沉默SMAD 家族成员3( SMAD3) 促进类风湿性关节炎巨噬细胞M2 极化和SMAD7 表达

目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默SMAD家族成员3(SMAD3)对类风湿性关节炎(RA)巨噬细胞极化及转化生长因子β1(TGF-β1)/SMAD家族信号通路的影响。方法以巨噬细胞与类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)共培养为细胞模型,TGF-β1刺激巨噬细胞后,将SMAD3特异性siRNA(si-SMAD3)和阴性对照siRNA(si-NC)转染TranswellTM小室共培养的人RA巨噬细胞,实时荧光定量PCR检测SMAD3 mRNA表达,Western blot法分别检测TGF-β1、SMAD3和SMAD7蛋白的表达;ELISA测定细胞培养上清液中TGF-β1、白细胞介素23(IL-23)的含量;CCK-8法检测细胞增殖情况;TranswellTM小室测定细胞的迁移。结果与模型组和si-NC组相比,沉默SMAD3后,RA巨噬细胞中TGF-β1、SMAD3 mRNA和蛋白表达显著下降,IL-23的分泌明显减少,细胞增殖活性及细胞迁移受到抑制,SMAD7高表达。结论敲低SMAD3促进RA巨噬细胞M2极化及SMAD7表达。

缺血性脑卒中致血管性痴呆患者血清HOXA1 及SMAD3基因表达与认知功能和预后的关系

目的探讨缺血性脑卒中致血管性痴呆(VD)患者血清同源异性盒基因A1(HOXA1)、SMAD家族成员3(SMAD3)基因表达与认知功能和预后的关系研究。方法选择2021年1月—2023年2月辽宁省金秋医院神经内科收治的缺血性脑卒中患者241例为研究对象,根据3个月后是否发生VD分为痴呆组(n=117)和非痴呆组(n=124)。根据痴呆组患者出院3个月后预后功能障碍分为Ⅰ级亚组(n=48)、Ⅱ级亚组(n=43)、Ⅲ级亚组(n=26)。Spearman相关性分析缺血性脑卒中致VD患者血清HOXA1和SMAD3基因表达与简易精神状态量表(MMSE)评分的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清HOXA1和SMAD3基因表达对缺血性脑卒中致VD患者预后功能障碍为Ⅲ级的预测价值。结果与非痴呆组比较,痴呆组血清HOXA1和SMAD3基因表达均明显升高(t=30.176、16.855,P<0.001);缺血性脑卒中致VD患者轻度亚组、中度亚组、重度亚组血清HOXA1和SMAD3基因表达依次升高,且差异均有统计学意义(F=308.625、153.360,P<0.001);与预后功能障碍Ⅰ~Ⅱ级亚组比较,Ⅲ级亚组患者血清HOXA1和SMAD3基因表达均明显升高(t=8.274、9.396,P<0.01);Spearman相关性分析结果显示,缺血性脑卒中致VD患者血清HOXA1和SMAD3基因表达与MMSE评分均呈显著负相关(r=-0.564、-0.518,P<0.01);血清HOXA1、SMAD3及二者联合预测缺血性脑卒中致VD患者Ⅲ级预后功能障碍的AUC分别为0.772、0.831、0.899,二者联合的AUC大于单项指标(Z/P=2.001/0.045、2.116/0.034)。结论HOXA1和SMAD3基因表达与缺血性脑卒中所致VD患者认知功能和预后密切相关,且血清HOXA1和SMAD3基因表达在缺血性脑卒中所致VD患者预后功能障碍的预测中具有较高的应用价值。

