超声造影联合血清SMURF1检测诊断甲状腺癌的临床分析

目的探讨超声造影联合血清Smad泛素调节因子1(SMURF1)检测对甲状腺癌的诊断价值。方法纳入东南大学附属中大医院溧水分院2019年2月至2020年2月收治的144例疑似甲状腺癌患者为研究对象,根据组织病理学结果,将其分为甲状腺癌组(76例)和良性组(68例)。所有患者均行超声造影检查及血清SMURF1水平测定;分析超声造影参数、血清SMURF1单独检测及二者联合检测对甲状腺癌的诊断价值。结果甲状腺癌组超声造影参数峰值强度(PI)、平均灌注强度(SImean)及最大灌注强度(SImax)均低于良性组,SMURF1 mRNA水平高于良性组(P<0.05)。超声造影参数SImax诊断甲状腺癌的敏感度为82.89%,特异度为72.06%,准确度为77.78%,Kappa值为0.552。血清SMURF1诊断甲状腺癌的敏感度为65.79%,特异度为94.12%,准确度为79.17%,Kappa值为0.589。SImax联合SMURF1诊断的敏感度、特异度、准确度、Kappa值分别为97.37%、85.29%、91.67%、0.832,均高于SImax、SMURF1单独诊断(P<0.05),且二者联合预测预后的AUC为0.927,明显高于二者单独诊断(Z联合vs.SImax=3.999,P<0.001;Z联合vs.SMURF1=3.270,P=0.001)。结论超声造影联合血清SMURF1检测可提高甲状腺癌的诊断效能,可在保证甲状腺癌患者诊断效率的前提下,避免临床甲状腺癌患者的过度诊断。

Research status of E3 ubiquitin ligase Smurf2 and related signaling pathways in glioma

Glioma is the tumor with the highest incidence in the brain,and it is eager to seek new and efiective treatment.The interaction of ubiquitination and deubiquitination regulates many cell activities in organisms,and participates in tumor occurrence,development,migration,invasion and other processes.This article summarized the progress of E3 ubiquitination ligase smad ubiquitination regulatory factor 2(Smurf2)and glioma-related signaling pathways to assist clinical diagnosis and treatment of glioma.

补肾中药对肾虚骨质疏松症大鼠肾组织中Smurf2的mRNA和蛋白表达影响研究

目的:通过研究摘除卵巢致肾虚骨质疏松症大鼠肾组织中Smurf2的mRNA和蛋白的表达,揭示摘除卵巢致肾虚骨质疏松症的病理机制,并研究补肾中药防治疗效及其作用机制。方法:摘除雌性大鼠双侧卵巢的方法复制肾虚骨质疏松症模型,采用具有补肾壮骨益精作用的补肾中药(高、低剂量)对实验大鼠治疗12周,以骨疏康颗粒剂、盖天力片作为阳性对照组,正常大鼠、假手术组作为标准对照组,模型大鼠作为空白对照组,并与补脾中药作疗效的比较。用RT-PCR法、Western印迹法检测肾虚骨质疏松症大鼠肾组织中Smurf2的mRNA和蛋白表达。结果:RT-PCR及Western方法检测,正常大鼠肾组织中存在Smurf2的mRNA和蛋白表达;与正常组、假手术组比较,模空组Smurf2 mRNA和蛋白的表达水平在肾组织中明显降低。用药12周后,与模空组比较,补肾高、低剂量组、盖天力组可明显上调Smurf2 mRNA和蛋白在肾组织中的表达水平。其中补肾高剂量组上调幅度大于补肾低剂量组。结论:①正常大鼠肾组织中Smurf2可以在基因、蛋白水平表达;②骨质疏松症的发生,可能与肾组织中Smurf2的mRNA和蛋白表达的异常变化有关;③补肾中药通过调控肾组织中Smurf2的mRNA和蛋白表达,对于骨质疏松症有一定的防治作用。

