日本血吸虫SjCTPI和SjC23DNA疫苗联合免疫保护作用的研究

目的 探索 Sj CTPI和 Sj C2 3DNA疫苗联合应用保护性免疫的协同作用。方法 大量制备 pc DNA3.1- Sj CTPI和 pc DNA3.1- Sj C2 3的质粒 DNA。 4 8只 BAL B/ c小鼠分为 4个组 (A、B、C、D组 )每组 12只。 A组每鼠经双侧股四头肌注射 10 0 μg pc DNA3.1的质粒 DNA,为对照组 ;B组为Sj C2 3组 ,每鼠肌注 10 0μg pc DNA3.1- Sj CTPI的质粒 DNA;C组为 Sj CTPI组 ,每鼠肌注 10 0μgpc DNA3.1- Sj CTPI的质粒 DNA;D组为联合免疫组 ,每组肌注 10 0μg pc DNA3.1- Sj C2 3和 10 0μgpc DNA3.1- Sj CTPI质粒 DNA的混和物。分别于 0、14、2 8d免疫 3次。末次免疫后 30 d,每鼠经腹部皮肤攻击感染 (45± 2 )条日本血吸虫尾蚴。攻击后 4 5 d,剖杀所有小鼠 ,灌冲 ,收集成虫并计数。每鼠肝脏称重后剪碎 ,置 5 % KOH中消化 ,并计数虫卵数。比较各组间的减虫率和减卵率。结果 与对照组相比 ,Sj C2 3组、Sj CTPI及联合组的减虫率分别为 2 8.1%、2 9.1%和 4 1.5 % ,均非常显著地高于对照组 (P分别为 <0 .0 1,<0 .0 1,<0 .0 0 1) ,而联合组则又显著地高于单独 Sj C2 3组及单独 Sj CTPI组 (P均 <0 .0 5 )。三组的减卵率分别为 37.9%、4 4 .2 %和 6 1.4 % ,均非常显著地高于对照组 (P分别为 <0 .0 1,<0 .0 1,<0 .0 0 1) ,但?

日本血吸虫SjC23-Hsp70 DNA疫苗与IL-12对水牛保护性作用的研究

目的：研究日本血吸虫中国大陆株23 kD膜蛋白-热休克蛋白（SjC23-Hsp70）DNA疫苗联合佐剂白细胞介素12（IL-12）质粒DNA对水牛的免疫保护作用。方法：将血吸虫病非流行区8~10月龄健康水牛45头随机分为A组（SjC23-Hsp70＋IL-12）、B组（SjC23＋IL-12）和C组（pVAX＋IL-12）,每组15头。每头牛经肩部肌注免疫3次,每次间隔28 d。末次免疫后28 d,每头牛感染日本血吸虫尾蚴1000条。解剖前2天及当天分别收集粪便1次,用定量法检测虫卵和毛蚴数。攻击感染后56天解剖所有水牛,经胸主动脉灌冲法收集成虫,计数成虫数,检测每克肝组织虫卵数。结果：A,B组与C组相比,分别获得45.70%和26.61%的减雌率,44.51%和25.84%的减虫率,41.10%和31.63%的减粪卵率,48.11%和38.07%的减毛蚴率及43.39%和31.95%的减肝卵率。A组的5个率均比B组高（P〈0.05）。结论：用SjC23-Hsp70 DNA疫苗和IL-12联合免疫水牛可获得明显的免疫保护作用。

