风咳汤通过SIRT1/NF-κB/NLRP3信号通路减轻咳嗽变异性哮喘大鼠气道炎症

目的探讨风咳汤对咳嗽变异性哮喘(CVA)大鼠气道炎症及肺功能的改善作用及机制。方法采用卵蛋白(OVA)和氢氧化铝混合物1 mL皮下注射致敏后再以雾化的OVA激发哮喘建立CVA大鼠模型,分别给予风咳汤低剂量、高剂量和地塞米松进行治疗,正常对照组与模型组灌胃相应体积生理盐水。Diff-Quick法进行肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞计数,ELISA法检测各组大鼠BALF上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-22(IL-22)含量;观察大鼠肺组织病理学变化;检测大鼠肺组织中SIRT1/NF-κB/NLRP3信号通路中的相关蛋白和基因表达水平;检测肝组织中Caspase-1的活性。结果与正常组比较,模型组大鼠炎症细胞数量、炎症因子含量和HE染色显示的病理改变都显著升高,SIRT1表达水平下降,NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18的蛋白水平和mRNA水平显著升高(P<0.05)。与模型组相比,风咳汤高剂量可以显著降低炎症细胞数和炎症因子含量,改善肺组织的病理改变,升高SIRT1的表达水平同时降低NF-κB、NLRP3、ASC和IL-1β的蛋白水平及mRNA水平,其作用与地塞米松相当。此外,风咳汤还可以降低Caspase-1的活性。结论风咳汤可以通过SIRT1/NF-κB/NLRP3信号通路有效改善CVA大鼠气道炎症,改善肺功能。

基于Sirt1/NF-κB通路探讨电针对围术期神经认知障碍大鼠海马线粒体功能的影响

目的 观察电针对围术期神经认知障碍(PND)大鼠海马线粒体功能和沉默信息调节因子1(Sirt1)/核因子-κB(NF-κB)通路的影响,探讨电针改善PND的作用机制。方法 将96只雌性SD老年大鼠随机分为对照组、模型组、电针组和激动剂组,每组24只。每组再按照术后3、7 d分为两个亚组,每亚组12只。模型组、电针组和激动剂组行剖腹探查术建立PND大鼠模型。电针组给予“百会”和双侧“内关”电针治疗,术前2天开始,每天1次,每次20~30 min。激动剂组认知训练开始时腹腔注射白藜芦醇(10 mg/kg),每天1次,连续7d。Morris水迷宫检测大鼠认知功能,ELISA法检测海马线粒体呼吸链复合物I和IV的含量,流式细胞术检测海马线粒体膜电位(MMP)水平,Western blot法和荧光定量PCR法检测Sirt1、NF-κB蛋白和mRNA表达水平。结果 与对照组比较,术后3、7 d模型组逃避潜伏期明显延长(P<0.01,P<0.05),平台穿越次数明显减少(P<0.01,P<0.05);术后3、7 d海马线粒体呼吸链复合物I和IV含量、MMP水平、Sirt1蛋白和mRNA表达水平明显降低(P<0.01),NF-κB p65蛋白和mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,术后3 d电针组和激动剂组逃避潜伏期明显缩短(P<0.01,P<0.05),平台穿越次数明显增加(P<0.01,P<0.05);术后7 d逃避潜伏期缩短,平台穿越次数增加,但差异均无统计学意义(P>0.05);术后3 d海马线粒体呼吸链复合物I、IV含量均明显增加(P<0.01);术后7 d线粒体呼吸链复合物I、IV含量差异均无统计学意义(P>0.05);术后3、7 d海马MMP、Sirt1蛋白和mRNA水平明显升高(P<0.01,P<0.05),NF-κB p65蛋白和mRNA水平明显降低(P<0.01)。结论 电针可以调控PND大鼠海马线粒体功能,改善认知功能,Sirt1/NF-κB信号通路可能参与其中。

栀子苷调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对急性呼吸窘迫综合征大鼠肺损伤的影响

目的:探讨栀子苷(GE)通过调节AMP活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子κB(NF-κB)信号通路对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺损伤的影响。方法:通过气管滴注脂多糖(LPS)方法建立ARDS大鼠模型。将建模后的50只大鼠随机分为ARDS组、GE低剂量(GE-L,12.5 mg/kg GE)组、GE中剂量(GE-M,25 mg/kg GE)组、GE高剂量(GE-H,50 mg/kg GE)组、GE-H+Compound C(AMPK抑制剂,50 mg/kg GE+250μg/kg Compound C)组,另取10只正常大鼠为对照组。干预后,分别取出各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织,检测肺湿干重比(W/D);ELISA法检测BALF中炎症因子IL-6、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫组化法检测肺组织中血管细胞黏附因子(VCAM-1)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)阳性表达;HE染色观察肺组织病理变化;Western blot检测肺组织中AMPK/SIRT1/NF-κB通路蛋白表达水平。结果:ARDS组W/D、IFN-γ、IL-6、TNF-α水平、p-NF-κB p65/NF-κB p65、VCAM-1表达较对照组显著升高,p-AMPK/AMPK、SIRT1、VEGF表达显著降低(P<0.05);经不同剂量GE治疗后,W/D、IFN-γ、IL-6、TNF-α水平、p-NF-κB p65/NF-κB p65、VCAM-1表达较ARDS组逐渐降低;p-AMPK/AMPK、SIRT1、VEGF表达逐渐升高(P<0.05);Compound C逆转了GE-H组对ARDS大鼠的保护作用(P<0.05)。结论:GE可以改善ARDS大鼠肺损伤状况,降低炎症因子水平,可能与激活AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路有关。

