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Smad3基因剔除小鼠的繁殖与基因型鉴定 被引量:5
1
作者 孙岩松 吕雅歆 +4 位作者 时彦胜 战大伟 李文龙 张爱兰 杨晓 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2001年第3期182-185,共4页
目的 为进一步深入研究Smad3基因在脊椎动物发育中的重要作用 ,对Smad3基因剔除小鼠进行保种和繁育研究。方法 采用基因剔除杂合子小鼠进行保种 ,通过PCR和Southern杂交对杂合子小鼠交配所产生的后代进行基因型鉴定 ,纯合子小鼠和野... 目的 为进一步深入研究Smad3基因在脊椎动物发育中的重要作用 ,对Smad3基因剔除小鼠进行保种和繁育研究。方法 采用基因剔除杂合子小鼠进行保种 ,通过PCR和Southern杂交对杂合子小鼠交配所产生的后代进行基因型鉴定 ,纯合子小鼠和野生型小鼠用于表型分析 ,杂合子小鼠用于留种和繁殖生产。结果 采用PCR方法对 2 78只子代小鼠进行了基因型鉴定 ,83只为野生型 ,133只为杂合子 ,6 2只为纯合子。结论 Smad3基因剔除突变能稳定遗传。采用杂合子小鼠保种 。 展开更多
关键词 smad3基因剔除小鼠 杂合子 纯合子 smad3基因 子代 表型分析 野生型 保种 基因型鉴定 繁殖
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Smad3基因剔除致骨关节炎小鼠血清蛋白质组双向凝胶电泳分析 被引量:4
2
作者 郝振明 杨晓 +3 位作者 应万涛 王杰 钱小红 黄翠芬 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期452-456,共5页
Smad3基因剔除导致小鼠骨关节炎。为了进一步深入研究Smad3基因缺失导致骨关节炎形成的分子机制 ,寻找骨关节炎发生早期的分子变化。用双向电泳技术结合肽质量指纹谱技术对Smad3基因剔除小鼠和野生型小鼠血清蛋白质组进行了初步分析。... Smad3基因剔除导致小鼠骨关节炎。为了进一步深入研究Smad3基因缺失导致骨关节炎形成的分子机制 ,寻找骨关节炎发生早期的分子变化。用双向电泳技术结合肽质量指纹谱技术对Smad3基因剔除小鼠和野生型小鼠血清蛋白质组进行了初步分析。对其中 7个表达差异蛋白质进行了鉴定 ,并探讨了所鉴定蛋白质与骨关节炎发生的关系。为揭示SMAD3介导的TGF β信号在骨骼发育中的重要作用提供了线索。 展开更多
关键词 smad3基因剔除 骨关节炎小鼠 血清蛋白质组 双向凝胶电泳分析
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Smad3基因剔除对小鼠造血功能的影响 被引量:2
3
作者 张玲 孙昭 +5 位作者 沈爱玲 马丽 姜学英 马冠杰 杨晓 赵春华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期428-432,共5页
研究Smad3基因剔除对小鼠造血功能的影响。实验小鼠分为 5组 ,每组有Smad3基因剔除小鼠(Smad3 - - )和其同窝孪生的野生型小鼠 (Smad3 + + )各 1只。小鼠的造血功能用 14天形成的脾结节 (CFU S1 4 )、多系祖细胞 (CFU GEMM)、粒 单... 研究Smad3基因剔除对小鼠造血功能的影响。实验小鼠分为 5组 ,每组有Smad3基因剔除小鼠(Smad3 - - )和其同窝孪生的野生型小鼠 (Smad3 + + )各 1只。小鼠的造血功能用 14天形成的脾结节 (CFU S1 4 )、多系祖细胞 (CFU GEMM)、粒 单系祖细胞 (CFU GM)、红系祖细胞 (BFU E)测定及外周血象、骨髓象等实验血液学指标来确定。每组小鼠取尾血作白细胞、红细胞和血小板计数 ,涂片作白细胞分类计数。将一侧股骨的骨髓冲出 ,制成单细胞悬液 ,计数其中有核细胞数 ,测定CFU GM、BFU E、CFU GEMM值。将每只小鼠的 4× 10 4个骨髓有核细胞 ,经尾静脉注入 3只 8~ 10周经致死量射线照射的同系雌性小鼠体内 ,测定 14天的CFU S。取一部分胸骨、肝脏、脾脏固定做病理切片 ,其余胸骨冲出骨髓 ,涂片作分类计数。结果Smad3 - - 小鼠外周血白细胞和血小板计数明显高于Smad3 + + 小鼠 ,红细胞数无显著差异。外周血白细胞分类结果也表明粒细胞显著增高。骨髓有核细胞数无显著差异 ,CFU GM显著增高 ,BFU E无显著差异 ,CFU GEMM明显减少 ,CFU S显著减少。病理形态学观察发现骨髓增生极度活跃 ,以粒系为主 ,肝脾无显著差别。骨髓涂片分类表明粒系增多 ,粒系 :红系比例增高。因此得出结论Smad3基因剔除使小鼠造血干祖细胞数目? 展开更多
关键词 smad3 基因剔除 小鼠 造血功能 介导转化生长因子 信号转导
