目的获得日本血吸虫TGF-β受体I胞外段(SjTβRIout)的序列,行原核克隆和表达,并分析其蛋白的免疫学功能。方法应用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)方法获得SjTβRI基因cDNA部分序列,用RT-PCR方法扩增SjT...目的获得日本血吸虫TGF-β受体I胞外段(SjTβRIout)的序列,行原核克隆和表达,并分析其蛋白的免疫学功能。方法应用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)方法获得SjTβRI基因cDNA部分序列,用RT-PCR方法扩增SjTβRI胞外段(SjTβRIout)基因,构建pET28a(+)重组原核表达载体,并测序鉴定。将质粒转入大肠埃希菌,IPTG诱导表达,并使用Ni离子亲和层析并透析处理获得纯化重组蛋白。使用纯化蛋白与弗氏佐剂共同免疫SD大鼠获得抗血清,使用ELISA方法检测血清中SjTβRIout特异抗体IgG含量。结果成功构建SjTβRIout原核表达载体。测序鉴定显示SjTβRIout包含399bp,编码133个氨基酸,并且与曼氏血吸虫TGF-β受体I的同源性较高。重组蛋白经SDS-PAGE分析,显示其相对分子质量约为20000,与目的基因编码蛋白的预测分子量相符。经重组蛋白免疫的SD大鼠产生高效价(>1:100000000)的抗原特异性IgG抗体。结论首次获得pET28a(+)-SjTβRIout的重组蛋白,并且证明其具有良好的免疫原性。展开更多
文摘目的获得日本血吸虫TGF-β受体I胞外段(SjTβRIout)的序列,行原核克隆和表达,并分析其蛋白的免疫学功能。方法应用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)方法获得SjTβRI基因cDNA部分序列,用RT-PCR方法扩增SjTβRI胞外段(SjTβRIout)基因,构建pET28a(+)重组原核表达载体,并测序鉴定。将质粒转入大肠埃希菌,IPTG诱导表达,并使用Ni离子亲和层析并透析处理获得纯化重组蛋白。使用纯化蛋白与弗氏佐剂共同免疫SD大鼠获得抗血清,使用ELISA方法检测血清中SjTβRIout特异抗体IgG含量。结果成功构建SjTβRIout原核表达载体。测序鉴定显示SjTβRIout包含399bp,编码133个氨基酸,并且与曼氏血吸虫TGF-β受体I的同源性较高。重组蛋白经SDS-PAGE分析,显示其相对分子质量约为20000,与目的基因编码蛋白的预测分子量相符。经重组蛋白免疫的SD大鼠产生高效价(>1:100000000)的抗原特异性IgG抗体。结论首次获得pET28a(+)-SjTβRIout的重组蛋白,并且证明其具有良好的免疫原性。