糖尿病大鼠肾组织Smurf2表达及其与SnoN蛋白降解的关系

目的:观察Smad泛素化调节因子2(Smurf2)和核转录共抑制因子SnoN在糖尿病(DM)大鼠肾组织的动态表达,并初步探讨Smurf2在DM大鼠肾组织SnoN蛋白表达变化中的作用。方法:链脲佐菌素(STZ)尾静脉注射复制DM大鼠模型,随机分为DM2、4、8、12、16和24周组,每组均设鼠龄匹配的正常对照组(n=6)。生化方法测血糖、血肌酐(Scr)及24h尿蛋白量,计算肾脏指数;HE染色观察胰腺和肾组织病理学改变;免疫荧光染色检测胰腺组织胰岛素、肾组织Smurf2和SnoN的表达;Westernblotting检测肾皮质Smurf2、SnoN、转化生长因子β1(TGF-β1)和磷酸化Smad2(p-Smad2)蛋白的表达;RT-PCR检测肾皮质Smurf2和SnoN的mRNA。结果:(1)DM各组血糖、血Scr、24h尿蛋白量和肾脏指数均高于正常对照组,正常胰腺组织胰岛素表达强,DM大鼠胰岛素表达则明显减弱;(2)Smurf2和SnoN蛋白均主要表达于肾小管上皮细胞,从DM2周始各DM组Smurf2、TGF-β1和p-Smad2蛋白表达均多于正常对照组,DM4周起各DM组SnoN蛋白均少于正常对照组,DM各组SnoNmRNA与正常组相比无显著差异,Smurf2mRNA随病程进展逐渐增多;(3)Smurf2和SnoN蛋白的表达量呈显著负相关(r=-0.88,P<0.01)。结论:在糖尿病肾病发病过程中SnoN蛋白的表达减少可能与Smurf2介导其泛素化降解有关。

胰腺导管腺癌中SMURF1基因表达水平的研究

目的探讨胰腺导管腺癌中Smad特异性E3泛素蛋白连接酶1(SMURF1)基因表达水平的异常情况。方法以相应癌旁正常组织为对照,应用半定量RT-PCR方法检测31例胰腺导管腺癌组织中SMURF1 mRNA表达水平;应用Western blot方法检测相应标本中SMURF1蛋白水平的异常情况。结果在31例病例中,肿瘤组织SMURF1 mRNA表达高于相应癌旁正常组织的有20例,统计分析结果肿瘤组与对照组差异显著(P<0.01);其中19例中同时存在SMURF1蛋白的高表达(P<0.01)。结论胰腺导管腺癌中SMURF1 mRNA和蛋白表达水平升高,这可能是胰腺癌发生发展的另一新的分子机制。

Smad泛素化调节因子2在转化生长因子β1诱导人肺成纤维细胞活化中的作用及其分子机制

目的:观察Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞活化中的作用,并探讨其可能的分子机制。方法:体外培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,10μg·L-1 TGF-β1作用1、2和6h(分别为TGF-β1 1h组、TGF-β1 2h组和TGF-β1 6h组),并设对照组(不加TGF-β1),RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Smurf1和Smurf2mRNA和蛋白的表达水平。MRC-5细胞随机分为对照组(未加入TGF-β1或siRNA)、TGF-β1组(10μg·L-1 TGF-β1)、Control siRNA转染组(10μg·L-1 TGF-β1+Control siRNA)和Smurf2siRNA转染组(10μg·L-1 TGF-β1+Smurf2siRNA)。Western blotting法检测各组细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原α1(COL1A1)的表达水平;RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Smad7、核转录共抑制因子SnoN、TGF-βⅠ型受体(TβRⅠ)、Smad2和Smad3mRNA和蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,各TGF-β1组细胞中Smurf2 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),且随着TGF-β1作用时间的延长,其表达水平呈逐渐增加的趋势;与对照组比较,各TGF-β1组细胞中Smurf1表达水平无明显变化(P>0.05)。与TGF-β1组比较,Smurf2siRNA组细胞中Smurf2蛋白表达水平下降(P<0.05)。与对照组比较,TGF-β1组细胞中α-SMA和COL1A1蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与TGF-β1组比较,Smurf2siRNA组细胞中α-SMA和COL1A1蛋白表达水平均下降(P<0.05)。与对照组比较,TGF-β1组和Smurf2siRNA组细胞中Smad7和SnoN mRNA表达水平均升高(P<0.05),而Smurf2siRNA组和TGF-β1组细胞中Smad7和SnoN mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。与对照组比较,TGF-β1组细胞中Smad7和SnoN蛋白表达水平均明显下降(P<0.05);与TGF-β1组比较,Smurf2siRNA组细胞中Smad7和SnoN蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,TGF-β1组和Smurf2siRNA组细胞中TβRⅠmRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),而Smurf2siRNA组和TGF-β1组细胞中TβRⅠmRNA和蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组细胞中Smad2和Smad3mRNA和蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Smurf2可能通过泛素化降解Smad7和SnoN,参与调控TGF-β1/Smads信号通路,从而发挥其促进TGF-β1活化肺成纤维细胞的作用。