丁苯酞通过SIRT1/NF-κB信号通路抑制阿尔茨海默病大鼠海马神经元凋亡的机制研究

目的:探讨丁苯酞通过SIRT1/NF-κB信号通路对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马神经元凋亡的影响及其机制。方法:采用氯化铝(AlCl 3)灌胃联合腹腔注射D-半乳糖的方法制备AD大鼠模型,分别给予25 mg/kg(低剂量)、50 mg/kg(中剂量)和100 mg/kg(高剂量)丁苯酞处理后,采用HE染色、流式细胞术和Western blot法分别观察丁苯酞对各组大鼠海马神经元形态、凋亡率及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3及SIRT1/NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响;分别以SIRT1激动剂SRT1720和抑制剂sirtinol处理大鼠后,观察SIRT1/NF-κB信号通路在海马神经元凋亡中的作用;在给予50 mg/kg丁苯酞的基础上,再给予sirtinol作用,观察丁苯酞调控SIRT1/NF-κB信号通路对神经元凋亡的影响。结果:丁苯酞可改善AD大鼠海马神经元的形态,显著抑制AD大鼠海马神经元凋亡及Bax和cleaved caspase-3蛋白的表达,而促进Bcl-2蛋白表达和SIRT1/NF-κB信号通路的激活( P <0.05)。SIRT1激动剂SRT1720可显著促进Bcl-2蛋白表达和SIRT1/NF-κB信号通路的激活,并抑制海马神经元凋亡及Bax和cleaved caspase-3蛋白的表达( P <0.05);而SIRT1抑制剂sirtinol的作用则与SRT1720相反。经sirtinol处理后,丁苯酞对海马神经元凋亡及Bax和cleaved caspase-3蛋白表达的抑制作用及对Bcl-2蛋白表达的促进作用均显著减弱( P <0.05)。结论:丁苯酞可通过激活SIRT1/NF-κB信号通路下调Bax和cleaved caspase-3,并上调Bcl-2蛋白的表达抑制AD大鼠海马神经元凋亡。

七叶皂苷钠调控SIRT1/NF-κB信号通路对帕金森病大鼠的神经保护作用

目的探究七叶皂苷钠通过调控沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子κB(NF-κB)信号通路发挥对帕金森病大鼠的神经保护作用。方法采用6-羟基多巴胺注射法构建帕金森病大鼠模型,将建模成功的48只大鼠随机分为模型组、七叶皂苷钠低剂量组(1.8 mg/kg)、七叶皂苷钠高剂量组(3.6 mg/kg)、七叶皂苷钠+EX527组(七叶皂苷钠3.6 mg/kg+SIRT1抑制剂EX5275 mg/kg),每组12只;另取12只健康大鼠作为假手术组。各药物组大鼠腹腔注射相应药液,每天1次,持续21 d。末次给药结束24 h后,检测大鼠运动及认知功能,观察其黑质区和海马组织CA1区神经元形态,检测其黑质纹状体中多巴胺(DA)含量和黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、α突触核蛋白(α-Syn)表达水平,检测其血清中促炎因子[白细胞介素6(IL-6)、IL-18]、抗炎因子(IL-10)水平及黑质纹状体中SIRT1、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、NF-κB p65蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠黑质区和海马组织CA1区神经元损伤严重;其旋转圈数、逃避潜伏期、黑质区α-Syn蛋白表达水平、血清中促炎因子水平、黑质纹状体中p-NF-κB p65与NF-κBp65蛋白的相对表达量之比均显著升高或延长(P<0.05),目标象限停留时间、黑质纹状体中DA含量及黑质区TH蛋白表达水平、血清中抗炎因子水平、黑质纹状体中SIRT1蛋白表达水平均显著缩短或降低(P<0.05)。与模型组比较,七叶皂苷钠各剂量组大鼠神经元损伤程度减轻,各定量指标均显著改善,且高剂量组的改善更为明显(P<0.05),而EX527可逆转高剂量七叶皂苷钠的改善作用(P<0.05)。结论七叶皂苷钠可通过上调SIRT1蛋白表达来抑制NF-κB信号激活,从而抑制帕金森病大鼠的神经炎症,改善其运动及认知功能障碍,最终起到神经保护作用。