三七总皂苷对肝纤维化小鼠转化生长因子β1及重组人SMAD家族成员3的调控作用研究

目的观察三七总皂苷对肝纤维化小鼠肝转化生长因子-β1(TGF-β1)及重组人SMAD家族成员3(smad3)表达的影响。方法小鼠皮下注射四氯化碳构建肝纤维化模型。将模型小鼠随机分为模型组和实验组,每组15只;另取15只健康小鼠作为空白组。空白组和模型组均给予5 mL·kg^(-1)橄榄油,皮下注射,每3天1次;实验组按400 mg·kg^(-1)的剂量腹腔灌注30 g·L^(-1)三七总皂苷,qd。3组小鼠均连续给药8周。用全自动生化分析仪测定小鼠血清中的总胆固醇(TC)和三酰甘油(TG),用聚合酶链反应检测肝组织TGF-β1和smad3基因的表达水平。结果给药8周后,实验组、模型组和空白组的TG分别为(1.11±0.17),(4.02±0.33)和(0.83±0.06)mmol·L^(-1),TC分别为(2.20±0.99),(3.94±0.44)和(1.57±0.57)mmol·L^(-1),TGF-β1 mRNA表达量分别为1.05±0.46,3.97±0.14和1.00±0,smad3 mRNA表达量分别为1.15±0.48,4.27±0.23和1.00±0,实验组上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论三七总皂苷对肝纤维化的肝组织有保护作用,这可能与三七总皂苷显著降低肝组织TGF-β1及smad3表达有关。

微RNA-196a-1-3p靶向Ras响应元件结合蛋白调控胆管癌细胞增殖的机制研究

目的探讨转化生长因子β(TGF-β)调控人胆管癌细胞系RBE细胞增殖的关键微RNA(miRNA)及其潜在的机制。方法该研究起止时间为2020年1月至2022年1月。磷酸盐缓冲液(PBS)处理为对照组,TGF-β处理为TGF-β组,TGF-β抗体处理为抗体组。检测三组RBE细胞的增殖水平。miRNA高通量测序检测三组RBE细胞的miRNA调控变化,并进行miRNA模拟物过表达筛选鉴定受TGF-β调控的影响RBE细胞增殖水平的关键miRNA。miRNA数据库(miRDB)在线分析miRNA的潜在底物,并通过小干扰RNA(siRNA)敲低筛选鉴定影响RBE细胞增殖水平的关键底物。结果相比于对照组,TGF-β组RBE细胞的增殖水平上升(1.62±0.07比2.35±0.09,P<0.05),抗体组RBE细胞的增殖水平下降(1.62±0.07比1.11±0.08,P<0.05)。过表达微RNA-196a-1-3p(miR-196a-1-3p)时,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。敲低Ras响应元件结合蛋白(RREB1)时,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。过表达miR-196a-1-3p后,RBE细胞中RREB1的信使RNA(mRNA)和蛋白水平下降(P<0.05)。敲低miR-196a-1-3p后,RBE细胞中RREB1与SMAD家族蛋白3(SMAD3)的相互作用增加。敲低SMAD3后,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。与仅敲低SMAD3相比,敲低SMAD3的同时过表达RREB1的RBE细胞的增殖水平无显著变化,并且同时敲低SMAD3和miR-196a-1-3p的RBE细胞的增殖水平无显著变化。结论TGF-β能够通过miR-196a-1-3p/RREB1/SMAD3轴促进RBE细胞增殖;miR-196a-1-3p和RREB1可作为潜在的治疗胆管癌的靶标,为针对该靶标的新药研发奠定了基础。

