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Single Molecule Fluorescence Resonance Energy Transfer and Ensemble Biophysical Characterization of a G-quadruplex Formed in the Promoter of Human Myocyte Enhancer Factor 2D
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作者 ZHOU Wen-Hua YING Li-Ming 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第4期1099-1106,共8页
关键词 荧光分光计 能量共振转移 杂种栽培 种植
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Single Molecule FRET Study of DNAG Quadruplex
2
作者 Jeremy Green Liming Ying +1 位作者 David Klenerman Shankar Blasubramanian 《Chemical Research in Chinese Universities》 SCIE CAS CSCD 2002年第2期103-106,共4页
The DNA G quadruplex formed by the human telomeric sequence is a potential target for novel anticancer drugs. We have investigated an intramolecular DNA G quadruplex using single molecule fluorescence resonance energy... The DNA G quadruplex formed by the human telomeric sequence is a potential target for novel anticancer drugs. We have investigated an intramolecular DNA G quadruplex using single molecule fluorescence resonance energy transfer and shown that individual folded quadruplexes can be identified. The mean proximity ratio measured at the single molecule level was consistent with ensemble measurement 展开更多
关键词 G quadruplex fluorescence resonance energy transfer(FRET) single molecule spectroscopy
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牛血清白蛋白@席夫碱双荧光化合物组合构建三输入-双输出分子逻辑电路
3
作者 胡杏梅 莫玉琳 +1 位作者 张锦鸿 林海彬 《化学研究与应用》 CAS 北大核心 2023年第9期2109-2119,共11页
基于牛血清白蛋白与邻苯二胺缩二5-氟水杨醛这两种荧光化合物组合的方式设计了一种荧光探针,并采用荧光光谱、同步荧光光谱、三维荧光光谱及分子对接等方法研究它们之间相互作用的机理。实验结果表明,邻苯二胺缩二5-氟水杨醛与牛血清白... 基于牛血清白蛋白与邻苯二胺缩二5-氟水杨醛这两种荧光化合物组合的方式设计了一种荧光探针,并采用荧光光谱、同步荧光光谱、三维荧光光谱及分子对接等方法研究它们之间相互作用的机理。实验结果表明,邻苯二胺缩二5-氟水杨醛与牛血清白蛋白之间可以形成稳态复合物,在形成过程中氢键及范德华力起主导作用,且邻苯二胺缩二5-氟水杨醛对牛血清白蛋白的构象会产生影响。此外,在280nm激发下,邻苯二胺缩二5-氟水杨醛与牛血清白蛋白之间可以基于荧光共振能量转移而在350nm及460nm处产生两个荧光发射峰。基于该特征,文章以牛血清白蛋白@邻苯二胺缩二5-氟水杨醛作为分子基逻辑材料,通过不同的金属离子对两个荧光发射峰进行调节,从而成功地构建出三个不同的分子逻辑路。 展开更多
关键词 分子逻辑电路 荧光共振能量转移 荧光 牛血清白蛋白
