白当归素通过调节TGF-β1/Smad3通路改善特发性肺纤维化的作用机制研究

为了研究白当归素(byakangelicin,BYAK)对转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的成纤维细胞激活和博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF),并初步探讨其作用机制.在细胞实验中,通过TGF-β1诱导肺成纤维细胞激活模型;在动物实验中,通过苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H&E)和羟脯氨酸含量检测评价肺纤维化程度;免疫印迹技术(western blot,WB)检测肺纤维化相关蛋白α-SMA(alpha-smooth muscle actin)、细胞外基质生成蛋白CoL1A1(collagen type I)、Smad3、p-Smad3的表达.结果表明:与正常组相比,TGF-β1组α-SMA蛋白升高,CoL1A1显著发生上调,博来霉素诱导的小鼠肺组织结构遭到破坏;与模型组相比,白当归素可以剂量依赖地抑制TGF-β1诱导的α-SMA和CoL1A1的蛋白表达,同时显著改善博来霉素诱导的小鼠肺纤维化进程;进一步研究发现,白当归素通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路,明显改善了博来霉素诱导的小鼠肺纤维化进程.白当归素可能是通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路抑制成纤维细胞活化和减少细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的生成,从而对特发性肺纤维化的预防和治疗具有潜在作用.

miR-590-5p靶向TGF-β1/Smad3通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭的研究

目的探讨miR-590-5p通过TGF-β1/Smad3通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭的作用。方法获取瘢痕疙瘩成纤维细胞进行培养采用随机数字表法分组,分为空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组、miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组,其中空白对照组不进行转染,空载体转染组转染空载体、miR-590-5p mimic组转染miR-590-5p mimic、miR-590-5p inhibitor组转染miR-590-5p inhibitor、miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组转染miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1。采用CCK-8试验检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell试验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测TGF-β1、Smad3蛋白表达。结果miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞培养24、48和72 h时细胞增殖活力明显低于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞凋亡率明显高于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞侵袭数明显低于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞TGF-β1、Smad3蛋白相对表达量明显低于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制miR-590-5p表达,可促进瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭以及抑制细胞凋亡,可能与通过TGF-β1/Smad3通路调控有关。

黄芪桂枝五物汤对糖尿病大鼠心肌梗死后心肌重塑及TGF-β_(1)/Smad3通路的影响

目的研究黄芪桂枝五物汤对糖尿病大鼠心肌梗死后心肌重塑和转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))/Smad3通路的影响。方法雄性SD大鼠72只,随机取12只作为空白组,其余大鼠采用高糖高脂饲料喂养建立糖尿病模型,然后采用冠状动脉结扎法建立心肌梗死模型。将50只造模成功大鼠随机分为模型组、福辛普利组及黄芪桂枝五物汤低、中、高剂量组,每组10只。黄芪桂枝五物汤低、中、高剂量组分别给予黄芪桂枝五物汤2.5 g/kg、5 g/kg、10 g/kg灌胃,福辛普利组给予福辛普利4 mg/kg灌胃,空白组及模型组给予生理盐水灌胃,均1次/d,连续8周。超声诊断仪测定大鼠左心室短轴缩短率(LVFS)及左心室射血分数(LVEF),全自动生化分析仪测定血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、脑钠肽(BNP)、血糖及糖化血红蛋白水平,ELISA法测定心肌组织中一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、丙二醛(MDA)及内皮素(ET)含量,HE染色观察心肌组织病理形态,Western blot法测定心肌组织中TGF-β_(1)及Smad3蛋白表达情况,RT-PCR法测定心肌组织中TGF-β_(1)mRNA表达量。结果与空白组比较,模型组大鼠LVFS及LVEF、心肌组织中NO和eNOS含量均明显降低(P均<0.05),血清CK、CK-MB、BNP、血糖、糖化血红蛋白水平及心肌组织中MDA和ET含量、心肌组织中TGF-β_(1)和p-Smad3/Smad3蛋白相对表达量、心肌组织中TGF-β_(1)mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05),大鼠心肌组织有明显炎症浸润及坏死;与模型组比较,黄芪桂枝五物汤各组及福辛普利组大鼠LVFS及LVEF、心肌组织中NO和eNOS含量均明显升高(P均<0.05),血清CK、CK-MB、BNP、血糖、糖化血红蛋白水平及心肌组织中MDA和ET含量、心肌组织中TGF-β_(1)和p-Smad3/Smad3蛋白相对表达量、心肌组织中TGF-β_(1)mRNA相对表达量均明降低(P均<0.05),大鼠心肌组织炎症坏死明显减轻。结论黄芪桂枝五物汤能够显著改善糖尿病心肌梗死大鼠心功能,抑制心肌重塑,调节血糖水平,其机制可能与调节TGF-β_(1)/Smad3通路有关。