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Smad3基因剔除的骨髓细胞移植对小鼠的影响
4
作者 陈静 沈红 赵勇 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2010年第1期9-12,I0003,共5页
目的通过小鼠骨髓细胞剔除Smad3基因,观察小鼠病理变化以及免疫T细胞状态。方法将Smad3基因剔除Smad3-/-)的小鼠骨髓细胞和野生型(Smad3+/+)小鼠骨髓细胞分别移植给60Co射线照射GFP小鼠。观察骨髓移植后GFP小鼠体征变化,第6周处死小鼠,... 目的通过小鼠骨髓细胞剔除Smad3基因,观察小鼠病理变化以及免疫T细胞状态。方法将Smad3基因剔除Smad3-/-)的小鼠骨髓细胞和野生型(Smad3+/+)小鼠骨髓细胞分别移植给60Co射线照射GFP小鼠。观察骨髓移植后GFP小鼠体征变化,第6周处死小鼠,取肠道固定,HE染色观察其病理变化,流式细胞技术检测淋巴结中T细胞变化。结果移植Smad3-/-骨髓细胞的GFP小鼠逐渐消瘦,大肠出现炎症;淋巴结中活化型的CD4+CD62LloT细胞增多。结论骨髓细胞TGF-β信号受阻,可导致小鼠患炎症疾病,引起免疫T细胞活化。 展开更多
关键词 smad3基因剔除- 骨髓细胞 T细胞活化 移植
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反义Smad3抑制3T3细胞增殖和TGF-β_1基因表达 被引量:4
5
作者 王丹茹 刘伟 +3 位作者 刘德莉 刘方军 曹谊林 张涤生 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2003年第3期203-205,共3页
目的 研究反义Smad3对转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达的调控和对3T3细胞增殖的影响。方法 构建反义Smad3质粒,以脂质体介导转染NIH3T3细胞,进行细胞计数,并用RT-PCR方法观察TGF-β1 mRNA的表达。 结果 反义Smad3能下调TGF-β1 mRNA... 目的 研究反义Smad3对转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达的调控和对3T3细胞增殖的影响。方法 构建反义Smad3质粒,以脂质体介导转染NIH3T3细胞,进行细胞计数,并用RT-PCR方法观察TGF-β1 mRNA的表达。 结果 反义Smad3能下调TGF-β1 mRNA的表达,并抑制3T3细胞增殖。 结论 可以通过阻断TGF-β1细胞内信号传导调控TGF-β1基因的表达并抑制细胞增殖。 展开更多
关键词 反义smad3 转化生长因子-Β1 细胞增殖 脂质体 RT-PCR 信号传导调控基因 瘢痕
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不同日龄Smad3基因剔除小鼠的脏器重量及脏器指数 被引量:16
6
作者 李吉庆 李文龙 +7 位作者 王冬平 栾蓉晖 战大伟 孙岩松 时彦胜 杨晓 李桂军 张爱兰 《实验动物科学与管理》 2003年第1期11-13,共3页
实验选用不同年龄雌雄小鼠各 2 0只 ,剖检Smad3基因剔除小鼠 ,观察其大体解剖特征 ,测定其体重、脏器重量、脏器指数 ,统计比较结果。其结果是 35日龄Smad3基因剔除纯合型小鼠的体重及各脏器重量均低于其它两种表型 ,而心、肝、脾、胸... 实验选用不同年龄雌雄小鼠各 2 0只 ,剖检Smad3基因剔除小鼠 ,观察其大体解剖特征 ,测定其体重、脏器重量、脏器指数 ,统计比较结果。其结果是 35日龄Smad3基因剔除纯合型小鼠的体重及各脏器重量均低于其它两种表型 ,而心、肝、脾、胸腺的脏器指数高 ;70日龄Smad3基因剔除纯合型小鼠的体重、肝脏、脾脏、肾脏、卵巢、睾丸和附睾均低于其它两种基因型 ,而脏器指数是肝脏低 ,脾脏和胸腺高 ;Smad3基因剔除纯合型小鼠与野生型小鼠比较 ,具有其独特的特性 ,为该小鼠的应用提供一定的参考。 展开更多
关键词 smad3基因剔除小鼠 脏器重量 脏器指数
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Smad3基因剔除小鼠的血液生理生化指标检测——35日龄Smad3基因剔除小鼠 被引量:8
7
作者 栾蓉晖 王冬平 +6 位作者 李吉庆 李文龙 战大伟 孙岩松 时彦胜 李桂军 张爱兰 《实验动物科学与管理》 2002年第2期10-14,共5页
