口服免疫药物后中国对虾某些血淋巴因子的测定及方法研究

于1991年4－9月，以海捕中国对虾亲虾及养殖中国对虾为材料，运用单向免疫扩散（SRID）方法测定对虾血淋巴免疫因子，并采用经改进后的Horowitz等人的方法测定对虾体内的酚氧化酶（PO）活性，目的在于运用该两种方法对口服不同免疫药物的养殖对虾的血淋巴免疫因子及PO活力进行测定。对亲虾和养殖对虾口服不同免疫药物前后的测定结果表明，几种情况下的对虾血淋巴中均存在类似IgM的因子，血细胞中存在酚氧化酶原（ProPO）并可被激活；正常对虾的血淋巴中存在PO活力；口服免疫药物可以刺激IgM，proPO，PO活力发生变化。研究初步表明，血淋巴因子的SRID测定及PO活力测定可作为衡量对虾免疫状态的定性指标。

铝吸附流感疫苗中血凝素含量检测方法的建立

目的建立铝吸附流感疫苗中血凝素(HA)含量的检测方法。方法选用不同的解离液,在不同的条件下对铝吸附疫苗进行解离,以单向免疫扩散法(SRID)检测血凝素含量,比较回收效果,并对选取的解离方法进行初步验证。结果经解离液A处理后,测定HA的回收率为71%～80%,而解离液B的回收率在96%～110%之间。对不同温度、作用时间等考察,最终确定以解离液B在室温解离2h后进行检测。该方法试验内和试验间变异系数均小于20%。结论采用解吸附结合传统SRD方法测定铝吸附流感疫苗中HA含量,重复性好,准确度高,可代替动物接种法。

紫外分光光度法测定动物血清IgG含量方法的研究

目的建立一种操作简便,快速,灵敏度高,重复性好的测定动物血清IgG制品含量的方法。方法研究紫外分光光度法测定动物血清IgG含量的可行性,并将其与免疫单扩散法进行方法学的比较。结果相比免疫单扩散法,紫外分光光度法得到的结果稳定,线性相当好。结论紫外分光光度法可用于测定动物血清IgG制品含量,该测定方法数据稳定,线性关系好,准确性高,操作简便。

日本对虾血清三类免疫球蛋白样物质的研究

采用单向免疫扩散法 (SRID)和免疫酶斑点法 (Dot ELISA)对日本对虾 (Penaeusjaponicus)血清中类IgM ,IgG ,IgA样物质进行了较系统的研究分析。结果发现 ,虾血清中存在能与羊抗人IgM ,IgG ,IgA发生结合且能被特异性阻断试验确证的物质。文中还对12例对虾血清类IgM ,IgG ,IgA样物质的含量进行了检测。结果提示 ,虾血清中确实存在与人免疫球蛋白 (Ig)特异性抗原决定簇极为相似的物质 ,它的存在对研究虾的抗病机制具有重要意义。

鸡血清载脂蛋白AI浓度单向免疫扩散测定法的研究

介绍一种特异、灵敏、简便的蛋鸡血清载脂蛋白AI(apoAI)浓度单向免疫扩散测定法。用磷钨酸镁反复沉淀制备得高密度脂蛋白,经纯化、B radford法蛋白定量后(3.208 mg/mL),作为新西兰白兔的免疫原及载脂蛋白AI测定的标准。本室免疫所得兔抗鸡apoAI抗血清制成免疫琼脂板,加样培养进行单向免疫扩散测定。本法的标准曲线相关性良好,可信性、重复性满意。

癌症患者血清α_1-抗胰蛋白酶、α_1-酸性糖蛋白和结合珠蛋白的变化

本文采用单向免疫扩散法对100例原发性肝癌、25例肺癌、25例卵巢癌、30例喉癌、87例鼻咽癌、139例良性疾患及60例正常献血员血清α_1-抗胰蛋白酶(α_1-AT)、α_1-酸性糖蛋白(α_1-AG)和结合珠蛋白(HP)进行了定量测定,结果表明五类癌症患者血清三种糖蛋白成分均高于正常人和良性疾患,具有显著区别(p<0.001及p<0.05)。应用七类人群进行逐步判别分析,建立判别式,正常人、良性疾患及原发性肝癌的回代符合率在60％以上。这些实验资料均表明对癌症患者。

