日本血吸虫主要虫卵抗原Sjp40在感染新西兰白兔肝脏中的表达与免疫定位

目的观察Sjp40在感染新西兰白兔肝脏沉积虫卵及其肉芽肿病变形成中的表达情况,并进行免疫定位。方法日本血吸虫尾蚴感染新西兰白兔,收集未感染组、29 dpi组和45 dpi组肝脏,Trizol法提取各组肝脏总RNA,以日本血吸虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参,Taqman探针q RT-PCR检测Sjp40 m RNA的表达;提取各组肝脏总蛋白,以硫酸铵盐析法和Protein G免疫亲和柱层析法纯化的抗Sjp40-Mc Ab 9G7和抗弓形虫t SAG1-Mc Ab Y3A8(对照抗体),western blot检测Sjp40蛋白的表达;制备肝脏石蜡切片,HE染色观察肝脏虫卵肉芽肿的形成与发展,进一步以免疫荧光技术进行Sjp40在肝脏沉积虫卵及其肉芽肿组织中的定位。结果日本血吸虫感染兔呈急性肝肉芽肿病变期的45 dpi肝脏沉积虫卵中Sjp40 m RNA水平显著高于29 dpi尚未形成虫卵肉芽肿结节的肝脏沉积的未成熟虫卵(P<0.05),westernb blot证实了Sjp40蛋白在29 dpi和45 dpi兔肝脏中的表达。免疫荧光显示:Sjp40在29 dpi兔肝脏中定位于未成熟虫卵内,而45 dpi可见感染兔肝脏中沉积大量成簇内含毛蚴的成熟虫卵及其周围肉芽肿组织均有明显荧光。结论 Sjp40在日本血吸虫感染兔肝脏沉积虫卵中的转录水平随虫卵发育成熟而显著增加,在感染兔急性肉芽肿病变期(45dpi)呈现由虫卵向其周围肉芽肿组织扩散现象,提示该分子在血吸虫肉芽肿形成与发展过程中具有重要作用。

抗日本血吸虫Sjp40鸡卵黄抗体的制备及其生物学特性鉴定

目的制备抗日本血吸虫蛋白(Sjp40)鸡卵黄抗体(egg yolk immunoglobulin Y,IgY),以期为日本血吸虫病的免疫学诊断提供一种特异性强、灵敏度高的优势抗体。方法以纯化的Sjp40抗原免疫健康SPF级产蛋鸡,初次免疫2周后开始每日收集的鸡蛋为样本,采用水稀释硫酸铵沉淀法从鸡蛋中初步提取抗Sjp40 IgY,进一步经透析袋、DEAE-FF阴离子交换柱纯化IgY。用SDSPAGE、Western Blot及ELISA对纯化后的抗Sjp40 IgY进行分析鉴定。结果纯化的特异性抗Sjp40IgY,抗体效价1∶106。相对分子质量为180 kDa,SDS-PAGE可见有2条主要蛋白带,分别约为66kDa和35 kDa,并可被Sjp40特异性识别。结论成功制备具有良好免疫反应性、特异性强、灵敏度高的抗Sjp40特异性IgY抗体。

日本血吸虫虫卵抗原Th1表位肽与不同佐剂联用对OVA诱导过敏性哮喘的抑制作用

目的观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原SjP40蛋白中Th1表位肽分别与不同佐剂联用对OVA诱导的小鼠过敏性哮喘的抑制作用。方法 BABL/c雌性小鼠随机分为5组:正常对照组,OVA哮喘组,P25+弗氏不完全佐剂(Incomplete Freund's Adjuvant,IFA))组,P25+Alum组和P25单用组。将SjP40蛋白Th1表位多肽P25分别与IFA油佐剂,铝佐剂及PBS混合,于第0 d和14 d分别免疫BALB/c小鼠,于第7 d、21 d腹腔注射OVA致敏小鼠;第28～35 d用OVA滴鼻诱发小鼠哮喘,24 h后取小鼠肺组织,HE染色观察病理改变;收集肺泡灌洗液(BALF),涂片染色后计数嗜酸性粒细胞;采用ELISA法检测血清OVA特异性IgE及BALF和脾细胞培养上清液中IL-4和IFN-水平。结果肺组织病理评分P25+IFA组为7.80±1.23,P25+铝佐剂组为9.07±0.97,与OVA哮喘组13.50±1.04比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);P25+IFA组支气管上皮粘液分泌面积比例为(15.8±2.23)%,P25+铝佐剂组为(21.07±1.37)%,与OVA哮喘组(43.5±0.84)%比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);P25 IFA组和P25铝佐剂组嗜酸性粒细胞数目与OVA哮喘组比较,差异有统计学意义(P<0.01);P25 IFA组和P25铝佐剂组血清OVA特异性IgE水平与OVA哮喘组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SjP40蛋白中Th1表位肽P25与IFA佐剂及铝佐剂联用对OVA诱导的小鼠过敏性哮喘具有抑制作用,以IFA佐剂效果更佳。