日本血吸虫SjC23 DNA疫苗基因枪免疫小鼠诱导免疫保护作用的研究

目的 研究日本血吸虫中国大陆株 2 3k Da膜蛋白 DNA疫苗基因枪免疫诱导 BAL B/ c小鼠产生的抗血吸虫感染作用。方法 6 0只雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 6组 :pc DNA3.1组 (对照组 ) ,每只小鼠用基因枪经腹部皮肤免疫 pc DNA3.1质粒 DNA2次 ,共 2 μg;Sj C2 3基因枪 (gg)组 ,每鼠用基因枪免疫 pc DNA3.1- Sj C2 3质粒 DNA2 μg;Sj C2 3肌注 (im)组 ,每鼠肌注 10 0 μg pc DNA3.1- Sj C2 3质粒 DNA;Sj C2 3/ Cp G(gg)组 ,每鼠用基因枪免疫 pc DNA3.1- Sj C2 3/ Cp G质粒 DNA2 μg;Sj C2 3/Cp G(im)组 ,每鼠肌注 10 0 μg pc DNA3.1- Sj C2 3/ Cp G质粒 DNA;联合免疫组 ,每只小鼠先肌注 10 0μg pc DNA3.1- Sj C2 3/ Cp G质粒 DNA,第 2天用基因枪免疫 2 μg。各组小鼠隔 2周加强免疫 1次 ,共 3次。末次免疫后 4周每鼠经腹部皮肤攻击感染 (45± 1)条日本血吸虫尾蚴 ,4 5 d后剖杀 ,计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前 2天及感染前 2天经尾静脉采血检测 Ig G抗体水平及抗体亚类 Ig G1 、Ig G2 a。末次免疫后 3周检测脾细胞经 Con A和 r Sj C2 3- HD刺激后培养上清中鼠 IL- 2、IL- 4和 IFN- γ的水平。结果 Sj C2 3(gg)组、Sj C2 3/ Cp G(gg)组及联合免疫组小鼠所检成虫数均低于对照组 (P均 <0 .0 1) 。

日本血吸虫SjC23蛋白质疫苗对核酸疫苗免疫增强作用的研究

目的 研究 Sj C2 3蛋白质疫苗对 Sj C2 3DNA疫苗增强小鼠的免疫保护作用的效果。方法 分别构建和制备 Sj C2 3DNA疫苗 (pc DNA3.1- Sj C2 3)和 Sj C2 3大亲水片段融合蛋白质 (GST-HD)疫苗。把 48只 BAL B/ c小鼠随机分为 A、B、C、D 4组 ,每组 12只。 A组 (DNA和蛋白质疫苗联合免疫组 )每只小鼠分别在第 0、2周经股四头肌注射 10 0μg Sj C2 3质粒 DNA,在第 4周经背部皮下多点注射 5 0 μg GST- HD+5 0 μg CFA;B组 (Sj C2 3DNA组 )每只小鼠分别在第 0、2、4周经股四头肌注射 10 0 μg Sj C2 3质粒 DNA;C组 (蛋白质疫苗组 )于第 4周每鼠经背部皮下多点注射 5 0 μgGST- HD+5 0 μg CFA1次 ;D组 (对照组 )每鼠分别在第 0、2、4周肌注 10 0 μg pc DNA3.1。各组在末次免疫后 4周每鼠以 45± 2条日本血吸虫尾蚴攻击感染 ,攻击后 45 d剖杀小鼠 ,计数成虫及肝内虫卵数。在免疫前、末次免疫后和攻击后从小鼠尾静脉采血 ,分离血清 ,用 Western- blot法检测抗体反应。结果 联合组与质粒对照组相比 ,获得了 42 .9%的减虫率和 6 0 .0 %的减卵率 ,均显著高于单独Sj C2 3DNA疫苗组 2 8.1%的减虫率和 37.9%的减卵率 ,及单独蛋白质疫苗组 (GST- HD) 2 3.8%减虫率和 39.5 %的减卵率 (P均 <0 .0 5 )。联合组抗体水平?

