补阳还五汤大鼠含药血清对肺成纤维细胞TGF-β1/Smad/ERK信号通路的影响

目的:观察补阳还五汤大鼠含药血清对博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺成纤维细胞中Smad3、Smad4、ERK1/2、p-ERK表达的影响。方法:含药血清的制备:24只SPF级SD大鼠,雄性,随机分为3组,即补阳还五汤水煎液组(简称补阳还五汤组,1 g生药/m L),强的松水溶液组(简称阳性组,5 mg/m L)和生理盐水组(简称模型组),每组8只,补阳还五汤组以9.24 g/(kg·d)(临床等效剂量)进行灌胃,阳性组及模型组以1 m L/100 g灌服相应溶液,1次/d,连续灌服7 d,采血前禁食12 h,于末次灌胃1 h后,腹主动脉取血,离心后分离血清,将收集到的补阳还五汤含药血清配制成含药血清浓度分别为5%、10%、20%的培养液备用;体外培养的肺成纤维细胞,分别加入含5%、10%、20%浓度的补阳还五汤药物血清干预,72 h后收集细胞及上清,采用Western blot检测细胞中Smad3、Smad4、ERK1/2、p-ERK蛋白的表达。结果:与模型组比较,20%含药血清组肺成纤维细胞中Smad3蛋白的表达显著减少(P<0.05),阳性组,10%和5%含药血清组Smad3蛋白表达有减少趋势;阳性组和不同浓度含药血清组肺成纤维细胞中Smad4蛋白表达有减少趋势;20%含药血清组肺成纤维细胞中ERK1/2蛋白有显著减少(P<0.05),阳性组,10%和5%补阳还五汤含药血清组肺成纤维细胞中ERK1/2蛋白有减少趋势;阳性组和不同浓度补阳还五汤含药血清组肺成纤维细胞中p-ERK蛋白均有减少趋势。结论:20%补阳还五汤含药血清能够有效抑制TGF-β1/Smad/ERK信号通路中关键细胞因子Smad3、ERK1/2蛋白的表达,从而发挥较好的抗肺纤维化作用。

补骨生髓方对去势骨质疏松大鼠Smad/ERK信号通路的影响

目的 探讨补骨生髓方对去势骨质疏松大鼠Smad/ERK信号通路的影响。 方法 通过采取去性腺法(摘除睾丸法)建立骨质疏松症大鼠实验模型,造模成功后按照实验方案对大鼠进行灌胃治疗,2个月后处死各组大鼠,HE常规染色,并通过免疫组织化学染色的方法检测正常对照组及各中药干预组去势大鼠ERK、p-ERK、Smad4蛋白的表达。 结果 与模型组比较,补骨生髓方高剂量组与中剂量组ERK蛋白的表达差异有统计学意义 ( P <0.05), 而低剂量组与模型组表达差异无统计学意义 ( P >0.05);与模型组比较,补骨生髓方高剂量组与中剂量组p-ERK蛋白的表达差异有统计学意义( P <0.05),而低剂量组与模型组表达差异无统计学意义( P >0.05);与模型组比较,补骨生髓方高剂量组与中剂量组Smad4蛋白表达差异有统计学意义( P <0.05),而低剂量组与模型组比较差异无统计学意义( P >0.05)。 结论 补骨生髓方在一定程度上能够上调ERK、p-ERK、Smad4蛋白的表达水平,其可能是通过调控ERK蛋白磷酸化介导的Smad/ERK信号通路来发挥作用;ERK、Smad4可能是今后治疗骨质疏松的潜在作用靶点,但仍需要进一步开展更深入的研究。

