胰岛素样生长因子结合蛋白3在脑梗死模型的表达及Smad信号通路的参与机制

目的 探讨Smad信号通路机制在脑梗死模型大鼠中的作用以及脑组织胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)的表达变化与神经功能的关系。方法 60只健康成年雄性SD大鼠随机分为模型组、假手术组及正常对照组,每组20只,模型组采用线栓法建立脑梗死模型,假手术组仅暴露颈内动脉后直接缝合皮肤,建模成功后1周评估各组大鼠的改良神经功能缺损(mNSS)评分。采用苏木精-伊红染色法检测脑组织病理学变化情况,采用Western blot法对大鼠脑组织中IGFBP-3、Smad2、Smad4蛋白水平进行检测,并采用逆转录聚合酶链反应测定大鼠脑组织中IGFBP-3、Smad2、Smad4 mRNA水平。用Spearman相关性分析IGFBP-3、Smad2、Smad4、P21表达水平之间的相关性。结果 苏木精-伊红染色结果显示,模型组大鼠出现明显脑组织水肿,表现为脑细胞排列紊乱,小胶质细胞数量变多,脑细胞核仁出现模糊,其中脑梗死面积为20.55%。与假手术组和正常对照组比较,模型组大鼠mNSS评分、IGFBP-3、Smad2、Smad4蛋白及mRNA相对表达水平明显升高,P21蛋白及mRNA相对表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。Spearman相关性分析显示,模型组大鼠脑组织中IGFBP-3 mRNA表达水平与mNSS评分、Smad2 mRNA、Smad4 mRNA呈显著正相关(r=0.568,r=0.623,r=0.597,P<0.01);IGFBP-3 mRNA表达水平与P21呈显著负相关(r=-0.573,P<0.01)。结论 脑梗死大鼠脑组织IGFBP-3水平显著升高,且IGFBP-3水平与脑梗死大鼠神经功能之间关系密切,其作用机制可能与Smad信号通路有关。

miR-10b靶向TGFBR1/SMAD3通路对特发性矮小症的软骨细胞增殖、肥大的影响机制

目的研究miR-10b对特发性矮小症(ISS)的影响及作用机制。方法收集ISS患儿(ISS组)和体检健康儿童(健康对照组)各54例,qPCR检验血清miR-10b表达量,分析ISS组患儿血清miR-10b表达与患儿临床资料的关系。采用miR-10b inhibitor、si-TGFBR1及各自阴性对照转染C28/I2细胞,利用CCK-8实验检测C28/I2细胞增殖能力,Western blot检测侏儒相关转录因子2(RUNX2)、X型胶原α1链(COL10A1)、转化生长因子β受体1(TGFBR1)、SMAD3、pSMAD3蛋白表达量。在StarBase数据库筛选miR-10b靶点,利用双萤光素酶报告基因实验验证miR-10b与TGFBR1的靶向关系。结果ISS组血清miR-10b表达量高于健康对照组,且miR-10b表达越高,患儿的身高、IGF-1、骨特异性碱性磷酸酶的下降越明显(P<0.05)。与NC组相比,miR-10b inhibitor组细胞增殖能力升高,RUNX2、COL10A1、TGFBR1、pSMAD3蛋白表达上调(P<0.05);StarBase数据库提示miR-10b存在TGFBR1的结合位点,双萤光素酶报告基因实验证实两者结合。与si-NC相比,si-TGFBR1组TGFBR1表达量下调,细胞增殖能力下降(P<0.05)。结论miR-10b通过靶向TGFBR1/SMAD3通路在特发性矮小症中抑制软骨细胞的增殖、肥大。