日本血吸虫23kDa膜蛋白DNA疫苗和蛋白质疫苗联合应用免疫保护性作用的研究

目的 研究 Sj C2 3DNA疫苗和 Sj C2 3蛋白疫苗联合免疫对 C5 7BL/ 6感染小鼠的免疫保护作用。方法 分别构建和制备 Sj C2 3DNA疫苗 (pc DNA3.1- Sj C2 3)和蛋白疫苗 (Sj C2 3大亲水片段融合蛋白 GST- HD)。 4 8只 C5 7BL / 6小鼠随机分为 A、B、C、D 4组 ,每组 12只。 A组 (Sj C2 3DNA+GST- HD联合应用组 )每只小鼠分别在第 0、2周经股四头肌注射 10 0μg Sj C2 3质粒 DNA,在第 4周经背部皮下多点注射 5 0 μg GST- HD+5 0 μg CFA;B组 (Sj C2 3DNA组 )每只小鼠分别在第 0、2、4周经股四头肌注射 10 0 μg Sj C2 3质粒 DNA;C组 (蛋白疫苗组 )于第 4周每鼠经背部皮下多点注射5 0μg GST- HD+5 0μg CFA 1次 ;D组 (对照组 )每鼠分别在第 0、2、4周肌注 10 0μg pc DNA 3.1。各组在末次免疫后 30 d每鼠以 4 5± 2条 /只日本血吸虫尾蚴攻击感染 ,攻击后 4 5 d剖杀小鼠 ,计数成虫及肝内虫卵数。在免疫前、末次免疫后和攻击后从小鼠尾静脉采血 ,分离血清 ,用 Western- blot法检测抗体反应。结果 联合组与质粒对照组相比 ,获得了 36 .9%的减虫率和 30 .7%减卵率 ;而单独Sj C2 3DNA疫苗组的减虫率为 2 6 .9% ,显著低于联合组 (P<0 .0 5 )和 2 2 .2 %的减卵率 ,单独蛋白疫苗组 (GST- HD)为 15 .2 %和 12 .2 %

日本血吸虫中国大陆株23 kDa膜蛋白DNA疫苗诱导小鼠保护性免疫的研究

目的 研究日本血吸虫中国大陆株 2 3kDa膜蛋白 (SjC2 3)DNA疫苗诱导C5 7BL/6小鼠免疫保护作用。方法 将全长的SjC2 3基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1,构建DNA疫苗 pcDNA3.1 SjC2 3。制备SjC2 3及IL 12的两个亚单位 p35、p4 0的DNA疫苗和对照 pcDNA3.1。 4 8只C5 7BL/6小鼠随机分为A、B、C 3组。A组小鼠肌注 10 0 μgpcDNA3.1;B组注射 10 0 μg pcDNA3.1 SjC2 3;C组肌注 pcDNA3.1 SjC2 3、pcDNA3.1 p35及pcDNA3.1 p4 0各 10 0 μg的混合物。每隔 2周各免疫 1次 ,共 3次。第 8周每鼠感染 4 5± 2条 /只尾蚴 ,4 5d后剖杀 ,计数成虫及肝内虫卵。采用免疫组化法检测SjC2 3及 p35、p4 0在小鼠局部组织内的表达 ;用脾细胞培养法检测经rSjC2 3 HD刺激后 ,攻击前、后小鼠脾细胞IL 2、IL 4、IL 10和IFN γ的水平。用Westernblotting检测血清中抗SjC2 3抗体。结果 SjC2 3以及p35、p4 0在免疫小鼠股四头肌细胞膜和细胞浆均获得表达。IL 2和IFN γ的水平攻击前、后在B组和C组均明显升高。Westernblotting检测抗SjC2 3抗体结果表明 ,免疫后两周 ,B组 8/10份血清为阳性 ,C组 9/10份血清阳性。B组和C组分别获得 2 6 .9%和 35 .4 %的减虫率 ,C组显著高于B组 (P <0 .0 5 ) ;减卵率分别为 2 2 .2 %和 2 8.4 %。

