Evaluation of the Biotechnological Potential of Isolated Bacteria of the Soil in the Degradation of Residues of Skin Swine

The degradation of industrial residues is of great importance for the maintenance of the environment. Therefore, the objective of this study is to verify the proteases production for bacteria of the gender isolated Bacillus of soil. The samples of skin residue were collected in industries of the area west of Santa Catarina, using residue of skin rude swine and residue of skin processed swine. The verification of the biotechnological potential consisted of the use of these residues in middle of culture and inoculation of the respective species of bacteria. The results were more expressive in the samples of skin processed swine, where it showed a degradation average around 43.55% (p/p). While, in the samples of residue of skin rude swine, an average of degradation of 20.60% (p/p) happened. In this way, the residue of skin processed swine is more sensitive than the catalytic activity of the bacterial enzymes.

水解胶原蛋白粉在生长肥育猪日粮中的应用研究

选用 40头平均体重 42 75kg的长×荣杂交阉猪 ,采用单因子完全随机设计研究了水解胶原蛋白粉对生长肥育猪生产性能、日粮消化率及背膘厚度等的影响。试验共设 5个处理 ,在相同营养水平条件下用水解胶原蛋白粉替代鱼粉或豆粕 ,其用量分别为 0 % (1组 )、2 % (2组 )、4% (3组 )、6 % (4组 )及 8% (5组 ) ,每个处理 4个重复。结果表明 ,水解胶原蛋白粉可部分或全部替代生长肥育猪日粮中的鱼粉或豆粕 ,但添加比例不能超过 6 % ,当含量达 8%时则降低生产性能 (P <0 0 5 ,P <0 0 1 )及日粮消化率 (P <0 0 5 ) ,增加饲养成本。 1、2、3、4组间前期、后期及全期日增重及饲料转化率差异不显著 (P >0 0 5 ) ,但都显著或极显著地高于 5组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1 ) ;1组日粮干物质及蛋白质的消化率高于 5组(P <0 0 5 )。水解胶原蛋白粉对猪的内脏器官及背膘厚度无明显影响 (P >0 0 5 )。

猪肢体移植模型建立的临床病理研究

目的 在大型动物 (猪 )上建立同种异体肢体移植模型 ,探讨同种异体肢体移植中肉眼观察与组织学之间的关系 ,以及皮肤排斥反应的机理。方法 对 9只不同窝的实验猪进行异体前肢移植 ,其中 3例为未用药组 ,6例为用药组。分别在术后不同时间对移植体的皮肤进行了肉眼观察及 72次活检病理组织学检查 ,并采用S -P免疫组化法进行CD3、CD4、CD8检测。结果 术后皮肤均在不同时期发生了不同程度的排斥反应。未用药组发生了严重排斥反应 ,移植肢体在 1周内坏死。用药组在免疫抑制剂的作用下 ,移植肢体获得了长期存活。对皮肤的肉眼观察和组织学检查 ,在确定早期的排斥反应。皮肤的排斥反应中CD3均有不同程度表达(10 0 % ) ;CD4及CD8表达分别为 (2 3 6 1% )及 (9 72 % ) ,后二者主要表达在发生严重排斥反应的病例中。结论 同种异体肢体移植在免疫抑制剂的作用下可获得长期存活。肉眼观察可以观察早期的排斥反应 ,病理组织学检查是诊断排斥反应的可靠依据。皮肤的排斥反应可能主要为一种T细胞介导的细胞免疫反应 。