Smad蛋白在BMP-2诱导成骨分化过程中的作用

目的研究Smad蛋白在骨形态发生蛋白-2(BMP-2)诱导成骨分化过程中作用,探讨Smad蛋白在成骨分化期间信号传导的机制。方法将取自MDX大鼠颅盖骨组织分离获得成骨细胞进行培养,培养的成骨细胞分组,加入不同浓度的BMP-2或BMP-2与Trx2SARA混合物后,用反义PCR和Western Blot斑点杂交对各组诱导成骨分化的情况进行分析。体内实验中肌肉局部埋植BMP-2或BMP-2和Trx2SARA,取不同时间点处死动物,制备组织切片,用SO染色进行组织学观察。结果BMP-2处理的成骨细胞碱性磷酸酶增加,降钙素mRNA增加,Smad蛋白的表达水平呈剂量依赖性增加。Trx2SARA处理组出现碱性磷酸酶和降钙素mRNA下调。体内实验组织切片SO染色显示,BMP-2处理组大部分异位组织由增殖中、肥厚前和肥厚软骨细胞构成,而Trx2SARA处理组很少向软骨源细胞分化。结论Smad蛋白在BMP-2诱导成骨分化中发挥重要的信号传导作用。

骨形态发生蛋白7/Smads信号通路及其在肝纤维化进程中的作用

肝纤维化是由于各种病因导致肝损伤后,机体对损伤进行修复的过程。近年来研究发现骨形态发生蛋白(BMP)7及其下游的Smads蛋白可以通过不同的途径拮抗转化生长因子(TGF)β1的致肝纤维化作用,包括诱导细胞外基质降解,抑制细胞凋亡,减少多种促炎症因子的表达,促进肝细胞再生等,探讨了BMP-7/Smads信号通路在肝纤维化过程中的作用。

丹酚酸B对人肺成纤维细胞TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白表达的影响及其机制

目的:观察丹酚酸B(Sal B)对人肺成纤维细胞转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad信号通路相关蛋白表达的影响,探讨其抑制TGF-β1活化肺成纤维细胞作用的信号机制。方法:体外培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,随机分为对照组(未加入TGF-β1或Sal B)、Sal B(10μmol·L-1)组、TGF-β1(10μg·L-1)组和TGF-β1(10μg·L-1)+Sal B(10μmol·L-1)组。Western blotting法检测各组细胞内p-Smad2、p-Smad3、TGF-βⅠ型受体(TβRⅠ)和Smad7蛋白表达。结果:与对照组比较,TGF-β1组细胞内p-Smad2、p-Smad3和TβRⅠ蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),Smad7蛋白表达水平明显下降(P<0.05);与对照组比较,Sal B组细胞内p-Smad2、p-Smad3、TβRⅠ和Smad7蛋白表达水平无明显变化(P>0.05);与TGF-β1组比较,TGF-β1+Sal B组细胞内p-Smad2、p-Smad3和TβRⅠ蛋白表达水平均下降(P<0.05),Smad7蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:Sal B能够通过抑制肺成纤维细胞TGF-β1/Smad信号通路,从而发挥其抑制TGF-β1活化肺成纤维细胞的作用。

复方芪参提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞内Smad蛋白连接区的影响

目的研究复方芪参提取物(CASE)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)内Smad蛋白连接区的影响。方法 MTT法检测CASE对新生牛血清(NBS)诱导的KFs增殖的影响;细胞免疫荧光染色法观察不同浓度(7.5、15、30mg/L)CASE对TGF-β1诱导的KFs内Smad2L和Smad3L蛋白磷酸化的影响;人体正常成纤维细胞(NFs)作为对照。结果 CASE(15、30、60mg/L)能够显著抑制NBS诱导的KFs的增殖,其IC50为18.90mg/L;TGF-β1能够诱导KFs内Smad2L和Smad3L蛋白磷酸化,而CASE(7.5、15、30mg/L)对这两种蛋白的磷酸化均具有明显的抑制作用,而TGF-β1对NFs中Smad2L和Smad3L蛋白表达无明显影响。结论 CASE能够抑制KFs细胞的增殖,其作用机制可能与抑制Smad2连接区和Smad3连接区磷酸化有关。