日本血吸虫23kDa膜蛋白DNA疫苗保护性免疫及IL-12免疫佐剂作用的研究

目的 研究日本血吸虫中国大陆株 2 3k Da膜蛋白 (Sj C2 3) DNA疫苗诱导 BAL B/ c小鼠免疫保护作用以及 IL- 12的免疫增强效果。方法 5 6只 BAL B/ c雌性小鼠随机分为 A、B、C、D4组 ,每组 14只。 A组 (对照组 ) ,于每鼠两腿股四头肌注射 10 0 μg pc DNA3.1质粒 DNA;B组 (Sj C2 3组 ) ,注射 10 0μg pc DNA 3.1- Sj C 2 3质粒 DNA;C组 (Sj C 2 3+IL - 12 DNA组 ) ,注射 10 0μg pc D-NA3.1- Sj C 2 3、10 0μg pc DNA 3.1- p35、10 0μg pc DNA3.1- p40质粒 DNA的混合液 ;D组 (Sj C2 3+r IL- 12蛋白组 ) ,免疫剂量同 Sj C2 3组。共免疫 3次 ,每次免疫间隔 2周 ,剂量和方法同第 1次。于末次免疫后 1个月 ,每鼠攻击感染 (4 5± 2 )条日本血吸虫中国大陆株尾蚴。但 D组的小鼠在攻击感染当天 ,及感染后第 2、4、6天经腹腔注射 0 .2 μg/鼠 r IL- 12蛋白。攻击后 45 d剖杀小鼠 ,计数成虫及肝内虫卵数。于末次免疫后 2周对照组及 Sj C2 3组用 51 Cr释放法测定 Sj C 2 3介导的特异性细胞毒作用 ;用脾细胞培养法检测经重组日本血吸虫 2 3k Da膜蛋白亲水区大片段融合蛋白 (GST- HD)刺激后 ,在免疫后及攻击后小鼠脾细胞 IL - 2、IL - 4、IL - 10和 IFN -γ的水平。分别于攻击前后 2周经小鼠尾静脉采血 ,用 EL

IL-18增强日本血吸虫DNA疫苗Sj23的免疫保护效果(英文)

将小鼠IL-18基因和日本血吸虫Sj23膜蛋白基因分别插入pVAX1载体,构建真核表达质粒pVAX/ mIL-18和pVAX/Sj23 ,联合或单独免疫小鼠,以pVAX1空载体作对照,免疫2次,间隔2周,2次免疫后4周攻击日本血吸虫尾蚴。体液和细胞免疫检测结果表明,联合免疫组能诱导小鼠产生较强的抗日本血吸虫成虫可溶性抗原(SWAP)IgG,较高水平的IFN-γ和IL-2。攻虫试验表明,联合免疫小鼠成虫减虫率和肝脏减卵率分别达41 .6 %和49 .4 %,明显高于pVAX/Sj23单独免疫组(减虫率和肝脏减卵率分别为26 .5 %和41 .4 %)。以上试验结果表明,IL-18能明显增强Sj23 DNA疫苗在小鼠体内的免疫应答,并且产生较强的保护作用。

日本血吸虫DNA多价疫苗pVIVO_2SjFABP-23的构建及其保护性免疫

目的构建日本血吸虫多价DNA疫苗pVIVO2SjFABP-23,并观察其在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法根据Sj FABP和Sj23的基因序列合成两对特异性引物,利用重组PCR技术将日本血吸虫Sj FABP和Sj23的基因片段进行拼接,得到融合基因SjFABP-23,再将该片段重组于p GEM-T载体中,进行PCR扩增及DNA序列测定。然后经双酶切将目的片段SjFABP-23克隆到pVIVO2的一个多克隆位点上转化E.coliGT 110获得重组质粒pVIVO2SjFABP-23,免疫小鼠进行免疫保护性实验。结果PCR扩增出一条大小约为1.1Kb的目的片段。免疫小鼠获得52.14%减虫率(P<0.01)和60.93%的减卵率(P<0.01),且均高于单价疫苗pVIVO2Sj23(P<0.05)。结论PCR成功扩增SjFABP-23的基因片段,血吸虫DNA多价疫苗pVI-VO2SjFABP-23构建成功,该疫苗在小鼠抗血吸虫感染中具有比单价疫苗pVIVO2Sj23更好的免疫保护作用。

