非诺贝特通过Sirt1-NF-κB途径调控肿瘤坏死因子α诱导的3T3-L1脂肪细胞炎症反应

目的探讨非诺贝特对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导3T3-L1成熟脂肪细胞中炎症相关蛋白CD40L/CD40表达的影响及其是否通过Sirt1-NF-κB途径调控TNF-α诱导的3T3-L1脂肪细胞炎症反应。方法 3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化成为成熟脂肪细胞后,免疫荧光检测Sirt1及CD40L/CD40的表达定位。TNF-α刺激细胞以及加入非诺贝特、Sirt1特异性激动剂和抑制剂和NF-κB信号通路阻断剂后,采用免疫印迹法检测细胞内Sirt1、CD40和NF-κB蛋白表达水平,采用RT-Q-PCR检测Sirt1和CD40 mRNA表达水平。结果油红O染色结果表明成功建立诱导分化体系。Sirt1在3T3-L1成熟脂肪中有表达且主要定位于细胞核。免疫荧光和逆转录PCR结果表明,3T3-L1成熟脂肪细胞表达CD40且主要定位于细胞膜上,但不表达CD40L。非诺贝特剂量依赖性下调TNF-α(10μg/L)诱导的成熟脂肪细胞中CD40蛋白和mRNA的表达,上调TNF-α诱导的成熟脂肪细胞中Sirt1蛋白和mRNA的表达。Sirt1特异性激动剂白藜芦醇增强非诺贝特对TNF-α诱导的成熟脂肪细胞中CD40蛋白和mRNA表达的抑制作用,组蛋白去乙酰化酶抑制剂尼克酰胺和Sirt1特异性抑制剂Sirtinol减弱非诺贝特的抑制作用。且当NF-κB信号通路阻断后,CD40蛋白和mRNA表达水平显著降低。结论非诺贝特抑制TNF-α诱导3T3-L1成熟脂肪细胞中CD40的表达,且其可能通过Sirt1-NF-κB途径调控TNF-α诱导的3T3-L1脂肪细胞炎症反应。

心外膜脂肪细胞核因子-κB信号途径抑制在抗动脉粥样硬化中的作用

目的研究心外膜脂肪细胞核因子(NF)-κB信号途径抑制在抗动脉粥样硬化中的作用。方法建立泡沫细胞模型,分为空白组,转染试剂组,siRNA干扰组,高脂组,高脂+SRT1720组,高脂+SRT1720+siRNA干扰组。采用油红O染色判断模型的建立,采用Western印迹方法进行蛋白表达的分析。结果建立模型成功;与高脂组比较,高脂+SRT1720组SIRT1蛋白表达量升高显著,NF-κB及其下游靶分子肿瘤坏死因子(TNF)-α蛋白表达量下降显著(P<0.05)。与高脂+SRT1720组比较,高脂+SRT1720+siRNA干扰组SIRT 1蛋白表达量下降显著,NF-κB及其下游靶分子TNF-α蛋白表达量升高显著(均P<0.05)。结论泡沫细胞中SIRT1是NF-κB信号通路的上游,通过抑制心外膜脂肪组织NF-κB炎症信号途径,参与调节泡沫细胞从动脉粥样硬化斑块中移出,可为防治冠状动脉粥样硬化的治疗提供新的手段。

芪卫颗粒含药血清调控SIRT1-NF-κB p65通路减轻高糖环境下肾小球足细胞转分化的机制

目的:观察芪卫颗粒(QWKL)含药血清对高糖环境下肾小球足细胞转分化及SIRT1-NF-κB p65通路的影响,探讨其保护足细胞损伤的作用机制。方法:采用QWKL含药血清干预体外培养的小鼠肾小球足细胞株,干预48h后,采用RT-PCR和Western Blot检测足细胞转分化标志物(nephrin和α-SMA)及SIRT1-NF-κB p65通路相关分子(SIRT1和乙酰化P)的表达水平。结果:QWKL含药血清和SIRT1激活剂SRT1720能够通过增加SIRT1水平和降低NF-κB p65乙酰化水平抑制足细胞转分化(P<0.05),而抑制剂EX527可以阻断QWKL含药血清的作用(P<0.05)。另外,在高糖环境下,NF-κB p65通路抑制剂PDTC抑制了足细胞转分化(P<0.05)。结论:芪卫颗粒含药血清能够减轻高糖环境下足细胞转分化,其部分作用机制是通过调控SIRT1-NF-κB p65通路实现的。