荧光定量PCR技术验证Sinofiler试剂盒的适宜模板量

目的探讨Sinofiler试剂盒适合扩增的模板DNA用量。方法选取经Sinofiler试剂盒基因分型且图谱完整、扩增均衡性好的DNA样本,进行荧光定量PCR检测。结果实验结果表明,在12.5μL体系中,1.29～1.51ng的模板DNA能够获得理想的分型结果。结论应用荧光定量PCR技术检测不同试剂盒适合扩增的模板DNA用量是一种准确、有效的方法。

Identifiler和Sinofiler试剂盒在亲权鉴定中的应用与评估

目的应用与评估Identifiler和Sinofiler试剂盒在亲权鉴定中的应用价值。方法应用五色荧光标记复合扩增系统对106例亲权鉴定的血样进行PCR扩增,用ABI3100-Avant遗传分析仪对扩增产物进行毛细管电泳,用GeneMapper v3.2软件进行基因分型,评估Identifiler和Sinofiler试剂盒在中国汉族人群中的适用性。结果在不排除的案例中Sinofiler比Identifiler具有较高的PI值,在排除的案例中Sinofiler比Identifiler具有较多的排除指标。结论Sinofiler比Identifiler更适用于中国汉族人群的亲权鉴定。

Sinofiler试剂盒在二联体亲子鉴定中的应用

目的评估单独使用Sinofiler试剂盒进行二联体亲子鉴定的效果,通过数据统计分析以及3个案例的介绍,使各位同行及学者充分意识到其中的问题。方法1)研究对象:2002年至今,本司法鉴定所进行的二联体亲子鉴定案例。2)方法通过Chelex法提取DNA,用AmpFlSTR Sinofiler试剂盒进行16个STR基因座位的检测,对出现1～2个基因座位不符合遗传规律的案例,增加STRtyper-10F/G试剂盒的检测,基因的检测和分析均在3130基因分析仪上进行。

Sinofiler试剂盒D13S317基因座变异1例

1案例 1.1案情 为申报户口,父亲杨某与妻子和女儿来我中心,要求对杨某与女儿是否具有父女关系进行检验,分别采取三人的指尖血备检。

IgG型意外抗体鉴定用试剂盒(固相凝集法)的研发

目的研发IgG型意外抗体鉴定用试剂盒(固相凝集法)。方法琥珀酰亚胺溶液包被微孔板后,将谱细胞悬液加入微孔板中制得红细胞单层,随后用1×PBS(pH7.40)裂解红细胞单层形成细胞膜单层;将低温干燥保护液加至细胞膜单层表面,4℃干燥后制成试剂盒反应板;定期用制备的试剂盒测试低效价IgG抗-E和抗-Fy a,以评估试剂盒稳定性;对72例意外抗体阳性血浆标本和152例正常血浆标本采用研发的试剂盒和微柱凝胶卡进行抗体鉴定试验,计算灵敏度和特异度指标,采用卡方检验分析,以评估试剂盒的检测性能。结果琥珀酰亚胺包被的微板能够较好的固定裂解后的红细胞膜;低温干燥保护液对膜单层能够形成较好的保护作用;在各个观察点内,低效价的IgG抗-E和抗-Fy a均能被准确检出;与微柱凝胶卡相比,72例意外抗体阳性的标本,固相法试剂盒正确检出70例,同时纠正1例凝胶卡漏检的抗-JK a;152例意外抗体阴性标本,2种试剂分别正确检出149例和152例。两者的灵敏度为97.22%(70/72)vs 98.61%(71/72),特异度为98.02%(149/152)vs 100%(152/152),配对卡方检验结果表明,2种试剂盒的检测结果差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论采用固相凝集法研发的试剂盒,适用于IgG型意外抗体的鉴定。

