多糖佐剂FQ_2对日本血吸虫rBCG-Sj26GST疫苗增效作用及其机理的初步探讨

为探讨多糖佐剂FQ2 对血吸虫疫苗保护性免疫力的增效作用及其机理 ,采用 1 0 8CFU日本血吸虫重组BCG -Sj2 6GST疫苗分别与 5 %、1 0 %、2 0 %浓度的佐剂FQ2 混匀皮下接种BALB/c小鼠 ,同时设对照组。接种后第 8W以日本血吸虫尾蚴攻击感染 ,感染后 6W剖杀小鼠 ,计算减虫率 ,测定血清中特异抗体水平和胸腺T淋巴细胞及其亚群。结果实验组获得了 33 49% - 4 0 50 %的减虫率 ,与对照组相比 ,胸腺细胞总数、胸腺活性细胞率、CD8+ 细胞率、CD4 + 细胞率均显著升高 ,尤其是疫苗 +1 0 %佐剂 ,疫苗 +2 0 %佐剂组差别有非常显著意义 (P <0 0 1 )。而各实验组IgG抗体水平无统计学差别。提示多糖佐剂FQ2 对日本血吸虫rBCG -Sj2 6GST疫苗有一定的增效作用 。

日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj26GST)疫苗免疫BALB/c小鼠脾细胞动态观察

目的观察日本血吸虫重组Bb（pGEX—Sj26GST）疫苗免疫BALB／c小鼠后脾细胞增殖、亚群和凋亡的动态变化。方法将疫苗分别经皮下注射（SC组）和鼻腔粘膜接种（IN组）免疫BALB／c鼠，在免疫后O～22周每2周每组随机剖杀4只小鼠，无菌取脾，制成单个悬浮脾细胞，用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测脾细胞增殖水平、用流式细胞仪（FACsort）检测T细胞亚群和脾细胞凋亡状况。结果未刺激及sjAWA刺激时SC组小鼠脾细胞增值水平于免疫后4～20周明显升高，ConA刺激时于4～18周显著升高，均于免疫后8周达最高水平；IN组脾细胞增殖水平原液组、SjAwA组和ConA组分别于2～18周、2～10周及14～18周、2～8周和12～18周显著升高，均于免疫后4周达最大值（P〈0．01或P〈0．05）。SC组和IN组CD＋T细胞分别于免疫后2～14周、2周及6～16周升高，并于8周达峰值（P〈0．01或P〈0．05）；两组CD＋T细胞均于2～20周轻微升高，分别于8周和6周达较高值（P〉0．05）。未刺激和ConA刺激时SC组脾细胞凋亡水平分别于免疫后2～4周、2～6周升高显著，均于免疫后2周达最大值（P〈O．01或P〈O．05）；IN组均于4周显著升高并达峰值（P〈O．01）。结论日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj26GST）疫苗可诱导脾细胞的增殖，增加cD＋T细胞的数目，抑制脾细胞的凋亡而发挥保护性免疫应答。

血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗对小鼠血清NO浓度的影响

目的研究血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗对小鼠血清 NO浓度的影响。方法第 1次实验用 10 6 和 10 8CFU疫苗分别皮下注射免疫 BAL B/C鼠 ,免疫后 8周用日本血吸虫尾蚴攻击 ,感染后 6周剖杀小鼠 ,同时设有 PBS对照组 ;第 2次实验用 10 6 CFU疫苗皮下和静脉分别注射免疫鼠 ,于免疫后 0、4、8、10、14和 16周各剖杀 4只 ,分离血清 ,用 NO试剂盒检测小鼠血清 NO浓度。结果发现疫苗免疫 ,尾蚴攻击后血清 NO浓度降低 ;疫苗皮下和静脉注射免疫后 4～ 16周血清 NO浓度升高 ,分别于免疫后 10周或 16周达最高水平。结论血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗能降低感染鼠血清 NO浓度 ,提高宿主抗血吸虫感染的保护力。