盐酸氨溴索治疗大鼠肺纤维化的作用研究及其对TGF-β/Smad/ERK信号转导通路和Th17/Treg细胞失衡的影响

目的:分析盐酸氨溴索治疗大鼠肺纤维化的作用研究及其对TGF-β/Smad/ERK信号转导通路和Th17/Treg细胞失衡的影响。方法:选取由温州康宁医院实验动物中心提供SPF级Wistar雄性大鼠30只,随机数字表法分成5组:正常组,模型组,氨溴索低、中、高剂量组,每组各10只。采用5 mg/kg博来霉素0. 2 m L气管内灌注成功制备肺纤维化模型,术后第2天起氨溴索低、中、高剂量组大鼠腹腔内注射剂量为10、20、40 mg/kg盐酸氨溴索,正常组和模型组大鼠腹腔注射剂量为3. 33 m L/kg生理盐水,连续注射14 d。HE染色和Masson染色观察各组大鼠组织病理变化,ELISA法检测大鼠成纤维细胞内转化生长因子β1(TGF-β1)含量,实时荧光定量PCR检测TGF-β1蛋白表达状况,Western blot检测成纤维细胞内ERK1/2、p-ERK和Smad3、Smad4、Smad7蛋白表达状况,流式细胞术法检测各组大鼠肺组织内Treg、Th17细胞表达状况。结果:与正常组相比,模型组大鼠成纤维细胞内TGF-β1含量、TGF-β1基因表达量、ERK1/2、p-ERK和Smad3、Smad4蛋白表达、肺组织内Th17、Th17/Treg均升高(均P<0. 05);与模型组相比,氨溴索中、高剂量组大鼠均降低(均P <0. 05)。而模型组大鼠成纤维细胞Smad7蛋白表达、肺组织内Treg表达比率较正常组均降低(均P <0. 05),氨溴索中、高剂量组大鼠较模型组升高(均P <0. 05)。结论:盐酸氨溴索可维持肺纤维化大鼠肺组织Th17/Treg平衡,抑制大鼠TGF-β/Smad/ERK信号转导通路内主要细胞因子信号传递,进而起到抗肺纤维化的作用。

ERK/Smad信号通路影响固本增骨方对去势大鼠骨代谢的研究

目的由ERK/Smad信号通路探讨固本增骨方对骨质疏松模型大鼠的作用机制,揭示其防治骨质疏松症的药理学效应。方法将SPF级Wistar大鼠,分为固本增骨方低、中、高剂量组,雌二醇组、假手术组及模型组,每组10只,固本增骨方低、中、高剂量组分别以固本增骨方6.1 g/(kg·d)、12.2 g/(kg·d)、24.4 g/(kg·d)的剂量进行灌胃,雌二醇组给予0.09 mg/(kg·d)的戊酸雌二醇灌胃,假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃。末次灌胃后心脏采血并取材,通过ELISA检测血清BALP、TRACP-5b水平,DXA检测大鼠右侧股骨近端骨密度,并进行HE染色。运用RT-PCR检测ERK-1、ERK-2、Smad4 mRNA表达,Western Blot检测ERK、p-ERK及Smad4蛋白表达。结果经固本增骨方干预后,与模型组比较,中、高剂量可提高骨密度,骨小梁形态明显改善,血清BALPBGP水平,ERK-1、ERK-2、Smad4 mRNA显著增加,ERK、p-ERK及Smad4蛋白表达显著上升(P<0.05),血清TRACP水平显著降低(P<0.05)。结论固本增骨方可改善绝经后骨质疏松模型大鼠的骨代谢,提高骨密度,可能与激活ERK/Smad信号通路促进成骨分化有关。

TGF-β_1介导的Smads与ERK通路在肺纤维化中的作用及相互关系

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是体内四大信号转导系统之一,已发现p38、ERK5/BMK1、ERK及JNK/SAPK4个亚族。它参与介导生长、发育、分裂、分化、死亡及细胞间功能同步等多种细胞过程,其中ERK通路在肺成纤维细胞(FB)增殖过程中起着非常重要的作用。在肺纤维化(pulmonaryfibrosis)的进程中,转化生长因子β-1(TGF-β1)介导的Sma-andMAD-related(Smad)与ERK通路,通过对FB等细胞的作用、对多种炎症因子生成的调控以及促进转录因子活化等机制来调节纤维化过程的发生发展。该文就Smads和ERK通路在肺纤维化发病中的作用及两条通路之间的相互关系作一综述。