TGF-β、Smad信号通路蛋白及α-SMA在糖尿病肾病患者肾组织中的表达和意义

目的检测转化生长因子(TGF)-β、Smad信号通路蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在糖尿病肾病(DN)患者肾活检组织中的表达,探讨DN的发病机制。方法收集DN肾组织标本28例(DN组);非DM行肾切除的正常肾组织10例为对照组。应用免疫组化方法检测TGF-β1、TGF-β受体(R)Ⅰ、TGF-βRⅡ、Smad2/3、α-SMA在肾组织中的表达。结果 (1)TGF-β1、TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad2/3在DN组和对照组中均有表达,前者高于后者,DN组早期光镜下肾组织未见明显异常时即有明显的高表达,而随着疾病的进展未见表达增高的现象。肾小球、肾小管出现纤维化后并不表达上述因子。(2)对照组的α-SMA仅表达于肾血管、肾小球和肾小管,而肾间质未见α-SMA表达,而DN组α-SMA在上述组织中均有表达。结论TGF-β及Smad信号转导通路参与了DN的发病,DN可能与免疫复合物性肾小球肾炎具有相似的发病机制。

肝细胞癌组织中高尔基体蛋白73和转化生长因子β_1及Smad2的表达水平及其意义

目的探讨高尔基体蛋白73(GP73)及转化生长因子β(TGF-β)/Smads信号通路与肝细胞癌(肝癌)的关系。方法选取2010年1月—2014年12月新疆医科大学第一附属医院病理科收集的80例肝癌患者的肝癌组织及癌旁组织蜡块标本,并从本院病案室调阅患者的临床病历资料,包括性别、年龄、乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)、血清甲胎蛋白(AFP)水平、有无肝硬化、有无门静脉癌栓、分化程度、TNM分期、有无血管侵犯。采用免疫组织化学En Vision二步法检测肝癌组织和癌旁组织GP73、TGF-β1和Smad2的阳性表达情况和积分光密度(IOD)。结果GP73定位于胞质,呈棕黄色颗粒。肝癌组织GP73阳性表达率为73.8%(59/80),高于癌旁组织的5.0%(4/80)(χ2=76.50,P<0.05)。TGF-β1和Smad2主要表达于胞质,偶见于胞核,为棕黄色深染颗粒。肝癌组织TGF-β1阳性表达率为81.2%(65/80),高于癌旁组织的6.2%(5/80)(χ2=65.67,P<0.05);肝癌组织Smad2阳性表达率为66.2%(53/80),高于癌旁组织的10.0%(8/80)(χ2=47.62,P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,GP73与TGF-β1、Smad2呈正相关(rs=0.841、0.405,P<0.05)。不同性别患者肝癌组织GP73、Smad2表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05),TGF-β1表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同年龄、HBs Ag、AFP、有无肝硬化及门静脉癌栓患者肝癌组织GP73、TGF-β1和Smad2表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);不同分化程度、TNM分期、有无血管侵犯患者肝癌组织GP73、TGF-β1和Smad2表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 GP73在肝癌组织中多呈阳性表达,其可能通过调控TGF-β/Smads信号通路参与肝癌的发生与发展。