机器视觉流感疫苗血凝素含量测量实验研究

流感疫苗血凝素含量的测量,采用单向放射免疫扩散法,其关键在于扩散环直径的确定。传统采用游标卡尺或高清扫描图像方法测量扩散环直径,存在人为干扰,测量精度与稳定度低。本文基于机器视觉技术研制了血凝素含量自动测量仪,利用CCD相机采集扩散环图像,用图像处理算法测量扩散环直径,实现了扩散环直径数据获取、血凝素含量计算与结果数据分析等操作的自动化与智能化,有效消除人为干扰,提高测量精度。实验表明,该测量仪测量精度可达2μg/mL,相关参数R2>0.99,稳定度高,变异系数小于1%,满足实际测量需求。此仪器适应于各种型别的流感疫苗血凝素含量测量,且测量结果易于保存、传输,便于二次处理。

应用单向放射免疫扩散法测定流感疫苗血凝素含量的研究

分析了单向放射免疫扩散法快速、准确测定流感疫苗血凝素含量的可行性。利用在打孔器孔径一定的条件下抗原浓度只与扩散圈直径的平方成线性关系,而与打孔器无关,测定流感疫苗血凝素含量。结果可见,流感疫苗3个型别血凝素扩散圈直径的平方均与其浓度成线性,r均大于0.99,变异系数均小于1%,平均回收率99.7%。单向放射免疫扩散法方法简便、快速、准确,适用于流感疫苗血凝素含量的测定。

流感疫苗单向免疫扩散试验中抗血清制备新方法的研究

流感疫苗血凝素含量检测方法为单向免疫扩散试验,其抗血清通常由WHO参比实验室提供,通过纯化病毒、蛋白酶切获得血凝素主要抗原片段,然后再免疫动物获得抗血清。该方法制备时间较长,是制约流感疫苗研发及检测的主要因素。以RT-PCR方法获取甲型H1N1流感病毒血凝素中主要抗原片段基因,构建重组质粒并在大肠杆菌中表达,表达产物经纯化、复性后,以蛋白电泳及免疫印迹方法进行了鉴定。以纯化蛋白免疫家兔,制备了相应的抗体,初步证明可用于常规的单向免疫扩散试验。以该法可以快速获得抗血清,尤其是在大流行流感疫苗的研发中,加快疫苗研发进程。

血清IgG、IgA、IgM、C_3和C_4四种测定方法的方法学评价

本文介绍血清ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、Ｃ_３和Ｃ_４四种测定方法的方法学评价试验。结果表明：简易免疫比浊法，微量免疫比浊法和超微量免疫比浊法测定前述五项指标的准确度，精密度和灵敏度均高，且都比单向放射免疫扩散法好。并把原简易免疫比浊法中的反应时间从３７℃６０分钟改为３７℃３０分钟，其吸光度仍稳定；把原简易免疫比浊法中的测定波长从４９５ｎｍ改为３４０ｎｍ，原超微量免疫比浊法中的波长从４９２ｎｍ改为４５０ｎｍ，这样可以提高灵敏度。我们用这四种方法同时测定了６０份献血员血清ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、Ｃ_３和ｃ_４水平，并对这四种方法做了干扰试验。由于免疫比浊法操作简单、快速，且准确度、精密度和灵敏度均好，因此，其不失为测定血清ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、Ｃ_３和Ｃ_４较好的方法。

血清免疫球蛋白的定量测定——调查桂林市213名青年学生的正常值

本文报道了用毛细玻管经末梢取血分离出血清,按常规单向琼脂扩散法,测定了桂林市213名16～35岁青年学生血清中IgG、IgM、IgA的含量,比较了16～20岁年龄组与21～35岁年龄组之间,16～20岁年龄组中男女性别之间以及本市16～35岁年龄组与我国20～49岁成年组之间血清Ig含量的差异,并经统计学处理,确定这种差异存在的意义。介绍了改良琼脂板的制作方法。

