采用响应面法对重组大肠杆菌谷氨酸脱羧酶转化谷氨酸生成γ-氨基丁酸的条件进行优化。首先通过单因素实验得出酶转化的初步条件,再经过Plackett-Burman设计法筛选出主要影响因素,并利用响应面分析法对各主要因素进行优化,最终确定的最...采用响应面法对重组大肠杆菌谷氨酸脱羧酶转化谷氨酸生成γ-氨基丁酸的条件进行优化。首先通过单因素实验得出酶转化的初步条件,再经过Plackett-Burman设计法筛选出主要影响因素,并利用响应面分析法对各主要因素进行优化,最终确定的最佳条件为:底物浓度0.290 mol/L,pH值4.99,转化温度52.10℃,转化时间60 min 22s。采用优化后的转化条件进行转化酶活达到了1461.84μmol/(5 mL·h),比优化前提高了19.11%。展开更多
【目的】将抗逆相关转录因子ABP9基因导入大豆(Glycine max L.)基因组,并对转化系统条件进行探索,为提高大豆遗传转化效率提供依据。【方法】以农杆菌介导的半种法大豆遗传转化系统为基础,对目的基因进行转化;以健康外植体获得率、抗性...【目的】将抗逆相关转录因子ABP9基因导入大豆(Glycine max L.)基因组,并对转化系统条件进行探索,为提高大豆遗传转化效率提供依据。【方法】以农杆菌介导的半种法大豆遗传转化系统为基础,对目的基因进行转化;以健康外植体获得率、抗性丛生芽获得率和抗性芽伸长比率为指标,对转化系统条件进行优化。【结果】共培养时保证充足的光照和氧气,外植体生长情况最好;在共培养或诱导丛生芽培养基中加入600mg·L-1的L-半胱氨酸可以使抗性丛生芽获得率由22.1%提高至32.6%;采用4种植物激素进行正交试验,诱导抗性芽伸长比率最高的激素配比为:6-BA为1.5mg·L-1,GA3为0.75mg·L-1,IAA为0.1mg·L-1,ZT为1.0mg·L-1。【结论】利用优化的方法进行遗传转化研究已获得转基因再生植株,经PCR和DNA测序等分子检测,证明目的基因ABP9已导入并整合到大豆基因组中;转化率为1.33%。展开更多
文摘采用响应面法对重组大肠杆菌谷氨酸脱羧酶转化谷氨酸生成γ-氨基丁酸的条件进行优化。首先通过单因素实验得出酶转化的初步条件,再经过Plackett-Burman设计法筛选出主要影响因素,并利用响应面分析法对各主要因素进行优化,最终确定的最佳条件为:底物浓度0.290 mol/L,pH值4.99,转化温度52.10℃,转化时间60 min 22s。采用优化后的转化条件进行转化酶活达到了1461.84μmol/(5 mL·h),比优化前提高了19.11%。
文摘用中性蛋白酶水解南瓜籽粕,制备血管紧张素转换酶(angiotensin—converting enzyme,ACE)抑制肽,是南瓜籽粕蛋白深度开发的途径之一。为了探寻南瓜籽粕酶法制备ACE抑制肽的最佳工艺,该文以ACE抑制率为响应值,用响应面分析法研究酶浓度、底物质量浓度和水解时间等因素对酶解产物的ACE抑制活性的影响,优化制备工艺。结果表明,各因素对制备ACE抑制肽的活性具有极显著影响(P<0.001)。获得中性蛋白酶水解南瓜籽粕制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为:酶体积分数为4.8%、底物质量浓度为4.0g/100 m L、水解时间为320 min。在此条件下,南瓜籽粕蛋白酶解产物对ACE的理论抑制率最高可达80.0%,验证值为80.56%±0.23%,预测模型可靠性高,可应用于南瓜籽粕ACE抑制肽的酶法制备。通过优化,提高了南瓜籽粕ACE抑制肽的活性。
文摘【目的】将抗逆相关转录因子ABP9基因导入大豆(Glycine max L.)基因组,并对转化系统条件进行探索,为提高大豆遗传转化效率提供依据。【方法】以农杆菌介导的半种法大豆遗传转化系统为基础,对目的基因进行转化;以健康外植体获得率、抗性丛生芽获得率和抗性芽伸长比率为指标,对转化系统条件进行优化。【结果】共培养时保证充足的光照和氧气,外植体生长情况最好;在共培养或诱导丛生芽培养基中加入600mg·L-1的L-半胱氨酸可以使抗性丛生芽获得率由22.1%提高至32.6%;采用4种植物激素进行正交试验,诱导抗性芽伸长比率最高的激素配比为:6-BA为1.5mg·L-1,GA3为0.75mg·L-1,IAA为0.1mg·L-1,ZT为1.0mg·L-1。【结论】利用优化的方法进行遗传转化研究已获得转基因再生植株,经PCR和DNA测序等分子检测,证明目的基因ABP9已导入并整合到大豆基因组中;转化率为1.33%。
