溶血对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素的影响

目的探讨溶血对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素的影响。方法收集30例未发生溶血的血清标本,利用低渗溶血法分别制备轻度溶血、中度溶血、重度溶血标本各10例;采用时间分辨免疫荧光分析法分别测定各组标本溶血前(0h)和溶血后0.5、2、18h的胰岛素浓度;通过配对t检验、重复测量数据的方差分析对溶血程度和时间对胰岛素浓度检测结果的影响进行分析。结果轻度溶血、中度溶血、重度溶血标本之间胰岛素浓度检测结果比较差异无统计学意义(P>0.05);随着溶血时间的延长,胰岛素浓度呈明显下降趋势,0.5、2、18h检测结果与0h检测结果相比,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论溶血程度对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素浓度的影响不明显,但溶血时间则对测定结果具有较为明显的影响;标本溶血和溶血时间均为影响胰岛素浓度检测结果的重要因素。

化学发光免疫分析法和时间分辨免疫荧光法定量检测不同浓度HBsAg的对比分析

目的以雅培全自动化学发光免疫分析法(CMIA法)为标准,探讨时间分辨免疫荧光法(TRIFA)检测血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的准确性和可行性,以便基层医院普遍开展此项目,为抗病毒个体化的策略及疗效的预测提供依据。方法分别用CMIA法和TRIFA法对157份乙型肝炎病毒(HBV)感染患者的血清进行检测,对于HBsAg滴度超过检测上限的样本,采用稀释液手动稀释后,再进行定量分析。将HBsAg水平分为4组:≤100 IU/mL、101~1 000 IU/mL、1 001~20 000 IU/mL、>20 000 IU/mL,分析两种方法阳性标本定量相关性。结果两种方法的直线回归方程为:Y=2.323X-896.3,相关系数r=0.943,P<0.001。以CMIA法检测值为参考,分为4组进行分析,结果显示在检测低浓度HBsAg样本时,TRIFA数值较CMIA法偏低,而高浓度样本以CMIA法检测值偏高。两种试剂在检测不同浓度的HBsAg均有较好的一致性(均P<0.05),其中以浓度在1 001~20 000 IU/mL时相关性最好。结论两种试剂在HBsAg定量检测上的准确性基本相当,定量相关性以检测值在1 001~20 000 IU/mL之间最佳。TRIFA成本低廉、易操作,更适于基层医院使用,具有广泛的应用前景。

时间分辨免疫荧光法定量检测血清HBeAg／HBeAb的可行性分析

目的:探讨国产时间分辨免疫荧光法(time-resolved immunofluorescence assay,TRIFA)是否与全自动化学发光免疫分析法(automatic chemiluminescence immunoassay,CMIA)在定量检测HBeAg/HBeAb中具有同样的准确性和特异性。方法:157份来自中南大学湘雅医院感染病科门诊的HBV感染患者的血清标本,分别用CMIA和TRIFA两种方法进行HBeAg定量及HBeAg/HBeAb定性检测,并对结果进行对比分析。结果:两种方法定量检测HBeAg的直线回归方程为:Y=0.72779X–4.0551(r=0.712,P<0.001)。与CMIA比较,TRIFA检测HBeAg定性结果的灵敏度和特异性分别为89.89%和100%,两种方法诊断HBeAg符合率为94.27%。TRIFA检测HBeAb定性结果的灵敏度和特异性分别为100%和95.45%,两种方法诊断HBeAb的符合率为97.45%。结论:TRIFA在HBeAg/HBeAb定量检测上的准确性、灵敏度和特异性与CMIA基本相当,二者HBeAg/HBeAb诊断符合率高。

百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法的建立及应用

目的建立铕(Eu3+)标记检测百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法。方法利用原核重组表达系统表达百日咳毒素S1亚基蛋白,并鉴定,采用双抗体夹心法建立检测S1 TRFIA分析方法。结果自制S1试剂盒检测灵敏度2.5 ng/ml,与其他抗原无交叉反应,并初步可应用于百日咳疫苗中免疫原的监测。结论自制百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法能够较为可靠的监控百日咳疫苗质量。