核酸提取试剂盒对饲料中牛羊源性成分检测的影响

实时荧光聚合酶链反应法(荧光PCR法)是目前饲料中牛羊源性成分的定性检测中常用方法之一。为了熟练操作和掌握这个方法,使得实验室工作人员在做饲料中牛羊源性成分定性这类检测时能有一个清晰的认识,通过核酸提取试剂盒的选取及平行实验比对,对此进行了阐释。

Y染色体微缺失检测试剂盒行业标准的建立

目的建立Y染色体微缺失检测试剂盒行业标准。方法选择9个厂家的Y染色体微缺失检测试剂盒,统一发放Y染色体微缺失检测参考品,按照拟定的行业标准,对外观、检测限、阳性参考品符合率、阴性参考品符合率和重复性项目进行验证。结果8个试剂盒的全部项目的检测结果均满足要求。检测限和阳性参考品符合率项目中,仅试剂盒8未检出AZFa微缺失,不满足要求。结论大部分验证结果均能满足拟定行标中的要求,表明行业标准各指标具有一定的合理性,可操作性强。Y染色体微缺失检测试剂盒行业标准的建立将有助于规范这类试剂盒发展,提升质量,并为监管提供技术支持。

DNATyper^(TM)21与Verifiler^(TM)Plus试剂盒对常规案件检材检验的比较

本文通过比较DNATyper^(TM)21与Verifi ler^(TM)Plus两种STR检测试剂盒对各类案件检材的检验能力,探讨DNATyper^(TM)21试剂盒在常规案件检验中应用的可靠性。取0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5、1.0 ng/μL基因组标准品对两种试剂盒进行灵敏度测试;应用DNATyper^(TM)21与Verifi ler^(TM)Plus试剂盒分别对1056例常规案件检材DNA进行检验;对同一样本等位基因进行一致性比较。结果表明,两种试剂盒均可以成功检测出模板浓度在0.0625 ng/μL以上的标准DNA。在检验的1056例样本中,DNATyper^(TM)21试剂盒共检出881例,检出率为83.4%;Verifi ler^(TM)Plus试剂盒检出892例,检出率为84.5%。统计学结果表明两种试剂盒检出率无统计学差异,且同一样本相同基因座得到的等位基因分型一致。综上,DNATyper^(TM)21试剂盒对各类常规检材具有良好的检验能力,可应用于日常案件检验。

四种口蹄疫分型试剂盒的检测效果比对

目前市场上销售的口蹄疫O型和A型双重荧光RT-PCR分型试剂盒比较多,为了找到一种效果理想的分型试剂盒,使用4个厂家(分别用A、B、C、D代替)的试剂盒对6份国家口蹄疫比对盲样(编号分别为S1、S2、S3、S4、S5、S6)进行检测效果比对。结果发现,不同厂家试剂盒的检测效果各不相同,且差别较大,D厂家试剂盒的检测结果与比对盲样的标准值完全吻合,A、B、C 3个厂家试剂盒的检测结果与比对盲样的标准值有不同程度的差异。

基于扩增阻滞突变系统-聚合酶链式反应法的A1/A2牛奶鉴别试剂盒的开发及应用

目的基于扩增阻滞突变系统-聚合酶链式反应(amplification refractory mutation system polymerase chain reaction,ARMS-PCR)技术,开发A1A2牛奶鉴别试剂盒,并对市场上A2牛奶产品进行检测应用,实现对A2牛奶的鉴别检测。方法本研究先利用D-loop基因片段设计了牛内参基因引物探针组(标记FAM荧光)。随后,在β-酪蛋白基因突变位点分别设计了A1基因引物探针组和A2基因引物探针组(均标记VIC荧光)。基于ARMS-PCR技术构建了双通道ARMS-PCR反应体系与程序,进而成功开发了A1A2牛奶实时荧光ARMS-PCR试剂盒。为进一步验证试剂盒性能,将其应用于市场上A2牛奶的检测,并将检测结果与DNA测序法结果对比。结果本试剂盒特异性强,检测DNA灵敏度为0.1 ng/L;10份市售实际样品的应用检测结果与测序结果一致。结论本试剂盒特异性好,灵敏度高、准度度高,适用于A2牛奶的真实性鉴别。

