鼻咽癌患者血清SMAD家族成员4、组织多肽特异性抗原表达水平及与临床特征和预后的关系

目的探讨鼻咽癌(NPC)患者血清SMAD家族成员4(SMAD4)、组织多肽特异性抗原(TPS)表达水平及与临床特征和预后的关系。方法选取43例NPC患者作为NPC组,40例健康体检者作为健康组,比较两组受试者血清SMAD4、TPS水平,分析SMAD4、TPS与NPC患者临床特征的关系。采用Cox回归模型分析NPC患者预后的影响因素。结果NPC组患者血清SMAD4水平明显低于健康组,TPS水平明显高于健康组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。不同临床分期、颈淋巴结转移情况、颅神经侵犯情况NPC患者血清SMAD4、TPS水平比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Cox回归分析结果显示,有颅神经侵犯、血清SMAD4水平﹤97.43 ng/L、血清TPS水平≥164.44 U/L均为NPC患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.01)。结论NPC患者血清SMAD4呈异常低表达,TPS呈异常高表达,其水平与NPC患者的临床特征有关,且与预后相关。

SMAD家族成员4 shRNA干扰慢病毒构建与分析

目的制备shRNA干扰人SMAD家族成员4(SMAD4)的慢病毒载体(shRNA-SMAD4),为深入研究BMPs/SMAD信号通路奠定基础。方法利用在线干扰设计网页进行干扰引物设计,根据小干扰RNA的设计原则,选取3对针对SMAD4特异性干扰引物而合成。合成的片段连接到慢病毒载体质粒pSIH1-H1,形成pSIH1-H1-shRNA-SMAD4质粒。用PCR及测序对其鉴定,然后与慢病毒包装质粒混匀,由脂质体转染至HEK293T细胞进行包装,产生慢病毒shRNA-SMAD4,并收集上清液感染乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过RT-PCR及Western Blot鉴定重组慢病毒干扰效果。结果(1)shRNA干扰SMAD4特异性引物的获得。(2)pSIH1-H1-shRNA SMAD4质粒经PCR验证和测序后,证实构建成功。(3)shRNA-SMAD4在HEK293T中重组成慢病毒,并成功感染MDA-MB-231。(4)shRNA-SMAD4感染乳腺癌MDA-MB-231细胞后SMAD4的表达降低。结论成功构建shRNA-SMAD4慢病毒载体,并能有效抑制SMAD4表达。

喉鳞癌组织CHD5、E-cadherin、Smad4表达变化及其意义

目的探讨染色质区解旋酶DNA结合蛋白5(CHD5)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Smad家族成员4(Smad4)在喉鳞癌组织中的表达变化及其意义。方法选择喉鳞癌组织及其配对的癌旁正常组织各35例份,采用免疫组化SP法检测两种组织CHD5、E-cadherin、Smad4表达。比较两种组织CHD5、E-cadherin、Smad4阳性表达,分析喉鳞癌组织CHD5、E-cadherin、Smad4阳性表达的关系及其与患者临床病理参数和预后的关系。结果喉鳞癌组织CHD5、E-cadherin、Smad4阳性表达率均低于癌旁正常组织(P均<0.05)。相关分析显示,喉鳞癌组织CHD5阳性表达与Smad4阳性表达呈正相关关系(r=0.810,P<0.05),与E-cadherin阳性表达无相关性(r=-0.263,P>0.05),E-cadherin阳性表达与Smad4阳性表达呈正相关关系(r=0.481,P<0.05)。喉鳞癌组织CHD5阳性表达与淋巴结转移、TNM分期有关,E-cadherin阳性表达与组织分化程度、淋巴结转移有关,Smad4阳性表达与淋巴结转移有关(P均<0.05)。CHD5、E-cadherin、Smad4阳性表达者术后生存时间>3年比例明显高于其阴性表达者(P均<0.05)。结论喉鳞癌组织CHD5、E-cadherin、Smad4低表达,其表达变化与喉鳞癌的恶性生物学行为和患者预后有关。