血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗诱导小鼠T淋巴细胞亚群变化的研究

目的研究血吸虫重组BCG－Sj26GST疫苗对小鼠T淋巴细胞亚群的影响。方法实验一采用106和108CFU疫苗皮下接种BALB／c小鼠，接种后8WK用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染，感染6wk剖杀小鼠，取脾制备脾细胞，同时设有PBS对照组。实验二分别用106CFU疫苗皮下和静脉注射免疫小鼠，分别于免疫后0、4、8、10、14和16wk各剖杀4只，分离脾脏，用FACsort流式细胞仪分析T细胞CD4＋和CD8＋亚群百分比。结果实验一疫苗免疫络小鼠经尾蚴攻击后脾T细胞CD4＋亚群明显升高，CD8＋亚群缓慢增加。实验二动态观察发现在皮下和静脉注射组，CD4＋亚群分别于免疫后10和18WK显著增加；皮下注射组CD8＋亚群在整个观察期间均无明显变化，静脉注射组则于免疫后4～16wk有轻度增加。结论T细胞CD4＋亚群可能在疫苗保护性免疫中起重要作用。

血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗对小鼠保护性免疫力的影响因素

目的 探讨血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗对小鼠保护性免疫力的影响因素。方法 将实验动物随机分为 8组 ,以免疫后不同攻击感染时间 ,不同免疫途径和不同免疫次数为主要参数。结果 各实验组减虫率为 2 9.6 9%～ 39.74% ,减卵率为 37.0 2 %～ 6 2 .86 % ,各实验组减虫率和减卵率与对照组相比 ,差异均有显著意义(P <0 .0 5 )或极显著意义 (P <0 .0 1)。结论 8周 。

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠保护力的观察

目的探讨日本血吸虫重组BCG鄄Sj26GST疫苗免疫鼠后对尾蚴攻击感染的保护作用。方法采用106和108CFU疫苗皮下接种免疫BALB/C鼠,免疫后8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染,感染后6周剖杀小鼠,计算减虫率和减卵率,观察肝脏病理变化,测量虫卵肉芽肿周长和面积,测定血清中CAg、IgG及其亚类水平,同时设有PBS和BCG对照。结果疫苗接种组的减虫率为16.64%～46.20%,减卵率为55.75%～60.50%,肝组织病变明显减轻,虫卵肉芽肿的平均周长和平均面积显著减少,血清IgG和IgG2a水平明显升高,108CFU组CAg升高。结论日本血吸虫重组BCG鄄Sj26GST疫苗是一种新型比较理想的疫苗,值得进一步深入研究。

重组BCG-Sj26GST疫苗诱导小鼠sIL-2R和IFN-γ的变化

目的研究日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗对小鼠脾细胞 s IL- 2 R和 IFN- γ的影响。方法第 1次实验采用 1× 10 6 和 1× 10 8CFU疫苗皮下免疫 BAL B/ C鼠 ,免疫后 8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6周剖杀小鼠 ,同时设有 PBS对照组。第 2次实验用 1× 10 6 CFU疫苗皮下和静脉注射分别免疫小鼠 ,于免疫后 0、4、8、10、14和 16周各剖杀 4只 ,分离脾脏 ,用 Sj2 6或 Con A刺激脾细胞 ,用 EL ISA法检测脾细胞上清液中 s IL 2 - R和 IFN -γ含量。结果疫苗免疫 ,尾蚴攻击后 ,s IL- 2 R和 IFN- γ水平显著升高 ;动态观察发现 s IL- 2 R和 IFN- γ分别于免疫后 8～ 10周和 4～ 8周达最高水平。结论日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗可加强宿主 Th1反应 ,促进 Th1细胞分泌 IL- 2和 IFN- γ,它们与免疫细胞相互作用 。

重组BCG-Sj26GST疫苗诱导小鼠体液免疫应答的动态观察

目的 检测日本血吸虫重组BCG Sj2 6GST疫苗免疫小鼠不同时间后的血清IgG及其亚类和循环抗原 (circulat ingantigen ,CAg)反应。方法 1× 10 6克隆形成单位 (colony formingunit,CFU)疫苗皮下和静脉注射免疫BALB/c鼠 ,分别于免疫后 0、4、8、10、14和 16周各剖杀 4只 ,收集血清 ,常规ELISA法检测IgG及其亚类和CAg ,同时设PBS皮下注射对照组。结果皮下注射组IgG在免疫后 10周 ,IgG1在免疫后 14～ 16周 ,IgG2a在免疫后 4周和IgG2b在免疫后 16周达最高水平 ,未能测到CAg ;静脉注射组IgG在免疫后 10周 ,IgG1和IgG2a在免疫后 8周以及IgG2b在免疫后 16周达最高水平 ,CAg在免疫后 14周升高。结论 日本血吸虫重组BCG Sj2 6GST疫苗能诱导宿主产生高水平的IgG、IgG2a和IgG2b 。