对 35日龄的血液生理生化指标进行了检测 ,反映出日常生长繁殖中Smad3基因剔除小鼠性成熟时血液生理生化指标的变化。纯合型 (- - )小鼠的白细胞和血小板明显高于杂合型 (+ - )和野生型 (+ +)小鼠。各项生化指标三种表型之间方差分析CE... 对 35日龄的血液生理生化指标进行了检测 ,反映出日常生长繁殖中Smad3基因剔除小鼠性成熟时血液生理生化指标的变化。纯合型 (- - )小鼠的白细胞和血小板明显高于杂合型 (+ - )和野生型 (+ +)小鼠。各项生化指标三种表型之间方差分析CER、GPT、CL、CA、MC差异显著 ,其它指标均差异不显著。纯合型 (- - )的GLU、CK、UA、TG、GPT、GOT、BUN、LDH L指标高于野生型的小鼠 ;CRE、CA。 展开更多
关键词 smad3基因剔除小鼠 血液生理生化指标 检测 35日龄
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Smad3基因剔除小鼠的血液生理生化指标检测——70日龄Smad3小鼠 被引量:1
8
作者 战大伟 王冬平 +6 位作者 栾蓉晖 孙岩松 李吉庆 李文龙 时彦胜 李桂军 李爱兰 《实验动物科学与管理》 2002年第1期7-11,共5页
对成年 70日龄的Smad3基因剔除小鼠血液生理生化指标进行检测 ,结果只有少数指标雌雄之间差异显著 ,纯合型 (- - )小鼠的白细胞 (WBC)和血小板高于杂合型 (+ - )和野生型 (+ +)小鼠。各项生化指标三种表型之间方差分析CER、CK、UA、GOT... 对成年 70日龄的Smad3基因剔除小鼠血液生理生化指标进行检测 ,结果只有少数指标雌雄之间差异显著 ,纯合型 (- - )小鼠的白细胞 (WBC)和血小板高于杂合型 (+ - )和野生型 (+ +)小鼠。各项生化指标三种表型之间方差分析CER、CK、UA、GOT、TP、ALP、LDH L、MG、CA差异显著 ;纯合型 (- - )的CK、UA、TG、ALP、LDH L指标高于野生型的小鼠 ;GLU、P、MG、CA指标低。 展开更多
关键词 smad3基因剔除小鼠 血液学 血液生化 指标
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Smad3基因剔除小鼠6月龄的生物学特性研究 被引量:1
9
作者 王冬平 李文龙 +7 位作者 孙岩松 栾蓉晖 战大伟 李吉庆 杨晓 时彦胜 李桂军 张爱兰 《实验动物科学与管理》 2002年第4期11-16,共6页
选用 6月龄Smad3基因剔除小鼠 ,称重、采血、解剖 ,检测其生理生化、体重、脏器重量及剖检的特性 ,其结果 :纯合型的MCH、CK、Tibil、GOT和LDH L ,及其肾上腺脏器指数差异显著 ;+ -的肾脏重量差异显著。不同基因型之间比较 :WBC、HCT、M... 选用 6月龄Smad3基因剔除小鼠 ,称重、采血、解剖 ,检测其生理生化、体重、脏器重量及剖检的特性 ,其结果 :纯合型的MCH、CK、Tibil、GOT和LDH L ,及其肾上腺脏器指数差异显著 ;+ -的肾脏重量差异显著。不同基因型之间比较 :WBC、HCT、MCHC、GLU、CHO、ALP、BUN、LDH L和CA ,及其体重、心脏、肝脏、肾脏、胸腺的脏器指数差异显著 ,并且纯合型的WBC、HCT、CK、CRE、GPT、GOT、ALP、BUN、LDH L较野生型和杂合型小鼠高 ,MCHC、GLU、CHO、MG、CA较野生型和杂合型小鼠低 ;杂合型的GOT、野生型的CK、ALP差异显著。 展开更多
关键词 smad3基因剔除小鼠 6月龄 生物学特性 生理生化指标 脏器重量
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Smad3基因剔除小鼠特异性免疫功能的研究
10
作者 王冬平 栾蓉晖 +2 位作者 孙岩松 杨晓 李桂军 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2002年第3期148-150,共3页
目的 研究Smad3基因剔除小鼠的体液免疫和细胞免疫。方法 采用流式细胞仪对其细胞免疫和体液免疫进行检测 ;并且应用ELISA方法对IgG抗体的吸光度进行测定。结果 纯合型 (- - )小鼠CD8+ 、CD4 + CD8+ 、IgG雌雄之间差异有显著性 ;CD... 目的 研究Smad3基因剔除小鼠的体液免疫和细胞免疫。方法 采用流式细胞仪对其细胞免疫和体液免疫进行检测 ;并且应用ELISA方法对IgG抗体的吸光度进行测定。结果 纯合型 (- - )小鼠CD8+ 、CD4 + CD8+ 、IgG雌雄之间差异有显著性 ;CD4 + 、CD8+ 、CD3+ 、CD19+ 、IgG的值低于野生型 ;结论 CD4 + CD8+ 的比值同野生型比较属于异常 (与人的范围比较 )。因此 。 展开更多
关键词 smad3基因剔除小鼠 特异性免疫功能 基因 免疫细胞 抗体生成
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Smad3基因剔除小鼠的基因型鉴定与繁殖性能研究
11
作者 孙岩松 吕雅歆 +5 位作者 王冬平 方厚华 时彦胜 战大伟 张爱兰 李桂军 《实验动物科学》 2003年第z1期129-130,共2页