百令胶囊上调miR-145-5p逆转TGF-β_(1)/Smad3通路机制初探

目的探讨百令胶囊(BLC)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺损伤的改善作用,以及对香烟烟雾提取物(CSE)作用下人支气管上皮细胞BEAS-2B生长的影响。方法将60只SD大鼠随机分为正常对照组(A组,灌胃生理盐水2 mL),模型组(B组,灌胃生理盐水2 mL),BLC组(C组,灌胃BLC 5.5 mg/kg),miR-145-5p inhibitorNC组(D组,灌胃BLC 5.5 mg/kg+尾静脉注射miR-145-5p inhibitorNC 6μL),miR-145-5p inhibitor组(E组,灌胃BLC 5.5 mg/kg+尾静脉注射miR-145-5p inhibitor 6μL),各12只。以香烟烟雾吸入法复制大鼠COPD模型。建模成功后灌胃相应药物或生理盐水(每日1次),尾静脉注射相应药物(每周1次),连续8周。以0(空白对照),3%,5%,10%,20%CSE,以及加5%,10%,20%,40%的BLC药物血清(BLC-S)孵育细胞48 h。检测大鼠潮气量(TV)、呼气峰流量(PEF)、分钟通气量(MV)、用力肺活量(FVC)和第0.3秒用力呼气容积(FEV_(0.3));观察肺组织病理形态;免疫组化法检测Smad3表达水平,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定转化生长因子(TGF)-β_(1)表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miR-145-5p mRNA表达水平。采用CCK-8法检测细胞活力。结果与B组比较,C组及D组大鼠TV,PEF,MV,FVC,FEV0.3均显著升高;与D组比较,E组大鼠上述指标均显著降低(P<0.05)。与B组比较,C组及D组大鼠肺组织病理形态显著改善,平均肺泡数显著增加,肺泡直径显著减小;与D组比较,E组大鼠肺组织病理形态未改善,且平均肺泡数显著减少,肺泡直径显著增长(P<0.05)。与5%CSE条件比较,5%CSE+20%BLC-S条件下的细胞活力显著增强(P<0.05)。与B组比较,C组及D组大鼠肺组织中Smad3,TGF-β_(1)的表达水平均显著降低,miR-145-5p mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与D组比较,E组大鼠肺组织中Smad3,TGF-β_(1)的表达水平均显著升高,miR-145-5p mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与5%CSE条件比较,5%CSE+20%BLC-S条件下细胞Smad3和TGF-β_(1)的表达水平均显著降低,miR-145-5p mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与5%CSE+20%BLC-S+inhibitor NC条件比较,同水平inhibitor条件下细胞Smad3及TGF-β_(1)表达水平均显著升高(P<0.05)。结论BLC在体内和体外均显示出对香烟诱导COPD的保护作用,其机制可能与上调miR-145-5p水平逆转香烟暴露激活的TGF-β_(1)/Smad3信号通路有关。

