SMAD5⁃AS1干扰对人食管癌细胞株Eca109增殖的影响及机制

目的观察长链非编码核糖核酸(LncRNA)信号传导蛋白Sma和Mad相关蛋白同源物5(SMAD5)反义核糖核酸1(SMAD5⁃AS1)干扰对人食管癌细胞株Eca109增殖的影响,并初步探讨可能的机制。方法取人食管癌细胞株Eca109培养传代,分别转染SMAD5⁃AS1 siRNA沉默质粒、阴性对照质粒,并记为siRNA⁃1组、siRNA阴性对照组,另取未转染细胞记为对照组,每组设置3个复孔。实时逆转录聚合酶链反应(RT⁃qPCR)检测各组SMAD5⁃AS1、表观遗传诱导LncRNA⁃1(EPIC1)信使核糖核酸(mRNA)表达;细胞计数试剂⁃8(CCK⁃8)法检测各组细胞增殖活性;流式细胞仪检测各组细胞周期分布;RT⁃qPCR检测各组细胞细胞周期D1(cyclinD1)、促凋亡基因(Bad)、抗凋亡基因(Bcl⁃2)mRNA表达;蛋白质免疫印迹法(WB)检测各组细胞cyclinD1、Bad、Bcl⁃2蛋白表达。结果各组细胞SMAD5⁃AS1、EPIC1 mRNA表达水平比较:对照组>siRNA阴性对照组>siRNA⁃1组,差异有统计学意义(P<0.05);各组细胞增殖活性比较:siRNA⁃1组>siRNA阴性对照组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组和siRNA阴性对照组比较,siRNA⁃1组cyclinD1和Bcl⁃2 mRNA与蛋白表达均下降,差异有统计学意义(P<0.05),G1/S期细胞占比、BadmRNA及蛋白表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05),上述指标siRNA阴性对照组和对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论SMAD5⁃AS1干扰可抑制人食管癌细胞株Eca109增殖,将其阻滞于G1/S期,推测与下调EPIC1、cyclinD1及Bcl⁃2表达,上调Bad表达有关。

SMAD7在多发性骨髓瘤中的表达及对细胞增殖和耐药的影响

目的·分析Sma和Mad相关蛋白7 (Sma-and Mad-related protein 7,SMAD7)在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)中的表达,以及其对MM细胞的增殖和耐药的影响。方法·获取基因表达综合(gene expression omnibus,GEO)数据库中的3个数据集,分析SMAD7在健康捐献者和MM患者中的差异表达。通过收集8例健康捐献者和20例MM患者的骨髓标本,采用实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,qPCR)检测骨髓CD138+细胞中SMAD7 mRNA的相对表达,并分析其与患者临床资料的关系。在MM细胞KMS11中过表达SMAD7后,通过CCK8实验、细胞周期实验观察SMAD7对MM细胞增殖的影响。采用不同浓度的硼替佐米处理过表达SMAD7的KMS11细胞后,观察SMAD7对MM细胞的耐药影响及细胞的凋亡情况。结果·数据集中SMAD7表达数据的分析显示,与健康捐献者相比,SMAD7在MM患者中表达较高(均P<0.05)。qPCR检测结果显示,SMAD7 mRNA相对表达水平在MM患者中有上调(P=0.002),但未显示出与临床资料间存在关联。与对照细胞相比,过表达SMAD7后,KMS11的细胞活力均较高(均P<0.05);且细胞周期分布亦发生了变化,S期细胞的比例有所下降(P=0.016)、G2/M期细胞的比例有所上升(P=0.005);而经硼替佐米处理后,过表达SMAD7细胞的药物敏感性及凋亡水平均较低。结论·SMAD7在MM中表达上调,过表达SMAD7可促进MM细胞的增殖和耐药能力。

