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A Co-expression System Based on Phage and Phagemid to Select Cognate Antibody-antigen Pairs in vivo
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作者 胡学军 Zhang Zhichao +2 位作者 Yuan Xiaodong Bao Yongming An Lijia 《High Technology Letters》 EI CAS 2002年第2期5-9,共5页
A modified selectively infective phage (SIP) is developed to facilitate the selection of interacting antibody antigen pairs from a large single chain antibody (scFv) library in vivo. The system is constructed with a m... A modified selectively infective phage (SIP) is developed to facilitate the selection of interacting antibody antigen pairs from a large single chain antibody (scFv) library in vivo. The system is constructed with a modified helper phage M13KO7 and phagemid pCANTAB 5 E. The antigen fused to the C terminal of N1 N2 domain and the scFv to the N terminal of CT domain of the gIIIp of filamentous phage are encoded on the phage and phagemid vectors respectively. The phages produced by co transformants restore infectivity via interaction between antigen and antibody fusions in the cell periplasm. In a model system, the scFv fragment of the anti hemagglutinin 17/9 antibody and its corresponding antigen are detected in the presence of a 10 5 fold excess of a non interacting control pairs, which demonstrates this system to be very sensitive and facile to screen a large single chain antibody library. 展开更多
关键词 co expression M13KO7 selectively infective phage single chain Fv antibody interacting antibody antigen pairs
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Screening for a human single chain Fv antibody against epitope on amyloid-beta 1-40 from a human phage display library 被引量:1
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作者 ZHAO Zhen-fu GAO Guo-quan LIU Shu ZOU Jun-tao XIE Yao YUAN Qun-fang WANG Hua-qiao YAO Zhi-bin 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2007年第21期1931-1934,共4页
Amyloid-beta peptides (Aβ) are believed to be .responsible for the mental decline in patients with Alzheimer's reported that pathology in vaccination disease (AD). In 1999, Schenk et all immunization with Aβ at... Amyloid-beta peptides (Aβ) are believed to be .responsible for the mental decline in patients with Alzheimer's reported that pathology in vaccination disease (AD). In 1999, Schenk et all immunization with Aβ attenuated AD-like the PDAPP mouse, and developed a new approach to AD. Such vaccines were successfully tested in mouse models of AD for the reduction of Aβ plaque burden and the improvement of cognitive performance. However, 6% of AD patients developed symptoms of brain inflammation after vaccination that resembled enceohalitis or meningitis. 展开更多
关键词 Alzheimer's disease phage-display library single-chain Fv antibody amyloid-beta peptide
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小鼠抗人T淋巴细胞表面抗原噬菌体抗体库的构建及筛选 被引量:1
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作者 王剑利 王一理 司履生 《西安医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期239-241,282,共4页