小儿免疫抑制酸性蛋白测定50例分析

目的：试图通过对非肿瘤患者的免疫抑制酸性蛋白（ＩＡＰ）检测来了解在炎症过程中的异常检出率及对免疫细胞抑制方面的影响。方法：用单向琼脂免疫扩散法测定５０例住院小儿肺炎患者的血清ＩＡＰ值，和用流式细胞术方法检测部分患儿外周血细胞表面标记。以ＩＡＰ５００μｇ／ｍｌ为限，分增高组和非增高组，两组免疫细胞等方面的数据采用ｔ检验处理。结果：肺炎患儿中４４％（２２／５０）ＩＡＰ值升高，ＩＡＰ升高组和ＩＡＰ正常组免疫细胞增殖分化等差异均无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论：ＩＡＰ增高并非肿瘤所特有，ＩＡＰ的生理功能有待探讨。

抗人IgA单克隆抗体在免疫单扩散中的应用

本实验应用杂交瘤技术建立两株抗人IgA单克隆抗体(McAbs),即AlA10和AlC9。此两株mcAbs针对人IgA的两个不同抗原决定簇,经等量混合后,在含有2％的聚乙二醇6000(PEG 6000)的1.5％琼脂糖免疫单扩散试验中,与多克隆抗体(PcAb)同时检测40份未经稀释的人血清样品,两者的相关性好(r=0.9493、P<0.001)。说明AlA10和AlC9混合后可替代PcAb在免疫单扩散中应用。

人血清免疫球蛋白工作标准的制备与标定

本文报导混合浓缩人血清工作标准(89-1)的制备和用WHO相应参考标准血清标定出其中五类免疫球蛋白(Igs)及IgG4亚类含量。该制剂主要用于体外测定IgG、IgA、IgM的工作标准,也可供作体外测定IgD、IgE、IgG4的工作标准。混合前每份血清均无乙型肝炎表面抗原、转氨酶正常。定量分装为每安瓿0.5ml,经冷冻干燥后,4℃保存。参照国际参考标准血清67/97及67/37,分别以免疫单扩散法标定89-1中IgG、IgA、ISM含量;以酶联免疫吸附试验(ELISA)标定IgD、IgG4和IgE含量。其中IgG、IgG4、IgA、IgM含量,应用本室制备的相应单克隆抗体(McAb)标定,而IgD和IgE应用多克隆抗体(PcAb)进行标定。并用五剂量法及四剂量法分别计算Igs含量。

初乳添加剂对新生羔羊血清指标和免疫球蛋白G吸收效率的影响

本试验旨在研究不同初乳添加剂对新生羔羊血清指标和免疫球蛋白G(IgG)吸收效率的影响。选取60只初生重[(3.52±0.31)kg]相近、健康状况良好的新生湖羊公羔,随机分为6组,每组10只,分别为对照组、抗生素组、甘露寡糖组、甲酸组、乙二胺四乙酸(EDTA)组和西沙必利组,各组羔羊分别将生理盐水、抗生素、甘露寡糖、甲酸、EDTA和西沙必利加入到100 mL牛初乳中混合均匀后于羔羊出生后1 h通过口腔插管法饲喂羔羊,羔羊随母哺乳。于羔羊出生后24 h时颈静脉采血,离心收集血清,血清样品分别测定生化指标、抗氧化指标、炎症指标、肠道通透性指标和免疫指标,采用单向免疫扩散法检测牛源IgG和羊源IgG的含量,计算IgG吸收效率。结果显示:抗生素组和甘露寡糖组羔羊血清葡萄糖(GLU)含量显著高于对照组(P<0.05);各试验组羔羊血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和总抗氧化能力(T-AOC)均显著低于对照组(P<0.05),血清丙二醛(MDA)含量均显著高于对照组(P<0.05);各试验组羔羊血清γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量均显著高于对照组(P<0.05);各试验组羔羊血清内毒素(LPS)含量和二胺氧化酶(DAO)活性均显著高于对照组(P<0.05);甲酸组、西沙必利组和甘露寡糖组羔羊IgG吸收效率均显著低于对照组(P<0.05),且甲酸组羔羊IgG吸收效率为0;相关性分析表明,新生羔羊IgG吸收效率与血清SOD活性、T-AOC和IgA含量呈显著正相关(P<0.05),与血清MDA、IL-1β和IL-6含量呈显著负相关(P<0.05)。由此可见,初乳中添加抗生素、甘露寡糖、甲酸、EDTA或西沙必利均无法提高新生羔羊的IgG吸收效率;同时,本研究结果提示提高新生羔羊血清抗氧化能力、降低炎症细胞因子含量可能是提高其IgG吸收效率的有效措施。