The previous study of Smad3 gene knockout mice ( Smad3 ex8/ex8 )shows that the Smad3 ex8/ex8 mice develop progressive leukocytosis, periodontitis, gastritis, colitis and chronic infection with abscess formation adjace... The previous study of Smad3 gene knockout mice ( Smad3 ex8/ex8 )shows that the Smad3 ex8/ex8 mice develop progressive leukocytosis, periodontitis, gastritis, colitis and chronic infection with abscess formation adjacent to mucosal surfaces .symptomatic mutant mice exhibit thymic involution, enlarged lymph nodes and T cells with activated phenotype. Further study suggests that the thymic cells and peripheral T ceels of Smad3 ex8/ex8 mice have lost the response to TGF β.Furthermore, nwe found that the homologous Smad3 ex8/ex mice developed degenerative joint disease resembling human osteoarthritis, osteoporosis and wound healing up quicker. So the mice can serve as an ideal animal model for immune dysregulation, osteoarthritis and so on. To futher study the important role of Smad3 during the vertebrate development ,we charactered the genotype and reproduce the Smad3 knockout mice .Compare to the general experimental mice, the mice of genetic modifications is different in the breeding and reproduction. Besider the reproduction of inbred lines, we also must keep the mice inherit the mutant gene and consider the influence of mutant gene to the mouse’s reproduction. Using PCR and Southern blot to characterize the genotype of the offspring can solve the question .Just like the homozygote of Smad3 ex8/ex8 mice lacking fertility, the homozygous mice cann’t be used for propagating. We use the heterozygous mice for propagating, while the homozygous and wild type mice were used for phenotype analysis. The Smad3 ex8/ex8 heterzyous mice were used for breeding. With genotype being characterized, we found that the ratio of 3 genotype of the Smad3 ex8/ex8 heterzyous mice’ offsprings fits the Mendel’s laws. Their gestation is the sames as others mice,and embryo interval and litter are not different from others, We kept means of cryopreservation by vitrification of embryos and got normal conditions .Using the Smad3 ex8/ex8 heterzyous mice for propagating, we can be used for keeping breed and propagating. 展开更多