宣肺开闭汤通过抑制TGF-β1/Smad3通路减缓小鼠肺纤维化进展

【目的】探讨宣肺开闭汤对肺纤维化小鼠的治疗作用及机制。【方法】将60只小鼠随机分为空白组,模型组,宣肺开闭汤低、中、高剂量组及宣肺开闭汤高剂量+转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads通路激活剂(SRI-011381)组,每组10只。除空白组,其余各组小鼠采用博来霉素诱导构建肺纤维化模型。干预结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理学变化并进行炎症评分,马松(Masson)染色法观察肺组织纤维化改变并进行纤维化评分,免疫组织化学染色法观察肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测肺组织中Hyp含量,蛋白印迹法(Western Blot)检测肺组织中TGF-β1、Smad3的蛋白表达,实时聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺组织中TGF-β1、Smad3的mRNA表达。【结果】与空白组比较,模型组小鼠肺泡腔炎症评分、肺纤维化评分、肺组织中α-SMA阳性表达水平、Hyp含量及TGF-β1、Smad3的蛋白和mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);宣肺开闭汤低、中、高剂量组小鼠肺泡腔炎症评分、肺纤维化评分、肺组织中α-SMA阳性表达水平、Hyp含量及TGF-β1、Smad3的蛋白和mRNA表达水平均低于模型组,且呈剂量依赖性(P<0.05);与宣肺开闭汤高剂量组比较,宣肺开闭汤高剂量+SRI-011381组小鼠肺泡腔炎症评分、肺纤维化评分、肺组织中α-SMA阳性表达水平、Hyp含量及TGF-β1、Smad3的蛋白和mRNA表达水平均显著升高(P<0.05)。【结论】宣肺开闭汤可减轻博来霉素诱导的小鼠肺纤维化,其作用机制与抑制TGF-β1/Smad3信号通路有关。

黄芪葛根汤对糖尿病大鼠心肌TGF-β_1/Smad3通路的影响

目的:研究黄芪葛根汤对实验性糖尿病心肌病变的干预作用及机制。方法:采用高脂饲料喂养和链脲佐菌素腹腔注射的方法建立2型糖尿病大鼠心肌病变模型,观察黄芪葛根汤对血糖、胰岛素、心肌纤维化、转化生长因子-β1(TGF-β1)及其信号蛋白Smad3表达的影响;mRNA表达采用RT-PCR方法检测,蛋白表达采用免疫组化方法。结果:黄芪葛根汤可显著降低糖尿病大鼠空腹血糖、胰岛素,改善胰岛素抵抗,减少心肌羟脯氨酸含量抑制胶原增生,降低心脏指数,并显著抑制心肌TGF-β1/Smad3 mRNA和蛋白的强表达。结论:黄芪葛根汤可以通过调控TGF-β1/Smad3通路显著干预实验性糖尿病心肌纤维化病变。

芍药苷通过抑制TGF-β_(1)/Smad3通路对急性心肌梗死后心室重塑的作用研究

目的基于抑制转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))/Smad3通路探讨芍药苷对急性心肌梗死后心室重塑的影响。方法将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、曲美他嗪组和芍药苷高、低剂量组,每组8只。除假手术组外,其余各组通过结扎大鼠冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死大鼠模型。曲美他嗪组大鼠灌胃10mg/(kg·d)曲美他嗪,芍药苷高、低剂量组大鼠灌胃10 mg/(kg·d)和5 mg/(kg·d)芍药苷,假手术组和模型组灌胃生理盐水,均连续4周。超声心电图评估大鼠心功能,ELISA试剂盒检测大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,TTC染色检测大鼠心肌梗死面积,HE染色观察大鼠心肌结构变化,Masson染色观察大鼠心肌胶原沉积情况,Western blot法检测大鼠心肌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TGF-β_(1)、p-Smad3和Smad3表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠射血分数(EF)、左室短轴缩短分数(FS)均显著降低(P均<0.05),左心室舒张末期内径(LVIDd)、左心室收缩末期内径(LVIDs)和血清TNF-α、IL-6水平均显著升高(P均<0.05);大鼠心肌排列紊乱,有明显炎性细胞浸润和间质水肿,胶原沉积面积和心肌组织中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TGF-β_(1)、p-Smad3表达水平均显著增高(P均<0.05)。与模型组比较,曲美他嗪组、芍药苷低剂量组和芍药苷高剂量组大鼠EF和FS均显著升高(P均<0.05),LVIDs、LVIDd,血清TNF-α、IL-6水平,心肌梗死面积、胶原沉积面积,心肌组织中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TGF-β_(1)、p-Smad3表达量均显著降低(P均<0.05),且芍药苷高剂量组改善情况均优于芍药苷低剂量组(P均<0.05)。结论芍药苷可通过抑制TGF-β_(1)/Smad3通路改善急性心肌梗死后心室重塑。