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Lineal DNA logic gate for microRNA diagnostics with strand displacement and fluorescence resonance energy transfer
4
作者 Tian-Tian Meng Ying-Xin Liu +4 位作者 Meng-Tan Liu Jiao-Bao Long Qing-Feng Cao Shu-Ya Yan Xiang-Xian Meng 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 2015年第9期1179-1182,共4页
Designing molecular logic gates to operate programmably for molecular diagnostics in molecular computing still remains challenging.Here,we designed a novel linear DNA logic gates for microRNA analysis based on strand ... Designing molecular logic gates to operate programmably for molecular diagnostics in molecular computing still remains challenging.Here,we designed a novel linear DNA logic gates for microRNA analysis based on strand displacement and fluorescence resonance energy transfer(FRET).Two labeled strands closed each other produce to FRET through hybridization with a complementary strand to form a basic work unit of logic gate.Two indicators of heart failure(microRNA-195 and microRNA-21) were selected as the logic inputs and the fluorescence mode was used as the logic output.We have demonstrated that the molecular logic gate mechanism worked well with the construction of YES and AND gates. 展开更多
关键词 molecular logic gate Strand displacement fluorescence resonance energy transfer
原文传递
荧光寿命成像及其在生物医学中的应用 被引量:11
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作者 刘立新 屈军乐 +3 位作者 林子扬 陈丹妮 郭宝平 牛憨笨 《深圳大学学报(理工版)》 EI CAS 北大核心 2005年第2期133-141,共9页
荧光寿命取决于荧光分子所处的微环境, 通过对样品荧光寿命的测量和成像可以定量获取样品的功能信息. 介绍荧光寿命成像(fluorescencelifetimeimaging, FLIM) 技术原理、实现途径、发展现状及其在生物医学中的应用. 提出一种基于皮秒扫... 荧光寿命取决于荧光分子所处的微环境, 通过对样品荧光寿命的测量和成像可以定量获取样品的功能信息. 介绍荧光寿命成像(fluorescencelifetimeimaging, FLIM) 技术原理、实现途径、发展现状及其在生物医学中的应用. 提出一种基于皮秒扫描相机、梯度折射率微透镜阵列、棱镜分光光谱仪、飞秒钛宝石激光器和荧光显微物镜的新型五维荧光显微成像技术, 该系统具有多光谱分辨功能以及很高的时间和空间分辨率, 能够实现三维多光子荧光强度、光谱分辨强度和寿命测量, 将在高通量生化分析、组织鉴别、胞内生理学和荧光共振能量转移(fluorescenceresonanceenergytransfer, FRET) 等领域获得广泛应用. 展开更多