日本血吸虫双价DNA疫苗pVIVO2-Sj14-Sj23免疫方案的研究

目的研究双价DNA疫苗pVIVO2-Sj14-Sj23在不同免疫剂量、免疫次数、免疫有效时间及不同免疫途径的最佳免疫方案。方法构建和制备双价DNA疫苗pVIVO2-Sj14-Sj23;110只雄性BALB/c小鼠随机分成11组,每组10只,按照四因素三水平分成2个对照组和9个实验组。各组统一在末次免疫后30d每鼠感染(40±2)条日本血吸虫尾蚴,感染后45d剖杀,计数成虫虫荷。结果双价DNA疫苗9个实验组获得40.14%～62.68%的减虫率。通过SPSS12.0进行正交设计的统计分析:F值<F′临界值,P>0.05。免疫剂量,免疫次数,免疫途径和免疫有效时间几个因素间差异无统计学意义。结论实验结果提示该疫苗的较好免疫方案为:50μg/只,免疫2次,采取皮内注射,免疫有效时间至少为12周。

日本血吸虫Sj23DNA突变体疫苗的构建与鉴定

目的对日本血吸虫Sj23DNA进行缺失突变,构建Sj23DNA突变体疫苗,为寻求更佳免疫效果的疫苗奠定基础。方法利用重叠PCR技术将Sj23DNA上与ME491同源的部分碱基缺失,获得Sj23DNA的突变体,将其克隆入真核表达载体pcDNA3的多克隆位点上,构建重组质粒pcD-NA3-Sj23突变体,进行酶切和测序鉴定,并用CLUSTALX和primerpremier软件将测序的结果与Sj23DNA序列进行分析。结果序列分析显示pcDNA3-Sj23突变体缺失序列与原设计一致,双酶切pcDNA3-Sj23突变体获得预期大小的DNA片段。结论成功构建了缺失与ME491同源部分碱基的质粒pcDNA3-Sj23突变体。

日本血吸虫Sj23与IL-12多价DNA疫苗的构建

构建能共同表达日本血吸虫 2 3kDa膜抗原 (Sj2 3)与细胞因子IL 12的多价DNA疫苗 .RT PCR的方法从日本血吸虫成虫获得Sj2 3的基因片段 ,克隆到载体 pVIVO2 mIL12 /mcs上 ,进行酶切和测序鉴定 .采用免疫荧光的方法检测多价DNA疫苗 pVIVO2 Sj2 3 IL12在小鼠骨骼肌细胞的表达 .成功地构建了能共同表达日本血吸虫 2 3kDa膜抗原 (Sj2 3)与细胞因子IL 12的多价DNA疫苗 .此多价DNA疫苗在免疫小鼠肌细胞的细胞膜和细胞浆均获得了Sj2

日本血吸虫Mr23000抗原与白细胞介素-12多价DNA疫苗诱导小鼠保护性免疫的研究

目的研究能共同表达日本血吸虫Mr23000膜抗原(Sj23)与白细胞介素-12(IL-12)的多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23诱导BALB/c小鼠免疫保护作用。方法在多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23和PV-IL12的基础上,构建空白质粒PV和仅表达Sj23的质粒PV-Sj23。50只BALB/c小鼠分为5组,每组10只,分别注射多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23、表达Sj23的质粒PV-Sj23、表达IL-12质粒PV-IL12、空白质粒PV和生理盐水,100μg/只,免疫1次。4周后每只鼠攻击感染40±2条尾蚴,42d后剖杀,计数成虫及肝内虫卵数。结果成功地构建了空白质粒PV和只表达Sj23的质粒PV-Sj23及多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23。PV-IL12-Sj23组和PV-Sj23组分别获得了45.5%和27.2%的减虫率,两组比较差异有显著性(P<0.05),减卵率分别为58.4%和33.9%。结论多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23可诱导BALB/c小鼠产生较显著的抗血吸虫免疫保护作用,且保护性效果比单价DNA疫苗PV-Sj23好。