吡菲尼酮对UUO大鼠肾纤维化组织中TGF-β1/smad3通路表达的影响

目的:探讨吡菲尼酮对UUO大鼠肾组织中TGF-β1/smad3通路表达的影响及作用。方法:将72只Wistar雄性大鼠随机分为3组:sham组、UUO组以0.9%NaCl 2mL灌胃,治疗组给予吡菲尼酮500mg/kg溶解后灌胃,各组大鼠于术后第3,7,14天分别处死8只。结果:与Sham组相比,UUO模型组肾小管间质损伤和纤维化程度明显,TGF-β1及smad3明显表达增多;且随着梗阻时间延长,UUO模型组大鼠的TGF-β1及smad3表达逐渐增加。与模型组比较治疗组大鼠肾间质组织中TGF-β1及smad3的表达水平显著降低。结论:吡菲尼酮能够通过抑制TGF-β1/smad3信号通路产生延缓肾间质纤维化的作用,可能为肾间质纤维化的临床治疗提供新的论证。

上调miR-200c通过抑制TGF-β1/Smad3通路减轻单侧输尿管梗阻小鼠肾纤维化

目的观察mi R-200c在单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)小鼠肾组织中的表达变化及其对UUO小鼠肾间质纤维化和TGF-β1/Smad3通路的影响。方法 45只C57BL/6J小鼠,随机数字表法分为假UUO组、UUO组、UUO+agomi R-200c组,每组15只。假UUO组仅游离左侧输尿管但不结扎;UUO组和UUO+agomi R-200c组通过结扎左侧输尿管建立的肾纤维化模型,手术后第1、7、14d两组小鼠分别给予生理盐水和agomir-200c尾静脉注射。第21d后处死全部小鼠,取血测定血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)。取小鼠梗阻侧肾脏组织,HE染色和Masson染色评价肾小管间质损伤和肾间质纤维化损伤程度,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测肾组织mi R-200c的表达,Western blotting检测肾组织TGF-β1、Smad3及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达。结果与假UUO组比较,UUO组小鼠肾组织mi R-200c的表达水平明显降低,血清Scr、BUN水平明显升高,肾小管间质损伤病理评分升高,肾胶原容积分数(c VF)增加,肾组织中TGF-β1、Smad3及α-SMA水平明显升高。与UUO组比较,UUO+agomi R-200c组小鼠肾组织mi R-200c的表达明显增高,血清Scr、BUN水平明显降低,肾小管间质损伤病理评分下降,肾胶原容积分数减少,肾组织中TGF-β1、Smad3及α-SMA水平明显降低。结论上调mi R-200c能够通过抑制TGF-β1/Smad3通路减轻UUO小鼠肾间质纤维化。

高糖刺激的巨噬细胞源外泌体对小鼠肾组织中TGF-β1/Smad3通路的影响作用

目的探讨高糖刺激的巨噬细胞源外泌体对C57小鼠肾组织中TGF-β1/Smad3通路的影响作用。方法动物分组为NG-Exo组(正常糖刺激的巨噬细胞外泌体组),MC-Exo组(甘露醇刺激的巨噬细胞外泌体组),HG-Exo组(高糖刺激的巨噬细胞外泌体组)。将不同糖刺激下巨噬细胞分泌的外泌体通过尾静脉注射到雄性SPF级C57BL/6小鼠体内,并于8周后收集尿液及肾脏标本,通过尿白蛋白试剂盒检测尿蛋白排泄率,HE染色和PAS染色观察肾小球系膜细胞增生和基质扩张程度,并计算系膜扩张指数。免疫组化检测小鼠肾脏内巨噬细胞CD68浸润及细胞外基质Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)与纤连蛋白(FN)的表达,Western blot检测肾组织中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和细胞外基质α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Col-Ⅳ、FN以及TGF-β1/Smad3通路蛋白表达变化。结果 HE染色和PAS染色显示HG-Exo组小鼠肾组织系膜增殖程度增高,系膜扩张评分明显高于NG-Exo组和MC-Exo组;免疫组化显示HG-Exo组小鼠肾组织中巨噬细胞CD68及细胞外基质Col-Ⅳ与FN表达高于NG-Exo组和MC-Exo组。Western blot显示HG-Exo组小鼠肾组织中炎性因子TNF-α、pro-IL-1β、IL-1β与细胞外基质α-SMA、Col-Ⅳ、FN表达均高于NG-Exo组和MC-Exo组;且TGF-β1/Smad3通路相关蛋白表达增加。结论高糖刺激的巨噬细胞源外泌体可以引起小鼠肾组织中炎症及系膜细胞和基质的增加,其机制可能与TGF-β1/Smad3信号通路激活有关。