关键词 荧光寿命 生物医学 应用 荧光共振能量转移 皮秒扫描相机 显微成像技术 钛宝石激光器 光谱分辨 微透镜阵列 梯度折射率 分光光谱仪 空间分辨率 荧光分子 技术原理 实现途径 显微物镜 荧光强度 寿命测量 生化分析 微环境
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基于量子点的分子灯塔探针的制备及其在DNA探针中的应用(英文) 被引量:4
6
作者 张纪梅 魏硕名 +4 位作者 李萍 许世超 尹雪莹 郑帼 代昭 《纳米技术与精密工程》 EI CAS CSCD 2009年第6期528-531,共4页
根据荧光共振能量转移理论合成出一种新颖的分子灯塔探针.由于CdTe量子点(QD s)的荧光发射光谱与DABCYL的紫外-可见吸收光谱有很好的重叠性,所以此种探针采用CdTe量子点作为能量给体,DABCYL作为能量受体.通过水相法合成出直径为2.5 nm的... 根据荧光共振能量转移理论合成出一种新颖的分子灯塔探针.由于CdTe量子点(QD s)的荧光发射光谱与DABCYL的紫外-可见吸收光谱有很好的重叠性,所以此种探针采用CdTe量子点作为能量给体,DABCYL作为能量受体.通过水相法合成出直径为2.5 nm的CdTe量子点,并且在偶联剂1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亚氨盐酸盐(EDC)作用下,与5-′NH2-DNA-DABCYL连接得到了分子灯塔探针.实验发现探针的荧光强度相比CdTe-DNA有明显的下降,最大能量转移效率为68.3%,表明CdTe QD s和DABCYL之间发生了荧光共振能量转移.结果表明,此种探针体系对于互补DNA及其变种有着很好的特异性,且其检测极限为5.170×10-9mol/L. 展开更多
关键词 分子灯塔探针 半导体量子点 荧光共振能量转移 生物传感器
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分子信标核酸检测技术研究进展 被引量:10
7
作者 陈忠斌 王升启 孙志贤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第6期488-492,共5页
介绍了分子信标设计和分子信标核酸检测原理、技术特性和在基因突变大规模自动化检测中的应用.分子信标是一种基于荧光共振能量转移现象设计的发卡型寡核苷酸探针,空间结构上呈茎环结构,环序列是与靶核酸互补的探针,茎序列由与靶序... 介绍了分子信标设计和分子信标核酸检测原理、技术特性和在基因突变大规模自动化检测中的应用.分子信标是一种基于荧光共振能量转移现象设计的发卡型寡核苷酸探针,空间结构上呈茎环结构,环序列是与靶核酸互补的探针,茎序列由与靶序列无关的互补序列构成,茎的一端连上荧光分子,另一端连上淬灭分子.通过空间结构改变决定分子信标发射荧光特性,从而对核酸进行定量检测.分子信标技术具有操作简单、敏感、特异、可对核酸进行液相实时检测和对活体内核酸动态进行检测等特点,已应用于HIV辅助受体基因等基因突变的大规模自动化检测,是一种新型核酸定量检测技术. 展开更多
关键词 分子信标 液相实时检测 基因突变检测 核酸检测
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分子信标的原理、应用及其研究进展 被引量:7
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作者 周海清 沈鹤柏 +1 位作者 陈新斌 巢强国 《光谱实验室》 CAS CSCD 2004年第3期417-422,共6页
分子信标是一种设计巧妙的新型荧光标记核酸探针。特殊的发夹结构使分子信标具有很强的特异性识别靶标序列的能力 ,目前已成为分子生物学和生物技术中一种强有力的研究工具。本文介绍了分子信标的原理及其在 PCR、核酸序列的分析、活细... 分子信标是一种设计巧妙的新型荧光标记核酸探针。特殊的发夹结构使分子信标具有很强的特异性识别靶标序列的能力 ,目前已成为分子生物学和生物技术中一种强有力的研究工具。本文介绍了分子信标的原理及其在 PCR、核酸序列的分析、活细胞内核酸的动态检测、蛋白质 (酶 )与核酸的相互作用等方面的应用和研究进展。 展开更多
关键词 分子信标 荧光核酸探针 荧光共振能量转移 聚合酶链反应 核酸分析
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新型量子点修饰分子灯塔探针及其作为DNA传感器应用 被引量:2
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作者 代昭 张纪梅 +3 位作者 许世超 郭宁 尹雪莹 孙波 《现代化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第3期47-49,51,共4页