白术内酯Ⅲ调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对脓毒症大鼠肝损伤的影响

目的探究白术内酯Ⅲ(AtractylideneⅢ,Atr-Ⅲ)对脓毒症大鼠肝损伤的影响以及对腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)/去乙酰化酶1(SIRT1)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的调节作用。方法将60只SPF级SD雄性大鼠分为假手术组、模型组、阳性组、Atr-Ⅲ低、高剂量组、Atr-Ⅲ高剂量+AMPK抑制剂组。检测大鼠血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织的病理变化;TUNEL染色检测肝细胞凋亡情况;ELISA检测血清白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性;Western blot检测通路相关蛋白表达情况。结果与假手术组相比,模型组大鼠肝细胞损伤严重,AST、ALT、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、细胞凋亡率、p65 NF-κB磷酸化表达均升高,SOD、CAT活性、AMPK磷酸化、SIRT1蛋白表达均降低(P<0.05);与模型组相比,阳性组和Atr-Ⅲ组大鼠肝细胞形态恢复,AST、ALT、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、细胞凋亡率、p65 NF-κB磷酸化表达均降低,SOD、CAT水平、AMPK磷酸化、SIRT1蛋白表达均升高(P<0.05)。AMPK抑制剂BML-275消除了高剂量ATL-Ⅲ对脓毒症大鼠肝损伤的缓解作用。结论Atr-Ⅲ可以激活AMPK/SIRT1信号通路,抑制p65 NF-κB活化,减轻脓毒症大鼠的肝损伤。

萝卜硫素通过AMPK/SIRT1/NF-κB通路改善糖尿病小鼠肾损伤

目的 探讨萝卜硫素(sulforaphane,SFN)通过调控AMPK/SIRT1/NF-κB途径保护糖尿病小鼠肾损伤的治疗机制。方法 30只C57BL/6小鼠随机分为正常组10只和实验组20只,后者通过腹腔注射50 mg/kg链脲佐菌素制备糖尿病小鼠模型;造模成功的小鼠分为模型组和萝卜硫素组(每天萝卜硫素0.5 mg/kg)各10只。每周称重并测量空腹血糖,连续给药12周后,收集血清和肾脏组织,检测肾损伤指标、炎症因子及AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路的蛋白水平,观察肾脏病理损伤情况。高糖处理HEK-293T细胞复制肾细胞损伤模型,加入AMPK抑制剂验证SFN是否通过激活AMPK/SIRT1途径发挥抗炎作用。结果 给药12周后,SFN组小鼠空腹血糖降至7.5 mmol/L,胰岛素升至0.82 ng/mL,肾脏病理损伤明显改善,血清中肌酐、尿素氮、24 h内尿蛋白含量及促炎因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)、p-p65蛋白水平降低,p-AMPK和SIRT1的蛋白表达水平显著增加,与模型组差异均有统计学意义(P<0.05)。体外实验表明,SFN改善高糖诱导的HEK-293T细胞炎症,激活AMPK/SIRT1信号通路并降低p65磷酸化蛋白表达水平;而AMPK抑制剂削弱了SFN的抗炎效果。结论 萝卜硫素通过激活AMPK/SIRT1信号通路并抑制NF-κB信号通路降低肾脏炎症水平,有效缓解糖尿病小鼠肾损伤。

间歇有氧运动激活miR-21/SIRT1/NF-κB通路改善心梗大鼠肾功能研究

目的:探讨间歇有氧运动激活心肌梗死(Myocardial Infarction,MI)大鼠肾脏miR-21/SIRT1/NF-κB通路改善肾功能的作用。方法:3月龄雄性SD大鼠,随机分为假手术组(Sham)、心肌梗死组(MI)、心梗+间歇运动组(ME),每组12只。左冠状动脉前降支(Left Anterior Descending Coronary Artery,LAD)结扎建立MI模型,ME组在心梗1周后采用小动物跑台进行8周间歇训练。训练结束后测定各组大鼠心电图变化,采用紫外分光光度法测定尿酸和尿蛋白水平,免疫荧光染色法测定AQP2表达,ELISA法测定血清AVP和尿液AQP2,RT-q PCR检测肾脏AQP2、V2R和miR-21表达,Western Blot检测肾脏AQP2、SIRT1和乙酰化NF-κBp65蛋白表达。结果:心梗大鼠肾脏功能显著降低,肾脏AVP、V2R和AQP2表达增多,尿液AQP2表达增多,水潴留严重。间歇运动可有效改善心梗大鼠肾脏功能,降低肾脏AVP、V2R和AQP2表达,减少尿液AQP2水平,上调肾脏miR-21和SIRT1的表达,抑制NF-κB乙酰化水平;且发现肾脏miR-21表达水平与SIRT1表达呈显著正相关。结论:间歇有氧运动可显著提高心梗大鼠肾脏miR-21表达,激活miR-21/SIRT1/NF-κB通路,改善心梗大鼠肾脏功能。间歇有氧运动改善心梗大鼠肾脏功能与提高心梗大鼠肾脏miR-21表达,激活miR-21/SIRT1/NF-κB通路关系密切。运动干预micro RNAs表达研究与心肾保护效应,将为心梗及肾脏疾病患者运动康复手段筛选提供新思路。

