利用Sm抗原模拟表位肽构建狼疮样鼠模型

目的利用Sm抗原模拟表位肽免疫BALB/C小鼠,构建狼疮样鼠模型。方法用鼠Sm单克隆抗体对噬菌体随机12肽库进行亲和筛选,将筛选的噬菌体阳性克隆行双抗体夹心ELISA检测、DNA序列测定并推导其氨基酸序列,初步确定Sm抗原模拟表位;进而用混合噬菌体阳性克隆皮下免疫BALB/C小鼠,ELISA法检测小鼠血清IgG型抗Sm抗体、抗双链DNA(dsDNA)抗体和抗核抗体(ANA)水平;直接免疫荧光检测小鼠肾脏IgG型免疫复合物的沉积以及HE染色观察小鼠肾脏组织病理损伤情况。结果免疫筛选获得的5个ELISA强阳性的噬菌体克隆的氨基酸序列IR、SQ、PP出现频率增加;实验组小鼠血清中第28天出现Sm抗体、dsDNA抗体、ANA抗体,且滴度不断升高;第33天出现蛋白尿;肾脏可以检测到IgG型免疫复合物沉积及明显的肾脏病理改变。对照组小鼠无明显自身抗体产生和肾脏病变。结论利用Sm抗原噬菌体模拟表位肽可成功构建狼疮样小鼠模型。

Sm抗原的性质特征及在疾病中的作用

本文主要介绍了Sm抗原的划分 ,分子量 ,结构性质 。

Sm抗原纯化及ELISA检测Sm抗体的初步研究

从小牛胸腺中盐析出来的Sm/RNP提取物经DEAE Bio-Ge1 A层析即为Sm抗原。在PAGE检测时Sm抗原在BSA之前有几条染色带。 血清学研究显示,Sm抗原仅与Sm阳性和Sm/RNP阳性血清发生反应,不与RNP阳性血清发生反应。经Sm抗原吸收后,Sm阳性和Sm/RNP阳性血清与Sm抗原的反应降低至接近正常人水平,而上述血清与RNP抗原的反应设有明显降低。结果表明,Sm与RNP已完全分开。ELISA方法检测Sm抗体有10/18的SLE和2/4MCTD是阳性,在14例RA、硬皮病和其它疾病中为阴性。

Sm抗原的异质性

自从1966年Tan和Kankel报道在SLE患者中发现抗Smith(Sm)抗体以来,该抗体一直被认为是诊断SLE的重要依据,是SLE的“标记”。近30年来随着研究的深入,尤其是利用分子生物学技术,使对Sm抗原、抗体有了更深入的认识。 1 Sm的组成与生物学作用 Sm与核糖蛋白(RNP)等抗原一样,均属于核内小核糖蛋白(snRNP)。在富含尿嘧啶(U)的snRNP中,Sm存在于U1,U2,U4,U5和U6snRNP中。而RNP抗原却仅存在于U1RNP中,这是RNP与Sm的一个重要区别,亦是抗Sm抗体与抗RNP抗体存在交叉反应的原因所在。根据凝胶电泳。

人自身抗原Sm B′的基因克隆和原核表达

目的克隆并表达人自身抗原Sm B′。方法应用RT-PCR技术,从HL-60细胞株中克隆人自身抗原Sm B′全长基因,将PCR产物直接TA克隆、鉴定及测序,再定向克隆至pGEX-ST载体中,转入大肠杆菌BL-21。阳性克隆鉴定后在IPTG诱导下表达,产物行SDS-PAGE和Western blot分析鉴定。结果PCR产物约为0.7kb,与预期657 bp接近,测序结果与GenBank报道的完全一致。pGEX-5T—Sm B′重组阳性克隆酶切鉴定正确,SDS-PAGE和Western blot结果显示融合蛋白分子量为53KD,具有天然人自身抗原Sm B′的免疫原性。结论成功克隆表达人自身抗原Sm B′。

人Smith D1抗原在原核细胞中的表达及纯化

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种自身免疫性疾病。患者血清中可检出多种自身抗体，抗Sm抗体是SLE的标志性抗体。并已成为美国风湿病协会（ARA）1997年修订的诊断标准之一。在Sm抗原中能与抗Sm抗体发生反应的是SmB／B’和SmD，而SmE、