血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗接种BALB/c鼠后肝脏病理学变化

血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗是一种新型疫苗。本文用 10 6克隆形成单位 ( Colony- froming unit,CFU)和10 8CFU疫苗皮下接种 BAL B/ c鼠 ,接种后 8wk用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6 wk剖杀小鼠 ,分离肝脏 ,观察其病理学变化 ,同时设 PBS对照组。光镜下观察发现肝脏病变明显减轻 ,肉芽肿数目少 ,体积小 ;电镜观察发现肝组织病变轻微 ,大部分肝细胞变性 ,肝纤维组织增生 ,有嗜酸粒细胞和淋巴细胞浸润。这些结果为阐明血吸虫重组 BCG- Sj2 6

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗诱导小鼠脾细胞TNF-α和IL-1变化的研究

目的 研究日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗对小鼠脾细胞产生 TNF-α和 IL - 1的影响。方法 实验 1分别采用 10 6 CFU和 10 8CFU疫苗皮下免疫 BAL B/C鼠 ,免疫后 8w用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6 w剖杀小鼠 ,同时设有 PBS对照组。实验 2用 10 6 CFU疫苗皮下和静脉注射分别免疫小鼠 ,于免疫后 0、4、8、10、14和 16 w各剖杀 4只 ,分离脾脏 ,用 Sj2 6或丝裂原刺激脾细胞 ,用 EL ISA法检测脾细胞上清液中 TNF-α水平 ,用成纤维细胞增殖法检测 IL - 1的生物活性。结果 疫苗免疫 ,尾蚴攻击后 ,TNF-α和 IL - 1水平显著升高。动态观察发现皮下注射组 TNF-α和 IL - 1于免疫后 4～ 8w达最高水平 ;静脉注射组 TNF-α和 IL - 1分别于免疫后 16 w和 4～ 8w达较高水平。结论 日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗促进小鼠脾细胞较早分泌 TNF-α和IL - 1。

rSj26GST-Sj32融合蛋白-IgG4-ELISA诊断慢性血吸虫病的研究

目的探讨rSj26GST-Sj32-IgG4-ELISA诊断慢性血吸虫病的价值。方法用rSj26GST-Sj32融合蛋白作为包被抗原,通过rSj26GST-Sj32-IgG4-ELISA检测慢性日本血吸虫病患者血清抗体,同时以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核患者血清和健康人血清作为对照。结果该法检测慢性血吸虫病的敏感性和特异性分别为95.00%和100.00%,且与泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺结核患者血清均无交叉反应;诊断慢性血吸虫病的阳性预告值、阴性预告值及诊断效率分别为100.00%、95.56%和97.59%。结论 rSj26GST-Sj32-IgG4-ELISA可用于慢性血吸虫病的免疫诊断。

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和CAg的动态观察

目的 检测日本血吸虫重组BCG Sj2 6GST疫苗免疫小鼠不同时间后的血清IgG及其亚类和CAg反应。 方法 10 6CFU疫苗皮下和静脉注射免疫BALB/C鼠 ,分别于免疫后 0、4、8、10、14、16周各剖杀 4只 ,收集血清 ,常规ELISA法检测IgG及其亚类和CAg。结果 皮下注射组IgG在免疫后 14周 ,IgG1在免疫后 14～ 16周 ,IgG2a在免疫后 4周和IgG2b在免疫后 16周达最高水平 ,未能测到CAg ;静脉注射组IgG在免疫后 10周 ,IgG1和IgG2a在免疫后 8周以及IgG 2b在免疫后 16周达最高水平 ,CAg在免疫后 10周升高。结论 日本血吸虫重组BCG Sj2 6GST疫苗能诱导宿主产生高水平的IgG、IgG2a和IgG2b,静脉注射的免疫效果优于皮下注射。

血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗接种后保护力的观察

为了探讨血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗免疫鼠后对尾蚴攻击感染的保护性作用，采用１０６ＣＦＵ和１０８ＣＦＵ重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗皮下接种ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，接种后８周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染，感染后６周剖杀小鼠，计算减虫率、减卵率，同时进行虫卵肉芽肿周长和面积测量，以及抗体水平和抗原水平测定，同时设有ＰＢＳ对照组。结果表明重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗免疫小鼠后，１０６ＣＦＵ、１０８ＣＦＵ组与对照组相比，减虫率分别为２７．３４％、１６．６４％，减卵率分别为５５．７５％、６０．５０％，虫卵肉芽肿的平均周长和平均面积、免疫后血清抗体水平差别均具有非常显著意义；１０８ＣＦＵ与１０６ＣＦＵ组相比，血清抗原水平差别具有显著意义，说明血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗是一种比较理想的新型疫苗。