和解利湿方对酒精性慢性胰腺炎大鼠胰腺纤维化及TGF-β/Smad/ERK信号通路的影响

目的:探讨和解利湿方对酒精性慢性胰腺炎(ACP)大鼠胰腺纤维化及TGF-β/Smad/ERK信号通路的影响。方法:Lieber-DeCarli酒精流质饮食联合尾静脉注射脂多糖(LPS)制备大鼠ACP模型。以不同浓度(2.170、1.085、0.543g/mL)的和解利湿方治疗4周后,采用HE和天狼猩红染色观察胰组织病理变化,碱水解法检测胰腺组织羟脯氨酸(HYP)含量变化,Western Blot法检测α-SMA、FN及TGF-β/Smad/ERK信号通路蛋白的表达。结果:与模型组比较,高剂量的和解利湿方显著减轻大鼠ACP纤维化病变;减少HPY含量;减少α-SMA,FN,TGF-β1,Smad2、3,P-Smad 2、3,ERK1以及P-ERK1/2的表达。结论:高剂量的和解利湿方对ACP胰腺纤维化可能有一定的治疗作用,其机制可能与调节胰腺组织TGF-β/Smad/ERK信号通路蛋白的表达和抑制其通路蛋白活化有关。

ERK和Smad通路在TGF-β_1抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的:探讨ERK通路是否参与TGF-β/Smad通路诱导的血管平滑肌细胞增殖及可能的分子机制。方法:原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,细胞分4组:(1)对照组;(2)TGF-β1组;(3)ERK阻断剂(PD98059)组;(4)TGF-β1+ERK阻断剂(PD98059)组。MTT法测细胞的增殖活性,Western blotting法检测VSMCs中细胞内核增殖抗原(PCNA)、Smad2/3、ERK1/2、Smad7蛋白表达及相关磷酸化蛋白含量,RT-PCR方法测VSMCs中Smad2、3、7mRNA的表达。结果:(1)各组PCNA蛋白表达和MTT法测得A值均低于对照组(P<0.05),TGF-β1+ERK阻断剂组与TGF-β1组相比无显著差异。(2)与对照组相比,TGF-β1组p-Smad2/3、p-ERK1/2蛋白含量和Smad7蛋白表达增高(P<0.05),ERK阻断剂组则明显降低(P<0.05);与TGF-β1组比,TGF-β1+ERK阻断剂组降低(P<0.05)。各组间Smad2/3、ERK1/2蛋白表达无显著差异。(3)与对照组相比,TGF-β1组Smad7 mRNA表达增高(P<0.05),ERK阻断剂组和TGF-β1+ERK阻断剂组降低(P<0.05);与TGF-β1组比,TGF-β1+ERK阻断剂组表达降低(P<0.05)。各组内VSMCs的Smad2、Smad3 mRNA表达无显著差异。结论:(1)TGF-β1诱导的Smad2/3蛋白磷酸化依赖ERK通路激活,但对TGF-β1的抑制平滑肌细胞增殖的作用无影响,可能有其它信号通路参与此过程。(2)ERK通路可通过蛋白和mRNA水平促进Smad7表达,反过来其又可促进ERK通路激活。(3)ERK通路对Smad2/3蛋白和mRNA水平无影响。