左卡尼汀通过TGF-β_(1)/Smad通路对尿毒症腹膜透析大鼠钙磷代谢的影响

目的探讨左卡尼汀通过转化生长因子-β_(1)/Sma和Mad相关蛋白(TGF-β_(1)/Smad)信号通路对尿毒症腹膜透析大鼠钙磷代谢的影响。方法将尿毒症腹膜透析大鼠分为模型组和左卡尼汀组,另给予假手术的大鼠作为对照组,每组10只。模型组和对照组分别灌胃生理盐水,左卡尼汀组灌胃左卡尼汀40 mg/kg,1次/d,持续6周。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血尿素氮、肌酐、甲状旁腺激素及钙、磷水平。采用Western blotting检测肾组织TGF-β_(1)、Smad及磷酸化Smad3(p-Smad3)蛋白相对表达量。结果模型复制前3组大鼠体重比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型复制6周后,与对照组比较,模型组和左卡尼汀组大鼠血肌酐、尿素氮、甲状旁腺激素及磷水平均升高(P<0.05),血钙水平降低(P<0.05),与模型组比较,左卡尼汀组大鼠血肌酐、尿素氮、甲状旁腺激素及磷水平均降低(P<0.05),血钙水平升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组和左卡尼汀组大鼠TGF-β_(1)和p-Smad3蛋白相对表达量均上调(P<0.05),与模型组比较,左卡尼汀组大鼠TGF-β_(1)和p-Smad3蛋白表达水平均下调(P<0.05)。结论左卡尼汀可通过抑制尿毒症腹膜透析的TGF-β_(1)/Smad通路活化来改善肾脏功能,提高血甲状旁腺激素、钙、磷水平,改善钙磷代谢平衡。

基于转化生长因子-β1观察三七总皂苷对大鼠跟腱异位骨化的组织学影响

目的:从组织学观察三七总皂苷(PNS)对大鼠跟腱异位骨化(HO)的影响,并基于转化生长因子-1(TGF-1)/Sma和Mad相关蛋白(Smad)同源物2/3信号通路探讨其潜在作用机制。方法:将126只SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、西药组、高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组18只。HO造模术后分别给予不同浓度PNS或对照西药或生理盐水灌胃2周。于术后2周、5周及10周分别行小动物X线及CT平扫评估HO发生情况。采用一般组织学染色,包括苏木精-伊红染色、Masson三色染色及番红O固绿软骨染色,观测HO病灶内组织学改变。经免疫组织化学法比较各组病灶局部TGF-β1、磷酸化Smad同源物2(p-Smad2)及p-Smad3表达的差异。结果:术后10周,X线检测可见各手术大鼠成骨率差异无统计学意义(P>0.05)。术后2周,手术大鼠跟腱细胞显著增加(P<0.05),跟腱纤维排列紊乱;5周可见大量增殖肥大软骨细胞;10周可见大量成熟异位骨组织形成。中剂量组术后10周相对骨量显著低于模型组(P<0.05)。免疫组织化学染色显示,假手术组TGF-β1、p-Smad2及p-Smad3表达术后与正常对照组比较均显著增加,差异均有统计学意义(均P<0.01)。与模型组比较,中剂量组TGF-β1的表达在术后2周显著降低(P<0.05),表达峰值延后。结论:TGF-β1的表达在大鼠跟腱HO造模术后具有显著增加。一定浓度的PNS可降低异位骨组织的相对骨量,这可能与PNS延后TGF-β1的表达峰值并下调其表达量有关。

中医药靶向TGF-β1/SMAD信号通路防治肾纤维化研究进展

肾纤维化是各种慢性肾脏病进展至终末期肾衰竭不可避免的共同病理过程,严重危害着人类健康。大量研究证实TGF-β1/SMAD信号通路在肾纤维化的发展中发挥着重要作用。中医药在防治肾纤维化方面具有独特优势和良好前景,其中有不少可靶向调节TGF-β1/SMAD信号通路的单味中药及其有效成分或其复方。本文就TGF-β1/SMAD信号通路在慢性肾脏病肾纤维化中的作用以及近年来中医药靶向TGF-β1/SMAD信号通路防治肾纤维化研究进展作简要综述,以期为临床中医药防治肾纤维化提供参考。

MiR-21在慢性阻塞性肺疾病患者外周血清和单个核细胞中的表达及临床意义

目的:通过研究mi R-21在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者外周血清及单个核细胞中的表达,探讨mi R-21在COPD发病中的意义及机制。方法:将研究对象分为健康对照组(n=41)和COPD组(n=49),收集两组外周血清,分离其外周血单个核细胞并收集临床资料。运用实时荧光定量PCR法检测各组外周血清及单个核细胞中mi R-21的表达水平。分析COPD组mi R-21与肺功能的关系,并对mi R-21与COPD患者一秒用力呼气容积(forced expiratory volume in one second,FEV1)进行相关性分析。结果:COPD组外周血清及单个核细胞中mi R-21表达水平较健康对照组增高;COPD外周血清及单个核细胞中mi R-21差异表达与肺功能相关;COPD患者mi R-21表达水平与FEV1呈正相关。结论:COPD患者外周血清及单个核细胞中mi R-21表达升高可能与COPD发病过程及病情严重程度相关。