目的 构建并筛选小鼠抗人静息 /活化T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示抗体库。方法 以人静息 /活化T淋巴细胞免疫Balb/c小鼠 ,取脾细胞 ,RT -PCR扩增VH 和VK 基因 ,拼接为ScFv ,插入噬菌粒载体转化大肠杆菌 ,构建了噬菌体展示抗体库 ,以... 目的 构建并筛选小鼠抗人静息 /活化T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示抗体库。方法 以人静息 /活化T淋巴细胞免疫Balb/c小鼠 ,取脾细胞 ,RT -PCR扩增VH 和VK 基因 ,拼接为ScFv ,插入噬菌粒载体转化大肠杆菌 ,构建了噬菌体展示抗体库 ,以人T淋巴细胞为靶抗原 ,对该库进行了 3轮淘洗 ,ELISA方法鉴定噬菌体抗体。结果 成功构建了最大实际库容量为 1 .75× 1 0 6的小鼠抗人静息T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示ScFv抗体库和小鼠抗人活化T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示ScFv抗体库。结论 所构建的抗体库可进一步用于对T淋巴细胞表面蛋白抗原的差异显示分析及构建基因工程抗体。 展开更多
关键词 T淋巴细胞表面抗原 抗体库 噬菌体展示 单链Fv抗体 T淋巴细胞 噬菌体抗体库技术
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用抗细胞表面分子单链抗体筛选和鉴别其相互作用肽
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作者 许静 李侠 +3 位作者 刘俊霞 何一心 韩忠朝 宋增璇 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期40-44,共5页
展示于噬茵体表面的肽库适于用抗体筛选其特异性结合表达肽。scFv-C193是一个抗KGla细胞表面分子的单链抗体,其抗原仍不清楚,为了筛选并鉴定其识别分子,用8cFv-C193筛选了1个展示于T7噬茵体表面的人胎肝cDNA片段库。经4轮生物吸附后分... 展示于噬茵体表面的肽库适于用抗体筛选其特异性结合表达肽。scFv-C193是一个抗KGla细胞表面分子的单链抗体,其抗原仍不清楚,为了筛选并鉴定其识别分子,用8cFv-C193筛选了1个展示于T7噬茵体表面的人胎肝cDNA片段库。经4轮生物吸附后分离单个阳性噬斑,并对其表达产物做电泳分析及斑点杂交。结果鉴别出1个scFv-C193结合肽,scFv-C193+克隆噬菌体DNA插入片段的PCR扩增和序列分析结果表明它是1个43bpDNA片段表达产物。BLAST分析EST人类基因数据库,发现它97%相同于CD34+造血干/祖细胞mRNA的1-43bp,提示scFv-C193识别片段存在于人类造血干/祖细胞基因中,单克隆单链抗体scFv-C193可能用于研究这些人类基因的性质。 展开更多
关键词 抗体筛选 表面分子 相互作用 鉴别 造血干/祖细胞 CDNA片段 噬菌体DNA CD34^+ 单链抗体 表达产物 特异性结合 PCR扩增 基因数据库 BLAST 生物吸附 斑点杂交 电泳分析 分析结果 mRNA 细胞基因 人类基因 体表面 人胎肝 结合肽
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小鼠噬菌体抗体库的构建和N-肽结合单链抗体的筛选 被引量:3
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作者 高新胜 黄仪秀 +2 位作者 郭振泉 朱圣庚 陈玉珍 《北京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期489-494,共6页
成功构建一库容量为 1.7× 10 8的小鼠噬菌体抗体库 ,并从中淘选出对N 肽有结合活性的单链抗体。首先从未免疫小鼠的脾脏中提取总RNA ,分离出mRNA ,经逆转录合成其总cDNA。随后通过PCR分别扩增出抗体重链和轻链可变区VH、VL 的基因... 成功构建一库容量为 1.7× 10 8的小鼠噬菌体抗体库 ,并从中淘选出对N 肽有结合活性的单链抗体。首先从未免疫小鼠的脾脏中提取总RNA ,分离出mRNA ,经逆转录合成其总cDNA。随后通过PCR分别扩增出抗体重链和轻链可变区VH、VL 的基因片断 ,再经重组PCR将两片断由一编码 (Gly4 Ser) 3十五肽的接头连在一起 ,并克隆到噬菌质粒 pCANTAB 5E中 ,电击转化大肠杆菌TG1。经辅助噬菌体M 13KO7超感染回收全部重组噬菌体 ,此即噬菌体抗体库。N 肽是一种新发现的神经肽 ,其N端与阿片肽高度同源 ,可与阿片肽受体相互作用。对其研究可能有助于了解成瘾机制和有临床应用价值。将生物素化的N 肽与抗体库相互作用 ,用偶联有链霉亲和素的磁珠富集与N 肽结合的重组噬菌体 ,经四轮淘选 ,得到亲和力较高的单链抗体。 展开更多
关键词 噬菌体展示技术 抗体库 神经肽 小鼠
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利用噬菌体展示技术制备人血管生成素2单链抗体 被引量:2
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作者 张中林 艾勇彪 +3 位作者 张吉发 袁玉蜂 刘志苏 何跃明 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期2159-2161,共3页
目的用纯化的人血管生成素2(Ang2)蛋白,通过噬菌体展示技术从非免疫小鼠噬菌体展示抗体库中淘选、鉴定Ang2单链抗体。方法以纯化的人Ang2蛋白为抗原,对非免疫小鼠噬菌体展示抗体库进行富集和筛选,获得Ang2单链抗体,利用十二烷基... 目的用纯化的人血管生成素2(Ang2)蛋白,通过噬菌体展示技术从非免疫小鼠噬菌体展示抗体库中淘选、鉴定Ang2单链抗体。方法以纯化的人Ang2蛋白为抗原,对非免疫小鼠噬菌体展示抗体库进行富集和筛选,获得Ang2单链抗体,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Westernblot法检测目的蛋白的表达并测序。结果经过3轮富集和筛选,获得了1个能特异性识别Ang2蛋白的阳性噬菌体克隆,DNA测序表明其含有完整的单链抗体基因片段,大小约750bp,表达蛋白相对分子质量约33.7×10^3;通过SDS-PAGE进一步实现Ang2单链抗体(phage-Ang2-scFv)的鉴定。结论成功分离并鉴定人Ang2-scFv,为进一步的功能学研究奠定了基础。 展开更多
关键词 血管生成素2 噬菌体抗体展示肽库 单链抗体
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