转化生长因子胞内信号蛋白Smad2/3在糖尿病大鼠肾脏表达的动态观察及意义研究

目的:动态观察大鼠糖尿病肾病发生发展过程中TGF-β1及其下游信号分子Sm ad2/3在肾脏的表达及定位变化,探讨TGF-β1-Sm ad2/3信号通路在糖尿病肾病(DN)肾纤维化发病机制中的作用。方法:链脲菌素诱导大鼠糖尿病肾病,以免疫组化、W estern b lotting及荧光实时定量PCR(RT-PCR)的方法动态观察糖尿病肾病发生发展过程中大鼠肾脏TGF-β1、Sm ad2/3蛋白及mRNA表达,并以RT-PCR方法观察结缔组织生长因子(CTGF)、胶原-3(COL-Ⅲ)、纤溶酶原激活剂抑制因子-1(PAI-1)mRNA表达。结果:TGF-β1在糖尿病肾病(DN)大鼠肾小管表达明显多于正常组(P<0.05);Sm ad2/3蛋白主要以胞浆表达阳性为主,部分呈胞核表达阳性;Sm ad2/3蛋白及mRNA从2周起表达明显多于正常对照组(P<0.05),且随着糖尿病进展有逐渐增加的趋势。16周DN组大鼠肾脏TGF-β1、Sm ad2、CTGF、COL-Ⅲ、PAI mRNA表达显著高于正常对照组(P<0.05)。结论:TGF-β1-Sm ad2/3信号转导通路参与了糖尿病肾病肾脏纤维化形成的信号转导过程,伴随着Sm ad2/3信号蛋白表达的增多及入核增加,CTGF、COL-Ⅲ、PAI-1等基因转录增加,导致肾脏细胞外基质的大量沉积,这是细胞因子TGF-β1导致糖尿病肾病肾纤维化进展可能的信号转导途径之一。

Smad4蛋白及mRNA在卵巢不同发育阶段的表达

目的探讨Smad4在不同发育阶段大鼠卵巢中蛋白及mRNA的表达。方法选择不同发育时期大鼠卵巢,运用免疫组化方法检测卵巢中Smad4蛋白表达,并进行图像分析;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Smad4mRNA在卵巢中的表达。结果免疫组化结果显示Smad4主要表达在各级卵泡中,在卵巢发育早期,Smad4主要在原始卵泡和窦前卵泡中表达;随着卵巢的发育成熟,Smad4在窦状及成熟卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞的表达与间质细胞比较无显著差异(P>0.05)。Smad4在卵泡中的表达强度也发生了变化随着卵泡的发育,Smad4在窦状及成熟卵泡卵母细胞的表达与窦前卵泡卵母细胞比较明显减弱(P<0.05,P<0.01);在卵泡膜细胞的表达逐渐增强(P<0.01),而在各级卵泡颗粒细胞中的表达无显著差异(P>0.05)。RT-PCR结果显示各阶段卵巢均有mRNA的表达,从第3周起Smad4mRNA的表达明显增强,与生后1d比较差异显著(P<0.05)。结论卵巢内存在Smad4,提示TGF-β家族对卵泡发育的调节很可能是通过Smad信号转导模式实现的。

转化生长因子β_1和Smad4蛋白在肝癌组织中的表达及其意义

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和Smad4蛋白在肝癌组织中的表达及其意义。方法选取2008年3月—2011年4月入住我院并接受治疗的肝癌患者54例,采用原位杂交显色法(IHCABC法)分析TGF-β1和Smad4蛋白在肝癌组织中表达和半定量情况。结果肝癌组织中Smad4蛋白高表达率(38.9%)低于癌旁组织(46.3%),差异有统计学意义(χ2=16.59,P=0.01)。肝癌组织中TGF-β1和Smad4蛋白高表达率在男女间差异无统计学意义(P>0.05);以45岁为界,肝癌组织中TGF-β1和Smad4蛋白高表达率在不同年龄间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);在不同病理分期间比较,差异亦均有统计学意义(P<0.05),且随着病理分期增加,TGF-β1和Smad4蛋白高表达率升高。结论肝癌组织中Smad4蛋白高表达率低于癌旁组织,TGF-β1和Smad4蛋白高表达与患者性别无关,而与病理分期和年龄增长(≥45岁)有关。