绵羊INHBB、SMAD4和FGF18基因的双荧光素酶载体构建及其与miR-370-3p的靶向验证

为研究绵羊输卵管功能相关的oar-miR-370-3p与抑制素亚基βB(inhibin subunit beta B,INHBB)、SMAD家族成员4(SMAD family member 4,SMAD4)和成纤维细胞生长因子18(fibroblast growth factor 18,FGF18)基因之间的靶向关系,本研究对多个物种(绵羊、人、小鼠、大鼠、猕猴、豚鼠和兔)中miR-370-3p的序列进行了比对,利用RNAhybrid程序预测绵羊miR-370-3p与INHBB、SMAD4和FGF18基因的3′UTR可能存在的结合位点,随后分别构建INHBB、SMAD4和FGF18基因3′UTR的野生型和突变型双荧光素酶载体,并将其与miR-370-3p mimics、mimics NC共转染至HEK293T细胞,检测双荧光素酶活性。结果表明,绵羊miR-370-3p序列与其他6个物种不同,但具有一定的保守性。RNAhybrid程序预测到oar-miR-370-3p与INHBB、SMAD4和FGF18基因的3′UTR存在结合位点。PCR扩增结果和测序结果表明,INHBB、SMAD4和FGF18基因3′UTR的野生型和突变型载体构建成功。共转染INHBB、SMAD4和FGF18野生型载体和miR-370-3p mimics的双荧光素酶活性极显著或显著低于相应的对照组(P<0.01;P<0.05);而3种突变型载体和miR-370-3p mimics共转染的双荧光素酶活性均与相应的对照组无显著差异(P>0.05)。表明INHBB、SMAD4和FGF18基因的3′UTR区域均能与miR-370-3p结合并抑制双荧光素酶活性,验证了INHBB、SMAD4和FGF18基因均是miR-370-3p的靶基因,为进一步研究oar-miR-370-3p影响绵羊输卵管功能与绵羊繁殖力的分子机制提供依据。

微小RNA-301a对肺癌细胞上皮间质转化和Smad4表达的影响

目的探讨微小RNA-301a(miR-301a)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞上皮间质转化(EMT)和SMAD家族成员4(Smad4)表达的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测30对NSCLC组织和癌旁组织的miR-301a和Smad4水平;脂质体法向A549细胞转染miR-301a抑制剂(抑制组)或阴性对照(NC组),另以未行转染的细胞为对照组,采用QPCR、活细胞计数(CCK-8)、划痕实验、Transwell小室实验和Western blotting检测miR-301a水平、增殖活力、划痕愈合率、穿膜细胞数和Smad4水平,QPCR和Western blotting检测EMT相关标志物[上皮型钙黏蛋白(E-cad)、神经型钙黏蛋白(N-cad)和波形蛋白(Vim)]的水平,生物信息学预测和双荧光素酶报告验证miR-301a和Smad4间的靶向关系。结果NSCLC组织的miR-301a水平为2.157±0.597,高于癌旁组织的1.023±0.229,癌组织的Smad4水平为0.648±0.162,低于癌旁组织的1.159±0.164,差异均有统计学意义(P<0.05)。抑制组的miR-301a水平、划痕愈合率和穿膜细胞数分别为0.166±0.075、(31.518±4.306)%和(89.744±15.060)个,均低于对照组的1.032±0.097、(52.461±6.373)%和(139.339±17.871)个及NC组的0.981±0.089、(54.791±4.528)%和(145.243±19.782)个,而抑制组的Smad4水平为0.712±0.121,高于对照组的0.428±0.163和NC组的0.390±0.096,上述差异均有统计学意义(P<0.05)。与其余两组相比,抑制组转染24、48 h的增殖活力及Vim和N-cad水平降低,而E-cad水平升高(P<0.05)。Smad4野生型质粒与miR-301a模拟物共转染A549细胞后,荧光素酶活性下降(P<0.05),而Smad4突变型质粒和miR-301a模拟物共转染后,荧光素酶活性无明显变化(P>0.05)。结论NSCLC中miR-301a高表达且发挥类似癌基因的作用,下调该miRNA水平可抑制增殖和迁移侵袭能力并逆转EMT,可能通过靶向Smad4来发挥作用,有望成为NSCLC诊治的潜在新靶标。

miR-421靶向Smad4促结直肠癌COLO-205细胞凋亡的机制

[目的]探讨miR-421靶向Smad4促进结直肠癌COLO-205细胞凋亡并抑制其增殖、迁移和侵袭的机制。[方法]设COLO-205细胞组、miR-NC组、miR-421 inhibitor组、miR-421 mimics组。MTT法检细胞活力,甲基紫染色测定单克隆数目,流式细胞仪测定凋亡水平,Transwell板测定迁移侵袭水平,RT-PCR法及蛋白印迹法测定miR-421、Smad4 mRNA和蛋白水平。[结果]与COLO-205细胞组、miR-NC组比较,miR-421 inhibitor组细胞凋亡率升高,OD值、存活率、单克隆形成数目、穿膜数、miR-421、Smad4 mRNA、Smad4蛋白降低(P<0.05),miR-421 mimics组细胞凋亡率降低,OD值、存活率、单克隆形成数目、穿膜数、miR-421、Smad4 mRNA、Smad4蛋白升高(P<0.05);与miR-421 inhibitor组比较,miR-421 mimics组细胞凋亡率降低,OD值、存活率、单克隆形成数目、穿膜数、miR-421 mRNA、Smad4 mRNA和蛋白升高(P<0.05)。[结论]沉默miR-421能促进结直肠癌COLO-205细胞凋亡并抑制其增殖、迁移和侵袭,其机制可能与miR-421靶向正向调控Smad4有关。