电针额区对血管性痴呆大鼠认知功能及SIRT1/NF-κB信号通路的影响

目的观察电针额区对血管性痴呆大鼠认知功能及SIRT1/NF-κB信号通路的影响,初步探讨其作用机制。方法选取60只健康雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组、模型组、西药组和电针组,动物模型的制作方法采取改良的2-VO法造模。电针组参照于致顺教授头针疗法,选取VD大鼠头部额区丛刺并连接脉冲电疗仪,西药组给予脑复康治疗,假手术组和模型组均给予生理盐水灌胃治疗。每组大鼠采用Morris水迷宫进行行为学能力的检测;Western blot法检测SIRT1,磷酸化NF-κB蛋白表达的变化。结果与模型组比较,电针组VD大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05),跨越原平台次数增高(P<0.05),VD大鼠海马区SIRT1蛋白表达升高(P<0.05),NF-κB p65蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论电针额区可以有效改善VD大鼠的认知功能障碍,调整VD大鼠海马区SIRT1/NF-κB信号通路的传导,促进大鼠神经功能恢复。

藤黄健骨胶囊通过SIRT1/NF-κB/NLRP3信号通路调节绝经后骨质疏松大鼠破骨细胞分化

目的:探讨藤黄健骨胶囊(TJC)对绝经后骨质疏松大鼠沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)信号通路关键蛋白表达的影响及分子机制。方法:采用随机数字表法将SD雌性大鼠分为假手术组,模型组[卵巢切除术(OVX)组],SIRT1抑制剂组(EX-527+OVX组),阳性药物戊酸雌二醇(ESV)对照组(ESV+OVX组),以及高、中、低剂量TJC处理组(TJC-H+OVX、TJC-M+OVX和TJCL+OVX组),每组10只。OVX建模,建模成功后给予TJC或ESV干预,并根据实验设计给予EX-527干预,8周后取材。ELISA法检测相关炎症因子水平;双重免疫荧光染色分别检测SIRT1、NF-κB p65和NLRP3蛋白;RT-qPCR和Western blot分别检测SIRT1/NF-κB/NLRP3信号通路相关分子和破骨分化标志分子的mRNA和蛋白水平。结果:与假手术组相比,OVX组和EX-527+OVX组大鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量显著升高(P<0.01),破骨细胞NF-κB p65及NLRP3表达荧光面积显著增大(P<0.01),股骨组织NF-κB p65、NLRP3和活化T细胞核因子胞浆1型(NFATc1)mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.01),而破骨细胞SIRT1表达荧光面积显著减小(P<0.01);与OVX组相比,高剂量TJC处理组大鼠血清IL-1β含量和股骨组织NLRP3蛋白表达水平均显著降低,中、高剂量TJC处理组大鼠血清IL-18含量及股骨组织NF-κB p65和NFATc1蛋白表达水平均显著降低,低、中、高剂量TJC处理组大鼠血清TNF-α含量、破骨细胞NF-κB p65和NLRP3表达荧光面积、股骨组织NF-κB p65、NLRP3及NFATc1 mRNA水平均显著降低,而破骨细胞SIRT1表达荧光面积显著增大(P<0.05);与EX-527+OVX组相比,高剂量TJC处理组大鼠股骨组织NLRP3蛋白表达水平显著降低,中、高剂量TJC处理组大鼠血清IL-1β及IL-18含量、股骨组织NF-κB p65和NFATc1蛋白表达水平均显著降低,低、中、高剂量TJC处理组血清TNF-α含量、破骨细胞NF-κB p65和NLRP3表达荧光面积、股骨组织NF-κB p65、NLRP3及NFATc1 mRNA水平均显著降低,而破骨细胞SIRT1表达荧光面积显著增大(P<0.05)。结论:TJC能够抑制绝经后骨质疏松模型大鼠破骨细胞分化,其作用机制可能与抑制SIRT1/NF-κB/NLRP3信号通路激活、减轻炎症反应有关。