选择性上调pSmad 3C/3L基因对人肝星状细胞增殖及α平滑肌肌动蛋白、纤维酶原激活物抑制剂-1和Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的观察选择性上调pSmad 3C/3L基因对人肝星状细胞(LX 2)增殖及α平滑肌肌动蛋白(α SMA)、纤维酶原激活物抑制剂 1(PAI 1)和Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)表达的影响。以进一步探究pSmad 3C/3L在肝纤维化进展中的作用机制。方法采用脂质体转染的技术(FuGENE?HD)向LX 2细胞转染野生型Smad3基因(Smad3 WT)、Smad3连接区磷酸化位点突变的基因(Smad3 EPSM)及Smad3 C末端磷酸化位点突变的基因(Smad33S A)3种质粒,选择性上调LX 2细胞中pSmad 3C/3L的表达水平,以蛋白质印迹法(Western Blot)验证转染效率并检测LX 2细胞中α SMA、PAI 1和Collagen Ⅰ的蛋白表达水平。MTT法检测选择性上调pSmad 3C/3L对LX 2细胞增殖能力的影响。结果转化生长因子 β1(TGF β1)刺激1 h后,与LX 2对照组相比,转染3种质粒组Smad3蛋白表达水平均升高[(0.48±0.02),(0.57±0.03),(0.60±0.02),(0.59±0.03);P<0.05];与Smad3 WT组相比,转染Smad3 EPSM质粒组pSmad3C蛋白表达水平明显升高[(0.33±0.02)比(0.44±0.01),P<0.05],转染Smad33S A质粒组pSmad3L蛋白表达水平明显升高[(0.36±0.01)比(0.42±0.02),P<0.05]。MTT结果显示,转染Smad3 EPSM质粒可抑制LX 2细胞增殖,而转染Smad33S A质粒可促进LX 2细胞的增殖[吸光度值(0.48±0.03)比(0.93±0.05),P<0.05]。TGF β1刺激12 h后,α SMA、PAI 1和Collagen Ⅰ在3种质粒转染组中呈现出差异表达(P<0.05)。结论转染3种质粒成功地选择性上调了LX 2细胞中pSmad 3C/3L的表达,选择性高表达pSmad3L可进一步促进TGF β1诱导的细胞增殖反应、促进α SMA、PAI 1和Collagen Ⅰ的表达,选择性高表达pSmad3C可抑制细胞增殖反应、降低α SMA、PAI 1和Collagen Ⅰ的表达;提示TGF β1诱导的Smad3不同位点磷酸化在LX 2细胞增殖和α SMA,PAI 1,Collagen Ⅰ蛋白表达的调控中发挥重要作用,为肝纤维化的逆转提供了新思路。

P16、P53和SMAD4蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨P16、P53和SMAD4蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义.方法采用免疫组织化学方法对30例胰腺癌组织和10例正常胰腺组织中P16、P53和SMAD4蛋白进行检测.结果 P16、P53和SMAD4蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达率分别为56.67%、43.33%和50.00%.在正常胰腺组织中的阳性表达率分别为100.00%、0和90.00%.两者比较差异有显著性（χ^2=4.60～5.00,P〈0.05）.P16、P53蛋白的表达与胰腺癌病人的临床病理特征无关,而SMAD4蛋白的表达在病理分化程度上存在显著差异（χ^2=7.98,P〈0.05）.结论 P16、P53、SMAD4蛋白在胰腺癌发病中起重要作用.