灯盏花素通过调控TGF-β1介导的Smad和ERK通路干预肾纤维化大鼠的作用机制研究

目的 基于转化生长因子(TGF)-β1介导的Smad和ERK通路探讨灯盏花素对肾纤维化大鼠的干预作用及机制。方法 将60只雄性SD大鼠随机为正常组、模型组、秋水仙碱组(0.45 mg·kg^(-1))及灯盏花素低(5.5 mg·kg^(-1))、中(11 mg·kg^(-1))、高(22 mg·kg^(-1))剂量组,每组10只。采用灌胃腺嘌呤的方式建立肾纤维化模型,连续30 d。第31天开始给药干预,每日1次,连续30 d。采用分光光度法检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平及BUN/Cr值;测定肾脏系数;采用HE染色法观察肾脏病理组织形态;采用免疫组化法检测肾脏组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、ERK1和ERK2蛋白水平;采用RT-PCR法检测肾脏组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、ERK1和ERK2 mRNA水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠肾脏系数及血清Cr、BUN水平明显升高(P<0.05),BUN/Cr值明显减小(P<0.05);肾脏出现纤维化病变;肾脏组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、ERK1和ERK2蛋白及mRNA水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,灯盏花素低、中、高剂量能明显降低大鼠肾脏系数及血清Cr、BUN水平(P<0.05),增加BUN/Cr值(P<0.05);改善肾脏纤维化病变;降低肾脏组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、ERK1和ERK2的蛋白及mRNA水平(P<0.05)。结论 灯盏花素通过抑制TGF-β1介导的Smad和ERK通路来实现对肾纤维化大鼠的保护作用。

左归丸含药血清通过ERK/Smads信号通路干预MC3T3-E1细胞的功能基因表达

目的研究ERK1/2信号通路在左归丸含药血清调控MC3T3-E1细胞基因表达中的作用。方法以倍美力为阳性对照药,对SD♀大鼠灌服高、中、低剂量的左归丸混悬液,d7腹主动脉取血分离含药血清。采用MTT法检测左归丸含药血清和PD98059对MC3T3-E1细胞增殖作用的影响,采用Western blot法检测ERK1/2蛋白的磷酸化水平及TGF-β1、Smad4蛋白表达,采用Real Time RT-PCR法检测Cbfα1、COLⅠmRNA表达。结果左归丸含药血清和倍美力能促进MC3T3-E1细胞增殖,诱导ERK1/2蛋白的磷酸化,促进TGF-β1、Smad4蛋白分泌,上调其Cbfα1、COLⅠmRNA表达;加入PD98059后MC3T3-E1细胞增殖下降、ERK1/2蛋白的磷酸化水平降低、TGF-β1蛋白表达进一步升高、Smad4蛋白表达降低、Cbfα1、COLⅠmRNA表达下调。结论左归丸能有效促进成骨细胞增殖和分化;左归丸可能是通过发挥雌激素样作用调控了ERK/Smads信号通路,从而达到防治骨质疏松的目的。

miR-195在宫腔粘连组织中的表达及其与TGF-β1/Smads、FGF2/FGFR1/ERK通路的关系

目的:探讨miR-195在宫腔粘连(IUA)组织中的表达及其与TGF-β1/Smads、FGF2/FGFR1/ERK通路的关系。方法:选取2017年9月~2019年2月在本院接受宫腔镜治疗的IUA患者118例作为IUA组,同期在本院进行宫腔镜下诊刮的功能失调性子宫出血患者80例作为对照组。比较两组宫腔镜所得组织中miR-195及转化生长因子-β1(TGF-β1)/信号传导蛋白(Smads)、成纤维细胞生长因子(FGF2)/成纤维细胞生长因子受体(FGFR1)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路相关分子表达量的差异,采用Pearson检验评估IUA患者宫腔粘连组织中miR-195表达量与TGF-β1/Smads、FGF2/FGFR1/ERK通路的相关性。结果:IUA组中miR-195的表达量高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。IUA组中TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA的表达量均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);IUA组中FGF2、FGFR1、ERKmRNA的表达量高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Pearson检验发现,IUA组中miR-195表达量与TGF-β1/Smads通路相关分子TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA的表达量呈正相关,与FGF2/FGFR1/ERK通路相关分子FGF2、FGFR1、ERK mRNA的表达量呈正相关(P<0.05)。结论:miR-195在IUA病灶组织中高表达,可能通过激活TGF-β1/Smads、FGF2/FGFR1/ERK信号通路促进病情进展。