异种脱细胞真皮与自体薄皮片联合移植临床研究

目的 探讨异种（猪）脱细胞真皮与自体薄皮片复合移植修复深度烧伤创面和瘢痕切除创面的可行性，为烧伤治疗寻找新的填充物与覆盖材料。方法 用胰酶消化法脱除断层猪的上皮细胞，制成细网状无细胞真皮支架，再与自体薄皮片联合移植修复各类创面。结果 用于切痴创面移植１８例，成活率７８％；用于瘢痕切除创面移植１１例，成活率９１％；用于肉芽创面移植４例，成活率 １００％。愈后创面外观平整，柔软有弹性，关节部位功能恢复良好，与单纯使用薄皮片移植的创面比较有明显区别。结论 异种（猪）脱细胞真皮能长期存活在人体中，具有组织填充、抑制瘢痕增生的作用，与自体薄皮复合移植是治疗大面积深度烧伤创面和瘢痕切除创面较理想方法。

猪肢体移植皮肤活检的病理学观察

目的 在大型动物 (猪 )上建立同种异体肢体移植模型 ,探讨同种异体肢体移植中组织学改变 ,以及皮肤排斥反应的机制。方法 对 9只不同窝的猪进行前肢移植 ,其中 3例为未用药组 ,6例为用药组。分别在术后不同时间对移植体的皮肤进行了 72次活检病理组织学检查 ,以术前皮肤为对照。采用S P免疫组化法进行CD3、CD4、CD8检测。结果 术后皮肤均在不同时期发生了不同程度的排斥反应。未用药组发生了严重排斥反应 ,移植肢体在 1周内坏死。用药组在免疫抑制剂的作用下 ,移植肢体获得了长期存活。皮肤的排斥反应中CD3均有不同程度表达 (10 0 % ) ;CD4及CD8表达分别为 (2 3 6 1% )及(9 72 % ) ,主要表达在发生严重排斥反应的病例中。结论 同种异体肢体移植在免疫抑制剂的作用下可获得长期存活。皮肤的病理组织学检查是诊断排斥反应的可靠依据。皮肤的排斥反应可能主要为一种T细胞介导的细胞免疫反应 。

无细胞毒性猪去细胞真皮基质制备及转归研究

目的制备无细胞毒性猪去细胞真皮基质(PADM),评价其生物安全性,并观察基质在体内的转归情况。方法取0.3～0.4mm厚的猪断层皮片,用高渗盐水浸泡去除表皮,然后置于氢氧化钠溶液中,常温下水浴持续震荡去除真皮细胞,获得PADM,经交联和消毒后进行细菌学及猪病毒微生物学检测。将PADM植入SD大鼠皮下,于术后动态观察PADM大体及组织学形态变化。结果所获PADM柔软而有弹性,易于塑形,便于手术操作。PADM内无任何细胞成分,胶原纤维排列规则有序,弹力纤维丰富。细菌和病毒微生物学检测结果均为阴性。PADM植入SD大鼠皮下后未引发免疫排斥。术后3周,PADM与创面黏附牢固,不易从创面揭离;术后24周仍然可见其结构;早期PADM被大量炎性细胞浸润,随时间延长成纤维细胞逐渐增多,并出现新生的毛细血管,胶原纤维逐渐排列规则、致密。结论高渗盐水/氢氧化钠方法制备PADM过程简单,所得真皮基质无细胞毒性,生物安全性高,在体内可作为真皮支架长期存在。

对猪皮不同部位药物透皮效果的研究

本试验采用ZRS—4型智能溶出仪为体外透皮装置,用紫外分光光度计测得3组药物(1组:黄连+冰片;2组:黄连+冰片+二甲亚砜;3组:黄连+恩诺沙星+二甲亚砜)在30～35日龄仔猪的不同部位皮肤的透过率,以研究不同部位皮肤对不同药物的透皮效果的影响。