酶联免疫法、金标法、时间分辨免疫荧光分析法测定HBsAg对比分析

目的探讨酶联免疫法、金标法、时间分辨免疫荧光分析法三种方法测定HBsAg的可靠性及优缺点。方法通过对1500名体检及临床标本用三种方法检测HBsAg，对其检测结果的准确度、灵敏度、特异性进行对比。结果三种方法在准确度、灵敏度、特异性方面酶联免疫法最低，金标法其次，时间分辨免疫荧光分析法最高。结论酶联免疫法检测HBsAg操作简便，可用于自动化分析，适用于大量标本的定性检测，如大量人群的乙肝筛查；金标法检测HBsAg操作简便快速，无需特殊仪器设备。适用于单份标本的定性测定，适用于急诊、社区诊所及家庭化验；时间分辨免疫荧光分析法检测HBsAg动态检测范围广、试剂稳定、自动化程度高，最有发展前途，但对实验室条件和操作人员条件要求高，适用于HBsAg定量检测。

检测游离β-HCG时间分辨免疫荧光分析法的建立及临床应用

目的建立一种快速灵敏的时间分辨免疫荧光分析法（TRFIA）,用于定量检测孕妇血清中游离β人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）的浓度。方法包被游离β-HCG单克隆抗体,铕（Eu3＋）标记抗β-HCG单克隆抗体,建立双抗体夹心法游离β-HCG TRFIA,对该试剂的各项指标进行评价。结果最低检测量〈0.06 ng/mL;线性检测范围为0.052-400 ng/mL;分析内和分析间变异系数分别为1.0%-6.4%、3.3%-5.1%;人黄体生成素（HLH）、人促甲状腺素（HTSH）、人促卵泡激素（HFSH）和人绒毛膜促性腺激素（HCG）与本试剂的交叉反应率分别为0.04%、0.03%、0.05%和0.11%;1 043份孕妇血样用该试剂与进口同类试剂同时检测,2种试剂检测值具有显著相关性（r=0.990,P=0.000）;血清样本2-8℃储存超过3 d,室温储存1 d或冻融2次,与新鲜样本比较,游离β-HCG浓度显著性增加（P〈0.05）。结论该试剂敏感性高、特异性强、操作简便快捷,具有良好的精密度,可以替代进口试剂用于临床样本的检测。为保证结果的可靠性,应注意样本的保存条件。

时间分辨免疫荧光法定量检测癌胚抗原(CEA)试剂临床应用研究

目的对自制时间分辨免疫荧光法定量检测癌胚抗原(CEA)试剂盒进行临床应用研究,为该试剂盒临床应用及临床疗效评价提供科学依据。方法收集血清标本326份,用自制试剂盒按试剂盒操作说明书对血样进行测定,并以化学发光法(R oche)为对照方法,W ALLAC公司的CEA时间分辨免疫测定药盒(A u toDELF IATMhCEA)作为复核试验,获取相关目标实验数据,并计算得“真实性”和“可靠性”等统计学数据。结果以化学发光法为对照试验,其阳性符合率为95.83%,阴性符合率为98.73%,检验无显著性差异;自制试剂盒的定量测定值与化学发光法的测定值较为一致,相关系数达0.93,相关性好。结论试剂盒检测性能与现在临床广泛应用的方法相仿,能满足临床应用的需要。

BAS-时间分辨免疫荧光分析检测丙型肝炎抗体

本文介绍将丙肝抗原包被于微量滴定条孔上，使待测丙肝抗体与生物素化抗人ＩｇＧ产生免疫反应，再与Ｅｕ３＋标记的链亲合素产生亲合反应。将ＢＡＳ引入检测方法中，建立了ＢＡＳ－ＴＲＩＦＭＡ检测抗－ＨＣＶ。

溶血对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素的影响

目的分析不同程度溶血对时间分辨免疫荧光分析法检测胰岛素结果的影响。方法选择健康成年体检者未发生溶血的300例血液标本,利用低渗溶血法分别制备出不同程度溶血标本,其中:轻度溶血100例、中度溶血100例、重度溶血标本100例;均采用时间分辨免疫荧光分析法对以上三组不同程度溶血标本分别检测其溶血前后的血清胰岛素水平;并进行组间对比分析。结果各组未溶血前检测结果与轻、中、重度溶血后比较,差异具有统计学意义(P<0.05);且轻、中、重度溶血标本间血清胰岛素水平检测结果比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论溶血对临床测定血清胰岛素水平具有较明显的影响,因此,在进行临床血清胰岛素水平检测时须尽量避免溶血现象发生。