糖肾方抑制TGF-β1/Smad3通路促进小鼠肾小管上皮细胞胆固醇流出

目的:利用高糖诱导的小鼠肾小管上皮细胞(mouse tubular epithelial cells,mTECs)观察中药糖肾方颗粒及Smad3抑制剂SIS3对于TGF-β1/Smad3通路及细胞胆固醇流出通路的影响。方法:25 mmol/L高糖诱导mTECs细胞后,分别给予糖肾方及Smad3抑制剂SIS3干预,利用ELISA试剂盒检测细胞中脂质含量,利用Western blot和Real-time PCR检测细胞中TGF-β1/Smad3通路及过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator 1α,PGC-1α)、肝脏X受体(liver X receptor,LXR)、ATP-结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ATP-结合盒转运蛋白G1(ABCG1)的表达。结果:糖肾方可以降低高糖诱导mTECs细胞中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酸酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)含量,上调高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)含量(P<0.05);糖肾方及Smad3抑制剂SIS3可下调高糖诱导mTECs细胞中TGF-β1、Smad3、CollagenⅠ和Fibronectin的表达,上调PGC-1α、LXR、ABCA1、ABCG1的表达(P<0.05)。结论:糖肾方可通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路促进细胞胆固醇流出,减轻肾损害。

基于TGF-β1/Smad3通路和AGEs/RAGE分子研究丹蛭降糖胶囊干预糖尿病大鼠心肌纤维化的作用

目的从转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad3信号通路和晚期糖基化终末产物(AGEs)/AGEs受体(RAGE)分子水平研究丹蛭降糖胶囊干预糖尿病大鼠心肌纤维化的作用及其机制。方法采用高糖高脂饮食联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)方法建立2型糖尿病大鼠模型,饲养6周后将造模成功30只大鼠随机分为二甲双胍组、丹蛭降糖组、模型组各10只,另取10只健康大鼠作为空白组。二甲双胍组给予二甲双胍150 mg/kg灌胃,丹蛭降糖组给予丹蛭降糖胶囊540 mg/kg灌胃,模型组和空白组给予等容量蒸馏水灌胃。连续灌胃8周后,麻醉状态下取材。采用HE染色法观察心肌组织病理学变化;用ELISA法检测左心室AGEs、结缔组织生长因子(CTGF)和RAGE的表达水平;Western blot法和实时荧光定量PCR法检测心肌组织中TGF-β1及其信号蛋白Smad3蛋白和基因表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠光镜下心肌纤维走行较为紊乱,部分溶解、断裂,胞核位置不一,细胞间界限不清,间质出现纤维细胞增生。与模型组比较,二甲双胍组和丹蛭降糖组光镜下心肌细胞的病变明显减轻,左心室AGEs、RAGE、CTGF表达水平及TGF-β1、Smad3、p-Smad3蛋白和基因表达水平均明显降低(P均<0.05),且丹蛭降糖组各指标水平均明显低于二甲双胍组(P均<0.05)。结论丹蛭降糖胶囊可能通过抑制心肌TGF-β1/Smad3信号通路和AGEs/RAGE分子表达,延缓糖尿病大鼠心肌纤维化,发挥心肌保护作用。