关键词 smad3基因剔除小鼠 繁殖 基因型鉴定
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糖耐康对转化生长因子-β_1诱导人肾小管上皮细胞Smad 2、3、7mRNA表达的影响 被引量:1
12
作者 李芳 杨丽霞 +3 位作者 舒畅 刘铜华 吴丽丽 孙文 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2013年第11期37-39,共3页
目的观察糖耐康药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad 2、3、7 mRNA的表达,探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为空白对照组、单... 目的观察糖耐康药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad 2、3、7 mRNA的表达,探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+5%糖耐康药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+10%糖耐康药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL+20%糖耐康药物血清)。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测Smad 2、3、7 mRNA的表达。结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,Smad 2、3 mRNA的表达显著上升,而Smad 7的表达减弱,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),经糖耐康药物血清干预后,Smad 2、3 mRNA的表达逐步下降,而Smad 7 mRNA的表达逐步上升,与单纯TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论糖耐康在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化信号通路Smad 2、3、7mRNA表达有关。 展开更多
关键词 糖耐康 转化生长因子-Β1 人肾小管上皮细胞 smad 2基因 smad 3基因 smad 7基因
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瘢痕疙瘩中肿瘤坏死因子α刺激基因-6及相关上下游分子表达水平及相关性的初步探究
13
作者 陈雷刚 周向昭 +3 位作者 王世宁 李亚维 刘媛媛 李坤 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期715-720,共6页
目的:研究瘢痕疙瘩中肿瘤坏死因子α刺激基因(TSG)-6及相关上下游分子的表达水平及相关性。方法:收集78例瘢痕疙瘩样本,另取50例正常皮肤组织样本作为对照。采用免疫组化检测TSG-6的阳性表达率,采用Western blot检测TSG-6、磷酸化磷酸肌... 目的:研究瘢痕疙瘩中肿瘤坏死因子α刺激基因(TSG)-6及相关上下游分子的表达水平及相关性。方法:收集78例瘢痕疙瘩样本,另取50例正常皮肤组织样本作为对照。采用免疫组化检测TSG-6的阳性表达率,采用Western blot检测TSG-6、磷酸化磷酸肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、自杀相关因子(Fas)、Fas配体(FasL)、转化生长因子(TGF)-β1及磷酸化Smad3(p-Smad3)的蛋白表达水平,采用荧光定量PCR法检测组织样本中微小RNA(miR)-23b、miR-181a及miR-376b的表达水平。结果:瘢痕疙瘩组织中TSG-6的阳性表达率、TSG-6、Fas及FasL的蛋白表达水平均低于正常皮肤组织,p-PI3K、pAKT、TGF-β1、p-Smad3、miR-23b、miR-181a及miR-376b的表达水平高于正常皮肤组织(P<0.05);瘢痕疙瘩组织中TSG-6的表达水平与p-PI3K、p-AKT、TGF-β1、p-Smad3、miR-23b、miR-181a及miR-376b的表达水平呈负相关,与Fas及FasL的表达水平呈正相关(P<0.05)。结论:TSG-6表达降低与瘢痕疙瘩形成有关,其机制可能涉及上游miR-23b、miR-181a、miR-376b及下游PI3K/AKT、Fas/FasL、TGF-β1/Smad通路。 展开更多