miR146a通过Smad4参与多柔比星的心肌细胞毒性作用

目的:探讨miR146a参与多柔比星心肌细胞毒性作用的可能机制。方法:用多柔比星处理大鼠心肌细胞,用CCK-8方法检测细胞活力,用荧光定量PCR检测miR146a的变化,用Western blot检测切割的Caspase 3的蛋白变化。使用常间回文重复序列丛集(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)的方法,设计针对miR146a的向导RNA,敲除miR146a的表达。用CCK-8方法和Western blot分别检测敲除细胞的活力和Caspase 3蛋白变化。用软件预测miR146a的靶基因,利用荧光素酶系统进行验证。用Western blot检测多柔比星处理后靶基因的变化,以及用Western blot检测敲除miR146a对靶基因变化的影响。结果:多柔比星处理导致大鼠心肌细胞活力降低,切割的Caspase 3水平升高,同时发现miR146a表达升高(3.6倍)。使用CRISPR可有效敲除miR146a的表达,敲除效果显著高于microRNA decoy的效果(88.6%vs 57.6%)。敲除miR146a的细胞用多柔比星处理,miR146a增加不明显(1.08倍),并且敲除miR146a抑制了多柔比星导致的细胞活力降低和Caspase 3升高。经生物信息学及荧光素酶检测证实在大鼠心肌细胞内Smad family member 4(Smad4)是miR146a的靶基因,用多柔比星处理心肌细胞后,Smad4的表达降低。而敲除miR146a后,Smad4的表达升高,用多柔比星处理敲除miR146a的细胞,Smad4的表达变化不明显。结论:大鼠心肌细胞中,miR146a通过调节Smad4的表达参与了多柔比星对细胞的毒性作用。

PIK3C3与SMAD4在胰腺癌中的表达及作用

背景与目的:Ⅲ型磷脂酰肌醇3-激酶(PIK3C3)及SMAD家族成员4 (SMAD4)参与的信号通路与胰腺癌(PAAD)关系密切,但两者与PAAD发生及预后是否有关尚不十分清楚。本研究初步探究两者在PAAD中的表达及其对患者预后的影响。方法:利用UALCAN在线网站分析PIK3C3 mRNA和SMAD4 mRNA在PAAD中的表达及两者各自对PAAD患者预后的影响;从TCGA数据库下载PAAD患者PIK3C3 mRNA和SMAD4 mRNA的表达数据和相应临床病理资料,基于PIK3C3和SMAD4联合的mRNA表达水平,用一致性聚类分析将PAAD患者分为两个聚类,用Kolmogorov-Smirnov检验及Kaplan-Meier法分析两个聚类患者PIK3C3与SMAD4的mRNA表达模式、临床病理因素和总体生存率的差异;用免疫组化的方法检测PAAD和癌旁组织组织芯片中PIK3C3及SMAD4蛋白表达水平,并用独立样本t检验及ROC曲线下面积(AUC)评估两个蛋白在癌和癌旁组织中的差异;采用Kaplan-Meier的方法分析PIK3C3和SMAD4的蛋白水平单独及联合对PAAD患者生存的影响。结果:分析结果表明,PIK3C3 mRNA或SMAD4 mRNA水平在PAAD中均无明显变化,并且两者单独均不影响PAAD患者的预后(均P>0.05)。PAAD中与PIK3C3 mRNA与SMAD4 mRNA具有较高的共表达相关性。两个聚类的PAAD患者之间,两基因的mRNA水平及年龄有明显差异(均P<0.05),其中,PIK3C3 mRNA及SMAD4 mRNA均高表达聚类的PAAD患者预后较好(P=0.006)。PAAD组织中PIK3C3和SMAD4的蛋白表达水平均明显低于癌旁组织(均P<0.001),AUC分别为0.7417及0.7991。PIK3C3和SMAD4蛋白之一阳性患者比两蛋白均阴性的患者预后更好(P=0.0359)。结论:PIK3C3和SMAD4蛋白可作为PAAD潜在的诊断标志物,PIK3C3和SMAD4联合分析可成为PAAD患者预后评估的新指标。

以高血压首诊的Myhre综合征1例并文献复习

1 病例资料患者,女,21岁,因“发现血压高2个月余”于2021年6月26日入院。患者入院2个月前中专毕业体检时发现血压高,之后多次测均高,波动于180~220/110~130 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),无明显头晕、头痛等不适症状。就诊于当地医院,给予“硝苯地平片10 mg 早晚各一片、比索洛尔5 mg每天早上半片”口服降压,疗效欠佳。近半月口服“左旋氨氯地平片2.5 mg 1片/d”。