组织工程皮肤自体及异体移植后表皮分化及重建的动物实验研究

目的研究猪组织工程皮肤移植后表皮层角蛋白分化标志的变化情况,为组织工程皮肤临床应用提供实验依据。方法按本科已建立的方法构建猪的组织工程皮肤,进行自体及同种异体移植实验,并于移植后1周、4周、8周取标本,行组织学检查和免疫组化染色,观察移植后组织工程皮肤表皮层角蛋白的表达、表皮细胞分化和重建情况。结果猪组织工程皮肤自体及同种异体移植后均存活,创面达到理想的愈合效果;组织学检查显示表皮分化良好,表皮层广谱角蛋白抗体免疫组化染色阳性;基底层以上细胞角蛋白K10抗体免疫组化染色阳性;基底层细胞角蛋白K5抗体免疫组化染色阳性。结论构建的猪组织工程皮肤自体及同种异体移植后,可获得理想的创面愈合效果,表皮分化和再构建良好,与正常皮肤相似。本实验为组织工程皮肤临床应用提供了有力的实验依据。

四点荷包缝合圆形皮肤病灶的实验研究

目的 探讨四点荷包缝合方法修复较小圆形皮肤组织缺损的效果。 方法 在 3只家猪的胸背部做直径3cm的圆形皮肤软组织缺损 ,共 18处创口 ,分别予以不同的缝合方法 ,直接关闭创口 ,观察创面愈合情况。 结果 四点荷包缝合法和四边梭形切除加四点荷包缝合法两组缝合创面平整美观 ,不需要切除较多的边缘正常组织 ,效果优于其他方法。

基于机器学习算法研究不同电压所致猪皮肤电流损伤红外光谱特征

目的通过傅里叶变换红外显微光谱(Fourier transform infrared-microspectroscopy,FTIR-MSP)成像技术结合机器学习算法,对不同电压所致猪皮肤电流损伤红外光谱特征进行分析,旨在为不同电压所致皮肤电流损伤的鉴别提供参考。方法建立猪皮肤电流损伤模型,分为110 V、220 V、380 V电击组及对照组,电击组电击30 s后取电击部位皮肤,对照组取对应部位正常皮肤组织。结合连续切片HE染色结果,应用FTIR-MSP成像技术采集对应区域的光谱数据,结合机器学习算法(主成分分析、偏最小二乘法-判别分析),选取不同光谱波段(全波段4 000～1 000 cm^(-1)和分波段4 000～3 600 cm^(-1)、3 600～2 800 cm^(-1)、2 800～1 800 cm^(-1)、1 800～1 000 cm-1)及预处理方式(正交信号校正、标准正态变量、多元散射校正、归一化、平滑)对模型进行优化,比较所建模型的分类效果。结果相较于单纯谱图分析,主成分分析法能很好地区分电击组和对照组,但难以区分不同电压组。基于3 600～2 800 cm^(-1)波段的偏最小二乘法-判别分析实现了对不同电压触电所致皮肤损伤的鉴别,且采用正交信号校正能进一步优化3 600～2 800 cm^(-1)波段模型的效能。结论应用FTIR-MSP成像技术结合机器学习算法对不同电压所致猪皮肤电流损伤的鉴别具有可行性。

猪皮肤源树突状细胞的分离和鉴定

分离出不需要体外诱导树突状细胞(DC),为研究病毒与猪DC的关系奠定基础。将刮下的猪皮肤表皮培养过夜,对所分离获得的细胞通过流式细胞术、吉姆萨染色与扫描电镜进行表型与形态鉴定。试验结果表明,通过细胞计数分离到的细胞能达到5×106个细胞,流式细胞术检测细胞CD1a/SWC3a的双阳性细胞率为82.3%;流式细胞术检测CD80/86分子,阳性细胞率为90.2%;通过吉姆萨染色和扫描电镜观察,细胞表面有大量的树突状突起,符合DC的形态特征。通过表型和形态学分析,说明已经成功分离到猪皮肤源DC,为猪病毒性疾病的免疫抑制机理研究奠定基础。

