日本血吸虫(中国大陆株)Sj16基因的原核表达

目的 进一步研究日本血吸虫 (中国大陆株 ) Sj16的免疫调节功能 ,丰富有关血吸虫免疫逃避知识。方法 根据曼氏血吸虫 Sm16基因已知序列设计合成一对引物 ,用 PCR技术从日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫 c DNA文库中扩增 Sj16基因 ;将 Sj16基因定向克隆入 p GEX- 4T- 1,转化感受态 BL 2 1/ DE3菌 ;用酶切、PCR扩增鉴定筛选得到的重组阳性克隆。 IPTG诱导 p GEX- 4T- 1- Sj16转化的 BL 2 1/ DE3菌 ,用 SDS- PAGE和 Wester- blot分析表达产物。结果 从日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫 c DNA文库中获取 Sj16基因 ,重组质粒中含有 Sj16基因 ,成功构建日本血吸虫 (中国大陆株 ) Sj16基因原核表达重组质粒 p GEX- 4T- 1- Sj16 ,p GEX- 4T- 1- Sj16转化的 BL 2 1/ DE3菌经 IPTG诱导可表达与 GST融合的蛋白 (约 40 k Da) ,抗 GST抗体能特异性识别该蛋白。结论 成功原核表达了 Sj16蛋白 ,为深入研究 Sj16的免疫调节功能 ,丰富有关血吸虫免疫逃避知识打下了基础。

日本血吸虫(中国大陆株)Sj16基因的体外扩增及克隆

为了构建日本血吸虫（中国大陆株）Ｓｊｌ６基因原核表达重组质粒ｐＧＥＸ－４Ｔ－Ｓｊ１６。根据曼氏血吸虫Ｓｍ１６基因已知序列设计合成一对引物．用 ＰＣＲ技术从日本血吸虫（中国大陆株）成虫ｃＤＮＡ文库中扩增 Ｓｊ１６基因；将Ｓｊ１６基因定向克隆人 ＰＧＥＸ－４Ｔ－１，转化感受态 ＢＬ２１／ＤＥ３菌；用酶切、ＰＣＲ扩增鉴定筛选得到的重组阳性克隆。结果表明，从日本血吸虫（中国大陆株）成虫ＣＤＮＡ文库中获取Ｓｊ１６基因，重组质粒中含有Ｓｊ１６基因。结果提示，成功构建日本血吸虫（中国大陆株）Ｓｊ１６基因原核表达重组质粒ｐＧＥＸ－４Ｔ－１－Ｓｊ１６，为进一步研究Ｓｊ１６基因功能打下基础。

日本血吸虫Sj16基因重组杆状病毒的构建和鉴定

目的利用杆状病毒-昆虫细胞系统构建日本血吸虫(Schistosomajaponicum,Sj)Sj16基因重组杆状病毒。方法从日本血吸虫尾蚴提取总RNA,通过RT-PCR扩增出Sj16基因全编码区序列,将其克隆到载体pET30a(+)中,通过PCR将Sj16基因连同pET30a(+)多克隆位点下游的6×His·Tag一起扩增出来,插入donor载体pFastBacHTa中,构建重组杆状病毒donor载体pFastBacHTa-Sj16-His,转化大肠杆菌DH10Bac-GFP进行转座,提取重组Bacmid,用Lipofectin法转染昆虫细胞Sf9使其包装成有感染性的重组杆状病毒。结果构建了含日本血吸虫Sj16基因的重组Bacmid-GFP-Sj16-His,转染Sf9细胞后,获得了有感染力的重组杆状病毒。结论成功构建了日本血吸虫Sj16基因重组杆状病毒,为下一步重组Sj16蛋白表达和Sj16基因功能研究打下了基础。

日本血吸虫 (中国大陆株 ) Sj16基因真核表达载体的构建及序列分析(英文)

目的 为了进一步研究日本血吸虫 (中国大陆株 ) Sj16的免疫调节功能 ,丰富有关血吸虫免疫逃避知识。 方法 根据曼氏血吸虫 Sm16基因已知序列设计合成一对引物 ,用 PCR技术从日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫 c DNA文库中扩增 Sj16基因 ;将 Sj16基因定向克隆入 pc DNA3,转化感受态 DH5α菌 ;用酶切、PCR扩增鉴定筛选得到的重组阳性克隆。以重组 pc DNA3- Sj16质粒为模板 ,用双脱氧链末端终止法测定 Sj16基因序列 ,应用软件辅助分析 Sj16序列及进行 Sj16与曼氏血吸虫的 Sm16同源性比较。 结果 从日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫 c DNA文库中获取 Sj16基因 ,重组质粒中含有 Sj16基因 ,成功构建日本血吸虫 (中国大陆株 )Sj16基因真核表达重组质粒 pc DNA3- Sj16 ;Sj16基因开放读码框有 35 4碱基 ,编码 117氨基酸 ,N端 18个氨基酸可能为信号肽序列 ;Sj16与 Sm16有高度同源性 ,只存在一个氨基酸的差异。 结论 成功克隆了 Sj16基因的真核表达载体 ,并测定、分析了 Sj16基因序列 ,为深入研究 Sj16的免疫调节功能 ,丰富有关血吸虫免疫逃避知识打下基础。

优化的日本血吸虫Sj16^(AA)蛋白的原核表达

目的 Sj16蛋白是从日本血吸虫分泌物中分离出的一种具有免疫调节功能的蛋白质,具有诱导器官移植免疫耐受的潜力。但是,在用传统方法合成时,其表达量低,可溶性较差,影响了其生物活性。该实验拟优化Sj16^(AA)的合成方法,为进一步研究其功能提供条件。方法在Sj16蛋白的DNA序列基础上,进行特定位点的突变修饰,同时针对大肠杆菌表达系统优化密码子。将修饰后的Sj16^(AA)基因定向克隆入pMal-c2X质粒,转入BL21(DE3)菌表达,摸索不同条件下Sj16^(AA)的表达情况。结果成功制备目的基因片段与载体的连接产物pMal-c2X-Sj16^(AA),转化后的BL21/DE3菌经IPTG诱导可表达与MBP融合的蛋白(约58 kDa),抗MBP抗体能特异性识别该蛋白。结论相较于传统合成方法,经优化的Sj16^(AA)蛋白表达量较高,可溶性较好,能够更好地应用于器官移植免疫相关的基础和临床研究。

Sm16/Sj16在血吸虫感染宿主皮肤期中的作用

Sm16/Sj16最早是从血吸虫的尾蚴分泌物中分离得到一种分泌蛋白,而尾蚴为血吸虫生活史中重要的感染期,Sm16/Sj16的分泌可减轻尾蚴感染宿主时引起的炎症反应。近年对血吸虫Sm16/Sj16分子的研究发现该分子参与下调血吸虫尾蚴感染宿主过程中炎症介质的表达水平,表现出了显著的抗炎作用,因而Sm16/Sj16分子可被制备为抗炎制剂应用于临床疾病的治疗。关于血吸虫Sm16/Sj16分子的文献报道众多,但血吸虫感染皮肤阶段涉及的具体的免疫调节机制至今尚未明确。本文针对血吸虫Sm16/Sj16分子的基因表达、体内外生物学功能的研究进展进行综述。