微小隐孢子虫表面抗原CP23 DNA疫苗免疫山羊诱导免疫应答及保护性研究

观察微小隐孢子虫 (Cryptosporidium parvum)子孢子表面抗原 CP2 3 DNA疫苗免疫山羊诱导其产生免疫应答和保护性作用 .将重组质粒 p CR 3 .1 2 3经鼻粘膜免疫怀孕山羊 ,用 ELISA测定 Ig G和 Ig A抗体滴度 ,用 C.parvum卵囊经口对其后代攻虫感染 .抗 CP 2 3抗体存在于免疫山羊的血浆和初乳中 ,且抗体滴度随免疫时间延长而增高 .C.parvum卵囊经口感染后代 ,试验组山羊后代与对照组相比 ,卵囊排出数量减少 ,排出时间缩短 .微小隐孢子虫表面蛋白 CP2 3

编码完整膜蛋白Sj23质粒DNA核酸疫苗免疫小鼠及其保护力的研究

目的探讨用编码完整膜蛋白(Sj23)核酸疫苗诱导BALB/c小鼠抗日本血吸虫病保护力的作用。方法大量制备DNA疫苗,BALB/c小鼠被分成3组,肌肉内注射进行免疫。免疫小鼠3次,间隔2周,末次免疫后2周,用ELISA法和Western Blotting法检测免疫鼠血清特异性抗体效价。结果编码Sj23-pcDNA质粒免疫的小鼠产生了针对Sj23的特异性IgG,而pcDNA对照组免疫小鼠血清则无此作用。Sj23-pcDNA疫苗对日本血吸虫攻击感染有一定的保护力。结论Sj23-pcDNA疫苗能够诱导小鼠产生抗日本血吸虫攻击感染的保护力。

日本血吸虫23kDa膜蛋白DNA疫苗抗病免疫作用的研究

目的探讨日本血吸虫SjC23 DNA疫苗对血吸虫肝脏虫卵肉芽肿的免疫调节作用,以评价其作为抗病疫苗的潜能。方法 30头松江猪分为3组。A组(SjC23组)每头猪于两侧臀部肌注500μgpcDNA3.l-SjC23质粒 DNA;B组(SjC23+IL-12)每头猪肌注500μg pcDNA3.1-SjC23 DNA疫苗及500μgpcDNA3.1-P 35和500μg pcDNA3.1-P40质粒DNA的混和物;C组(对照组),每头猪肌注500μgpcDNA3.1质粒DNA。于第0、3、6周共免疫3次。末次免疫后30天,每头猪采用背部贴片法攻击感染600条日本血吸虫尾蚴,攻击后45天剖杀实验猪,取肝脏,于同一部位切取1.5cm^3的肝组织。按常规法制备石腊切片。切片在NYD-1000型图象分析系统下观察,测定所有肉芽肿的面积和直径,并比较。结果与对照组相比,SjC23组及SjC23+IL-12组肉芽肿内炎性细胞明显减少。肉芽肿平均面积较对照组分别减小48.57％和44.37％,肉芽肿直径分别减小27.56％和 22.78％。结论 SjC23 DNA疫苗具有下调血吸虫肝脏虫卵肉芽肿的作用,可望成为一种血吸虫病抗病疫苗候选分子。