关键词 瘢痕疙瘩 肿瘤坏死因子α刺激基因-6 微小RNA PI3K/AKT通路 Fas/FasL通路 TGF-β1/smad通路
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SMAD3基因在畜牧生产中的应用研究进展 被引量:1
14
作者 谭斌 杨胜林 +4 位作者 杨汝才 王旭平 周美迪 周璇 杨世皓 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第1期185-193,共9页
SMAD3基因是SMADS基因家族成员之一,其编码的SMAD3蛋白是转化生长因子-β(TGF-β)超家族特异的细胞内信号转导分子,SMAD3基因通过TGF-β超家族参与疾病、免疫调节、生长发育、创伤愈合、软骨与骨骼的发育及维持等重要的生理过程,同时还... SMAD3基因是SMADS基因家族成员之一,其编码的SMAD3蛋白是转化生长因子-β(TGF-β)超家族特异的细胞内信号转导分子,SMAD3基因通过TGF-β超家族参与疾病、免疫调节、生长发育、创伤愈合、软骨与骨骼的发育及维持等重要的生理过程,同时还参与调节生殖细胞的增殖、分化、成熟、黏附、闭锁、凋亡和甾体激素的产生等,因此,了解SMAD3基因的结构与功能对动物生长发育、繁殖等研究具有重要意义。文章简述了SMAD3基因结构、功能、作用机理,分析了其在畜牧生产方面相关的应用研究进展发现,目前SMAD3基因在畜牧生产上的应用研究主要集中在参与调控脊椎动物(猪、牛、羊、鸡等)生长、发育、细胞免疫与凋亡、激素分泌及繁殖功能方面;SMAD3基因在调控动物机体疾病发生、生长发育、脂肪沉积及繁殖性能方面仍是国内外研究的热点,而该基因对畜禽疾病发生、生长和繁殖性能的精确分子调控机制仍有待进一步研究。 展开更多
关键词 smad3基因 转化生长因子-β(TGF-β) 作用机理 畜牧生产
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TGF-β and cancer: Is Smad3 a repressor of hTERT gene? 被引量:2
15
作者 He Li Dakang Xu Ban-Hock Toh Jun-Ping Liu 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2006年第2期169-173,共5页
关键词 转化生长因子-Β 癌症 smad3 HTERT基因 基因表达
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胎儿和出生后机体皮肤内转化生长因子-β_1基因表达的变化 被引量:10
16
作者 陈伟 付小兵 +4 位作者 葛世丽 孙同柱 姜笃银 周岗 盛志勇 《中国危重病急救医学》 CAS CSCD 2004年第4期206-209,共4页
目的 探讨转化生长因子 β1 (TGFβ1 )及其转录因子 sm ad2和 smad3基因在不同胎龄的胎儿和出生后机体皮肤组织中表达的变化特征及其可能的生物学意义。方法 用病理学技术检测不同发育时期皮肤的结构特征后 ,提取 18例不同胎龄 (13~... 目的 探讨转化生长因子 β1 (TGFβ1 )及其转录因子 sm ad2和 smad3基因在不同胎龄的胎儿和出生后机体皮肤组织中表达的变化特征及其可能的生物学意义。方法 用病理学技术检测不同发育时期皮肤的结构特征后 ,提取 18例不同胎龄 (13~ 32周 )的胎儿皮肤和 6例出生后机体皮肤组织的总 RNA后 ,分离 m RNA,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测这 3种基因在不同组织中的表达变化规律。结果  TGFβ1 、smad2和 smad3基因在不同发育阶段的皮肤组织中都有表达。在早期妊娠胎儿的皮肤组织中 ,TGFβ1 和 smad2基因表达较弱 ,随着胎龄的增加 ,皮肤组织内这两种基因表达逐渐增强 ,在出生后机体的皮肤组织中 ,这两种基因的表达量分别为妊娠早期皮肤的 1.3倍和 5 .9倍 ,基因表达显著升高 (P<0 .0 5 )。smad3基因的表达呈不同的变化规律 ,在妊娠早期的皮肤组织中 ,该基因的表达较强 ,随着胎儿的生长发育 ,该基因表达逐渐降低 ,而在出生后机体的皮肤组织内 ,smad3基因表达产物的灰度值又升至 0 .2 72±0 .0 2 2 ,与早期妊娠胎儿皮肤相比差异不明显 (P>0 .0 5 )。结论  TGFβ1 、sm ad2和 smad3基因在不同发育阶段人皮肤组织内都有表达 ,显示 TGFβ1 介导的信号通路可能对皮肤的发生、结构功能的维持以及伤后修复? 展开更多
关键词 转化生长因子-Β1 smad2基因 smad3基因 无瘢痕修复 胎儿皮肤
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ZHX3基因沉默对BMSCs中成骨相关因子表达的影响 被引量:1
17
