植物桃耳七中鬼臼毒素的提取及HPLC分析

采取化学提取及层析分离，从植物桃耳七中分离出高纯度鬼臼毒素，并利用ＨＰＬＣ对其进行分析，测定结果证明产品中鬼臼毒素的含量不低于９８％ ，有关物质含量不超过２％ 。

HPLC法测定桃儿七中鬼臼毒素的含量

建立了桃儿七中鬼臼毒素含量测定的方法,采用色谱柱:Diamonsil C18(100×4.6 mm,5 um;流动相:甲醇-水(40∶60);流速:1.0 mL/min;紫外检测波长:292 nm.在0.05000μg～10.00μg范围内桃儿七中鬼臼毒素进样量与峰面积的线性关系良好(r=0.9972);平均回收率为98.2%,RSD为1.57%;该方法准确、灵敏、重复性好,可用于桃儿七中鬼臼毒素的含量测定.

桃儿七果实中鬼臼毒素的鉴别和含量测定

目的采用TLC法鉴别桃儿七果实药材中的鬼臼毒素并采用HPLC法测定含量。方法色谱柱为Phenomenex LunaC18（2）（150mm×4．6mm，5μm）；流动相为乙腈-0．2％磷酸溶液（38：62）；检测波长290nm；流速1．0ml·min-1；柱温32℃。结果各批桃儿七果实药材TLC色谱中均能检出鬼臼毒素；鬼臼毒素与其他色谱峰分离良好，进样量0．26—1．30μg呈良好线性关系（r=0．9999），平均回收率为97．84％，RSD=1．66％（n=6）。结论所建方法简便快捷，结果可靠，可控制桃儿七药材的质量。

藏药桃儿七的快繁体系及其鬼臼毒素含量分析

[目的]建立藏药桃儿七的组培-移栽体系,并比较野生桃儿七与组培桃儿七的根茎中鬼臼毒素的含量差异。[方法]以藏药桃儿七种子为外植体诱导愈伤组织,将组培苗炼苗移栽,并利用高效液相色谱技术(HPLC)测定野生品桃儿七与组培品桃儿七的根茎中鬼臼毒素的含量。[结果]桃儿七带胚种段在MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L GA3培养基上愈伤诱导率最好,达33.33%;组培苗在蛭石基质中存活较好,成活率可达80%以上;西藏野生品桃儿七根茎中鬼臼毒素含量为1.01%,组培品中含量为0.087%。[结论]通过组织培养可在不破坏野生资源的前提下生产鬼臼毒素,该研究为桃儿七引种栽培提供了试验指导。

RP-HPLC法测定桃儿七中木脂素成分的含量

目的:对桃儿七中的4种主要木脂素类成分鬼臼毒苷(化合物Ⅰ)、4′-去甲基鬼臼毒素(化合物Ⅱ)、鬼臼毒素(化合物Ⅲ)和去氧鬼臼毒素(化合物Ⅳ)进行含量测定。方法:采用反相高效液相色谱法,使用ZORBAX SB C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水,线性梯度洗脱(0～13min,25∶75;13～20min,30∶70;20～30min,32∶68;30～32min,50∶50),流速1.2mL.min-1,检测波长290nm,柱温25℃。结果:化合物Ⅰ～Ⅳ进样量均在0.05～5.0μg范围内有良好的线性关系(r≥0.9999,n=7);化合物Ⅰ～Ⅳ的平均回收率(n=6)分别为102.2%,101.0%,99.8%,102.6%,RSD分别为0.56%,1.9%,0.87%,1.9%。结论:本方法能够准确地测定桃儿七中的4种主要木脂素类化合物的含量。

桃儿七组织培养体系的建立及鬼臼毒素的检测

目的建立桃儿七组织培养体系及其鬼臼毒素的提取检测方法。方法以桃儿七成熟分离胚为材料,研究了不同浓度激素、活性炭(AC)对无菌苗诱导的影响;以桃儿七无菌苗切除后约2.0 cm的根茎为材料,考察不同浓度激素对根继代及生长发育的影响,并定期对继代根、叶(叶柄)及培养基进行鬼臼毒素的提取及HPLC法检测。结果分离胚在MS+2.0%蔗糖+0.4%琼脂+1.0 mg/mL GA3+1.0 g/L AC的培养基培养20 d后,无菌苗诱导率为92.0%,无菌苗生长发育良好;切除后约2 cm的根茎接种在MS+2.0%蔗糖+0.4%琼脂+1.0 g/LAC+1.0 mg/mLIBA继代40 d后,根长11.59 cm,植株生长发育良好;对继代根、叶(叶柄)及培养基进行鬼臼毒素的提取及HPLC法检测显示,鬼臼毒素量大小依次为根>培养基>叶(叶柄),50 d后分别为33.17、12.97、4.55μg/mL。结论本研究建立了桃儿七组织培养体系,证明了利用桃儿七根培养生产鬼臼毒素的可行性。