爱比菌素注射液对猪疥螨病的疗效观察

挑选自然感染猪疥螨的仔猪60头,随机分为2组,每组30头。用爱比菌素注射液按0.3mg/kg体重皮下注射,并用双甲脒作为对照,以病变计分减少率、螨虫减少率为疗效判定指标,分别在用药后第7、14、21、28天观察药物对猪疥螨的驱治效果。结果表明爱比菌素治疗效果明显优于双甲脒,用药14天后其病变计分减少率、螨虫减少率均高达到100%,而对照组在用药后第28天其病变计分减少率、螨虫减少率分别为75%和78.7%。表明爱比菌素注射液具有高效、低毒、用药方便等优点。

小型香猪复方壳多糖组织工程皮肤的构建及组织学特点

目的评价制备的小型香猪复方壳多糖组织工程皮肤在组织学方面的特性,为其修复皮肤缺损创面提供实验依据。方法采用传代培养的角质形成细胞和成纤维细胞作为种子细胞,I型胶原作为真皮基质。采用气—液界面方式进行培养,通过苏木精—伊红(HE)染色、比较小型香猪的体外构建组织工程皮肤与正常皮肤的组织学特征,包括表皮、真皮结构。结果制备的复方壳多糖组织工程皮肤表皮细胞增殖活跃,分层分化良好,厚约150μm,真皮层细胞生长正常,排列有序,与机体皮肤结构相似。结论复方壳多糖组织工程皮肤组织结构良好,符合新型皮肤替代物在治疗皮肤缺损时的组织学要求。

应用小型猪进行的Langer皮纹研究

选择七只健壮的小型猪就Ｌａｎｇｅｒ皮纹在其腰背部进行设计，制作了手术切口愈合模型，并做Ｗｅｉｇｅｒｔ弹力纤维染色，显微测量等研究。结果：小型猪皮肤胶原纤维束、弹力纤维束的走行方式主要是和Ｌａｎｇｅｒ皮纹方向一致；沿Ｌａｎｇｅｒ皮纹方向做垂直于皮肤的切口较其它方向做垂直于皮肤的切口能明显地减少切断胶原纤维、弹力纤维束的数量（胶原纤维Ｐ＜０．０１，弹力纤维Ｐ＜０．０５），并和全厚皮片的摆放位置无关（Ｐ＞０．０５）。

全层组织工程皮肤修复猪糖尿病体表溃疡的实验研究

目的:观察有活性细胞成分的组织工程皮肤在修复猪糖尿病体表溃疡中的效果。方法:体外构建有活性细胞成分的组织工程皮肤;采用 6 只 2.5～3 月龄约克猪建立糖尿病溃疡模型;彻底清创形成 48 个创面(直径 50mm),随机分为三组:A(组织工程皮肤)组,B(自体皮肤)组,C(空白)组;术后 1、2、3、4、6、8、12 周观察皮片存活率、创面收缩率及组织学变化。 结果:A、B 组移植后皮片与创面紧密贴合、生长良好;A、B 组皮片存活率无明显差别(P=0.667);A、B 组收缩率与 C 组有明显差别(P<0.01);A组皮片可见表皮和真皮两种成分,且两种成分不断改建,12 周时其组织学表现接近正常皮肤。结论:全层组织工程皮肤修复糖尿病体表溃疡是可行的。

猪组织工程皮肤自体及异体移植后血管重建的实验研究

目的研究贵州小型香猪来源的组织工程皮肤自体及同种异体移植后血管形成情况,为复方壳多糖组织工程皮肤临床应用提供实验依据。方法按我科已建立的方法构建猪的组织工程皮肤,然后进行自体及同种异体移植实验,观察移植的猪组织工程皮肤的存活及创面愈合情况。并于移植后1、4、8周取标本,行组织学检查和免疫组化染色,观察自体及同种异体移植后猪组织工程皮肤血管形成状况。结果猪组织工程皮肤自体及同种异体移植后均存活,创面达到理想的愈合效果,组织学检查显示新生血管丰富;免疫组化染色显示:Ⅷ因子免疫组化染色阳性。结论本实验构建的猪组织工程皮肤自体及同种异体移植后,可获得理想的创面愈合效果,猪组织工程皮肤血管形成良好,与正常皮肤相似。本实验为复方壳多糖组织工程皮肤临床应用提供了有力的实验依据。