Inhibitory effects of oxyresveratrol on ERK and Smad1/2 phosphorylation and HSC activation in preventing carbon tetrachloride-induced rat liver fibrosis

Oxyresveratrol(ORes,trans-2,4,3′,5′-tetrahydroxy stilbene)naturally exists in mulberry,grapes,peanuts and other plants.It belongs to stilbene polyphenolic family and has an extra hydroxyl group at 2-position comparing with resveratrol(Res).Hence,ORes has stronger antioxidant activity than resveratrol.In present study,we employed a rat hepatic fibrosis model induced by carbon tetrachloride(CCl_(4))and administrated ORes via gavage feeding to study the protective effects and potential mechanisms of ORes against hepatic fibrosis.We demonstrated that rat liver oxidative damage induced by CCl_(4)was significantly alleviated after ORes feeding.Furthermore,the mRNA transcription levels ofα-smooth muscle actinn(˛-SMA),desmin,and two MMPs(MMP2 and MMP9)were reduced and the expression levels of transforming growth factorβ1(TGF-β1),p-small mother against decapen-taplegic protein(Smad)1/2 and p-extracellular signal-regulated kinases(ERK)1/2 in the liver tissue down-regulated dramatically.In a parallel study with Res,ORes showed more efficacious protective effect than Res against rat liver fibrosis,which is attributed to extended conjugation system due to the extra hydroxyl group at 2-position on ORes making it more electron-rich and susceptible to oxidation than Res.Therefore,dietary consumption of mulberry and other fruits containing ORes may be beneficial in the prevention of liver fibrosis.

MIF通过调控ERK/MAPK及TGF-β1/Smads通路影响瘢痕成纤维细胞活力和凋亡

目的:探究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)是否通过调控细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路及转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads通路影响瘢痕成纤维细胞的活力和凋亡。方法:收集郑州大学附属儿童医院烧伤整形科与河南省胸科医院胸外科手术切除的6例瘢痕疙瘩组织和对应正常皮肤组织,RT-qPCR和Western blot检测组织中MIF的mRNA和蛋白水平。瘢痕疙瘩组织利用组织块培养法提取成纤维细胞,实验分为对照组、空载体组、MIF过表达组、siRNA阴性对照(NC)组和MIF干扰组。除对照组外,其余各组用LipofectamineTM2000分别转染p-EGFP-N1、p-EGFP-N1-MIF、siRNA NC和MIF siRNA(均4μg),置于37℃、CO2培养箱中转染6 h,更换为含10%胎牛血清的DMEM培养液继续培养。继续培养12、24、48、72和96 h,MTT法检测细胞活力;培养48 h,RT-qPCR和Western blot检测细胞中MIF的mRNA和蛋白水平,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7、ERK、磷酸化ERK(p-ERK)、p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)蛋白水平。结果:与正常皮肤组织相比,瘢痕疙瘩组织中MIF的mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。转染12 h,与对照组、空载体组和阴性对照组相比,MIF过表达组细胞活力升高(P<0.05);处理24、48、72和96 h,与对照组、空载体组和阴性对照组相比,MIF过表达组细胞活力升高(P<0.05),MIF干扰组细胞活力降低(P<0.05);随着处理时间的延长,MIF过表达组细胞活力逐渐升高(P<0.05),MIF干扰组细胞活力逐渐降低(P<0.05)。转染48 h,与对照组、空载体组和阴性对照组相比,MIF过表达组细胞中MIF的mRNA和蛋白水平及Bcl-2、TGF-β1、Smad2、Smad3、p-ERK和p-p38 MAPK蛋白水平升高(P<0.05),细胞凋亡率及Bax、cleaved caspase-3和Smad7蛋白水平降低(P<0.05);MIF干扰组细胞中MIF的mRNA和蛋白水平及Bcl-2、TGF-β1、Smad2、Smad3、pERK和p-p38 MAPK蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率及Bax、cleaved caspase-3和Smad7蛋白水平升高(P<0.05)。结论:MIF在瘢痕疙瘩组织中高表达,沉默MIF可抑制病理性瘢痕ERK/MAPK及TGF-β1/Smad2/3通路中相关因子的表达,进而促进细胞凋亡,抑制成纤维细胞过度生长,而过表达后的作用相反。