基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨金合欢素对急性脑梗死大鼠神经功能的保护作用

目的:探讨金合欢素对急性脑梗死大鼠神经功能的保护作用及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad家族成员3(Smad3)信号通路的影响。方法:100只SD大鼠随机分为5组:正常对照组、模型组、丁苯酞组(20.0 mg·kg^-1)、金合欢素低、高剂量组(40.0,80.0 mg·kg^-1),每组20只。除正常对照组外,其余各组建立急性脑梗死模型。建模成功后,丁苯酞组、金合欢素低、高剂量组给予相应药物灌胃,每天1次,持续给予7 d,正常对照组、模型组给予等体积的生理盐水。实验结束后,测定大鼠神经功能评分,HE染色观察大鼠脑组织结构病理改变,同时实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法、蛋白质免疫印迹(Western Blot)法测定大鼠脑TGF-β1、Smad3 mRNA及蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组逃避潜伏期时间、TGF-β1、Smad3 mRNA及蛋白表达水平显著升高,经过原平台位置次数、原平台象限停留时间显著降低(P<0.05);与模型组比较,丁苯酞组、金合欢素低、高剂量组逃避潜伏期时间、TGF-β1、Smad3 mRNA及蛋白表达水平显著降低,经过原平台位置次数、原平台象限停留时间显著升高(P<0.05),金合欢素各组呈剂量依赖性(P<0.05);金合欢素低剂量组与丁苯酞组比较差异有统计学意义(P<0.05)。模型组脑组织见大量坏死神经元,且神经细胞排列松散,细胞间隙增宽,呈缺血样病理改变,空泡样变性坏死数量较多;丁苯酞组和金合欢素高剂量组脑组织结构病理得到明显改善。结论:金合欢素对急性脑梗死大鼠表现出较强的神经保护作用;其机制可能与金合欢素通过抑制TGF-β1、Smad3 mRNA和蛋白的表达,进而抑制TGF-β1/Smad3信号通路有关。

基于TGF-β_(1)/Smad3信号通路探讨参附注射液对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用

目的 基于转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))/Smad家族成员3(Smad3)信号通路探讨参附注射液对缺血性脑卒中(IS)大鼠的神经保护作用机制。方法 将48只无特定病原体(SPF)级SD雄性大鼠随机分为Sham组、Vehicle组、参附注射液组、TGF-β_(1)组。采用改良Longa线栓法构建Vehicle组、参附注射液组、TGF-β_(1)组大鼠永久性中动脉栓塞模型,分别腹腔注射相应剂量的生理盐水、参附注射液和TGF-β_(1),Sham组只插入线栓不结扎其余操作同Vehicle组。建模14 d后进行神经功能缺损评分;采用激光散斑成像观察大鼠大脑皮层血流变化;伊文思蓝染色检测血脑屏障通透性;2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测脑梗死面积;尼氏染色观察脑组织神经元损伤程度;原位末端凋亡检测(TUNEL)法检测细胞凋亡;检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测TGF-β_(1)、p-Smad3、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果 与Sham组比较,Vehicle组大鼠大脑皮层血流灌注量、SOD水平、Bcl-2蛋白水平减少,神经功能损伤评分、脑梗死面积、血脑屏障通透性、细胞凋亡、神经元损伤、炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量、MDA水平及TGF-β_(1)、p-Smad3水平、Bax蛋白水平增加(P<0.05);与Vehicle组比较,参附注射液组和TGF-β_(1)组大鼠大脑皮层血流灌注量、SOD水平、TGF-β_(1)、p-Smad3水平、Bcl-2蛋白水平增加,神经功能损伤评分、脑梗死面积、血脑屏障通透性、细胞凋亡、神经元损伤、炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达、MDA水平、Bax蛋白水平降低(P<0.05)。结论 参附注射液可改善脑缺血大鼠血流灌注,缩小脑梗死体积,抑制机体氧化应激、炎症反应及细胞凋亡,可能通过激活TGF-β_(1)/Smad3信号通路发挥对IS大鼠神经细胞的保护作用。