日本血吸虫双价DNA疫苗的构建及其免疫保护性研究

目的研究防治日本血吸虫病的双价DNA疫苗的免疫保护效果。方法构建共表达双价DNA疫苗pVI-VO2-mcs-SjFABP-Sj23和pVIVO2-mcs-Sj23-SjFABP,并用BamHI/EcoRI和BspHI/AvRⅡ进行双酶切和测序鉴定。通过免疫荧光法(IFAT)检测质粒在BALB/c小鼠骨骼肌细胞的表达。70只小鼠随机分为7组,每组10只,分别肌肉注射生理盐水、pVIVO2-mcs、pVIVO2-mcs-Sj23、pVIVO2-mcs-SjFABP、pVIVO2-mcs-Sj23-SjFABP、pVIVO2-mcs-SjFABP-Sj23和pVIVO2-mcs-Sj23-SjFABP+多糖佐剂,免疫1次。免疫后4周用40±2条尾蚴攻击感染,感染后45d剖杀,计数各组小鼠成虫数和肝虫卵数。结果双酶切反应和测序分析证明成功构建双价质粒DNA。IFAT结果提示双价质粒DNA可在小鼠骨骼肌细胞胞膜和胞浆中表达。双价DNA疫苗免疫小鼠后获得41.2%～53.8%的减虫率和47.0%～53.8%肝减卵率;pVIVO2-Sj23-SjFABP+多糖佐剂组获得68.9%的减虫率和84.0%肝减卵率,保护力显著高于单价疫苗和双价疫苗(P<0.05﹚。结论共表达的双价DNA疫苗在小鼠体内可产生较好的抗血吸虫感染的免疫保护效果。多糖佐剂组保护效果明显高于单价和双价疫苗组。

日本血吸虫多价DNA疫苗的构建

目的 构建日本血吸虫多价 DNA疫苗。 方法 在本室已构建的克隆载体 p Bluescript- Sj2 6、p Bluescript- Sj32及 p Bluescript- Sj2 3的基础上 ,根据 Sj2 6 k Da、Sj32 k Da和 Sj2 3k Da基因序列分别设计一对引物 ,且在引物中引入 1个含多肽接头甘氨酸 -甘氨酸 -丝氨酸 (G- G- S)的碱基序列。首先将 Sj2 3基因连接入载体 p BK中 ,构建重组质粒 p BK - Sj2 3,然后将 Sj2 6 k Da或 32 k Da基因分别连接入载体 p BK- Sj2 3中 ,构建成多价 DNA疫苗p BK- Sj2 6 - Sj2 3和 p BK- Sj32 - Sj2 3。对重组基因鉴定后 ,检测了质粒在小鼠肌肉中的表达情况。 结果 多价 DNA疫苗 p BK- Sj2 6 - Sj2 3和 p BK- Sj32 - Sj2 3转入了完整的 Sj2 6、Sj2 3和 Sj32基因。多价基因质粒能在小鼠肌肉组织中表达。结论 构建了日本血吸虫多价 DNA疫苗。

日本血吸虫多价核酸疫苗的构建及免疫保护试验

利用PCR技术获得日本血吸虫GST抗原基因,通过分子克隆技术将GST、FABP基因克隆至pVAX1载体,并将其克隆至含有Sj23基因表达核的pIRESneo载体,构建重组质粒pVAX-GST、pVAX-GST-FABP、pIRESneo-Sj23和pIRESneo-GST-FABP-Sj23。将50只昆明小鼠随机分成5组,每组10只,分别以肌肉注射质粒pIRESneo-GST-FABP-Sj23、pIRESneo-Sj23、pVAX-GST、pVAX-GST-FABP和空白质粒pIRESneo,50μg/只,免疫2次,每次间隔21 d。测定小鼠免疫前后血清抗体水平,30 d经腹部皮肤感染血吸虫尾蚴,45 d后剖杀小鼠,计数各组小鼠虫卵数及成虫数。结果表明,重组质粒pVAX-GST、pIRESneo-Sj23、pVAX-GST-FABP和pIRESneo-GST-FABP-Sj23均能诱导小鼠产生特异性的IgG抗体,pIRESneo-GST-FABP-Sj23免疫组所诱导的IgG水平最高;减虫率分别为26.1%、30.8%、33.2%和47.5%;减卵率分别为25.4%、45.0%、48.4%和69.8%。pIRESneo-GST-FABP-Sj23的减卵率和减虫率明显高于其他DNA疫苗。结果表明,日本血吸虫多价核酸疫苗能产生较强的免疫反应,并能获得较好的免疫保护效果。