一种基于表面增强拉曼光谱技术的环境水中啶虫脒现场快速检测试剂盒

啶虫脒(acetamiprid,AC)在环境中的蓄积可对生态系统和人体健康产生不利影响。本研究利用表面增强拉曼光谱(Surface-enhanced Raman spectroscopy,SERS)技术,构建了一种快速定性及定量检测环境水中啶虫脒的检测试剂盒。采用化学合成法制备了粒径为40~60 nm的纳米金溶胶作为SERS活性基底,以包覆铝箔的24孔板为反应平台,将一定量的聚沉盐负载到反应孔中诱导信号热点,并与便携式拉曼光谱仪集成为适用于现场检测的试剂盒。通过对聚沉盐负载量、聚沉时间等条件进行优化,在浓度为25~750 ng·mL^(-1)范围内,啶虫脒浓度与SERS信号强度呈现良好的线性关系,R2=0.988。试剂盒检出限低至15.56 ng·mL^(-1),平均加标回收率为90.04%~106.10%,在5 min内实现了环境水中啶虫脒的现场检测。与传统方法相比,该试剂盒便携、操作简单、快速、成本低廉、可同时进行多样本检测,为环境水体中啶虫脒的现场检测分析提供了新选择。

跨越式滚环等温扩增试剂盒检测沙门氏菌的研究

沙门氏菌可引起食源性疾病,严重危害食品安全和人类健康。因此,开发新的检测方法尤为重要。本研究基于自主研发的新型核酸扩增方法--跨越式滚环等温扩增,研制了检测沙门氏菌的试剂盒,并对该试剂盒相关性能进行评估。结果显示,试剂盒检测沙门氏菌的特异性良好,灵敏度为4.1×10^(1)CFU·mL^(-1),有效期可达90 d,表明该试剂盒可靠、灵敏、稳定,可满足食品中沙门氏菌快速检测的需求。

市售酶抑制法农残速测试剂盒对多种农药的敏感性研究

用市售酶抑制法农残速测试剂盒进行农药残留快速检测,具有操作简便、出结果快、对检测人员技术水平要求低等优点,在日常农药残留监管中应用广泛。酶抑制法农残速测,是基于有机磷和氨基甲酸酯类农药对动物体内胆碱酯酶抑制作用的原理。

国产化Y-STR试剂盒与YFiler^(TM) Platinum PCR扩增试剂盒的法医DNA检验性能比较研究

该文评估4种国产化Y-STR试剂盒与Yfiler^(TM) Platinum PCR扩增试剂盒的法医DNA检验性能,并进行比较分析。结果显示,4种国产化Y-STR试剂盒均可基本满足日常案件检测需要,在灵敏度和拮抗抑制剂的适用性的方面,SureID■ Y40 PCR扩增试剂盒和炎黄Y数据分型盒表现较优,在降解样本的适用性方面,Yfiler^(TM) Platinum PCR扩增试剂盒和国产化炎黄Y数据分型盒表现最优。

奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的临床应用评估

为了评估商品化的奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)(后文简称为“检测试剂盒”)在临床应用中的适用性,本试验采用传统细菌分离培养、检测试剂盒、16S rRNA基因扩增子测序和药物敏感性试验对宁夏回族自治区9个牧场155份奶牛乳房炎奶样分别进行菌株鉴定和耐药性检测,并将检测试剂盒与其他3种检测结果进行比较和分析。结果显示,检测试剂盒与传统细菌分离培养在病原菌检出情况上基本保持一致,均主要检出了大肠杆菌、芽孢杆菌属和凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)等;检测试剂盒与16S rRNA基因扩增子测序结果在菌属组成上一致性较高,均主要检出了假单胞菌属、链球菌属和葡萄球菌属等;药物敏感性试验结果显示,检出率较高的66株病原菌分离株对β-内酰胺类抗菌药物的耐药率普遍偏高;奶样中β-内酰胺酶耐药基因blaZ的检测试剂盒检出结果与同一奶样中分离菌株的药物敏感性试验结果一致率达58%(7/12)。综上所述,该检测试剂盒具有较高的准确度和病原覆盖率,可为牧场奶牛乳房炎主要病原的快速诊断和耐药基因(blaZ)监测提供有效的技术支持,从而降低抗菌药物的使用量,以减少牧场经济损失。