以CdTe量子点为能量供体,BHQ-1为能量受体构建了一种基于能量共振转移原理(FRET)的分子灯塔探针。能量供体与受体分别连接于分子灯塔探针DNA链的两端,由于探针的自杂交作用可将能量供体与受体之间的距离控制在1~10nm之间,并且供... 以CdTe量子点为能量供体,BHQ-1为能量受体构建了一种基于能量共振转移原理(FRET)的分子灯塔探针。能量供体与受体分别连接于分子灯塔探针DNA链的两端,由于探针的自杂交作用可将能量供体与受体之间的距离控制在1~10nm之间,并且供体的荧光发射光谱与受体的紫外吸收光谱存在一定程度的重叠,因此满足FRET原理。此探针体系可以作为DNA传感器较好的区分与探针碱基序列完全匹配的DNA、单碱基错配的DNA、完全不匹配的DNA。 展开更多
关键词 CDTE量子点 分子灯塔探针 荧光共振能量转移 DNA传感器
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基于上转换荧光共振能量转移检测 被引量:1
10
作者 王玉洁 罗灏 +3 位作者 张玉华 何洁鑫 杨佐毅 刘敬勇 《功能材料》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第23期23115-23119,共5页
设计了一种基于分子信标的新型生物检测模型,以上转化发光纳米粒子(UCPs)作为FRET能量供体,利用分子信标茎环结构的优势,有效减小供受体之间距离,从而增加FRET能量转移效率,提高猝灭效率和生物检测灵敏度,并将该模型用于目标DNA和凝血... 设计了一种基于分子信标的新型生物检测模型,以上转化发光纳米粒子(UCPs)作为FRET能量供体,利用分子信标茎环结构的优势,有效减小供受体之间距离,从而增加FRET能量转移效率,提高猝灭效率和生物检测灵敏度,并将该模型用于目标DNA和凝血酶检测,得到了令人满意的结果。此外,将这种灵敏且结构简单的模型用于复杂基质中凝血酶的检测,显示出UCPs优越的抗干扰性能。 展开更多
关键词 荧光共振能量转移 上转换荧光纳米材料 分子信标 生物
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银纳米粒子簇的设计、制备和表面增强拉曼光谱 被引量:1
11
作者 冯微 王博蔚 +1 位作者 姜洋 李龙云 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1345-1351,共7页
通过匹配激光光斑直径与胶体微球的尺寸,设计制备了银纳米粒子的表面增强拉曼散射(SERS)基底,并将其用于研究单个银纳米粒子簇的表面增强拉曼光谱.在制备纳米粒子的过程中,考察了等离子体刻蚀时间与银沉积厚度对“单”银纳米粒子结构与... 通过匹配激光光斑直径与胶体微球的尺寸,设计制备了银纳米粒子的表面增强拉曼散射(SERS)基底,并将其用于研究单个银纳米粒子簇的表面增强拉曼光谱.在制备纳米粒子的过程中,考察了等离子体刻蚀时间与银沉积厚度对“单”银纳米粒子结构与形貌的影响.将吡啶、巯基苯和罗丹明R6G作为SERS探针分子,研究了其SERS效应,通过荧光共振能量转移(FRET)机理,实现了染料分子在单银纳米粒子簇上的SERS效应.SERS光谱测试与相关计算结果表明,单个银纳米粒子簇的拉曼增强因子能够达到约10^6. 展开更多
关键词 “单”银纳米粒子簇 拉曼增强因子 聚苯乙烯微球 荧光共振能量转移
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磁性荧光复合粒子的合成、表征及DNA检测应用研究 被引量:3
12
作者 杨娟 许世超 +1 位作者 张纪梅 姚翠翠 《科技信息》 2010年第3期I0036-I0036,I0341,共2页
以NaOH作为沉淀剂,在水相中合成了直径约为10nm的Fe3O4磁性纳米粒子,以Fe3O4为核层原料以CdTe量子点为壳层原料合成了Fe3O4/CdTe磁性荧光复合粒子。合成的Fe3O4/CdTe磁性荧光复合粒子经测试具有良好的磁性核荧光性能。以Fe3O4/CdTe作为... 以NaOH作为沉淀剂,在水相中合成了直径约为10nm的Fe3O4磁性纳米粒子,以Fe3O4为核层原料以CdTe量子点为壳层原料合成了Fe3O4/CdTe磁性荧光复合粒子。合成的Fe3O4/CdTe磁性荧光复合粒子经测试具有良好的磁性核荧光性能。以Fe3O4/CdTe作为能量供体3,端修饰有淬灭剂BHQ-2的单链DNA作为能量受体合成分子灯塔探针,成功构建了荧光共振能量转移体系,所合成的探针可利用磁铁与游离的5,-DNA-3,-BHQ-2进行快速分离。该探针在和与探针DNA序列完全互补的目标弓形虫DNA杂交后,荧光强度得到了恢复,实现了对弓形虫DNA的高灵敏度检测。 展开更多