人风疹病毒IgG抗体时间分辨免疫荧光法的建立

目的:建立人风疹病毒(Rubella virus;RV)IgG抗体时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)的方法。方法:采用间接两步法建立人风疹病毒IgG抗体的TRFIA分析方法,并对试剂盒的各项指标进行评价。结果:试剂盒的可测范围为5～160IU/ml,灵敏度为0.092IU/ml,批内、批间的变异系数(CV)分别为7.8%和10.5%;130份血样用本方法与进口的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.926。结论:本试剂盒的各项指标均达到临床检测的要求。

时间分辨免疫荧光技术在检验医学中的发展现状

标记免疫分析法创立于60年代初期,是将多种标记示踪技术的高度敏感性和医学免疫学抗原抗体反应的高度特异性相结合的产物,包括放射免疫(RIA),酶联免疫分析法(EIA)、化学发光免疫分析法(CLIA)、电化学发光免疫分析法(ECLIA)、时间分辨荧光免疫分析(TRFIA).TRFIA具有零本底、灵敏度高、重复性好、特异性强、线性范围宽和应用广泛等特点,是继放射免疫分析之后,标记免疫分析法发展的一个新的里程碑,是当代配基分析中最有发展前景的分析手段.本文就时间分辨免疫荧光分析技术作如下综述.

时间分辨免疫荧光技术检测3项血清指标的临床应用

目的探讨时间分辨免疫荧光分析法和放射免疫分析法检测游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离素甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)的方法学及临床应用。方法利用2种方法分别检测对260例甲状腺疾病患者的血清FT3、FT4、TSH进行检测,对甲状腺功能亢进、甲状腺功能低下的诊断标准及临床符合率给以统计分析。同时对血清FT3、FT4、TSH进行精密度、准确度、分析灵敏度、抗干扰情况等方面的分析,并进行相关性比较。结果 2种方法检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。并且时间分辨免疫荧光法在患者结果可报告范围,精密度,灵敏度,准确度抗干扰试验方面稍优于放射免疫分析法。结论时间分辨免疫荧光法完全能够替代放射免疫分析法,并且还具有精密度及灵敏度高,抗干扰能力强,可报告范围宽等优点。在甲状腺疾病患者中FT3、FT4、TSH所测结果各有特点,有助于临床鉴别诊断。

加样时差及加样时间对时间分辨法检测弱阳性HBsAg标本的影响

目的:探讨加样时差及加样时间对时间分辨法检测弱阳性HBsAg标本的影响。方法:利用30份弱阳性HBsAg患者血清为检测对象,用加样时差和加样时间这2个条件进行实验。结果:30份标本在不同的加样时差所检测的结果不一致,加样时差对弱阳性标本的结果有影响;立即加样与30、45、60min后加样比较有明显差异(P<0.005)。结论:加样时间及加样时差影响弱阳性HBsAg检测的重复性;在常规检测操作中应将初试中高值阴性标本做复试,且保证复试标本加样优先,以避免漏检弱阳性标本。

临床检验中免疫荧光技术的应用

随着科技的不断进步,临床检验中不断出现了许多的新技术和新方法,免疫荧光技术作为一种先进的技术,已经在临床上得到了应用.免疫荧光技术是利用荧光色素对目标进行标记,之后用于免疫学检测,目标可以是抗体或者抗原.时间分辨荧光免疫分析法是用正三价的稀土离子作为示踪物,例如钐离子,以此来代替传统的物质来对抗原、抗体等细胞进行标记,最终依靠时间分辨荧光仪测定荧光强度,来获得分析物的浓度.