用于黄曲霉毒素B_(1)快速检测的胶体金试剂盒质量评价

为评估黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))胶体金快速检测试剂盒性能,对6个胶体金快速检测试剂盒生产厂家的产品进行质量评价。以大豆油为基质,通过人为加入标准物质的方法制备盲样,对6个生产厂家的试剂盒组成、前处理过程、显色情况、性能指标、检测时间等进行评价,并将其用于国家及河南省抽检食用油样品的检测。结果表明,6个生产厂家的试剂盒组成完整,前处理快速,易操作,检测时间短(均在25 min以内),但合格率仅50%,有3个生产厂家的试剂盒因较高的假阴性率而不达标。由此可知,质量优良的快速检测试剂盒能很好地满足实际样品检测需求,但目前市场上的快速检测试剂盒整体质量还有待提升,生产企业应严格按照国家相关标准进行研发和生产,同时国家相关部门要继续完善评价体系,加强监管。

量子点标记的新型冠状病毒抗体试剂盒行业分析

新型冠状病毒感染全世界大流行阶段,随着对新型冠状病毒感染的预防、确诊及治疗等方面认识的不断深入,各种体外检测技术与应用产品成为研发人员关注的重点。相较于传统的基因测序及应用广泛的核酸检测,或同为免疫学检测试剂盒的胶体金免疫层析、酶联免疫吸附法(ELISA)、化学发光等技术,新型纳米材料免疫标记试剂盒是一种兼具快速、简便和灵敏度、特异度良好等优点的新型冠状病毒检测方法。本文通过比较不同新型冠状病毒检测方法,重点阐述新型纳米材料免疫标记新型冠状病毒检测试剂盒的商业价值及其潜在应用价值。

DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒在案件中的应用研究

本文探讨DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒在案件中应用的可行性。应用DNATyper mtDNASNP60^(TM)试剂盒对100个汉族无关个体和20组全同胞进行mtDNA SNP检验;取25 pg/μL马、牛、羊、猪、鸡、鸭、猫、狗、兔、鼠和大肠杆菌的DNA样品进行种属特异性测试;取5、10、20、40μmol/L血红素进行抗抑制性测试;取两个批次的DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒经反复冻融10次后进行稳定性测试;分别应用VeriFiler^(TM)Plus PCR扩增试剂盒和DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒对100份陈旧、腐败、降解检材进行检验。结果表明,100个汉族无关个体均获得清晰的mtDNA SNP分型结果,其检验结果与通过mtDNA测序获得的结果完全一致;100个汉族无关个体含有100种不同的单倍型;20组全同胞中每组个体之间mtDNA SNP分型结果相同;DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒对马、牛、羊、猪、鸡、鸭、猫、狗、兔、鼠和大肠杆菌的DNA样品进行检测,均未出现特异性分型;当血红素浓度≤40μmol/L时,所有mtDNA SNP位点均获得正确分型;两个批次的DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒经反复冻融10次后,所有mtDNA SNP位点均可正确分型;对于100份陈旧、腐败、降解检材,STR检出率为55%,mtDNA SNP的检出率为86%,mtDNA SNP的检出率显著高于STR。当模板DNA浓度大于5 pg/μL时,DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒能得到完整的分型谱图。综上,DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒可应用于陈旧、腐败、降解检材的检验,具有很好的实战应用价值。

