日本血吸虫Sj31核酸疫苗联合IFN-γ重组质粒诱导小鼠保护性免疫的研究

目的 探讨干扰素 γ重组质粒对日本血吸虫组织蛋白酶B核酸疫苗在小鼠抗血吸虫作用的影响。 方法 将小鼠干扰素 γ基因PCR扩增片段克隆入真核表达载体pCDNA3 1以构建重组真核表达质粒pCDNA3 1 IFN γ ,并与日本血吸虫组织蛋白酶B真核表达质粒VR10 12 Sj3 1一同免疫小鼠。小鼠分为 4组 ,其中实验组每鼠同时肌注VR10 12 Sj3 1及pCDNA3 1 IFN γ各 10 0 μg ,3个对照组分别为VR10 12 Sj3 1肌注 10 0 μg ,pCDNA3 1 IFN γ肌注 10 0 μg和载体VR10 12及pCHAN3 1肌注各 10 0 μg。共免疫 3次 ,每次间隔 2周。于末次免疫后两周免疫组化检测表达质粒在小鼠肌细胞的表达 ,于末次免疫后 3周经小鼠皮肤攻击感染 40± 1条日本血吸虫尾蚴。 45d后杀小鼠计算减虫率。 结果 VR10 12 Sj3 1及pCDNA3 1 IFN γ均在小鼠肌细胞表达 ,日本血吸虫Sj3 1核酸疫苗联合IFN γ重组质粒免疫可诱导小鼠产生 2 7 3 7%的减虫率 ,与日本血吸虫Sj3 1核酸疫苗单独免疫组比较减虫率显著 (P <0 0 5 )。 结论 IFN

核酸疫苗VR1012/Sj31粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的研究

目的 探讨日本血吸虫核酸疫苗VR10 12 /Sj3 1粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力。 方法 将实验小鼠随机分为 5组 ,每组 12只。A组为单磷脂 (MPL)组 ,B组为VR10 12组 ,C组VR10 12 +MPL组 ,D组为VR10 12 /Sj3 1组 ,E组为VR10 12 /Sj 3 1+MPL组。滴鼻免疫。在第 3次免疫后 2周 ,每只鼠经腹部感染 40± 1条尾蚴 ,45d后宰杀 ,观察减虫率和减卵率。在初次免疫前和攻击感染前尾静脉采血并收集粪便 ,ELISA检测血清内特异性IgA、IgG及粪内sIgA水平。 结果 与对照组相比 ,VR10 12 /Sj 3 1及VR10 12 /Sj 3 1加MPL滴鼻免疫均可引起小鼠血清IgG、IgA和粪内sIgA升高 ,且VR10 12 /Sj 3 1加佐剂滴鼻免疫组抗体的增幅 >不加佐剂组。VR10 12 /Sj3 1和VR10 12 /Sj3 1加MPL滴鼻免疫诱导小鼠产生的减虫率分别为 2 1.70 %和 2 8.82 % ,减卵率分别为 2 7.98%和 40 .72 %。二者的减虫率差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但减卵率后者显著高于前者 (P <0 .0 5 )。 结论 VR10 12 /Sj3 1滴鼻免疫可引起小鼠产生全身和粘膜免疫应答及部分抗攻击感染的免疫保护力。

日本血吸虫二价DNA疫苗的免疫保护效果研究

目的 观察本课题组所构建日本血吸虫大陆株二价 DNA疫苗 VR10 12 - Sj GST- Sj31和VR10 12 - Sj GST- Sj32的免疫保护效果。方法 用纯化质粒免疫昆明鼠 :6 0只小鼠分为 5组 ,2个对照组的小鼠分别于股四头肌注射生理盐水 10 0μl或空质粒 VR10 12 10 0μg,3个实验组的小鼠则同法分别注射 VR10 12 - Sj GST、VR10 12 - Sj GST- Sj31和 VR10 12 - Sj GST- Sj32各 10 0 μg,每隔 3周免疫1次 ,共免疫 3次 ,以间接免疫荧光法观察 VR10 12 - Sj GST- Sj31、VR10 12 - Sj GST- Sj32在肌肉组织中的表达后 ,每只鼠经腹部感染 10条尾蚴 ,4 5 d后剖杀计数各小鼠成虫数及肝卵数 ,并用 EL ISA分析小鼠血清中的抗体。结果 EL ISA分析表明 ,第 3次免疫后小鼠出现特异性 Ig G抗体。与生理盐水组比较 ,3个实验组的减虫率分别为 33.90 %、33.90 %及 2 7.14 % (P <0 .0 1) ,减卵率分别为6 1.86 %、74 .88%及 6 8.87% (均为 P<0 .0 1) ,每雌肝减卵率分别为 4 4 .6 7%、5 9.4 0 %、5 4 .32 % (P<0 .0 1)。与 VR10 12 - Sj GST组相比 ,VR10 12 - Sj GST- Sj31和 VR10 12 - Sj GST- Sj32组的减卵率分别为34.19% (P<0 .0 1)、18.5 1% (P<0 .0 1) ,每雌肝减卵率为 2 6 .6 2 %、17.4 6 % (P<0 .0 1)。结论 DNA疫苗 VR10 12 -