atRA对大鼠结肠炎中TGF-β1/Smad3通路的作用研究

目的探讨全反式维甲酸(atRA)对TNBS诱导的大鼠结肠炎模型中的TGF-β1/Smad3信号通路的影响。方法大鼠随机分为5组,分别为对照组(C组),造模组(TNBS组),atRA灌胃组(A组),美沙拉嗪组(M组),美沙拉嗪+atRA组(MA组);使用TNBS/乙醇灌肠液诱导结肠炎;之后对照组、造模组予以生理盐水灌胃,其余各组分别予以相应药物灌胃,记录大鼠的疾病活动指数(DAI)、组织学评分(TDI)。QT-PCR检测结肠组织中TGF-β1 mRNA、Smad7 mRNA的水平,免疫组化测定结肠组织中Smad7蛋白及磷酸化Smad3(p Smad3)水平。ELISA法检测血清中IL-17、TNF-α水平。结果与TNBS组比较,各治疗组的DAI、TDI评分较TNBS组下降,差异有统计学意义(P<0.05),MA组下降最明显(P<0.05)。C组TGF-β1 mRNA水平降低最明显,TNBS组升高,各治疗组升高更明显,与TNBS组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,与TNBS组比较,各组Smad7 mRNA水平均下降(P<0.05);TNBS组Smad7蛋白水平最高,治疗后各组Smad7蛋白水平均明显降低(P<0.05),但A组与M组比较差异无统计学意义(P=0.586),MA组较A组或M组下降更明显(P<0.05)。TNBS组p Smad3水平明显下调,而各治疗组均升高,与TNBS组比较差异有统计学意义(P<0.01),其中MA组升高最明显(P<0.05)。各治疗组IL-17、TNF-α水平较TNBS组均明显降低,MA组降低最明显(P<0.05)。结论炎症性肠病中存在着TGF-β1/Smad3通路受损,导致过度的免疫炎症反应。atRA可通过下调Smad7蛋白表达,增加p Smad3水平,修复该通路,恢复TGF-β1的效应,缓解症状。

p300/p53/Smad3通路参与人心房成纤维细胞衰老相关心房纤维化

目的:探究p300在人心房成纤维细胞(HAFs)衰老相关心房纤维化中的作用及其可能机制。方法:采用组织贴块法从人左心耳组织中分离HAFs并进行传代培养建立细胞衰老模型,检测衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)活性以比较P3和P7代细胞衰老程度的不同。Western blot实验比较不同代数(P3、P7和P11)细胞的p300、p53和Smad3等衰老和纤维化相关因子的蛋白表达水平。高代数(P7)细胞给予不同浓度(6、9和12μmol/L)的p300抑制剂姜黄素处理或转染p300 shRNA质粒敲减p300的表达,低代数(P3)细胞转染p300过表达质粒,分别观察p53和Smad3等衰老和纤维化相关因子蛋白水平的变化。结果:随着HAFs传代,衰老细胞增加,伴随p300、p53、p21、p16、p-Smad3、基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/9)和纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)水平的升高(P<0.05)。姜黄素处理或转染p300 shRNA质粒后,高代数(P7)细胞的p53和Smad3等衰老和纤维化相关因子的蛋白水平减少(P<0.05);而过表达p300后,低代数(P3)细胞的p53和Smad3的蛋白水平明显增加(P<0.05)。结论:p300可以促进HAFs衰老相关纤维化,其机制可能是通过激活p53/Smad3通路实现的。

FKBP11下调对肾癌细胞增殖、迁移、侵袭及TGF-β_(1)/Smad3通路的影响

目的 探讨下调FK506结合蛋白11(FKBP11)对肾细胞癌(RCC)细胞增殖、迁移、侵袭的影响及对转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))/Smad同源物3(Smad3)通路的作用。方法 2020年3月—2021年3月于武汉大学人民医院生物实验室进行实验。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹(Western-blot)法测定人正常肾小管上皮细胞系(HK-2)和RCC细胞系(A498、ACHN、CaKi-1、786-O)中FKBP11的mRNA和蛋白表达水平。将786-O细胞分为空白组(不转染)、对照组(转染阴性对照siRNA)、si-FKBP11组(转染si-FKBP11)和si-FKBP11+LY364947组(转染si-FKBP11同时加入TGF-β_(1)/Smad3通路抑制剂LY364947),采用qRT-PCR和Western-blot检测各组细胞中FKBP11 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法和集落形成实验检测细胞的增殖活力,Transwell小室检测细胞的侵袭和迁移能力,Western-blot检测各组细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、凋亡抑制蛋白(Twist)、锌指转录因子(Snail)、TGF-β_(1)、Smad3及磷酸化Smad3 (p-Smad3)蛋白表达水平。结果 与正常肾小管上皮细胞系HK-2比较,RCC细胞系A498、ACHN、CaKi-1、786-O中FKBP11 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.05),且在786-O细胞中表达最高。与对照组比较,si-FKBP11组细胞中FKBP11 mRNA和蛋白表达水平、细胞增殖能力、细胞侵袭和迁移能力及PCNA、Vimentin、Twist、Snail、TGF-β_(1)和p-Smad3蛋白水平显著降低,E-cadherin蛋白水平显著增高(P<0.05);与si-FKBP11组比较,si-FKBP11+LY364947组细胞增殖能力、细胞侵袭和迁移能力以及PCNA、Vimentin、Twist、Snail、TGF-β_(1)和p-Smad3蛋白水平显著降低,E-cadherin蛋白水平显著增高(P<0.05);而空白组与对照组上述各项指标变化比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 FKBP11下调可通过抑制TGF-β_(1)/Smad3通路激活进而抑制RCC细胞增殖、侵袭和迁移。