关键词 分子灯塔探针 复合纳米粒子 荧光共振能量转移 磁性分离
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EMND与人血清白蛋白的分子作用机制
13
作者 田进军 王公轲 《河南师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2014年第5期75-81,共7页
微波条件下,运用一锅法合成了二氢嘧啶-2-酮的衍生物—5-乙酯基-6-甲基-4-(4-硝基苯基)-3,4-二氢嘧啶-2-酮(EMND).运用同步荧光光谱、位点竞争结合实验、荧光共振能量转移(FRET)理论以及分子模拟技术研究了EMND与人血清白蛋白(HSA)的分... 微波条件下,运用一锅法合成了二氢嘧啶-2-酮的衍生物—5-乙酯基-6-甲基-4-(4-硝基苯基)-3,4-二氢嘧啶-2-酮(EMND).运用同步荧光光谱、位点竞争结合实验、荧光共振能量转移(FRET)理论以及分子模拟技术研究了EMND与人血清白蛋白(HSA)的分子作用机制.实验结果表明:EMND与HSA的结合位点位于色氨酸(Trp214)附近,EMND的结合位点位于HSA的IIA亚域.通过FRET理论计算得出EMND与色氨酸残基的结合距离r=4.25nm,说明EMND与HSA之间能够发生非辐射能量转移.分子模拟表明EMND结合到HSA IIA亚域的疏水空腔,它们之间存在氢键作用,进一步印证了同步荧光及位点竞争结合实验结果.本研究对于在分子水平上理解小分子与生物大分子的相互作用本质以及设计基于二氢嘧啶-2-酮的药物等都有一定的参考作用. 展开更多
关键词 人血清白蛋白 作用机制 同步荧光光谱 荧光共振能量转移 分子模拟
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利用荧光寿命变化定量分子内和分子间相互作用的方法
14
作者 王文娟 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1358-1364,共7页
荧光寿命是指荧光分子在回到基态前在激发态停留的平均时间.本文发展了基于荧光寿命测量来定量分子内和分子间相互作用的方法:通过G碱基猝灭对于荧光寿命的影响定量DNA二级结构的形成;通过荧光共振能量传递(FRET)中荧光寿命的变化来定... 荧光寿命是指荧光分子在回到基态前在激发态停留的平均时间.本文发展了基于荧光寿命测量来定量分子内和分子间相互作用的方法:通过G碱基猝灭对于荧光寿命的影响定量DNA二级结构的形成;通过荧光共振能量传递(FRET)中荧光寿命的变化来定量分子间的相互作用.第一种方法巧妙利用了G碱基会猝灭临近的染料分子的性质,结合荧光寿命的变化,可以判断DNA二级结构的形成以及形成的比率.FRET是用于研究生物分子相互作用的一个重要手段.传统的FRET方法主要是基于强度的变化,但这种变化容易受到荧光表达水平变动、样品中分子扩散以及荧光串色的影响,因此经常存在着实验比较复杂和重复性差的问题.而基于荧光寿命的FRET研究则可以很好地克服上述缺点.通过检测供体荧光寿命的变化,我们能够方便快捷地判断是否发生FRET,并通过建立系统的数据分析方法,得到FRET的效率以及分子之间相互作用的信息. 展开更多
关键词 荧光寿命 荧光猝灭 G碱基猝灭 荧光共振能量传递 荧光衰减曲线 分子内相互作用 分子间相互作用 发卡结构 时间相关单光子计数
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单分子荧光共振能量转移用于生物大分子构象动态变化过程研究进展 被引量:5
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作者 孙乐乐 苏莹莹 +4 位作者 高延静 李威 吕慧 李宾 李迪 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2018年第6期803-813,共11页
