒重的测定,并制作种子半薄切片,研究不同温度下种子的萌发情况。[结果]种子(实际为瘦果)由外皮(果皮和种皮)和胚2部分组成。外皮分5层,外侧4层为果皮,内侧1层为种皮。种胚发育完善,没有胚乳,子叶主要储藏物质为脂肪;25℃为种子萌发的适宜温度,少部分种子具有休眠现象。[结论]该研究积累了水飞蓟种子(果实)的基础生物学资料,为水飞蓟的栽培生产、分类、生药鉴定提供了理论依据。

HPLC法同时测定水飞蓟果实不同部位及其提取物中水飞蓟亭等7种黄酮类成分的含量

目的建立水飞蓟果实、果皮、果仁及其提取物中花旗松素、水飞蓟亭、水飞蓟宁、水飞蓟宾A、水飞蓟宾B、异水飞蓟宾A和异水飞蓟宾B等7种黄酮类成分的含量测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱为Kromasil C18（200 mm×4.6 mm,5μm）柱,以甲醇-水-甲酸为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 m L·min^-1,检测波长为288 nm,柱温为40℃,进样量为20μL。结果花旗松素、水飞蓟亭、水飞蓟宁、水飞蓟宾A、水飞蓟宾B、异水飞蓟宾A和异水飞蓟宾B的质量浓度分别在1.00-25.0、3.96-99.0、1.96-49.0、4.00-100、4.08-102、2.00-50.0和1.04-26.0 mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r≥0.999 0）,平均加样回收率为96.4%-103.3%,RSD均小于3.1%。不同水飞蓟果实、果皮、果仁及提取物中7种成分含量及总水飞蓟素含量均显示出一定差异。结论本法可为水飞蓟药材及其提取物质量的综合评价提供准确的定量方法。

水飞蓟原生质体培养形成愈伤组织及组织培养再生植株

以继代培养一年后的水飞蓟(Silybum marianum Gaerta.)叶愈伤组织为材料进行了原生质体的分离和培养的研究。在 M_(12)培养基中培养3天后观察到第一次分裂,最高分裂频率为35.4%,1—3个月后得到肉眼可见的小愈伤组织,将增殖长大的愈伤组织转至 D_6分化培养基后出现绿色芽点的分化。水飞蓟幼苗下胚轴切段接种于 MS+NAA 0.8mg/l、6-BA0.5mg/1、水解酪蛋白200mg/1 的培养基上诱导出愈伤组织,转至 D_6培养基后分化苗的频率可达75%,再转入生根培养基得到了根的分化,再生植株生长旺盛,移栽工作正在进行之中。

水飞蓟全草不同部位的组成特征

为了考察水飞蓟全草不同部位的组成特征,采用不同的提取溶剂对水飞蓟的幼草、根、茎、叶、花、种子等不同部位提取后,通过高效液相色谱法(HPLC)进行分析。以Hypersil ODS2色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)为分离柱,以50mmoL/L磷酸二氢钾溶液和甲醇为流动相,梯度洗脱,检测波长为254nm。在此条件下,水飞蓟不同部位的样品得到了很好的分离,发现不同部位组成差别很大,得到的组分数从幼草、种子、花、叶、根、茎依次减少。水飞蓟不同部位所含的组分极性有很大差别,不同提取方法得到的样品组成也有较大差别。实验结果可为水飞蓟全草的指纹图谱构建及应用开发提供实验依据。

中药水飞蓟对鸡脂肪肝综合症防治效应的研究

中药水飞蓟(Silybum Marianum(L)Gaertn)具有稳定肝细胞的作用。经反复实验证明,对减轻肝脂肪变性效果明显。临床应用降低血液胆固醇及降脂率分别为41.9％和51.5％,对鸡的脂肪肝综合症有明显的防治作用,可使66.7％的鸡免患脂肪肝,治愈率达80.0％,显效率为13.3％,无效率为6.7％。此药是防治鸡脂肪肝综合症较为理想的药物。

水飞蓟有效成分的研究──水飞蓟宾的提取、分离鉴定

采用有机溶剂和柱层析两种方法提取分离水飞蓟果实中的有效药理成分，经定性反应和薄层层析等方法鉴定，主要药理成分为水飞蓟宾（Ｓｉｌｙｂｉｎ）。４００ｇ水飞蓟油渣用两种方法分别提取３．８４ｇ（得率０．９６％）和２．６９（得率０．６５％）水飞蓟宾。