骨质疏松症大鼠肾组织中Smurf1 mRNA和蛋白表达的实验研究

目的通过研究摘除卵巢致骨质疏松症大鼠肾组织中Smurf1的mRNA和蛋白的表达,揭示摘除卵巢致骨质疏松症的病理机制,并研究补肾中药防治疗效及其作用机制。方法摘除雌性大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,采用具有补肾壮骨益精作用的纳米钙补肾中药(高、低剂量)对实验大鼠治疗12w,以骨疏康颗粒剂、盖天力片作为阳性对照组,正常大鼠、假手术组作为标准对照组,模型大鼠作为空白对照组,并与补脾方剂(补中益气汤)作疗效的比较。用RT-PCR法、Western印迹法检测骨质疏松症大鼠肾组织中Smurf1的mRNA和蛋白表达。结果RT-PCR及Western方法检测,正常大鼠肾组织中存在Smurf1的mRNA和蛋白表达;与正常组、假手术组比较,模型组Smurf1 mRNA和蛋白的表达水平在肾组织中明显降低。用药12w后,与模型组比较,补肾高、低剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可明显上调Smurf1 mRNA和蛋白在肾组织中的表达水平。其中补肾高剂量组上调幅度大于其他各用药组。结论①正常大鼠肾组织中Smurf1可以在基因、蛋白水平表达;②骨质疏松症的发生,可能与肾组织中Smurf1的mRNA和蛋白表达的变化有关;③纳米钙补肾中药通过调控肾组织中Smurf1的mRNA和蛋白表达,对于骨质疏松症有一定的防治作用。

Smad泛素化调节因子2siRNA的筛选及转染原代肾小管上皮细胞条件的优化

试验旨在优化Smad泛素化调节因子2（Smurf2） siRNA最佳转染条件，筛选最佳siRNA干扰片段，进而实现对Smurf2基因的瞬时沉默，为研究Smurf2基因在马兜铃酸肾病（aristolochic acid nephrohathy，AAN）中的作用奠定基础。本研究通过培养小鼠原代肾小管上皮细胞（renal tubular epithelial cells，RTECs），并以脂质体LipofectamineTM 2000为转染介质，将Smurf2 siRNA转染入RTECs；通过观察绿色荧光的表达量及Real-time PCR反应优化转染条件，转染后Real-time PCR检测mRNA表达抑制率。CCK-8法检测Smurf2 siRNA复合物对RTECs活性的影响；同时，用Real-time PCR和Western blotting检测不同位点Smurf2 siRNA对Smurf2 表达的影响。结果显示,当Lipofectamine TM 2000与siRNA比例为1.5 μL∶30 pmol时，转染效率最高，为70%～80%；Smurf2-619 siRNA干扰效果最明显；与正常组相比，转染siRNA组的Smurf2蛋白表达水平显著下降（P〈0.05）。最终确定了Smurf2 siRNA最佳转染条件，其中Smurf2-619 siRNA对Smurf2 表达的抑制率最高。

骨肉瘤与骨良性病变组织中Smurf1、BMP-2的表达及相关性分析

目的:研究Smad泛素化调节因子1(Smad ubiquitin regulatory factor-1,Smurf1)与骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)在骨的良性病变及骨肉瘤组织中的表达及相关性,以此分析Smurf1蛋白在骨肉瘤的发生、侵袭、转移中的意义。方法:共收集骨组织标本120例,其中良性病变36例,骨肉瘤84例。免疫组化法检测标本中Smurf1和BMP-2含量,相关性分析采用Spearman等级相关分析法。结果:骨肉瘤组织Smurf1蛋白阳性表达明显高于良性病变组织[(0.786±0.214)vs.(0.583±0.183)],BMP-2蛋白表达水平则相反[(103.57±13.23)vs.(152.19±19.42)],差异均有统计学意义(P<0.05)。Smurf1与BMP-2在骨肉瘤组织中的蛋白表达水平呈显著负相关(r=-0.598,P<0.05)。结论:Smurf1可通过抑制BMP-2的表达来促进骨肉瘤的形成和发展。