地塞米松对异氟醚麻醉手术大鼠SIRT1/NF-κB信号通路的影响

目的探究地塞米松对异氟醚麻醉手术大鼠沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子(NF)-κB信号通路的影响。方法选取40只SPF级SD大鼠随机分为4组:Sham组(不做任何处理);ISO组(持续4 h吸入1.4%异氟醚);5 Dex Iso组(吸入异氟醚前30 min腹腔注射5 mg/kg地塞米松);10 Dex Iso组(吸入异氟醚前30 min腹腔注射10 mg/kg地塞米松)。采用Morris水迷宫实验和物体位置识别实验评估大鼠认知功能,HE染色观察大鼠海马区形态学变化,TUNEL染色观察大鼠海马区神经元凋亡情况,ELISA法检测海马组织中IL-6、IL-1β和TNF-α水平,Western blot法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)、caspase-9、SIRT1、NF-κB、磷酸化(p)-NF-κB、NF-κB抑制蛋白(IκBα)。结果与Sham组比较,ISO组第3至5天逃避潜伏期和物体记忆时间延长,原平台位置穿越次数减少,海马区神经元凋亡率、caspase-3、caspase-9相对表达量、IL-6、IL-1β、TNF-α及p-NF-κB/NF-κB水平明显升高,SIRT1和IκBα表达量明显降低(P<0.05);与ISO组比较,10 Dex Iso组第4至5天逃避潜伏期和物体记忆时间缩短,原平台位置穿越次数增加,海马区神经元凋亡率、caspase-3、caspase-9相对表达量、IL-6、IL-1β、TNF-α及p-NF-κB/NF-κB水平明显降低,SIRT1和IκBα表达量明显升高(P<0.05)。结论地塞米松可改善异氟醚麻醉所致大鼠认知功能障碍,减轻神经元凋亡,可能与调节SIRT1/NF-κB信号通路有关。

隔三七饼灸调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对创伤性骨关节炎大鼠软骨损伤的影响

目的探究隔三七饼灸调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对创伤性骨关节炎(TOA)大鼠软骨损伤的影响。方法随机把SD大鼠分为假手术(sham)组、TOA组、隔三七饼灸组、扶他林组、隔三七饼灸+AMPK抑制剂(Compound C)组,采用经典Hulth方法复制TOA模型,HE染色和番红-固绿染色观察软骨组织病理改变,并进行Mankin’s评分;免疫组化检测软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)阳性表达情况;利用试剂盒检测软骨组织中炎性介质[(一氧化氮(NO),白介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子α(TNF-α);基质金属蛋白酶-1、3(MMP-1.3)]水平;Western Blot、免疫共沉淀检测软骨组织中AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路相关蛋白表达情况。结果与Sham组比较,TOA组软骨组织发生明显病变,软骨层变薄,表面出现裂隙样破坏,软骨细胞大量减少、排列紊乱,蛋白多糖明显丢失,Mankin’s评分增高;CollagenⅡ阳性表达下降,NO、IL-1β、TNF-α、MMP-1、MMP-3水平增高(P<0.05);经隔三七饼灸、扶他林干预后,上述情况均得到改善,且隔三七饼灸干预改善更明显;在隔三七饼灸干预的同时给予AMPK抑制剂干预,隔三七饼灸的改善作用被削弱。与Sham组比较,TOA组软骨组织中AMPK磷酸化蛋白、SIRT1蛋白表达下降,NF-κB乙酰化蛋白、核NF-κB蛋白表达增高(P<0.05);经隔三七饼灸干预后,上述蛋白表达情况明显改善;在隔三七饼灸干预的同时给予AMPK抑制剂干预,隔三七饼灸的改善作用被削弱。结论隔三七饼灸能够减轻TOA大鼠软骨损伤,可能与调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路有关。

补阳还五汤通过SIRT1/NF-κB p65信号通路减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤

目的:探讨补阳还五汤(BYHWD)通过调控沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子κB p65(NF-κB p65)炎症信号通路减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤(CIRI)的作用机制。方法:SD大鼠随机分为假手术(sham)组、模型组(MCAO/R组)、BYHWD组、SIRT1抑制剂组(EX527组)和BYHWD+EX527组,每组15只。除sham组外,其余各组均构建大脑中动脉栓塞(MCAO)模型缺血2 h再灌注3 d并给予药物干预。采用ZeaLonga评分标准进行神经功能缺损评分;TTC染色检测脑梗死体积百分比;HE染色观察脑组织病理学变化;Westernblot检测SIRT1、乙酰化核因子κB p65(AcNF-κB p65)、NF-κB p65、和白细胞介素6(IL-6)蛋白的相对表达量;免疫荧光检测NF-κB p65入核表达水平;免疫组化染色检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平。结果:与sham组相比,MCAO/R组神经功能学评分升高(P<0.05);脑梗死体积百分比增加(P<0.05);缺血侧脑组织皮质区病理损伤严重,神经细胞排列紊乱、细胞核固缩、碎裂;SIRT1蛋白表达减少,AcNF-κB p65/NF-κB p65和IL-6蛋白表达升高(P<0.05);免疫荧光显示细胞核内NF-κB p65表达增多(P<0.05);免疫组化显示TNF-α阳性表达升高(P<0.05)。与MCAO/R组相比,BYHWD组神经功能学评分降低(P<0.05);脑梗死体积百分比减小(P<0.05);缺血侧脑组织皮质区病理损伤减轻,神经细胞形态有所恢复;SIRT1蛋白表达增加,AcNF-κB p65/NF-κB p65和IL-6蛋白表达减少(P<0.05);免疫荧光显示细胞核内NF-κB p65表达减少(P<0.05);免疫组化显示TNF-α阳性表达减少(P<0.05)。SIRT1抑制剂EX527能降低SIRT1的表达,抑制脱乙酰酶活性,削弱了BYHWD通过激活SIRT1后对CIRI产生的上述作用。结论:BYHWD可有效减轻大鼠CIRI,激活SIRT1/NF-κB p65信号通路进而抑制炎症反应是其发挥作用的机制之一。