作者 张苗苗 包翠芬 +2 位作者 王艳 闵鹤鸣 秦书俭 《天津医药》 CAS 2015年第12期1356-1360,共5页
目的探讨锌指蛋白和同源框3(ZHX3)基因沉默对骨髓间充质干细胞(BMSCs)中smad3、smad4、RUNX2表达的影响。方法构建ZHX3低表达慢病毒载体并转染大鼠BMSCs(ZHX3沉默组),同时设空载病毒转染BMSCs(载体对照组)及不做任何处理的BMSCs(空白对... 目的探讨锌指蛋白和同源框3(ZHX3)基因沉默对骨髓间充质干细胞(BMSCs)中smad3、smad4、RUNX2表达的影响。方法构建ZHX3低表达慢病毒载体并转染大鼠BMSCs(ZHX3沉默组),同时设空载病毒转染BMSCs(载体对照组)及不做任何处理的BMSCs(空白对照组)。荧光显微镜下测定细胞转染率并采用免疫印迹技术鉴定转染是否成功;采用免疫荧光化学和免疫印迹技术定性定量检测ZHX3沉默时smad3、smad4、RUNX2表达情况。结果(1)复苏培养的细胞具有BMSCs表型。(2)转染后,ZHX3沉默组和载体对照组均表达绿色荧光,空白对照组不表达荧光,且沉默组ZHX3基因表达显著低于载体对照组。(3)免疫荧光结果显示,smad3、smad4的阳性表达位于细胞核和细胞质,RUNX2的阳性表达主要定位于细胞核。3组细胞均可见阳性表达细胞,且空白对照组与载体对照组之间荧光强度未见显著差异,但ZHX3基因沉默组的荧光强度显著低于2个对照组。(4)免疫印迹检测smad3、smad4、RUNX2的条带于空白对照组和载体对照组中无显著差异,但均显著高于ZHX3沉默组(P<0.05)。结论ZHX3基因沉默后BMSCs体外成骨能力延迟,可能通过下调smad3、smad4、RUNX2来发挥作用。 展开更多
关键词 DNA结合蛋白质类 锌指 基因 同源盒 转录因子 基因沉默 间质干细胞 smad3 smad4 RUNX2 转录 抑制因子-锌指蛋白和同源框3
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miR-129-5p调控MC3T3-E1细胞成骨分化的体外研究 被引量:3
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作者 赵长铭 黄萌 +1 位作者 王振宁 徐璐璐 《解放军医学院学报》 CAS 北大核心 2021年第5期565-570,共6页
背景微小RNA(microRNA,miR)是一种非编码的小分子化合物,在成骨分化等生命过程中发挥重要调控作用。目的探讨miR-129-5p对小鼠成骨前体细胞(preosteoblast cell line,MC3T3-E1)成骨分化功能的影响及相关作用机制。方法体外培养MC3T3-E1... 背景微小RNA(microRNA,miR)是一种非编码的小分子化合物,在成骨分化等生命过程中发挥重要调控作用。目的探讨miR-129-5p对小鼠成骨前体细胞(preosteoblast cell line,MC3T3-E1)成骨分化功能的影响及相关作用机制。方法体外培养MC3T3-E1细胞后,分别转染慢病毒载体(miR-control、miR-129-5p mimic和miR-129-5p inhibitor),以过表达或敲低细胞miR-129-5p水平。成骨诱导分化培养细胞后,使用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色试剂盒检测碱性磷酸酶的活性,茜素红(alizarin red staining,ARS)染色观察钙结节形成情况,以检测细胞成骨分化水平。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法和Western blot法检测成骨分化基因Runx2和OCN的mRNA及蛋白表达水平。生物信息学方法预测mi R-129-5p靶基因,并用双荧光素酶基因报告实验验证。结果转染慢病毒载体的MC3T3-E1细胞进行成骨诱导分化后,与mi R-control组相比,转染miR-129-5p mimic的MC3T3-E1细胞7 d后碱性磷酸酶染色增强,成骨早期标志物Runx2表达增加,14 d后成骨晚期标志物OCN表达升高,21 d后茜素红染色显示钙化结节较大且量多(P<0.05)。而转染miR-129-5p inhibitor慢病毒的MC3T3-E1细胞与miR-control组相比,碱性磷酸酶活性低,钙结节较小且少,成骨标志物Runx2和OCN表达下降(P<0.05)。通过Targetscan网站(生物信息分析)预测miR-129-5p的靶基因为BMP通路负向调控蛋白Smad6;双荧光素酶报告实验验证Smad6为靶基因,过表达miR-129-5p后Smad6蛋白表达水平下调。结论 miR-129-5p通过靶向抑制Smad6的表达对MC3T3-E1细胞成骨分化产生促进作用。 展开更多
关键词 miR-129-5p MC3T3-E1细胞 成骨分化 smad6基因 生物信息