国产结核分枝杆菌T细胞免疫反应检测试剂盒诊断结核病的临床试验研究

目的:评价国产结核分枝杆菌T细胞免疫反应检测试剂盒(简称“试验试剂盒”)在体外定性检测疑似结核病患者新鲜外周静脉抗凝血中结核分枝杆菌特异性T细胞免疫反应结果的检测效能。方法:采用国产试验试剂盒与已上市进口产品(简称“对照试剂盒”),针对2020年11月至2021年6月陕西省结核病防治院收治的335例及2021年7月至2022年6月第四军医大学第一附属医院收治的343例疑似结核病患者的新鲜外周静脉抗凝血进行检测效能的比较研究。结果:678例外周静脉抗凝血样本中,以对照试剂盒为参考标准,试验试剂盒检测的敏感度为93.97%(327/348),特异度为96.06%(317/330),一致率为94.99%(644/678);以病原学诊断和临床诊断结果为参考标准,试验试剂盒检测的敏感度为82.93%(277/334),特异度为81.69%(281/344),一致率为82.30%(558/678),对照试剂盒检测的敏感度为87.13%(291/334),特异度为83.43%(287/344),一致率为85.25%(578/678);204例病原学阳性患者外周静脉抗凝血样本中,试验试剂盒的结核病检出率为82.35%(168/204),对照试剂盒的结核病检出率为88.24%(180/204);130例病原学阴性患者的外周静脉抗凝血样本中,试验试剂盒的结核病检出率为83.85%(109/130),对照试剂盒的结核病检出率为85.38%(111/130);在344例非结核肺部疾病患者外周静脉抗凝血样本中,两种试剂盒检测的一致率为95.35%(328/344),试验试剂盒检测的特异度为81.69%(281/344),对照试剂盒检测的特异度为83.43%(287/344)。结论:国产结核分枝杆菌T细胞免疫反应检测试剂盒与进口已上市试剂盒,对疑似结核病患者新鲜外周静脉抗凝血体外检测结核分枝杆菌特异性T细胞免疫反应的结果具有较高的一致性,可以作为疑似结核病患者的替代诊断工具。

体外检测试剂盒阻断剂的制备方法及特性分析

目的探讨体外检测试剂盒阻断剂的制备方法及特性。方法采用6周龄BALB/c小鼠进行抗原免疫,构建杂交瘤细胞并克隆。采用动物体内诱导单克隆抗体的方法大量制备单克隆抗体,分别采用G柱亲和层析、蓝胶+Q柱离子交换层析两种方法进行纯化,核酸蛋白检测仪记录波长280 nm下的光密度(optical density,OD),紫外分光光度计测量成品浓度。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测抗体纯度。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)双抗体夹心法检测该阻断剂(CN302)对假阳性样本的阻断能力。结果G柱亲和层析法提取阻断剂的收率(3个批次分别为6.49、6.12、6.27 g/L)高于蓝胶+Q柱离子交换层析法(3个批次分别为1.78、1.68、1.61 g/L)。两种纯化方法的纯度均高达95%以上。G柱亲和层析法、蓝胶+Q柱离子交换层析法所得阻断剂的活性分别为106.54%、92.45%;与空白组相比,两种纯化方式所得阻断剂CN302对假阳性样本的检出率均降低,其OD值均小于0.2,与基准阻断剂大致相同。G柱亲和层析法所得阻断剂CN302未冻融的活性为99.86%,冻融5次后活性为99.83%。无阻断剂存在时,对假阳性样本检测的OD值约为2.5,最高可达到4.0;加入阻断剂后,OD值明显降低;阻断剂CN302对假阳性样本检测的OD值低于其他阻断剂。结论本研究所得阻断剂能显著消除样本内源性干扰,且活性几乎全部保留。G柱亲和层析法提取抗体的收率和阻断能力均高于蓝胶+Q柱离子交换层析法。