维生素D治疗小鼠狼疮性肾炎的机制:基于上调miR145的表达进而抑制TGF-β1/Smad3通路

目的研究1,25(OH)_(2)D_(3)是否通过上调miR145从而抑制TGF-β1/Smad3通路,探讨其在狼疮性肾炎中的可能治疗机制。方法共42只8周龄雌性ApoE^(-/-)小鼠,分为7组,每组6只。空白对照组1、2每天予腹腔注射0.5 mL无菌0.9%生理盐水至实验结束;空白模型组1、2予腹腔注射降植烷0.5 mL/只1次后高脂饲料喂养3个月建立狼疮性肾炎小鼠模型;1,25(OH)_(2)D_(3)治疗组、miR145过表达组、miR145空载体组在空白模型组的基础上,分别予灌胃维生素D、载入miR145空载腺病毒、载入miR145过表达腺病毒。CBB法检测各组小鼠第8周尿蛋白含量,ELISA法分别检测各组小鼠外周血ANA抗体、抗dsDNA抗体,评估小鼠模型建立情况。通过RT-qPCR检测各组小鼠外周血PBMCs中miR145表达,观察1,25(OH)_(2)D_(3)处理后miR145表达情况。通过Western blot检测各组小鼠外周血PBMCs及肾脏中TGF-β1、Smad3、p-smad3表达,观察上调1,25(OH)_(2)D_(3)、miR145过表达对TGF-β1/Smad3通路的影响。对空白对照组1、空白模型组1、miR145过表达组、miR145空载体组小鼠肾脏进行病理检测,比较miR145过表达后肾脏病理变化。结果miR145对小鼠狼疮性肾炎的作用实验组:miR145过表达组中小鼠肾脏损害减轻;外周血PBMCs中miR145表达水平显著高于miR145空载体组(P<0.01),TGF-β1、Smad3、p-smad3表达均显著低于miR145空载体组(均P<0.01),肾脏中TGF-β1、Smad3、p-smad3表达均显著低于miR145空载体组(均P<0.01)。1,25(OH)_(2)D_(3)对小鼠狼疮性肾炎的治疗作用实验组:第24周,1,25(OH)_(2)D_(3)治疗组尿蛋白量明显低于空白模型组(P<0.01);1,25(OH)_(2)D_(3)治疗组小鼠血清1,25(OH)_(2)D_(3)浓度明显高于空白模型组(P<0.01),外周血PBMCs中miR145表达水平显著高于空白模型组(P<0.01),而TGF-β1、Smad3、p-smad3表达明显低于空白模型组(均P<0.01)。结论1,25(OH)_(2)D_(3)通过上调miR145表达,从而负性调节TGF-β1/Smad3通路,减轻小鼠狼疮性肾炎肾脏损害。miR145可能是治疗狼疮性肾炎的新靶点。

金雀异黄素通过调控TGF-β1/Smad3信号通路对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的影响