黄芪皂苷调节TGF-β1/Smad通路对尿毒症腹膜透析大鼠钙磷代谢的影响

目的:探讨黄芪皂苷对尿毒症腹膜透析大鼠钙磷代谢及对转化生长因子-β1(TGF-β1)/Sma和Mad相关蛋白(Smad)信号通路的影响。方法:建立尿毒症腹膜透析大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、黄芪皂苷50、100、200 mg/kg组、碳酸钙0. 0042mg/kg组,各组灌胃相应药物或生理盐水,每日1次,连续6周。酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测血清中肌酐、尿素氮、钙、磷、甲状旁腺激素含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理学变化;蛋白免疫印迹(WB)检测肾脏组织中TGF-β1、Smad3、pSmad3蛋白表达水平。结果:建模前,各组大鼠体重差异不明显。建模6周后,与假手术组相比,模型组血清中钙含量下降,血清中肌酐、尿素氮、甲状旁腺激素、磷含量升高、肾组织中TGF-β1、p-smad3蛋白表达上调。与模型组相比,黄芪皂苷剂量依赖地使大鼠体重、血清中钙含量增加,血清中肌酐、磷、甲状旁腺激素、尿素氮含量降低,肾组织中TGF-β1、p-smad3蛋白表达下调;其中黄芪皂苷200 mg/kg改善各项指标最显著。与假手术组和碳酸钙组相比,尿毒症腹膜透析模型大鼠出现肾小球细胞严重增殖、肾小管毛细血管衰减等病理变化,经黄芪皂苷50、100、200 mg/kg组剂量作用后,肾组织病变情况明显改善。结论:黄芪皂苷可能通过抑制TGF-β1/Smad通路激活,改善肾功能,调节尿毒症腹膜透析大鼠钙磷代谢平衡。

百令胶囊加还原型谷胱甘肽含药血清对NRK-49F细胞增殖的影响

目的探讨百令胶囊加还原型谷胱甘肽(GSH)含药血清对大鼠间质成纤维细胞NRK-49F增殖及信号分子转化生长因子-β1(TGF-β1)、Sma和Mad相关蛋白(Smad)表达水平的影响。方法采用单侧输尿管梗阻组大鼠制备含药血清(百令胶囊1.5 g/kg联合GSH 300 mg/kg)和不含药血清。将对数生长期细胞分为正常对照组、模型组(10 ng/ml TGF-β1)、阴性对照组(10 ng/ml TGF-β1+10%不含药血清)和药物干预组(10 ng/ml TGF-β1+10%含药血清)。显微镜下观察各组细胞形态,采用CCK8检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组细胞周期分布;RT-PCR检测各组细胞TGF-β1/Smad信号通路转录水平的表达;Western blot检测各组细胞TGF-β1/Smad信号通路蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组和阴性对照组NRK-49F细胞增殖活性增加(P<0.05),G0/G1期细胞减少(P<0.05),S期细胞增加(P<0.05),增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、α肌动蛋白(α-SMA)、磷酸化Smad2/Smad2(p-Smad2/Smad2)、p-Smad3/Smad3的表达上调(P<0.05);与阴性对照组相比,药物干预组NRK-49F细胞增殖活性下降(P<0.05),G0/G1期细胞增加(P<0.05),S期细胞减少(P<0.05),PCNA、Cyclin D1、CollagenⅠ、α-SMA、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3的表达下调(P<0.05)。结论百令胶囊加GSH含药血清可能通过抑制TGF-β1/Smad的表达,抑制肾间质纤维化。

小肠间质瘤预后因素分析

目的探讨小肠间质瘤预后相关因素。方法复阅病理切片(苏木精-伊红染色),重新诊断;两点取材构建组织微阵列,免疫组织化学染色检测CD117、CD34、SMA、Desmin、S-100、Ki-67、P53及bcl-2蛋白等8种抗体表达;单因素分析各变量与患者预后的关系。结果58例患者1、3、5年生存率分别为98.3%、69.7%、50.9%。单因素分析,患者预后仅与肿瘤大小及性别有关(P<0.05)。结论对男性小肠间质瘤患者应加以关注,小肠间质瘤直径大于5cm,应高度警惕其复发转移。