ERK参与调节人脐动脉平滑肌细胞内SMAD2/3蛋白及其mRNA的表达

目的了解ERK信号转导通路对人脐动脉平滑肌细胞(hUASMC)内SMAD2/3蛋白及其mRNA表达的影响。方法原代培养hUASMC,实验分四组:1)对照组,2)PDGF组,3)ERK阻断剂组,4)PDGF+ERK阻断剂组。分别用免疫细胞化学和RT-PCR法测hUASMC内磷酸化SMAD2/3蛋白和SMAD2/3mRNA的表达。结果1)与对照组相比,PDGF组hUASMC细胞内磷酸化SMAD2/3蛋白的表达增强(P<0·01);2)四组hUASMC细胞内SMAD2/3mRNA的表达无明显差异。结论在hUASMC中,ERK通路可促进SMAD2/3蛋白的磷酸化,但对SMAD2/3mRNA的表达没有影响。

胃癌细胞中SMAD-4与TGF-β通过抑制RAS/ERK途径促进PTEN表达(英文)

SMAD-4在肿瘤抑制方面有重要作用,但它在肿瘤发生中的作用及其与细胞周期进程中的一种关键调控因子——PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10)的关系仍存在争议.分别在人胚肾细胞(293T)及人胃癌细胞(MGC-803)中研究SMAD-4及TGF-β信号通路对PTEN基因表达的影响.结果发现,在293T细胞中,SMAD-4与TGF-β促进PTEN表达,而MGC-803细胞中,SMAD-4与TGF-β抑制PTEN转录.进一步研究发现,胃癌细胞中,SMAD-4与转化生长因子β(TGF-β)对PTEN的抑制可被PD98059(MEK抑制剂)解除.此外,SMAD-4的核转移也明显促进PTEN表达,并且PD98059存在下,SMAD-4与TGF-β协同刺激可促进胃癌细胞凋亡.综上,实验发现,SMAD-4作为一种co-Smad蛋白,通过TGF-β信号途径影响PTEN表达.

TGF-β1介导的Smad和ERK信号通路在肾纤维化中的研究进展

肾纤维化的发生发展受到生长因子、细胞因子、趋化因子等多种因素的调控。TGF-β1是目前已知的最重要的致纤维化因子。TGF-β1/Smad和TGF-β1/ERK信号通路是传导TGF-β1的主要信号通路,在肾纤维化中发挥着重要作用。因此,本文结合最新研究成果就TGF-β1/Smad和TGF-β1/ERK信号通路在肾纤维化中的作用及其二者之间的相互关系进行综述。

A型肉毒毒素对瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β/Smad通路和ERK通路表达的影响

目的:探讨A型肉毒毒素对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(Human keloid fibroblasts,HKF)生物学行为和TGF-β/Smad信号通路和ERK信号通路表达的影响。方法:在HKF培养过程中加入A型肉毒毒素进行干扰,观察A型肉毒毒素对瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β/Smad通路和ERK通路相关分子的变化及细胞增殖、侵袭、凋亡情况。结果:A型肉毒毒素可以抑制HKF增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,并且明显抑制Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白、α-SMA和CTGF基因的表达水平,上调IFN-γ、TGF-β3基因的表达水平。上调Smad7基因和蛋白的表达,下调VEGF基因表达,明显抑制p-Smad2和p-Smad3蛋白表达水平,并且抑制P-ERK1/2蛋白表达。以上生物学变化均且呈药物浓度依赖性。结论:A型肉毒毒素可抑制HKF的增殖、侵袭、血管生成和胶原积累,这些效应与TGF-β/Smad和ERK1/2信号通路有关。