3种抗原Dot-ELISA诊断日本血吸虫病的比较

目的 探讨Dot-ELISA快速诊断血吸虫病的实用价值。方法 利用Dot ELISA分别检测 10 8例日本血吸虫病人、2 5例肝吸虫病人、2 0例肺吸虫病和 5 0例正常人血清日本血吸虫 31/ 32kDa抗原 (Sj31/ 32 )、可溶性虫卵抗原 (SEA)和血吸虫成虫粗抗原 (AWA)特异性IgG抗体 ,以寻找用于Dot ELISA快速有效诊断日本血吸虫病的抗原。结果 10 8例日本血吸虫病人血清Sj31/ 32 IgG、SEA IgG和AWA IgG的检出率分别为 92 6 %、94 4%和 95 4% ,平均抗体滴度分别为 1∶333、1∶982和 1∶85 0 ,5 0例正常人和 2 5例肝吸虫病人Sj31/ 32 IgG均为阴性 ,2 0例肺吸虫病人中Sj31/ 32 IgG仅 1例阳性 ,而正常人、肝吸虫和肺吸虫病人SEA IgG、AWA IgG均有不同程度的交叉反应。Sj31/ 32 IgG与SEA、AWA敏感性相似 ,但特异性明显高于SEA和AWA。结论 提示Sj31/ 32 IgGDot ELISA诊断日本血吸虫病价值优于SEA和AWA。

佐剂对日本血吸虫31/32kDa蛋白保护性免疫力的影响

本实验用纯化的日本血吸虫３１／３２ｋ Ｄａ 蛋白（ Ｓｊ３１／３２ 蛋白）辅以ｐｏｌｙａｌｐｈａｏｌｅｆｉｎ（ Ｐ Ａ Ｏ）佐剂免疫小鼠，同时比较了 Ｓｊ３１／３２ 蛋白辅以福氏完全佐剂（ Ｆ Ｃ Ａ）对小鼠保护性免疫力的影响。 Ｓｊ３１／３２ 蛋白＋ Ｐ Ａ Ｏ 组小鼠减虫率为３７５５％ ，肝减卵率为６７０２％ ； Ｓｊ３１／３２ 蛋白组小鼠减虫率为２１１８％ ， 肝减卵率为 ４９０３％ ； Ｓｊ３１／３２ 蛋白＋ Ｆ Ｃ Ａ 组小鼠减虫率为 ２４０２％ ， 肝减卵率为５２２４％ 。结果提示， Ｓｊ３１／３２ 蛋白辅以 Ｐ Ａ Ｏ 佐剂的减虫作用优于 Ｓｊ３１／３２ 辅以 Ｆ Ｃ Ａ 的减虫作用（ Ｐ＜ ００５），且明显强于单纯 Ｓｊ３１／３２ｋ Ｄａ 蛋白的保护性免疫作用（ Ｐ＜ ００１）。

佐剂对日本血吸虫31/32kd蛋白保护性免疫力的影响

本实验用纯化的日本血吸虫31/32kd蛋白(Sj31/32)辅以polyalphaolefin(PAO)佐剂免疫小鼠,同时比较了Sj31/32辅以福氏完全佐剂(FCA)对小鼠保护性免疫力的影响.Sj31/32+PAO组小鼠减虫率为43.17%,肝减卵率为67.02%,Sj31/32+FCA组小鼠减虫率为28.74%,肝减卵率为64.(?)4%,Sj31/32组小鼠减虫率为26.99%,肝减卵率为51.73%.结果提示,Sj31/32辅以佐剂,对小鼠保护性免疫力明显强于单纯Sj31/32蛋白对小鼠的保护性免疫.

日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗不同免疫途径免疫保护效果研究

目的 :观察本室所构建日本血吸虫大陆株 31kDa组织蛋白BDNA疫苗在BALB/c小鼠体内的不同免疫途径的免疫保护效果。方法 :用纯化的空白质粒载体VR1 0 1 2、重组质粒VR1 0 1 2 Sj31免疫BALB/c鼠 ,将 36只 6～ 8周龄BALB/c鼠随机分为 3组 ,每组 1 2只 ,对照组 (A组 )肌肉注射空白质粒载体VR1 0 1 2 ,实验组 (B组 )皮下注射重组质粒VR1 0 1 2 Sj31 ,C组肌肉注射重组质粒VR1 0 1 2 Sj31。质粒剂量均为 1 0 0 μg ,每隔 2w免疫 1次 ,共免疫 3次 ,第 3次免疫后第 2 1d ,每只鼠经腹部感染 1 0条尾蚴 ,4 2d后剖杀计数各小鼠成虫数和每克肝卵数 ,观察诱导产生的减虫和减卵效果 ,并用ELISA分析小鼠血清中的抗体。结果 :ELISA分析表明 ,第 3次免疫后小鼠出现特异性IgG抗体。与空白质粒对照组比较 ,2个实验组的减虫率分别为 1 5 .0 % (P >0 .0 5 )和 2 5 .0 % (P <0 .0 5 ) ,减卵率分别为 38.2 2 %和 5 4.90 % (P <0 .0 0 1 )。与皮下免疫组相比 ,VR1 0 1 2 /Sj31肌肉免疫组的减卵率分别为 2 6 .99% (P <0 .0 0 1 )。结论 :DNA疫苗VR1 0 1 2 Sj31能诱导小鼠产生一定水平的抗日本血吸虫感染保护作用 ,肌肉注射的保护效果大于皮下注射。