MiR-23b通过调节TGF-β1/SMAD3信号通路对博莱霉素所致大鼠肺纤维化及自噬水平的影响

目的:探究miR-23b通过调节转化生长因子-β1(transforming growth factorβ,TGF-β1)/SMAD同源物3(mothers against decapentaplegic homolog 3,SMAD3)信号通路对博莱霉素(bleomycin,BLM)所致大鼠肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)及自噬水平的影响。方法:采用BLM诱导大鼠PF模型,并分为对照组、PF组、agomiR-阴性对照(negative control,NC)组和agomiR-23b组。通过生物信息学预测及双荧光素酶实验验证miR-23b对SMAD3的调控作用;用苏木精-伊红(hematoxylineosin stain,HE)和Masson染色观察大鼠肺组织病理学改变,免疫组织化学染色观察大鼠肺组织Ⅰ型胶原蛋白(collagen-Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、酵母自噬相关基因6(autophagy related protein 6,ATG6)的哺乳动物同源体(beclin-1)、轻链3-Ⅱ(light chain 3-Ⅱ,LC3-II)的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测肺组织中miR-23b和SMAD3 mRNA的表达,蛋白质印迹法检测肺组织中TGF-β1、SMAD3和SMAD7的蛋白质表达。将人肺成纤维细胞(HFL1)分为对照组、PF组、agomiR-NC组和agomiR-23b组;用RT-qPCR检测各组细胞中miR-23b和SMAD3 mRNA的表达,Transwell小室实验检测各组细胞迁移和侵袭能力,透射电镜观察各组细胞自噬泡的形成。结果:与对照组相比,PF组和agomiR-NC组PF程度更严重;肺组织SMAD3 mRNA以及collagen-Ⅰ、α-SMA、TGF-β1和SMAD3蛋白表达水平明显升高,miR-23b以及beclin-1、LC3-Ⅱ和SMAD7蛋白表达水平明显降低;HFL1细胞SMAD3 mRNA表达水平以及迁移和侵袭能力提高,自噬活性降低(均P<0.05)。与PF组相比,agomiR-23b组大鼠PF程度得到有效改善;肺组织collagen-Ⅰ、α-SMA、TGF-β1和SMAD3蛋白表达水平明显降低,beclin-1、LC3-Ⅱ和SMAD7蛋白表达水平明显升高;HFL1细胞迁移、侵袭能力降低,自噬活性增强(P<0.05)。结论:MiR-23b通过靶向抑制SMAD3的表达抑制肺成纤维细胞的迁移,降低PF程度,并提高自噬活性;其机制可能与调控TGF-β1/SMAD3通路有关。

甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺组织RORγt/FOXP3及TGF-β、Smad3的影响

目的:探讨甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎(AIT)大鼠保护作用的机制。方法:制作AIT大鼠模型,随机分为模型组、甲炎康泰组,每组10只。另选取10只为正常组。灌胃干预8周后,ELISA检测大鼠血清中甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)浓度,甲状腺组织进行HE染色、实时荧光定量PCR检测和免疫组化检测。结果:与模型组比较,甲炎康泰组TPOAb浓度显著降低(P<0.05),淋巴细胞浸润减轻;甲炎康泰组大鼠甲状腺组织中维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05),叉头翼状螺旋转录因子P3(FOXP3)、转化生长因子-β(TGF-β)、Smad3 mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.01,P<0.05)。结论:甲炎康泰可能通过增强甲状腺组织中TGF-β、FOXP3以及Smad3的表达和抑制RORγt的表达以缓解AIT的发生发展。