Smurf1拮抗BMP-2对C2C12细胞的诱导成骨作用

目的研究Smad泛素化调节因子1(Smurf1)对基因重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)诱导成骨作用的影响。方法通过将质粒pcDEF3-Smurf1临时转染C2C12细胞并应用实时PCR和Western免疫印迹法鉴定其表达Smurf1,空载体pcDNA3.1作为阴性对照;然后用比色法测定细胞碱性磷酸酶活性和实时PCR分析细胞碱性磷酸酶、骨钙素、成骨转录因子Osterix基因表达,观察Smurf1对rhBMP-2诱导C2C12细胞向成骨细胞分化的影响。同时在相差显微镜下观察细胞形态的变化。结果Smurf1在C2C12细胞可以通过临时转染获得很好的表达。尽管在细胞形态上没有明显的差别,但Smurf1转染的C2C12细胞在rhBMP-2作用48 h后,细胞碱性磷酸酶活性以及细胞碱性磷酸酶、骨钙素、成骨转录因子Osterix基因表达均较对照组明显下降。结论Smurf1在BMP诱导成骨过程中发挥着负性调节作用。

Smurf2与肺纤维化关系研究进展

Smad泛素化调节因子2(Smurf2)是E3泛素连接酶的一种。研究发现,Smurf2与肺纤维化的发生发展有一定关系,其可选择性作用于Smad蛋白,调节肺纤维化TGF-β1信号传导,进而调控肺纤维化的发展。本文主要就Smurf2与肺纤维化TGF-β1/Smad信号通路的关系研究进展做一综述。

Smad泛素化调节因子2对人胚胎眼巩膜成纤维细胞TGF-β1/Smads信号通路和I型胶原表达的影响

目的探讨Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导后对人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)分泌Smads蛋白、I型胶原α1(COLIA1)的影响,探讨泛素化在巩膜重塑中的作用。方法HFSFs复苏并稳定传代后,免疫组化(IHC)法检测细胞中Smurf2的表达。将HFSFs细胞分别设空白对照组、TGF-β1组(加入10 ng/mL TGF-β1)、Control siRNA转染组(10 ng/mL TGF-β1+Control siRNA)及Smurf2 siRNA转染组(10ng/mL TGF-β1+Smurf2 siRNA)。Western Blot法检测COLIA1蛋白表达水平。RT-PCR法检测各组细胞中Smurf2、Smad2、Smad3和Smad7的mRNA表达水平。结果IHC结果显示,HFSFs中有Smurf2蛋白表达。TGF-β1诱导HFSFs中COLIA1蛋白显著性高表达,而当Smurf2被抑制时,COLIA1蛋白表达受抑制。与空白对照组比较,Smad7 mRNA表达水平呈上升趋势,差异有统计意义(P<0.05),但Smad7蛋白表达水平与PCR结果不完全相同;各培养组中Smad2和Smad3 mRNA和蛋白表达水平,与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论Smurf2表达于HFSFs细胞中,且随着Smurf2表达减少,HFSFs细胞中Smad7蛋白含量呈上升趋势,COLIA1含量呈下降趋势。提示Smurf2可能通过作用于TGF-β1/Smads信号通路参与了巩膜重塑过程。

遍在蛋白-蛋白连接酶对骨形态发生蛋白/Smad通路的调节

Smad通路是转化生长因子(TGF)-β超家族包括骨形态发生蛋白(BMP)信号转导的经典通路。Smad复合物的积聚导致其基因转录的过度活化,因此Smad的降解对Smad通路的调控至关重要。遍在蛋白-蛋白水解酶复合体通路降解Smad,对调控TGF-β信号转导发挥重要的调节作用。遍在蛋白-蛋白连接酶(Smurf)作为这一系统的核心,参与调控BMP和TGF-β两个家族的分子信号转导过程。本文就TGF-β/Smad通路、遍在蛋白酶体途径、遍在蛋白-蛋白连接酶Smurf家族及其结构、遍在蛋白-蛋白连接酶Smurf-1对Smad信号通路的调节等研究进展作一综述。