TGF—β/Smads信号通路相关蛋白在胰腺上皮内瘤变和胰腺癌组织中的表达

目的 探讨转化生长因子(TGF)-β／Smads信号转导通路中Smads相关蛋白、TGF-β1及 其Ⅰ、Ⅱ型受体在胰腺上皮内瘤变(PanIN)和胰腺癌组织中表达的意义。方法 用EnVision和SP免疫 组化技术检测266灶不同级别PanINs和121例胰腺癌组织中Smads相关蛋白、TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受 体的表达并联系临床病理学指标进行相关分析。结果 高级别PanINs病灶Smad4表达率(60.6％,20／ 33)显著低于低级别PanINs Smad4表达率(79.8％,186／233)(P<0.05);而高级别PanINs中Smad7、 TGF-β1、TGF-βRⅡ表达率明显高于低级别PanINs(P<0.05)。胰腺癌组织中,Smad4蛋白表达率在淋 巴结转移组和神经受累组显著低于各自对照组(P<0.05);Smad7、TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体的表达率 在淋巴结转移组和神经受累组则分别显著高于各自对照组(P<0.05)。胰腺上皮内瘤变和胰腺癌组织 中Smad2、4、7蛋白,TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体表达率的差异具有非常显著性(P<0.01)。结论 从低级 别PanINs到高级别PanINs再到胰腺癌中,Smad4蛋白表达率逐渐降低,而Smad7、TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ 型受体表达率逐渐升高,支持胰腺癌形成的分子模型。

姜黄素调控TGF-β1/Smad信号通路改善大鼠腹膜透析相关腹膜纤维化及机制研究

目的 探讨姜黄素对大鼠腹膜透析(peritoneal dialysis, PD)相关腹膜纤维化(peritoneal fibrosis, PF)的影响及可能作用机制。方法 随机选取10只雄性Wistar大鼠作为正常组(生理盐水),剩余大鼠随机分为模型组(生理盐水)及姜黄素低(15 mg·kg-1·d-1)、中(30 mg·kg-1·d-1)、高(60 mg·kg-1·d-1)剂量组,每组各10只,给药同时腹腔内注射4.25%葡萄糖PD溶液(100 mL/kg),连续30 d。4 h腹膜平衡试验评估腹膜功能;测量腹膜厚度;腹膜组织行HE和Masson染色观察腹膜病理变化;ELISA法检测腹膜组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)及白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)水平;蛋白质印迹法检测腹膜组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad7、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,ColⅠ)蛋白相对表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠腹膜超滤体积降低,葡萄糖转运量升高,腹膜厚度增加(P<0.05),结构紊乱、间皮细胞变形、炎症细胞严重浸润、胶原蛋白严重沉积;腹膜组织中TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高,TGF-β1、p-Smad2/3、α-SMA及ColⅠ蛋白相对表达水平升高,Smad7蛋白相对表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,姜黄素低、中、高剂量组大鼠腹膜组织超滤体积升高,葡萄糖转运量降低,腹膜厚度减少(P<0.05),结构逐渐完整,炎症浸润及胶原蛋白沉积情况有所减轻;腹膜组织中TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低,TGF-β1、p-Smad2/3、α-SMA及ColⅠ蛋白相对表达水平降低,Smad7蛋白相对表达水平升高(P<0.05);姜黄素改善PD相关PF大鼠的效果呈剂量依赖性作用。结论 姜黄素可减轻PD相关PF大鼠腹膜组织病理损伤,改善腹膜功能障碍,其作用机制可能与减轻炎性反应,阻滞TGF-β1/Smad信号通路激活,进而抑制PF发生、发展有关。