生物大分子参与生命活动的各个过程,在单分子水平上实时观测和分析生物大分子自身的结构动态以及生物大分子相互作用的动态过程,对于深入理解生物大分子的作用机制具有重要意义。自提出以来,单分子荧光共振能量转移技术逐渐展现出其在... 生物大分子参与生命活动的各个过程,在单分子水平上实时观测和分析生物大分子自身的结构动态以及生物大分子相互作用的动态过程,对于深入理解生物大分子的作用机制具有重要意义。自提出以来,单分子荧光共振能量转移技术逐渐展现出其在研究生物大分子构象变化和相互作用过程等方面的巨大潜力,一系列新的作用机理陆续被提出。本文对单分子荧光共振能量转移技术在蛋白质与核酸分子构象动态变化、蛋白质-蛋白质相互作用以及蛋白质-核酸相互作用等方面取得的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 单分子荧光共振能量转移 生物大分子 构象动态 相互作用 评述
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生物单分子探测与成像的新进展
16
作者 林克椿 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期307-313,共7页
生物单分子研究是分子生物学向更深层次发展的自然趋势。从上世纪末开始,由于研究单分子技术的不断发展,这一领域已取得了许多重要成果。近年来活细胞内单分子过程的揭示成为关注的焦点。文章仅从基因表达的研究、用受激发射损耗(STED)... 生物单分子研究是分子生物学向更深层次发展的自然趋势。从上世纪末开始,由于研究单分子技术的不断发展,这一领域已取得了许多重要成果。近年来活细胞内单分子过程的揭示成为关注的焦点。文章仅从基因表达的研究、用受激发射损耗(STED)成像研究细胞膜、胞浆中单个分子的追踪以及单分子力谱在细胞生物学中的应用等几个方面说明本领域发展的现状。 展开更多
关键词 单分子 受激发射损耗成像 荧光共振能量转移 原子力显微术 整合蛋白
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用于单分子动力学实验的微流控混合器(英文) 被引量:1
17
作者 支泽勇 刘鹏程 +1 位作者 黄岩谊 赵新生 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1990-1995,共6页
设计制作了用于单分子动力学实验的微流控混合器,该混合器用聚二甲基硅氧烷(PDMS)芯片和石英载玻片密封而成,具有低的荧光背景,广泛的生物相容性,结合激光共聚焦显微镜能够在非平衡态下进行单分子荧光探测.我们设计的压力控制系统和进... 设计制作了用于单分子动力学实验的微流控混合器,该混合器用聚二甲基硅氧烷(PDMS)芯片和石英载玻片密封而成,具有低的荧光背景,广泛的生物相容性,结合激光共聚焦显微镜能够在非平衡态下进行单分子荧光探测.我们设计的压力控制系统和进样流路方便而稳定,保证了微流路中流形的长时间稳定,从而实现了样品流速和流量的精准控制.这些技术特点保证了单分子探测得到准确和高信噪比的结果.利用蛋白质的塌缩过程远快于混合过程的特点,采用荧光标记的金黄色葡萄球菌核酸酶作为指示物,分辨出蛋白质变性态的特征峰,并利用变性态的荧光共振能量传递效率随时间的变化表征出混合器在适合于单分子探测条件下的混合时间为150ms. 展开更多
关键词 微流控混合 单分子探测 荧光共振能量传递 蛋白质折叠 金黄色葡萄球菌核酸酶
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大肠杆菌表达的RNA解螺旋酶Ded1p的提纯与解螺旋机制 被引量:1
18
作者 赵富林 徐明飞 +5 位作者 谢青云 单衍可 雷静 施志玉 孙海凤 刘斐 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期874-880,共7页
[目的]表达、提纯DEx H/D-box家族蛋白Ded1p,并综合传统电泳以及单分子荧光共振能量转移(sm FRET)技术,探究Ded1p的双链RNA解螺旋机制。[方法]原核表达、纯化出全长的Ded1p作为研究蛋白,并验证其解螺旋酶活性。以荧光对标记的带有3'... [目的]表达、提纯DEx H/D-box家族蛋白Ded1p,并综合传统电泳以及单分子荧光共振能量转移(sm FRET)技术,探究Ded1p的双链RNA解螺旋机制。[方法]原核表达、纯化出全长的Ded1p作为研究蛋白,并验证其解螺旋酶活性。以荧光对标记的带有3'末端单链RNA尾巴的13 bp双链RNA作为研究底物,基于全内反射的单分子荧光共振能量转移技术,在自制的样品通道内添加800 nmol·L-1Ded1p、2 mmol·L-1ATP/Mg2+以及研究底物进行解螺旋试验,再用自编的Matlab程序采集和分析数据,进而从单分子层面探究Ded1p的双链RNA解螺旋机制。[结果]首次通过Ni-NTA凝胶亲和层析与Capto-DEAE凝胶阴离子交换层析两步纯化手段,得到了大量纯净的、并且具有双链RNA解螺旋酶活性的Ded1p。Ded1p的sm FRET试验在单分子层面实现了对Ded1p打开13 bp双链RNA过程的实时观察。通过分析FRET的变化过程,首次提出Ded1p主要以一步解螺旋的方式打开双链RNA结构。[结论]原核表达、纯化的Ded1p具有RNA解螺旋酶活性;该Ded1p是以局部双链打开的模式解开RNA双链。 展开更多