Smad泛素化调节因子与组织修复及器官纤维化的研究进展

泛素(ubiquitin)因其在整个生物界广泛存在而得名。泛素依赖性的蛋白质降解系统通过降解缺陷无用的蛋白质和失活的各种细胞器,影响着机体的染色体结构与功能、遗传信息的复制与表达、细胞信号传导与调节等常见生命现象。转化生长因子β(transforming growth factor β)及TGF-β/Smad信号传导通路在组织修复及器官纤维化过程中起重要作用。TGF-β/Smad信号传导调节机制复杂,其中探讨TGF-β/Smad信号传导通路的终止机制是近年研究热点。随着泛素-蛋白水解酶复合体可阻断TGFB/Smad信号分子作用的发现,一类特异性介导Smads泛素化降解的关键泛素酶—Smads泛素化调节因子(Smad ubiquitination regulatoryfactors,Smurfs)逐渐为学者所重视。本文对Smurfs与组织修复、纤维化过程中的生理及病理研究进展作如下综述。

Smad泛素化调节因子和Arkadia在大鼠肺纤维化中的作用研究

目的探讨Smad泛素化调节因子(Smurf)和Arkadia在博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化形成中的作用及可能的分子机制。方法将24只无特定病原体级健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型7 d组、模型14 d组、模型28 d组,每组6只。模型组大鼠气管内滴入博莱霉素(10 mg/kg)建立肺纤维化动物模型,对照组气管内滴入等体积0.9%氯化钠注射液。于造模后第7、14和28天分批处死大鼠。应用苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色观察肺组织炎症及纤维化情况;应用逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测Ⅰ型胶原α1(COL1A1)、Arkadia、Smurf1、Smurf2、Smad7、Ski和转化生长因子βⅠ型受体(TβRⅠ)的表达。结果 HE染色和Masson染色显示肺纤维化模型建立成功。模型7、14、28d组大鼠肺组织COL1A1蛋白表达水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型7、14、28 d组大鼠肺组织Arkadia mRNA和蛋白表达水平均明显高于对照组,Smurf2 mRNA和蛋白表达水平均明显低于对照组(均P<0.05)。模型7 d组大鼠肺组织Smad7和Ski蛋白表达水平明显高于对照组,随后Smad7和Ski蛋白表达水平随时间延长而逐渐降低,至第28天均低于对照组水平(均P <0.05),但各组间Smad7和Ski mRNA表达水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。模型7、14、28 d组大鼠肺组织TβRⅠmRNA和蛋白表达水平均明显高于对照组[(0.340±0.056)、(0.520±0.021)、(1.014±0. 190)比(0.244±0.033);(0.453±0. 033)、(0.617±0. 060)、(0. 720±0. 038)比(0.309±0.031)],差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论 Smurf2和Arkadia均参与了博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化形成;Arkadia可能通过泛素化降解蛋白途径实现对Smad7和Ski蛋白表达的下调,促进肺纤维化形成。

DPC4和Smurf2在子宫内膜腺癌中的表达及临床意义

目的检测胰腺癌缺失基因(DPC4)及Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在增殖期子宫内膜、子宫内膜不典型增生及子宫内膜腺癌组织中的表达,探讨两者与子宫内膜腺癌发生发展的关系。方法采用免疫组化SP法检测DPC4和Smurf2在上述3种组织中的表达情况,并结合年龄、病理分期、组织学分级、肌层浸润深度及淋巴结转移等临床特征进行相关性分析。结果与增殖期子宫内膜表达相比在子宫内膜腺癌中,DPC4呈低表达,而Smurf2呈高表达(均P<0.05),两者呈负相关(r=-0.525,P<0.05),两因子在子宫内膜腺癌中的表达均与其病理分级和临床分期相关(均P<0.05),而与淋巴结转移、癌肿浸润肌层深度及年龄无关(均P>0.05)。结论DPC4和Smurf2均与子宫内膜腺癌的发生发展相关,两者均与其病理分级和临床分期有关,而与淋巴结转移及癌肿浸润肌层深度无关,可作为肿瘤恶性程度及预后指标。