穴位埋线通过SIRT1/NF-κB信号通路对溃疡性结肠炎肠道屏障功能的影响

目的观察穴位埋线调控SIRT1/NF-κB信号通路对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠炎症反应和肠黏膜屏障功能的影响。方法将Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为空白组、模型组、药物组和穴位埋线组,每组10只。采用3%葡聚糖硫酸钠自由饮用建立UC大鼠模型。药物组给予柳氮磺胺吡啶每千克体质量0.5 g连续灌胃;穴位埋线组予穴位简易埋线治疗。比较4组大鼠疾病活动度指数(disease activity index,DAI)和黏膜损伤指数(colon mucosa damage index,CMDI)的改变,观察4组结肠组织的病理变化,比较血清和结肠组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性、结肠组织核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65的阳性表达、结肠组织SIRT1/NF-κB信号通路相关蛋白的表达、结肠组织黏膜屏障保护因子上皮钙黏附素(epithelial calcium-dependent cell adhesion molecule,E-cadherin)和紧密连接蛋白的闭合蛋白(occludin)的m RNA表达。结果与模型组比较,穴位埋线组大鼠DAI和CMDI评分降低,结肠黏膜溃疡和炎性浸润显著减轻,血清和结肠组织中MPO活性升高,结肠组织中NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IκBα、p-IKKβ、AC-p65的蛋白表达下调,SIRT1的蛋白表达水平及E-cadherin、occludin的m RNA水平上调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论穴位埋线疗法可显著改善大鼠肠黏膜的炎症,降低DAI、CMDI及病理组织学评分,其作用机制可能与调控SIRT1/NF-κB信号通路、上调黏膜屏障保护因子水平及修复黏膜上皮屏障功能相关。

有氧运动通过SIRT1/NF-κB信号通路改善睡眠剥夺大鼠的学习记忆

目的研究有氧运动对睡眠剥夺大鼠学习记忆的影响,并探讨其对SIRT1/NF-κB信号通路及相关炎症因子的影响。方法40只雄性SD大鼠随机均分成空白对照组(CON,Control Group)、完全睡眠剥夺组(TSD,Total Sleep Deprivation Group)、有氧运动组(EX,Exercise Group)、运动+完全睡眠剥夺组(EX+TSD)。EX组和EX+TSD组进行4周的跑台运动之后,采用多平台水环境法,建立大鼠完全睡眠剥夺模型,TSD组和EX+TSD组进行72h的睡眠剥夺。睡眠剥夺结束后选用Morris水迷宫来检测大鼠的学习记忆水平;采用Real-time PCR法检测各组大鼠海马TNF-α、IL-6表达量;选用Western blot技术检测每组的大鼠海马SIRT1、Ac-NF-κB P65蛋白表达水平;采用免疫荧光检测PSD95、SYN在海马中的表达情况。结果Morris水迷宫检测结果表明,与CON组比较,TSD组大鼠的上平台潜伏期和游泳总路程、初次抵达平台时间显著延长(P<0.05,P<0.01),目标象限停留时间显著减少(P<0.05);与TSD组比较,EX+TSD组和EX组上平台潜伏期、游泳总路程、初次抵达平台时间减少(P<0.05,P<0.01),目标象限停留时间显著增加(P<0.01);RT-PCR检测结果表明,与CON组相比,TSD组TNF-α、IL-6 mRNA表达显著上调(P<0.01);与TSD组相比,EX+TSD组TNF-、IL-6表达下调(P<0.05);Western blot检测结果表明,与CON组相比,TSD组SIRT1蛋白表达显著降低(P<0.01),Ac-NF-κB P65表达显著升高(P<0.01);与TSD组相比,EX组和EX+TSD组海马中SIRT1表达上调(P<0.05),Ac-NF-κB P65的表达下调(P<0.05);免疫荧光结果表明,与CON组比较,TSD组海马中PSD95、SYN表达显著减少;与TSD组比较,EX组和EX+TSD组海马中PSD95、SYN表达显著增加。结论睡眠剥夺能引起明显的学习记忆损伤,4周的有氧运动可能通过调节SIRT1/NF-B信号通路及相关炎性因子的含量,减轻由睡眠剥夺引起的学习记忆损伤。