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酒精对HBV转基因小鼠肝脏的损伤作用及其机制 被引量:7
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作者 黄娟娟 李兵 +2 位作者 曹力波 欧阳林旗 刘世坤 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期372-376,共5页
目的探讨在肝损伤早期酒精和HBV协同作用的分子机制。方法20只HBV转基因小鼠和20只普通小鼠随机分为4组:转基因小鼠酒精组(alcohol-fed Tg mice)和普通小鼠酒精组(alcohol-fed Wt mice),以白酒灌胃;转基因小鼠对照组(control Tg mice)... 目的探讨在肝损伤早期酒精和HBV协同作用的分子机制。方法20只HBV转基因小鼠和20只普通小鼠随机分为4组:转基因小鼠酒精组(alcohol-fed Tg mice)和普通小鼠酒精组(alcohol-fed Wt mice),以白酒灌胃;转基因小鼠对照组(control Tg mice)和普通小鼠对照组(control Wtmice),以生理盐水灌胃。连续处理10wk后检测各组小鼠血清ALT、AST水平,肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、Smad7、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达水平及TGF-β1、CTGF、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平。结果酒精可升高转基因小鼠血清ALT、AST水平,诱发其肝脏病理损伤,但纤维化不明显;肝组织TGF-β1、Smad3、Smad7、CTGF mRNA及TGF-β1、CTGF、α-SMA蛋白表达增加。结论酒精和HBV对肝损伤协同作用的机制可能与TGF-β1、Smad3、CTGF、α-SMA表达增加以及TGF-β1/Smads通路信号分子表达比例失调有关。 展开更多
关键词 酒精 乙肝病毒转基因小鼠 转化生长因子-β1 smad3 smad7 结缔组织生长因子 Α-平滑肌肌动蛋白
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Smad信号传递途径调节肾小管上皮细胞转分化实验 被引量:10
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作者 李瑾 王宁宁 +4 位作者 谭若云 郑东辉 任胜利 王笑云 杨俊伟 《肾脏病与透析肾移植杂志》 CAS CSCD 2005年第3期230-234,共5页
目的:研究转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞(HKC)转分化作用与其细胞内信号传递途径的关系。方法:以细胞间粘连蛋白(Ecadherin)和α平滑肌肌动蛋白(αSMA)作为肾小管上皮细胞转分化的观察指标,借助细胞培养、蛋白印迹和基... 目的:研究转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞(HKC)转分化作用与其细胞内信号传递途径的关系。方法:以细胞间粘连蛋白(Ecadherin)和α平滑肌肌动蛋白(αSMA)作为肾小管上皮细胞转分化的观察指标,借助细胞培养、蛋白印迹和基因转染等方法,检测TGFβ1引发的Smad信号途径的变化,和TGFβ1诱导的肾小管上皮细胞转分化作用。将含有Smad7基因表达质粒转染HKC细胞,观察高表达的Smad7蛋白对TGFβ1作用的影响。结果:实验结果表明①TGFβ1作用HKC细胞10min即可磷酸化HKC细胞内Smad2/3蛋白,而且此作用可持续48h以上;②TGFβ1作用HKC细胞6h即可下调Ecadherin蛋白的表达,24h后能诱导该细胞表达αSMA,其作用呈明显的剂量依赖关系;③转染Smad7表达质粒的HKC细胞,可拮抗TGFβ1诱导HKC细胞表达αSMA以及下调Ecadherin蛋白表达的作用;④应用特异性MAP激酶抑制剂(PD98059和SC68376)和PI3激酶抑制剂(Wortmannin)均不能拮抗TGFβ1的作用。结论:TGFβ1诱导的上皮细胞转分化作用是依赖其引发的Smad信号途径,阻断该信号传递途径则能够拮抗TGFβ的作用。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞转分化 信号传递途径 实验 α-平滑肌肌动蛋白 HKC细胞 人肾小管上皮细胞 cadherin 转化生长因子β smad7蛋白 smad2/3 α-SMA 激酶抑制剂 调节 分化作用 基因表达质粒 剂量依赖关系 TGF 信号途径 细胞表达
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