甘草酸二胺对输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的治疗作用及机制

目的:探讨甘草酸二胺对肾间质纤维化的作用及其机制。方法:以Wistar大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)为模型,在不同的时间点(7d、14d、28d)观察梗阻侧肾间质纤维化指数;致纤维化的转化生长因子β1(TGF-β1)的表达情况;肾皮质中与肾脏纤维化相关的Smurf2、Smad7信号蛋白等的mRNA及蛋白表达。结果:(1)随着梗阻时间的延长,肾间质纤维化程度逐渐加重,Smurf2基因和蛋白质明显上调,呈时间依赖性(P<0.01);Smad7蛋白呈时间依赖性下调(P<0.01),Smad7基因在各个时间点无明显变化;TGF-β1基因在UUO后第7d达高峰,此后逐渐下降,但仍然高于假手术组(P<0.01)。(2)甘草酸能改善UUO所致的肾间质纤维化程度(P<0.01),下调肾脏组织TGF-β1基因的表达(P<0.01);减少Smurf2基因和蛋白质的表达,同时上调TGF-β1信号传导中抑制性因子Smad7的表达(P<0.01)。结论:甘草酸二胺能保护UUO所致的肾间质纤维化损伤。其可能的作用机制为减少Smurf2核酸和蛋白质的表达,增加抗纤维化作用的Smad7蛋白表达;减少TGF-β1表达,阻止TGF-β信号传导,从而阻断肾间质的纤维化。

特发性肺纤维化中Smurf2对TGF—β1／Smad通路调控机制

特发性肺纤维化是肺间质纤维化的主要原因，为最常见的间质性肺疾病。其主要病理特点为大量成纤维细胞、肌成纤维细胞集聚、增殖。近年来研究表明转化生长因子B。（transforming growth factor-β1，TGF-β1）在肺纤维化的形成与发展中起关键性作用。Smad蛋白是参与TGF-β1信号细胞内传导的一类信号蛋白，是TGF-β1信号传导重要通路。近年来发现Smad泛素调节因子2（Smad ubiquitination regulatory factor 2，Smurf2）可选择性作用于Smad蛋白，进而调控TGF-β信号传导。本文就特发性肺纤维化中Smurf2对TGF-β1／Smad通路的调控机制作一综述。

泛素化调节因子2真核表达质粒的构建及其在原代肾小管上皮细胞的表达

本试验旨在构建带有增强型绿色荧光蛋白报告基因EGFP及目的基因泛素化调节因子2(Smurf2)的真核表达载体pEGFP-N3-Smurf2,并转染小鼠肾小管上皮细胞检测其表达情况。用RT-PCR法扩增小鼠肾小管上皮细胞Smurf2的CDS区,构建克隆载体pEASY-Zero-Smurf2和真核表达载体pEGFP-N3-Smurf2,酶切并测序鉴定。运用脂质体转染法将pEGFP-N3-Smurf2真核表达载体转染小鼠肾小管上皮细胞,实时荧光定量PCR、免疫印迹检测Smurf2的表达。PCR结果显示扩增出Smurf2基因片段大小约为2247bp;重组质粒pEGFP-N3-Smurf2的酶切鉴定及测序结果均表明Smurf2基因成功克隆到真核表达载体中;脂质体转染后检测结果显示,转染pEGFP-N3-Smurf2表达载体的肾小管上皮细胞中Smurf2基因mR-NA表达量升高且EGFP-Smurf2重组蛋白有表达。本试验成功构建了含有增强型绿色荧光蛋白标记的Smurf2真核表达质粒,转染后能明显提高细胞内Smurf2的表达,为研究Smurf2基因的功能奠定了基础。

补肾中药对肾虚骨质疏松症大鼠骨、肾、下丘脑组织中Smurf1/Smurf2的mRNA表达影响

目的:探讨摘除卵巢致肾虚骨质疏松症的病理机制,并研究补肾中药防治疗效及其作用机制。方法:摘除雌性大鼠双侧卵巢的方法复制肾虚骨质疏松症模型,采用具有补肾壮骨益精作用的补肾中药(高、低剂量)对实验大鼠治疗12周,以骨疏康颗粒剂、盖天力片作为阳性对照组,正常大鼠、假手术组作为标准对照组,模型大鼠作为空白对照组。用RT-PCR法检测肾虚骨质疏松症大鼠骨、肾、下丘脑组织中Smurf1/Smurf2的m RNA表达。结果:与模空组相比较,补肾中药高、低剂量组可不同程度上调骨、肾组织中Smurf1/Smurf2的m RNA表达水平(P<0.01),并明显下调在下丘脑组织中Smurf1/Smurf2的m RNA表达水平(P<0.01),其中,补肾中药高剂量组效果最佳(P<0.05,P<0.01)。结论:骨质疏松症的发生,可能与骨、肾、下丘脑组织中Smurf1/Smurf2的m RNA表达的异常变化有关;补肾中药通过调控骨、肾、下丘脑组织中Smurf1/Smurf2的m RNA表达,对于骨质疏松症有一定的防治作用。