单纯疱疹病毒IgM抗体(1+2型)时间分辨免疫荧光分析法的建立

目的利用时间分辨免疫荧光分析法研制单纯疱疹病毒IgM抗体(1+2型)检测试剂盒。方法基于"捕获法"原理,在96孔酶标板上包被抗人IgM单克隆抗体,铕标记特异性单纯疱疹病毒1型和2型单克隆抗体作为示踪物,建立单纯疱疹病毒IgM抗体(1+2型)检测试剂,并对自研试剂盒的各项性能进行评价,与同类试剂盒进行方法学比对试验。结果自研试剂盒的灵敏度与ELISA比较有较大的提高,分析内变异系数≤4.29%,分析间变异系数≤6.15%;血清盘检测结果与该血清盘说明书提供的Gull IFA试剂的测试结果一致;与进口酶免法试剂同时检测293份临床样本,自制试剂盒的临床敏感性达100%,临床特异性达98.88%,Kappa值为0.940(P<0.001)。结论自研试剂盒灵敏度高、特异性强、精密度好,与商业化的同类产品检测结果一致性好,能满足临床应用的需要。

免疫荧光技术在寄生虫病诊断中的应用

免疫荧光技术是把血清学和显微镜示踪法结合起来的一种技术。介绍了直接免疫荧光技术、间接免疫荧光技术、时间分辨荧光免疫分析法在寄生虫病诊断中的应用。

时间分辨免疫荧光分析检测细胞角蛋白19片段抗原试剂的研制

1993年Stieber等首先采用ELISA法检测血清中细胞角蛋白19片段抗原（CYFRA21—1），发现其对非小细胞肺癌有早期诊断价值，随后其作为一种肿瘤标志被用于肿瘤诊断、疗效评估、复发检测和判断预后。时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）法灵敏度高，特异性强，无放射性污染，被誉为最有前途的免疫学诊断方法之一。

血吸虫病时间分辨免疫荧光检测试剂盒的研制和效能评价

目的研制日本血吸虫SjP38的时间分辨免疫荧光分析(Time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)试剂盒,并评价其效能。方法将抗SjP38的9G7单克隆抗体作为捕获抗体包被96孔板,Eu^(3+)标记1A6单克隆抗体作为检测抗体,研制SjP38 TRFIA试剂盒,并评价试剂盒的准确度、灵敏度、精密度、稳定性以及与病原学检测方法的符合率等指标。结果自制试剂盒准确度好,线性范围为2~1 250 ng/ml,最低检出浓度为0.14 ng/ml;精密度良好,分析内精密度为3.6%~4.6%,分析间精密度为5.1%~6.7%。定性试验表明该试剂盒可在4℃稳定半年,37℃稳定7 d。自制试剂盒与病原学检测方法的阳性符合率为95%,阴性符合率为100%。结论所研制试剂盒的各项性能及检测指标均达到临床检验的要求,但临床推广使用还有待进一步的验证。

不同检验方法对血源性病原体四项检查的检测应用

探索对血源性病原体四项检查的血清标志物在进行检测的过程中,采取不同的检测方法所起到的效果。方法 以系统随机化法,将2022.3-2023.5在我院住院治疗的65例患者均分为观察组与对照组两组。其中对照组(n=32):乙型肝炎表面抗原、梅毒螺旋体特异抗体、丙型肝炎抗体选择时间分辨免疫荧光分析法,人类免疫缺陷病毒抗体选择酶联免疫法进行检测,观察组(n=33)则全部采用电化学发光法进行检测。比较两组的诊断准确率、血清标志物的阳性情况。结果 在进行检测后,观察组的乙型肝炎表面抗原、梅毒螺旋体特异抗体检出情况、艾滋病毒检出情况与丙型肝炎抗体阳性检出率均显著高于对照组,P<0.05。结论 运用电化学发光法对血源性病原体四项检查的血清标志物进行检测,其不仅阳性检出率高,而且诊断准确率更高,患者能更快诊断,尽早接受治疗。是一种优质的检测方法,值得在临床上应用推广。

两种方法检测血清低水平乙肝病毒表面抗原比较

目的:比较时间分辨免疫荧光分析法(TRFIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测低值乙肝病毒表面抗原(HB-sAg)的符合率。方法:分别用国产TRFIA试剂盒和ELISA试剂盒检测血清标本。结果:在234例乙肝病毒表面抗原浓度介于0￣0.5ng/ml的临床标本中,两种方法检测HBsAg同时阳性共41例,其中TRFIA检测阳性有46例,ELISA检测阳性有66例,符合率为87.18%。结论:在国产试剂HBsAg中,TRFIA与ELISA相比,特异性较高但灵敏度较低,在临床应用中应注意0.2￣0.5ng/ml的低值。