基于SIRT1/NF-κB信号通路探讨有氧运动结合生慧汤对睡眠剥夺大鼠学习记忆的影响

目的研究4周的跑台运动结合生慧汤对睡眠剥夺大鼠SIRT1/NF-κB信号通路及相关炎症因子的调节作用,探讨其改善睡眠剥夺大鼠学习记忆可能的作用机制。方法将48只睡眠剥夺模型大鼠随机均分为空白对照组(CON组)、有氧运动组(EX组)、完全睡眠剥夺组(TSD组)、完全睡眠剥夺+有氧运动组(TSD+EX组)、完全睡眠剥夺+生慧汤+有氧运动组(TSD+SHT+EX组)、完全睡眠剥夺+生慧汤组(TSD+SHT组)。EX组、TSD+EX组进行4周的跑台运动、TSD+SHT+EX组同时给与4周的跑台运动及生慧汤之后,采用多平台水环境法建立大鼠完全睡眠剥夺模型,TSD组、TSD+EX组、TSD+SHT组、TSD+SHT+EX组进行72 h的睡眠剥夺。睡眠剥夺结束后采用Morris水迷宫评价大鼠的学习记忆,采用Western blot(免疫印迹试验)检测大鼠海马中SIRT1、IκBα(NF-κB的抑制蛋白)、AC-NF-κB p65(乙酰化NF-κB p65)蛋白表达水平,采用实时荧光定量PCR技术和ELISA(酶联免疫吸附剂测定)分别检测海马和血清中TNF-α(Tumornecrosis factor-α,肿瘤坏死因子-α)、IL-6(Interleukin-6,白细胞介素-6)、IL-1β(Interleukin-1β,白细胞介素-1β)mRNA表达水平,采用HE染色(苏木精-伊红染色法)观察大鼠海马的神经元形态。结果与CON组比较,TSD组大鼠上平台潜伏期和游泳总路程显著增加,初次抵达平台时间显著延长,目标象限停留时间显著减少;SIRT1、IκBα表达显著降低、AC-NF-κB p65表达显著升高;海马及血清中TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平显著升高。与TSD组比较,TSD+EX组、TSD+SHT组、TSD+SHT+EX组大鼠平台潜伏期和游泳总路程显著减少,初次抵达平台时间缩短,目标象限停留时间增加;SIRT1、IκBα表达升高、AC-NF-κB p65表达降低;海马及血清中TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达水平显著降低;TSD+SHT+EX组、TSD+EX组、TSD+SHT组海马神经元细胞排列较规则,数量增加,细胞核饱满。结论4周的有氧运动结合生慧汤可抑制神经元损伤,改善睡眠剥夺引起的大鼠学习记忆能力,其机制可能与SIRT1/NF-κB信号通路中的关键蛋白及TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症因子表达有关。

葛根素减轻LPS诱导的小鼠急性肾损伤:基于调节SIRT1/NF-κB信号通路

目的探讨SIRT1/NF-κB信号通路在葛根素抗脂多糖(LPS)所致急性肾损伤(AKI)中的作用及机制。方法将15只BALB/C小鼠随机分为3组:对照组,LPS组,葛根素组。对照组小鼠腹腔注射生理盐水4 d;LPS组小鼠第1天注射LPS(5 mg/kg),随后注射生理盐水3 d,葛根素组小鼠第1天注射LPS(5 mg/kg)1 h后注射葛根素(25 mg/kg),继续注射葛根素3 d,第5天收集标本,观察小鼠肾组织形态变化,细胞凋亡情况;测定肾功能指标尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)和肾损伤分子1(KIM-1)以及炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β);检测肾组织SIRT1和NF-κB-p65(acetyl K310)的表达。结果与对照组相比,LPS组小鼠肾小球毛细血管扩张、充血,肾间质水肿,肾小管上皮细胞肿胀,变形脱落,肾小管损伤评分增加(P<0.01),肾组织细胞凋亡率增加(P<0.01),血清中BUN、Scr、KIM-1、TNF-α和IL-1β升高(P<0.01),肾组织TNF-α、IL-1βmRNA和NF-κB p65(acetyl K310)表达增加(P<0.01),而SIRT1表达降低了17%(P<0.05)。与LPS组相比,葛根素处理后肾间质水肿减轻,肾小管上皮细胞脱落不明显,肾小管损伤评分、肾组织细胞凋亡率降低(P<0.01),血清中BUN、Scr、KIM-1、TNF-α和IL-1β降低(P<0.01),肾组织TNF-α和IL-1βmRNA以及NF-κB p65(acetyl K310)表达降低了(P<0.05),SIRT1表达增加了17%(P<0.05)。结论葛根素能够减轻LPS所致AKI,其机制可能与SIRT1/NF-κB信号通路有关。

白藜芦醇对缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠认知功能及SIRT1/NF-κB信号通路的影响