异种(猪)无细胞真皮基质与自体微粒皮复合移植修复深度烧伤创面的实验研究

目的 观察异种 (猪 )无细胞真皮支架与自体微粒皮加同种异体皮复合移植修复全层皮肤缺损的效果。方法 4 8只 SD大鼠背部全层皮肤缺损创面 ,分别行异种 (猪 )无细胞真皮支架与自体微粒皮移植(复合皮组 )和单纯微粒皮移植 (对照组 ) ,术后定期观察创面愈合情况并行创面愈合率和收缩率的计算 ,同时取创面组织进行组织学观察。结果 复合皮组的创面愈合情况良好 ,未见明显挛缩 ,皮肤弹性较好 ,两组异体皮成活情况及创面愈合情况相近 ,但是复合皮组创面收缩率显著低于对照组。组织学观察复合皮组上皮化良好 ,胶原纤维排列有序 ,基底膜结构完整。结论 异种 (猪 )无细胞真皮支架与自体微粒皮复合移植能修复全层皮肤缺损 ,改善创面愈合质量。

BrdU单抗免疫组化法观察人工皮肤种子细胞生长

目的研究贵州小型香猪来源的组织工程皮肤自体及同种异体移植后种子细胞生长情况,为复方壳多糖组织工程皮肤临床应用提供实验依据。方法构建猪的组织工程皮肤并于移植后第1、4、8周采集标本,BrdU单抗免疫组化染色,观察移植后种子细胞存活情况。结果猪组织工程皮肤移植后8周 BrdU单克隆抗体免疫组化染色阳性。结论笔者构建的组织工程皮肤自体及同种异体移植后种子细胞存活良好。本实验为复方壳多糖组织工程皮肤临床应用提供了有力的实验依据。

猪皮脱细胞真皮基质制备方法的改良及其临床应用

目的 :寻找一种较好的脱细胞真皮基质制备方法。方法 :利用自制的装置 ,先将猪皮经负压处理 ,去除起泡后的表皮 ,然后利用离子型去污剂的渗透压梯度作用去除真皮内的细胞成分。结果 :本方法制备的脱细胞真皮基质的胶原直径及排列结构均正常 ,无任何细胞成分。临床应用 18例复合皮均存活良好。结论 :本方法不失为一种简单方便且对真皮基质性状影响较小的脱细胞真皮基质制备方法。

冻干猪皮抑菌及渗透消毒剂作用的实验研究

目的解决大面积烧伤病人手术用皮，对冷冻猪皮进行消毒处理并观察其抑菌作用。方法用消毒液浸泡处理和改良kirby—bauer法（抑菌环试验方法）进行了观察。结果冻干猪皮显示出明显抑菌作用，在冻干猪皮中心贴上含氯己定的滤纸片可明显提高猪皮的抑菌效果；用醋酸氯己定溶液浸泡的冻干猪皮抑菌效果最好。进行多个均数间的两两比较，证明冻干皮组与贴滤纸片组，冻干皮组与氯己定浸泡皮组，贴滤纸片组与氯己定浸泡皮组之间抑菌环的平均数差异显著。冻干皮片组和贴氯己定滤纸片组对铜绿假单胞菌均无抑菌作用；浸有消毒液的冻干皮片组只有6／20平板上显示出对铜绿假单胞菌有比较弱的抑菌作用；氯己定滤纸片对照组只有17／20平板上显示出8—10mm的抑菌环。结论新鲜猪皮片经醋酸氯己定溶液消毒处理，冻干后本身具有一定的抑菌作用，但其作用有限；冻干皮片经500mg／L醋酸氯己定浸泡处理，可明显提高其抑菌作用。