六味地黄汤对多囊卵巢综合征大鼠性激素水平及转化生长因子β/Smads信号通路相关因子的影响

目的观察六味地黄汤对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠性激素及转化生长因子β/Smads(TGF-β/Smads)信号通路相关因子的影响。方法随机将20只雌性SD大鼠分为空白对照组5只,造模组15只。造模组大鼠予来曲唑溶液8 mL/kg灌胃,连续21天造模,同时空白对照组予等量1%羧甲基纤维素溶液(CMC)灌胃,造模成功后将造模组大鼠进一步分为模型组、中药组、中西医结合组,每组5只。中药组大鼠予六味地黄汤生药7.5 g/(kg·d)灌胃,中西医结合组大鼠在中药组基础上予炔雌醇环丙孕酮溶液10 mL/(kg·d)灌胃,模型组和空白对照组予0.9%氯化钠注射液7.5 mL/(kg·d)灌胃,均连续21天。用酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清黄体生成激素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E_(2))、睾酮(T)水平,蛋白免疫印迹法检测各组大鼠卵巢组织TGF-β_(1)、Smad3、Smad4、Smad7蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组LH、T水平升高(P<0.05);与模型组比较,中药组、中西医结合组LH、T水平均降低(P<0.05),而中药组LH、T水平与中西医结合组比较差异无统计学意义(P>0.05)。4组FSH、E_(2)比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组比较,模型组TGF-β_(1)、Smad3、Smad4、Smad7蛋白表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,中药组TGF-β_(1)、Smad3、Smad4蛋白表达水平均降低(P<0.05),Smad7蛋白表达水平升高(P<0.05),中西医结合组Smad3、Smad4、Smad7蛋白表达水平均降低(P<0.05),而TGF-β_(1)蛋白表达水平与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与中西医结合组比较,中药组TGF-β_(1)蛋白表达水平降低(P<0.05),Smad3、Smad4、Smad7蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论六味地黄汤能改善PCOS大鼠的性激素水平,调节TGF-β/Smads信号通路相关因子的表达。

扶正化瘀方影响转化生长因子β1/Smad信号通路的抗肝纤维化作用机制

目的:探讨扶正化瘀方影响转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)/Smad信号转导的抗肝纤维化作用机制。方法:本研究分体内实验和体外实验两部分。在体内实验中,37只雄性Wistar大鼠分为正常组(5只)、模型组(18只)和扶正化瘀方组(14只)。模型组和扶正化瘀组大鼠采用二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)腹腔注射复制大鼠肝纤维化模型。灌胃治疗4周后,采用盐酸水解法检测肝组织中羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,蛋白质印迹法分析肝组织中TGF-β1、TGF-β1Ⅰ型受体(TGF-β1 type Ⅰ receptor,TβR-Ⅰ)、Smad2、Smad3及磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外实验采用培养4d的原代大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC),分为对照组、TGF-β1组、10%扶正化瘀方药物血清组及TβR-Ⅰ胞内激酶抑制剂(SB-431542)组。后3组用2.5ng/mLTGF-β1刺激24h后,对照组及TGF-β1组加10%正常大鼠血清,10%扶正化瘀方药物血清组加10%服用扶正化瘀方的大鼠血清,SB-431542组加10%正常大鼠血清及10μmol/LSB-431542。共孵育24h后,免疫荧光染色检测HSC中α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和Smad3蛋白的表达,蛋白质印迹法分析HSC中α-SMA蛋白的表达。结果:体内实验发现,扶正化瘀方可明显降低纤维化肝组织中异常升高的Hyp含量及TGF-β1、TβR-Ⅰ、磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外研究发现,正常HSC中α-SMA、TβR-Ⅰ表达较低,TGF-β1刺激可显著上调其表达;扶正化瘀方药物血清共孵育后,可明显抑制TGF-β1诱导的HSC中α-SMA的表达;正常HSCSmad3主要表达在细胞质中,细胞核中表达较低,TGF-β1可显著刺激Smad3向细胞核转移,扶正化瘀方药物血清可明显抑制TGF-β1诱导的Smad3核转位。结论:扶正化瘀方可下调纤维化大鼠肝脏及HSC中的TGF-β1/Smad病理信号转导通路,这可能是扶正化瘀方抗肝纤维化的部分作用机制。