骨痹散通过调节TGF-β/Smad信号通路减轻兔膝骨关节炎损伤

目的探讨骨痹散对骨关节炎的治疗效果及其机制。方法将新西兰大白兔分为空白组、模型组、阳性组(双氯芬酸钾凝胶)与骨痹散组,每组6只,使用改良Hulth法构建兔膝骨关节炎模型,造模8周后给药4周。对软骨组织进行甲苯胺蓝染色后测量软骨厚度,番红-O染色后进行Mankin评分;使用Tunel荧光染色法检测软骨组织中软骨细胞的凋亡情况;使用免疫组织化学法检测软骨组织中ColⅡ与Col X蛋白的表达水平;使用Western blot法检测软骨组织中Bax、cleaved-caspase-3、p-ERK、p-p38、p-Smad2、p-Smad3、TGF-β1的蛋白表达水平。结果与空白组相比,模型组软骨组织厚度减少,Mankin评分升高,软骨细胞凋亡率升高,ColⅡ、p-Smad2、p-Smad3、TGF-β1蛋白表达水平减低,Col X、Bax、cleaved-caspase-3、p-ERK、p-p38蛋白表达升高。与模型组相比,阳性组与骨痹散组软骨组织厚度增加,Mankin评分降低,软骨细胞凋亡率降低,ColⅡ、p-Smad2、p-Smad3、TGF-β1蛋白表达水平升高,Col X、Bax、cleaved-caspase-3、p-ERK、p-p38蛋白表达降低。结论骨痹散对骨关节炎具有良好的治疗效果,能通过减少软骨细胞凋亡,稳定软骨组织结构,促进软骨组织损伤后再生与修复,其机制可能与抑制ERK/P38通路、激活TGF-β/Smad通路有关。

松果菊苷通过激活ERK/BMP-2信号通路促进大鼠的成骨细胞增殖观察

目的考察松果菊苷对大鼠成骨细胞增殖的影响及作用机制。方法将不同浓度的松果菊苷(0.01,0.1,1.0,10.0,100 nmol/L)及MAPK/ERK信号通路抑制剂PD98059(20μmol/L)与成骨细胞共培养12,24,36,48,60 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况。酶联免疫吸附法(ELISA)和q RT-PCR法检测细胞上清中和成骨细胞中骨钙素(BGP)和骨形态发生蛋白(BMP-2)的表达水平。Western blotting检测成骨细胞中Smad4、ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白表达水平。结果松果菊苷能够促进大鼠成骨细胞的增殖,而且能诱导ERK的磷酸化从而激活MAPK/ERK信号通路,并提高成骨细胞中BMP-2和Smad4的表达而激活BMP/Smad信号通路。加入PD98059后,松果菊苷诱导的BMP-2和Smad4表达及成骨细胞增殖均受到抑制。结论松果菊苷可通过激活ERK/BMP-2信号通路促进大鼠的成骨细胞增殖。

转录因子的入核转运调控机制

转录因子(transcription factors,TFs)参与细胞内DNA转录的起始与调控,直接或间接响应信号通路转导。其中,部分转录因子存在细胞核质定位的改变,在细胞质与细胞核中发挥不同的功能或活性。目前已发现,Smad,细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK),Yes相关蛋白(yes-associated protein,YAP),β-联蛋白(β-catenin),信号传导与转录激活蛋白(signal transducer and activator of transcription,STAT)等转录因子存在细胞核质定位的改变。各转录因子通过不同的核定位信号肽(nuclear localization signal,NLS)受经典或非经典入核转运机制调控,进而影响其功能与活性。转录因子入核转运调控作为信号通路调控基因表达的重要方式之一,诸多转录因子入核转运机制仍不清楚。同时,部分转录因子被报道受不同的入核转运机制调控,各入核转运调控机制之间的关系尚不清楚。本文主要针对Smad,ERK,YAP,β-联蛋白,STAT五类转录因子NLS,入核转运机制研究及其对信号通路的影响进行综述,并对转录因子入核转运机制中存在的问题进行讨论,以期为后续其他转录因子入核转运机制研究提供参考。