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗诱导小鼠血清IgG及其亚类免疫应答的研究

目的 研究日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗接种小鼠 ,尾蚴攻击后诱导的血清 Ig G及其亚类变化。方法 采用 10 6 CFU和 10 8CFU疫苗皮下接种 BAL B/ C鼠 ,接种后 8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6周扑杀小鼠 ,收集血清 ,用常规 EL ISA法检测 Ig G及其亚类。结果 疫苗免疫后 8周血清 Ig G水平明显升高 ;疫苗免疫 ,尾蚴攻击后 6周血清 Ig G2 a显著增加 ,但 Ig G1 和Ig G2 b无明显变化。结论 日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗可能诱导宿主产生高水平的 Ig G和Ig G2 a。

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠血清IgG动态观察及免疫保护力的研究

为检测血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗免疫小鼠血清 Ig G动态变化和免疫保护力 ,采用 10 6 CFU疫苗皮下 1次和 3次接种小鼠 ,接种后 8周用日本血吸虫尾蚴攻击感染。感染后 6周剖杀小鼠 ,计算减虫率和减卵率 ,同时设有 BCG对照组。结果发现 :实验组免疫后血清 Ig G抗体迅速升高并持续于高水平 ;减虫率分别为 39.74%和 39.74% ,减卵率分别为 6 2 .86 %和 5 5 .6 2 % ,与对照组相比均有非常显著的差异 (P<0 .0 1)。而免疫 3次和免疫 1次小鼠血清 Ig G抗体水平及减虫率、减卵率均无显著差异。血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗皮下注射 1次即能诱导小鼠较高水平的 Ig G抗体和免疫保护力 ,是一种比较理想的新型疫苗 。

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠后IgG抗体反应的动态观察

目的：检测日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠不同时间后的IgG抗体。方法：将106CFU疫苗采用皮下和静脉注射分别免疫BABL/C鼠，分别于免疫后0、4、8、10、14和16周各剖杀4只，收集血清，常规ELISA法检测IgG抗体，同时设PBS皮下注射对照组。结果：皮下注射组和静脉注射组IgG抗体水平都于免疫后4周显著增加，免疫后10周达最高水平，并持续在较高水平至免疫后16周。疫苗免疫后10周静脉注射组的抗体水平显著高于皮下注射组。结论：日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗静脉注射免疫效果优于皮下注射。

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗诱导小鼠脾细胞IL-6变化的研究

目的： 研究日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗对小鼠脾细胞IL-6的影响。方法：实验1采用该疫苗皮下免疫小鼠，免疫后8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染，感染后6周剖杀小鼠，同时设有PBS对照组。实验2用该疫苗皮下和静脉注射分别免疫小鼠，于免疫后0、4、8、10、14和16周各剖杀4只，分离脾脏，用Sj26或PHA刺激脾细胞，用ELISA法检测脾细胞上清液中IL-6含量。结果：疫苗免疫,尾蚴攻击后，IL-6水平无明显变化；动态观察发现IL-6于疫苗免疫后8～10周达最高水平。结论：IL-6可能与日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗诱导的保护性免疫力无关。

乳酸乳球菌介导日本血吸虫重组LL-Sj26GST疫苗的构建、鉴定及表达

目的构建以乳酸乳球菌(LL)为载体的日本血吸虫(Sj)rLL-Sj26GST疫苗,并研究其表达效率。方法以pGEX-Sj26GST为模板PCR扩增Sj26GST基因片段,经XbaⅠ和HindⅢ双酶切后插入pMG36e,构建重组质粒pMG36e-Sj26GST,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞。抽提质粒,经双酶切鉴定正确后电穿孔转化乳酸乳球菌MG1363株,构建日本血吸虫rLL-Sj26GST疫苗,抽提质粒进行PCR鉴定。结果pMG36e-Sj26GST经双酶切获得预期大小的目的片段,重组质粒构建正确。提取具有罗红霉素抗性的rLL质粒进行PCR,扩增出676 bp的Sj26GST基因片段;SDS-PAGE分析显示rLL可表达26 ku的Sj26GST蛋白,表达蛋白约占菌体总蛋白的18%;Western blot检测表达蛋白可被Sj感染者血清识别。结论成功构建日本血吸虫rLL-Sj26GST疫苗,表达的Sj26GST蛋白具有反应原性。