关键词 单分子荧光共振能量转移 DExH/D-box家族 Ded1p蛋白 荧光标记RNA 局部双链打开
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单分子技术研究T7解旋酶的解旋与换链 被引量:2
19
作者 陈泽 马建兵 +4 位作者 黄星榞 贾棋 徐春华 张慧东 陆颖 《物理学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2018年第11期252-262,共11页
单分子荧光共振能量转移(smFRET)和磁镊(MT)技术目前广泛应用于研究分子马达.相较于常规技术,其具有高精度及动态观测的优点.本文研究对象为T7解旋酶,是六聚体解旋酶的典型代表.研究表明,这种解旋酶主要消耗脱氧胸苷三磷酸(dTTP)提供能... 单分子荧光共振能量转移(smFRET)和磁镊(MT)技术目前广泛应用于研究分子马达.相较于常规技术,其具有高精度及动态观测的优点.本文研究对象为T7解旋酶,是六聚体解旋酶的典型代表.研究表明,这种解旋酶主要消耗脱氧胸苷三磷酸(dTTP)提供能量,且仅能沿着5′-3′单向进行行走和解旋工作.目前对于六聚体解旋酶的解旋和换链机制的认知仍然存在着诸多问题,因此本文主要以此作为切入点开展研究.首先通过运用smFRET技术研究T7解旋酶在不同DNA底物上的解旋现象,发现其需要3′-尾链参与到解旋工作中,但其为单链或双链结构并无明显区别;通过改变脱氧核糖核酸(DNA)序列中的GC含量,发现T7解旋酶随着序列中GC含量的升高会更容易在解旋过程中发生回退现象,导致解旋长度明显缩短;通过进一步分析发生回退先的实验数据,发现T7解旋酶除了可以瞬时回退到叉形DNA岔口或脱落外,还可以缓慢回退到叉形DNA岔口;运用MT技术研究该解旋酶,同样发现这种缓慢回退现象的存在.根据T7解旋酶解旋DNA遵循的单向性和极性,其只能沿着5′到3′方向进行行走和解旋.因此,本文推测这种缓慢回退的现象可能是解旋酶从5′-链转移至3′-链上,即发生换链过程;最后,本文提出了T7解旋酶在解旋过程中进行换链的模型,将有助于进一步理解环状六聚体解旋酶行使其功能的分子机制. 展开更多
关键词 单分子荧光共振能量转移 磁镊 T7解旋酶 换链
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基于FRET荧光蛋白探针的活体定量分子影像方法探究 被引量:1
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作者 王颖奇 唐吉 +2 位作者 刘晴 白净 刘晓冬 《北京生物医学工程》 2016年第6期566-570,共5页
目的荧光共振能量转移(fluorescent resonance energy transfer,FRET)探针由于自身仍存在诸多局限,其在活体成像领域尚未得到广泛应用。本文旨在解决FRET探针在活体定量分子影像应用中所存在的瓶颈问题,即如何利用FRET探针精准计算目标... 目的荧光共振能量转移(fluorescent resonance energy transfer,FRET)探针由于自身仍存在诸多局限,其在活体成像领域尚未得到广泛应用。本文旨在解决FRET探针在活体定量分子影像应用中所存在的瓶颈问题,即如何利用FRET探针精准计算目标物浓度,以及如何基于FRET探针实现三维成像。方法基于探针和目标物结合时的化学反应平衡关系,提出一种新型分析方法,以精确定量待测物[钙调素(calmodulin,Ca M)]的浓度。同时对于FRET探针的活体分子成像,结合荧光透射成像(3DFMT)方法,建立了可进行三维时空动态FRET检测的平台系统,对FRET探针的测量结果(即待测物浓度)进行实时定量的三维重建。结果准确地定量了待测物Ca M浓度,并得到了高质量的3D-FRET分布影像。结论提出FRET探针在活体成像应用领域两个关键问题的解决方案,为基因编码FRET探针向活体分子影像领域的推广奠定了重要的技术基础。 展开更多
关键词 荧光共振能量转移 基因编码FRET探针 荧光蛋白 荧光断层成像 钙调素
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