目的:研究白藜芦醇对缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠认知功能及沉默信息调节因子1(SIRT1)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:将SD新生大鼠随机分为假手术组(生理盐水)、模型组(生理盐水)和白藜芦醇低、高剂量组(30、60mg/kg),每组12只,假手术组大鼠行假手术,其余各组大鼠采用Rice法建立缺氧缺血性脑损伤模型,建模成功后,各组大鼠每天腹腔注射相应药物,连续给药6周。采用水迷宫实验分析各组大鼠空间学习记忆功能,记录给药1、3、6周后的逃避潜伏期和给药6周后的穿台次数。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法观察各组大鼠给药6周后的脑组织梗死面积,Western blot方法检测海马组织CA1区内凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)及其相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)表达和SIRT1/NF-κB通路相关蛋白SIRT1、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠给药1、3、6周后的逃避潜伏期明显延长(P<0.05),给药6周后的穿台次数明显减少(P<0.05),脑组织梗死面积明显增加(P<0.05),海马组织CA1区内Bax、Caspase-3、p-NF-κB蛋白表达明显增强,Bcl-2、SIRT1蛋白表达明显降低(P<0.05)。与模型组比较,白藜芦醇低、高剂量组大鼠给药1、3、6周后的逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),给药6周后的穿台次数明显增加(P<0.05),脑组织梗死面积明显减小(P<0.05),海马组织CA1区内Bax、Caspase-3、p-NF-κB蛋白表达明显降低,Bcl-2、SIRT1蛋白表达明显增强(P<0.05),且高剂量组大鼠上述指标的改善效果明显优于低剂量组(P<0.05)。结论:白藜芦醇可改善缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠认知功能障碍,其可能与SIRT1/NF-κB信号通路有关。

丹酚酸B通过调控SIRT1/NF-κB/p53通路减轻缺氧/复氧诱导的大鼠肝细胞损伤

目的探究丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)减轻缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠肝细胞损伤及潜在的分子机制。方法体外培养BRL-3A大鼠肝细胞株,制备BRL-3A的H/R模型,予以Sal B干预。CCK-8检测细胞活力;微板法测转氨酶含量;ELISA测炎性因子的含量;流式细胞术测细胞凋亡水平;Western blot和实时荧光定量PCR(q PCR)检测SIRT1、NF-κB p65、p53、Bax、Bcl-2蛋白及mRNA表达水平。结果 H/R诱导的大鼠肝细胞活力下降;细胞上清液中ALT、AST、TNF-α、IL-1β含量明显增多;细胞凋亡率明显升高;SIRT1和Bcl-2在蛋白及mRNA水平的表达下调,而NF-κB p65、p53和Bax在蛋白及mRNA水平的表达上调。在Sal B预处理后,细胞活力升高;细胞液中ALT、AST、TNF-α及IL-β的含量下降;细胞凋亡率降低;SIRT1和Bcl-2在蛋白水平及mRNA水平的表达升高,NF-κB p65、p53和Bax在蛋白水平及mRNA水平的表达降低。结论丹酚酸B可有效减轻H/R诱导的大鼠肝细胞损伤,其机制可能与SIRT1/NF-κB/p53通路有关系。

游泳运动对糖尿病小鼠骨骼肌AMPK/SIRT1/NF-κB炎症信号通路的影响

目的:探讨耐力运动对糖尿病小鼠骨骼肌AMPK/SIRT1/NF-κB炎症信号通路及相关炎症因子的影响,以其从骨骼肌慢性炎症的角度为肥胖、糖尿病等代谢类疾病的防治提供新的研究靶向。方法:采用4周高脂膳食喂养加注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)的方法构建糖尿病小鼠模型,建模成功后随机分为安静对照组(C)、运动对照组(E)、糖尿病安静组(D)、糖尿病运动组(DE)。E组和DE组进行6周游泳耐力运动,1h/天,5天/周。末次运动结束,空腹12h后处死小鼠并采样。RT-PCR及Western Blotting技术检测相关基因的mRNA及蛋白表达水平。结果:1)与C组相比,D组小鼠体重极显著降低(P<0.01),空腹血糖显著升高(P<0.01);与C组相比,E组小鼠体重显著降低(P<0.05);与D组相比,DE组小鼠空腹血糖显著降低(P<0.05);与E组相比,DE组小鼠体重极显著性降低(P<0.01),空腹血糖极显著性升高(P<0.01)。2)与C组相比,D组小鼠IL-10mRNA表达极显著性降低(P<0.01),E组IL-6 mRNA表达显著性升高(P<0.05),IL-10 mRNA表达极显著性升高(P<0.01);与D组相比,DE组TNF-αmRNA表达显著降低(P<0.05),IL-10 mRNA表达极显著性升高(P<0.01);与E组相比,DE组IL-6 mRNA表达显著性下降(P<0.05)。3)与C组相比,D组AMPK蛋白表达和AMPK活性显著性下降(P<0.05),NF-κBp65 mRNA表达显著性升高(P<0.05);与D组相比,DE组AMPKα2及SIRT1 mRNA表达极显著性升高(P<0.01),AMPK及p-AMPK蛋白表达和AMPK活性显著性升高(P<0.05),NF-κBp65蛋白表达极显著性下降(P<0.01);与E组相比,DE组SIRT1 mRNA表达极显著性升高(P<0.01)。结论:长期耐力运动可抑制糖尿病小鼠骨骼肌中促炎因子的基因表达,促进抗炎因子的基因表达,同时,AMPK/SIRT1/NF-κB炎症信号通路的被抑制效应得到缓解。