联合应用自杀基因/前药系统和放疗对人骨肉瘤细胞的杀伤作用

目的观察联合应用自杀基因/前药系统和放疗对人骨肉瘤细胞的杀伤作用。方法以大肠杆菌JM107为模板,PCR扩增出CD基因,测序并将其插入真核表达质粒pEGFP-C1中,构建EGFPCD融合基因。用DOTAP将分别含有CD和HSV-TK的两种质粒pEGFP-CD和tgCMVHyTK同时导入人骨肉瘤细胞SAOS-2,经G418和潮霉素B共同筛选后,于荧光显微镜下观察阳性克隆细胞株SAOS-2CDTK。运用PCR和Northernblot方法检测SAOS-2CDTK细胞中的CD和HSV-TK基因及其表达。用MTT法检测单独或联合应用两种前药(GCV、5-FC)对SAOS-2CDTK细胞的存活率、“旁观者效应”以及细胞对放疗敏感性的影响。结果测序图和酶切鉴定证明CD基因的克隆和含EGFPCD融合基因的重组真核表达质粒pEGFP-CD的构建是成功的。荧光显微镜观察SAOS-2CDTK细胞胞质呈现绿色荧光。PCR和Northernblot分析均表明SAOS-2CDTK细胞中含有CD和HSV-TK两个基因,并获得mRNA水平的表达。与单一前药相比,联合应用两种前药时,SAOS-2CDTK细胞的存活率下降,“旁观者效应”及细胞对放疗的敏感性增强。结论联合应用两种自杀基因/前药系统和放疗可增强细胞毒作用,为骨肉瘤的治疗提供了一条新的有效途径。