Smad3、Smad4和Smad7在大鼠放射性肺纤维化中的表达及意义

探讨转化生长因子β(TransforrninggrowthfactorβTGFβ)的Smad信号转导通路中信号蛋白Smad3、Smad4和Smad7在大鼠放射性肺纤维化中的变化及其意义。采用25GyCoγ射线全胸照射二级雄性Wistar大鼠6060只,建立大鼠放射性肺纤维化模型,分别于照射后1天、1周、1月及3月活杀后取材并进行肺泡巨噬细胞的分离培养,采用免疫组化SP法检测信号蛋白Smad3、Smad4和Smad7的表达变化。正常肺组织中较大血管内皮细胞及平滑肌细胞胞浆中存在Smad3、Smad4、Smad7蛋白弱阳性表达,Smad4在支气管上皮细胞胞浆也有阳性表达;;照射后1天,上述3种蛋白在部分肺泡上皮细胞和部分巨噬细胞胞浆出现阳性表达;;照射后1周及1月,Smad4蛋白在肺间质内纤维/成纤维细胞胞浆也出现阳性表达;;照射后3m,Smad4蛋白在部分肺泡上皮、巨噬细胞、成纤维/纤维细胞胞核出现阳性表达。信号蛋白Smad3、Smad4、Smad7主要表达于放射性肺纤维化发生发展相关的靶细胞和效应细胞,包括部分肺泡上皮细胞、巨噬细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞、支气管上皮细胞,并呈一定时相性动态分布,证明TGFβ的Smad信号通路在放射性肺纤维化中起调节作用。

经典转化生长因子β/Smad信号和Wnt/β-catenin信号间的相互作用

TGF-β信号通路是调节细胞生长和分化的的重要通路,此外还参与纤维化疾病发生和肿瘤发生发展的调控。Wnt信号通路是调节胚胎发育和肿瘤侵袭转移的重要通路。近10年来研究表明,这两条通路在调节胚胎发育、纤维化疾病发生以及肿瘤的演进等过程中共同发挥着重要作用,两者之间存在着密切联系,这两条通路存在Smad、轴蛋白(Axin)、蓬乱蛋白(Dvl)和β-连环蛋白(β-catenin)几个典型的相互作用的交叉点。本文着重阐述经典的TGF-β信号通路和Wnt信号通路在这几个交叉点的相互作用模式,以更好地应对纤维化疾病和肿瘤的进展。

益气活血方对肾间质纤维化大鼠肾脏TGF-β/smad信号通路及结缔组织生长因子的影响

目的:观察益气活血方对肾间质纤维化大鼠肾脏TGF-β/smad信号通路及结缔组织生长因子(connectivetissue growth factor,CTGF)的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠30只诱导建立单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)致肾小管间质纤维化模型,模型成功后随机分为模型组,益气活血方大、中、小剂量组和西药组,另取健康雄性Wistar大鼠6只设为假手术组。3周后处死大鼠,称取体质量;取血清检测肌酐(creatinine,Cr)、尿素氮(bloodurea nitrogen,BUN)水平;取肾脏组织采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法和免疫印迹法检测各组转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)、smad2、smad7、CTGF mRNA和蛋白表达水平;苏木精-伊红染色和Masson染色检测各组肾间质纤维化指数。结果:模型组大鼠血清Cr和BUN值较假手术组偏高;与模型组比较,大剂量益气活血方可以降低Cr和BUN值,但差异无统计学意义。苏木精-伊红染色和Masson染色显示模型组肾小管上皮细胞萎缩,大部分肾小管管腔扩张,间质纤维组织增生,大量炎性细胞浸润,肾小球数目明显减少,胶原成分显著增加。益气活血方大剂量组、中剂量组和西药福辛普利钠组大鼠肾间质炎性细胞浸润、纤维组织增生、肾小管扩张情况较模型组明显减轻,胶原成分明显减少。与假手术组比较,模型组大鼠肾脏组织中TGF-β、smad2和CTGFmRNA以及蛋白表达水平明显升高(P<0.05),smad7的表达水平则明显降低(P<0.05)。与模型组比较,益气活血方大剂量组和中剂量组大鼠TGF-β、smad2、CTGF mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.01,P<0.05),smad7表达明显升高(P<0.01,P<0.05)。结论:UUO大鼠肾组织中CTGF mRNA的表达可能通过TGF-β/smad信号通道进行调节;益气活血方可以通过下调TGF-β、smad2和上调smad7的表达来抑制CTGF表达,进而遏制肾纤维化的进展。