免疫因子表达异常促进宫颈癌微环境免疫失衡

目的评估叉头蛋白3(Fox P3)、趋化因子配体22(CCL22)、肿瘤坏死因子受体超家族成员40(OX40)和SMAD家族成员3(Smad3)在宫颈癌免疫微环境中的调节作用和对肿瘤发生的影响。方法采用qRT-PCR方法检测宫颈癌癌灶、癌旁和正常宫颈组织中Fox P3、CCL22、OX40和Smad3的mRNA表达水平。结果与正常宫颈组织相比,Fox P3和CCL22 mRNA在癌灶(P=0.000,P=0.002)和癌旁(P=0.048,P=0.040)的表达显著升高,两者在高级别鳞癌癌灶(P=0.019,P=0.020)和癌旁(P=0.023,P=0.031)中的表达明显高于低级别鳞癌。OX40和Smad3的mRNA在癌灶中的表达明显低于正常宫颈(P=0.000,P=0.015),两者在高级别鳞癌癌灶(P=0.018,P=0.030)和癌旁(P=0.027,P=0.014)中的表达明显低于低级别鳞癌。在宫颈癌灶和癌旁中,OX40 mRNA与Smad3 mRNA(r=0.384,P=0.002;r=0.288,P=0.023)、Fox P3 mRNA与CCL22 mRNA均呈正相关(r=0.353,P=0.000;r=0.307,P=0.000),CCL22 mRNA与OX40 mRNA呈负相关(r=-0.288,P=0.031;r=-0.263,P=0.037)。Fox P3和CCL22mRNA在HPV阳性的宫颈癌灶(P=0.024,P=0.039)和癌旁(P=0.032,P=0.034)中的表达明显高于阴性组,Smad3在HPV阳性宫颈癌灶中的表达明显低于HPV阴性组(P=0.017)。结论在宫颈癌发生的微环境中,存在免疫因子Fox P3、CCL22、OX40和Smad3的转录表达异常,这种表达偏移可能导致宫颈癌局部OX40和Smad3的正性调节被削弱,而Fox P3和CCL22的免疫抑制作用增强的免疫模式,共同参与促成局部免疫失衡和肿瘤的发生。

湿润烧伤膏干预烧伤模型大鼠创面愈合及α-平滑肌肌动蛋白的表达

背景:湿润烧伤膏能够抑制炎症反应,降低氧化应激水平,加速创面愈合速度,广泛用于治疗烧伤创面、皮肤放射性损伤、糖尿病足病,并取得了显著效果,但对其机制的研究仍处于空白阶段。目的:基于转化生长因子β1/Smad家族成员3信号通路探讨湿润烧伤膏对烧伤模型大鼠创面愈合及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响。方法:将80只SPF级SD雄性大鼠随机分为假烫伤组、模型组、湿润烧伤膏组、转化生长因子β1组,后3组采用圆形烫伤仪(直径为2.5 cm)构建大鼠模型,伤后湿润烧伤膏组创面涂抹湿润烧伤膏,转化生长因子β1组注射转化生长因子β1,假烫伤组、模型组创面涂抹生理盐水。第21天麻醉处死,观察各组大鼠伤后创面愈合情况;采用苏木精-伊红染色观察大鼠创面组织病理学表现;免疫组化染色检测创面组织表皮生长因子受体、α-平滑肌肌动蛋白表达水平;ELISA法检测大鼠血清炎症因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6的表达水平;黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸显色法检测创面组织氧化应激指标超氧化物歧化酶、丙二醛水平;Western-blot检测创面组织转化生长因子β1、磷酸化Smad家族成员3蛋白表达水平。结果与结论:①与假烫伤组相比,模型组大鼠创面愈合率、表皮生长因子受体、α-平滑肌肌动蛋白、超氧化物歧化酶、转化生长因子β1、Smad家族成员3水平显著降低(P<0.05),肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6、丙二醛水平显著升高(P<0.05);②与模型组相比,湿润烧伤膏组和转化生长因子β1组大鼠创面愈合率、表皮生长因子受体、α-平滑肌肌动蛋白、超氧化物歧化酶、转化生长因子β1、磷酸化Smad家族成员3水平显著升高(P<0.05),创面上皮组织基本形成,胶原组织清晰可见;肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6、丙二醛水平显著下降(P<0.05);③而湿润烧伤膏组和转化生长因子β1组上述指标相比差异无显著性意义(P>0.05);④提示湿润烧伤膏可通过激活转化生长因子β1/Smad家族成员3信号通路,降低烧伤模型大鼠氧化应激水平和炎症程度,增加α-平滑肌肌动蛋白表达水平,从而促进创面愈合。