去垢剂对单向免疫扩散法测定流感病毒疫苗血凝素含量的影响

目的研究单向免疫扩散法测定流感病毒亚单位疫苗不同生产阶段中间产品的血凝素含量实验中,去垢剂对检测结果的影响,寻找最佳裂解条件。方法以不同的去垢剂浓度和不同裂解时间分别对完整病毒和亚单位疫苗样本进行处理后,利用单向免疫扩散实验测定样本的血凝素含量,并对测定结果进行比较和分析。结果亚单位疫苗的单向免疫扩散沉淀圈在去垢剂Zwittergent浓度小于0.125%时随去垢剂浓度的增加而增大,当去垢剂浓度达到0.125%后不再继续增大;而完整病毒的沉淀圈在去垢剂浓度达到1%后才不再增大。以终浓度1%的去垢剂对完整病毒和亚单位疫苗分别处理30、60、120min后进行单向免疫扩散,测定结果比较差异无统计学意义。结论以终浓度1%的去垢剂Zwittergent对完整病毒或亚单位疫苗样本裂解30min后进行单向免疫扩散测定血凝素含量,均可得到稳定准确的结果,有利于提高工作效率、缩小实验间误差、节约实验成本。

高效液相色谱在流感疫苗血凝素含量检测中的应用进展

目前,流感疫苗血凝素(hemagglutinin,HA)含量最常用的检测方法仍为单向免疫扩散法(single-radial immunodiffusion,SRID),但该方法所需标准品制备耗时较长,通常需要2~3个月。在大流行流感发生初期无法获得标准参考品时,如何精确定量分析HA,一直是HA含量检测面临的难题。高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)具有快速、灵敏度高、重复性较好以及准确性高的特点,利用不同的分离原理可快速测定HA含量,在流感疫苗HA含量检测方面已得到很多应用。本文对HPLC在流感疫苗HA含量检测中应用的研究进展作一综述。

人H7N9禽流感疫苗抗血清参考品的快速制备及初步应用

目的以重组H7N9禽流感病毒血凝素（HA）免疫动物后制备抗血清，以应用于单向免疫扩散试验（SRID）对H7N9禽流感疫苗抗原定量。方法以真核表达的HA蛋白免疫绵羊，通过酶联免疫试验及双向免疫扩散试验检测抗体效价。通过优化抗血清使用浓度，建立检测H7N9禽流感疫苗抗原含量的方法。结果经4次免疫后，抗体滴度达到最高值，效价分别为1：1000000（酶联法）和1：32（双扩法）。以制备的抗血清进行SRID试验，当H7N9病毒抗原浓度为10μg/ml～40μg／ml时，能够形成清晰的沉淀环，其直径与抗原浓度相关性良好。以该法检测6批次H7N9疫苗原液中抗原含量，结果与SDS—PAGE方法结果一致。结论通过免疫重组抗原，及时制备了抗血清参考品，可初步应用于H7N9禽流感疫苗的抗原定量。

肺癌患者血清免疫抑制酸性蛋白检测

目的研究肺癌与血清免疫抑制酸性蛋白的关系。方法采用单向免疫扩散法，检测６５例肺癌患者、１５例肺部良性疾病病例、３０例健康对照人群血清免疫抑制酸性蛋白。结果肺癌患者血清免疫抑制酸性蛋白均值明显高于健康人和肺部良性疾患病人（Ｐ＜０．０５）。不同病理组织类型的肺癌之间、不同临床分期的肺癌患者之间，血清免疫抑制酸性蛋白水平无明显区别。结论免疫抑制酸性蛋白可作为肺癌的一个肿瘤标志物。

流感疫苗血凝素含量检测方法的研究进展

目前流感疫苗血凝素含量最常用的检测方法是单向免疫扩散法(Single-radial immunodiffusion,SRID)。为了解决大流行流感发生初期无法获得参考品的情况,提高流感血凝素检测方法的灵敏度、重复性、准确性,人们从物理化学和免疫化学两个方面对SRID的替代方法进行了探索性研究。本文对近10年来对流感疫苗血凝素含量测定方法的研究进展作一简要综述。