目的 探讨金雀异黄素减轻糖尿病大鼠心肌纤维化的作用及潜在机制。方法 通过高脂饮食结合腹腔注射链脲菌素(STZ)法建立大鼠2型糖尿病(T2DM)模型,并随机分为模型组、二甲双胍组(100 mg/kg)及金雀异黄素低、高剂量组(50、100 mg/kg),另设正常组给予常规饮食,每组10只。各给药组灌胃给药8周,检测体质量、心功能、心脏质量及心脏指数,血清CK-MB、AST及LDH活性,观察心肌纤维化程度,心肌组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad同源物3(Smad3)mRNA和蛋白表达,心肌组织Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)和Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)蛋白分布及表达。结果 与模型组比较,金雀异黄素各剂量组大鼠体质量、每搏输出量(SV)及射血分数(EF)升高(P<0.01),心脏指数、左心室收缩末期内径(LVIDs)、血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织胶原相对面积及CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织TGF-β1、Smad3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),金雀异黄素高剂量组左心室舒张末期内径(LVIDd)降低(P<0.05)。结论 金雀异黄素可通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路,减轻2型糖尿病大鼠心肌纤维化作用,进而发挥保护心脏效应。

HDAC3抑制剂RGFP966通过下调TGF-β1/SMAD3/STAT-1信号通路抑制AIM2炎症小体活化和EMT缓解子宫内膜纤维化

目的探讨HDAC3抑制剂RGFP966缓解子宫内膜纤维化的分子机制。方法将18只6~8周雌性SD大鼠随机分为3组,Control组、IUA模型组(即宫内粘连大鼠模型组)、RGFP966治疗组(IUA模型组给予HDAC3抑制剂RGFP966治疗),每组6只。建立IUA大鼠模型。ELISA测定大鼠血清炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平。qPCR法测定大鼠子宫内膜组织上皮间质转化标志物E-cadherin、N-cadherin、α-SMA、Vimentin mRNA相对表达水平。蛋白质印迹法测定大鼠子宫内膜组织TGF-β1、SMAD3、p-STAT-1、STAT-1、AIM2、IL-18、cleaved-IL-1β、IL-1β的表达水平。结果与Control组相比,IUA模型组大鼠子宫角壁变薄,血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高(P<0.05);E-cadherin mRNA相对表达水平降低,N-cadherin、α-SMA、Vimentin mRNA相对表达水平升高(P<0.05);TGF-β1、SMAD3、p-STAT-1蛋白质表达水平增强(P<0.05);AIM2、IL-18、cleaved-IL-1β的表达水平增强(P<0.05)。与IUA模型组相比,RGFP966治疗组部分逆转(P<0.05)了上述指标。STAT-1和IL-1β的表达水平在上述3个分组中无明显差异(P>0.05)。结论HDAC3的抑制剂RGFP966可通过下调TGF-β1/SMAD3/STAT-1信号通路抑制AIM2炎症小体和EMT,缓解子宫内膜纤维化。

硫辛酸联合踝泵运动治疗糖尿病足的疗效及TGF-β1/Smad3信号通路的调控作用

近年来,糖尿病患病人数呈现快速增加的趋势。糖尿病足是糖尿病患者的严重并发症之一,严重影响患者的生存质量[1]。研究显示,国内糖尿病足发病率呈逐年上升趋势,糖尿病门诊中糖尿病足占3.67%,而截肢率已高于1%[2]。硫辛酸是糖尿病临床治疗的一线用药。

益肾降糖饮对糖尿病肾脏病大鼠TGF-β1/SMAD2/3信号通路的调节作用

目的:观察益肾降糖饮对糖尿病肾脏病(DKD)大鼠TGF-β1/SMAD2/3信号通路的调节作用。方法:随机将30只大鼠分为对照组、模型组、益肾降糖饮低剂量组、益肾降糖饮高剂量组、达格列净组,以柠檬酸缓冲液溶解的1%链脲佐菌素(STZ)经腹腔注射建立DKD大鼠实验模型。经8w治疗后,检测并比较各实验组大鼠禁食状态下的血糖、24h尿蛋白、肾组织病理的变化,以及转化生长因子-β1(TGF-β1)/SMAD2/3信号通路、纤维粘连蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况。结果:与模型组比较,益肾降糖饮低剂量组、益肾降糖饮高剂量组大鼠的肾重指数、空腹血糖、24h尿蛋白、TGF-β1、SMAD2/3、纤维粘连蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达及肾纤维化程度均明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:益肾降糖饮可通过干预TGF-β1/SMAD2/3信号传导,从而延缓DKD大鼠肾纤维化的进展。