水飞蓟组织培养的研究进展

对水飞蓟组织培养中外植体来源、愈伤组织诱导、再生植株诱导、毛状根诱导以及组织培养物中活性成分等方面进行了综述,以期为解决水飞蓟的资源需求以及以组织培养为基础的基因与代谢工程研究提供理论及技术指导。

外源水杨酸对盐胁迫下水飞蓟种子萌发及幼苗生理特性的影响

以水飞蓟为试材,在100 mmol/L Na Cl胁迫处理下,调查不同浓度(0 mmol/L,0.1 mmol/L,0.2 mmol/L,0.4 mmol/L,0.6 mmol/L与0.8 mmol/L)外源水杨酸(SA)处理对水飞蓟种子萌发、幼苗生长、抗氧化能力和渗透调节能力的影响。结果显示,SA一定程度上能够缓解盐胁迫对水飞蓟种子萌发及幼苗生长的胁迫效应。经0.1 mmol/L、0.2 mmol/L与0.4 mmol/L SA处理,提升了盐胁迫下水飞蓟种子的发芽势、发芽率、发芽指数及活力指数;提高了水飞蓟株高、茎基、主根长度、根直径、干质量与叶片光合色素含量等生长指标;显著提高了超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)活性以及渗透调节物质含量;降低了膜脂过氧化产物(MDA)与总黄酮含量。但随着SA浓度继续升高其缓解效应随之降低。研究表明:当外源SA浓度为0.1~0.4 mmol/L时,尤其以0.4 mmol/L处理效果最佳,而SA≥0.6 mmol/L时未见明显缓解甚至可能加剧盐胁迫造成的伤害,因此适当浓度的外源SA可通过提高水飞蓟幼苗叶片光合色素的合成能力保护其光合作用,维持植物正常的生长;同时,通过调节抗氧化与抗渗透胁迫能力缓解盐胁迫对水飞蓟幼苗造成的膜脂过氧化损伤,有效缓解盐害胁迫,提高抗盐性。

外源NO对NaCl胁迫下水飞蓟种子萌发和幼苗生长生理的影响

目的研究外源NO对NaCl胁迫下水飞蓟种子萌发、幼苗生长生理的影响。方法用0.05～0.60 mmol/L亚硝基铁氰化钠(SNP)溶液浸种,在0.7%NaCl胁迫下发芽,观察种子发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数。并观察幼苗生长情况,检测叶片中丙二醛(MDA)、光合色素和渗透性物质量,以及保护酶活性。结果 0.7%NaCl胁迫下,水飞蓟种子萌发和幼苗生长受到显著抑制,用0.05～0.60 mmol/L SNP溶液浸种能促进水飞蓟种子萌发和幼苗生长,降低叶片中MDA量,增加光合色素(叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总量和类胡萝卜素)和渗透性物质(可溶性糖、可溶性蛋白和脯氨酸)量,提高保护酶[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)]活性。结论 0.05～0.60 mmol/L SNP浸种能提高水飞蓟种子和幼苗的抗盐能力。不同栽培类型水飞蓟对SNP敏感度不同,其中,0.10 mmol/L SNP对白色种皮处理效果最好;0.40 mmol/L SNP对黑色种皮处理效果最好。

水飞蓟籽油的亚慢性毒性研究

目的研究水飞蓟籽油的亚慢性毒性。方法将80只大鼠随机分为3个实验组和1个空白对照组,每组20只,雌雄各半,剂量分别为10.00 ml/kg BW、5.00 ml/kg BW和2.50 ml/kg BW,连续灌胃91 d。试验期间每周称一次体重,计算食物利用率;实验中期和末期检查大鼠血常规、生化指标;试验结束时处死动物,称量重要脏器重量,计算脏器指数,并对主要脏器进行病理组织学观察。结果实验期间,各组大鼠均未见明显中毒体征,也未见死亡。各实验组大鼠的体重和食物利用率与对照组比较差别无统计学意义。试验中期、末期血生化和血常规指标与对照组比较差别均无统计学意义。各实验组动物的脏器/体重比与对照组比较差别均无统计学意义,组织病理学未见明显异常。结论在本实验条件下,水飞蓟籽油无明显亚慢性毒性。