日本血吸虫Sj26gst mRNA候选疫苗的免疫原性研究

目的制备日本血吸虫谷胱甘肽S⁃转移酶相对分子质量(Mr)26000亚基(Sj26gst)mRNA并评价其免疫原性。方法根据Sj26gst编码区序列(NC_002544.1),用人类常用的密码子优化Sj26gst编码序列,两端加β球蛋白3′和5′非编码区(UTR),合成后连接至pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1/Sj26gst质粒,以线性化的pcDNA3.1/Sj26gst质粒为模版,体外转录Sj26gst mRNA。用脂质体将Sj26gst mRNA转染至HeLa细胞中,转染后2、6、12、24、48 h取HeLa细胞,免疫荧光定量PCR(qRT⁃PCR)检测Sj26gst mRNA的相对水平,蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测Sj26GST蛋白的表达水平。雌性BALB/c小鼠随机均分为Sj26gst mRNA组、pcDNA3.1/Sj26gst组、pcDNA3.1组和PBS组(每组6只),分别于小鼠左后腿股四头肌肌内注射100μg的Sj26gst mRNA、pcDNA3.1/Sj26gst质粒、pcDNA3.1质粒和PBS(100μl),共免疫3次,每次间隔2周。分别采集免疫前(0),首次免疫后2、4、6、8周小鼠尾静脉血,制备血清,ELISA检测血清Sj26GST特异性IgG抗体水平。首次免疫后8周,无菌分离小鼠脾组织,制备脾淋巴细胞悬液,37℃培养48 h后,加入10μl细胞增殖试剂培养4 h后测定脾细胞刺激指数,ELISA法检测脾淋巴细胞上清中Th1型[肿瘤坏死因子α(TNF⁃α)、干扰素γ(INF⁃γ)],Th2型[白细胞介素4(IL⁃4)、IL⁃10]和Th17型(IL⁃17)细胞因子的水平。组间比较采用单因素方差分析。结果优化后的Sj26gst编码序列长858 bp,GC含量为63.2%,二级结构的自由能变为-485.6 kcal/mol。电泳结果显示,体外转录的Sj26gst mRNA条带呈单一且无弥散的条带。RT⁃PCR结果显示,Sj26gst mRNA转染后2 h,HeLa细胞Sj26gst mRNA相对水平为6.21±0.83,6 h达到峰值(14.26±1.23),随后下降;Western blotting结果显示,Sj26gst mRNA转染后6、12、24、48 h均检出Mr 26000的Sj26GST蛋白条带。ELISA检测结果显示,首次免疫后8周,Sj26gst mRNA组、pcDNA3.1/Sj26gst组、pcDNA3.1组和PBS组的A450分别为0.85±0.16、0.42±0.21、0.14±0.03和0.11±0.02,Sj26gst mRNA组与pcDNA3.1/Sj26gst组、pcDNA3.1/Sj26gst组与pcDNA3.1组之间差异均有统计学意义(t=16.46、12.35,均P<0.05)。首次免疫后8周,Sj26gst mRNA组、pcDNA3.1/Sj26gst组小鼠脾淋巴细胞增殖指数分别为11.25±1.22、6.37±2.45,高于pcDNA3.1组(2.56±0.38)和PBS组(1.27±0.45)(t=9.98、5.25,均P<0.05)。ELISA检测结果显示,Sj26gst mRNA组小鼠脾淋巴细胞上清中TNF⁃α、INF⁃γ、IL⁃10和IL⁃17的表达水平分别为(756.23±134.35)、(598.46±50.47)、(713.42±118.25)、(301.45±48.23)pg/ml,pcDNA3.1/Sj26gst组分别为(587.26±32.48)、(401.45±46.25)、(386.27±23.75)、(175.24±41.23),均高于pcDNA3.1组的(19.34±2.01)、(35.14±5.25)、(32.11±15.20)、(19.75±7.21)pg/ml和PBS组的(18.75±1.98)、(34.12±4.78)、(29.36±8.72)、(15.34±2.51)pg/ml(t=54.59、19.57、52.36、26.47,均P<0.05)。结论构建了稳定表达Sj26gst mRNA的质粒,Sj26gst mRNA可诱导产生高水平的特异性Sj26GST蛋白抗体并诱导Th1型细胞免疫应答。