转化生长因子β_1和Smad4蛋白在肝癌组织中的表达及其意义

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和Smad4蛋白在肝癌组织中的表达及其意义。方法选取2008年3月—2011年4月入住我院并接受治疗的肝癌患者54例,采用原位杂交显色法(IHCABC法)分析TGF-β1和Smad4蛋白在肝癌组织中表达和半定量情况。结果肝癌组织中Smad4蛋白高表达率(38.9%)低于癌旁组织(46.3%),差异有统计学意义(χ2=16.59,P=0.01)。肝癌组织中TGF-β1和Smad4蛋白高表达率在男女间差异无统计学意义(P>0.05);以45岁为界,肝癌组织中TGF-β1和Smad4蛋白高表达率在不同年龄间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);在不同病理分期间比较,差异亦均有统计学意义(P<0.05),且随着病理分期增加,TGF-β1和Smad4蛋白高表达率升高。结论肝癌组织中Smad4蛋白高表达率低于癌旁组织,TGF-β1和Smad4蛋白高表达与患者性别无关,而与病理分期和年龄增长(≥45岁)有关。

Smad4蛋白及mRNA在卵巢不同发育阶段的表达

目的探讨Smad4在不同发育阶段大鼠卵巢中蛋白及mRNA的表达。方法选择不同发育时期大鼠卵巢,运用免疫组化方法检测卵巢中Smad4蛋白表达,并进行图像分析;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Smad4mRNA在卵巢中的表达。结果免疫组化结果显示Smad4主要表达在各级卵泡中,在卵巢发育早期,Smad4主要在原始卵泡和窦前卵泡中表达;随着卵巢的发育成熟,Smad4在窦状及成熟卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞的表达与间质细胞比较无显著差异(P>0.05)。Smad4在卵泡中的表达强度也发生了变化随着卵泡的发育,Smad4在窦状及成熟卵泡卵母细胞的表达与窦前卵泡卵母细胞比较明显减弱(P<0.05,P<0.01);在卵泡膜细胞的表达逐渐增强(P<0.01),而在各级卵泡颗粒细胞中的表达无显著差异(P>0.05)。RT-PCR结果显示各阶段卵巢均有mRNA的表达,从第3周起Smad4mRNA的表达明显增强,与生后1d比较差异显著(P<0.05)。结论卵巢内存在Smad4,提示TGF-β家族对卵泡发育的调节很可能是通过Smad信号转导模式实现的。

P16、P53和SMAD4蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨P16、P53和SMAD4蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义.方法采用免疫组织化学方法对30例胰腺癌组织和10例正常胰腺组织中P16、P53和SMAD4蛋白进行检测.结果 P16、P53和SMAD4蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达率分别为56.67%、43.33%和50.00%.在正常胰腺组织中的阳性表达率分别为100.00%、0和90.00%.两者比较差异有显著性（χ^2=4.60～5.00,P〈0.05）.P16、P53蛋白的表达与胰腺癌病人的临床病理特征无关,而SMAD4蛋白的表达在病理分化程度上存在显著差异（χ^2=7.98,P〈0.05）.结论 P16、P53、SMAD4蛋白在胰腺癌发病中起重要作用.

补肾中药成分配伍对成骨细胞成骨活性及Smad4 mRNA表达的影响

背景:补肾中药对动物及细胞实验研究提示具有防治骨质疏松及改善骨代谢作用,但补肾中药的配伍研究较少且复杂,且有效作用成分之间的相互作用及药物物质基础尚不确定,筛选最佳配伍困难。目的:通过采用不同补肾中药成分配伍,对新生SD大鼠成骨细胞进行干预性培养,并对其增殖、分化、Smad4m RNA表达进行测定,从而筛选并确定补肾中药的最佳配伍。方法:第5代成骨细胞分为5组:淫羊藿苷组细胞中加入1×10-5mol/L的淫羊藿苷;淫羊藿苷+柚皮苷组细胞中加入1×10-5mol/L淫羊藿苷+1×10-5mol/L柚皮苷;淫羊藿苷+薯蓣皂苷元组细胞中加入1×10-5mol/L淫羊藿苷+1×10-5mol/L薯蓣皂苷元;淫羊藿苷+梓醇组细胞中加入1×10-5mol/L淫羊藿苷+1×10-5mol/L梓醇;对照组细胞中加入10μL生理盐水。每组6个复孔。结果与结论:与对照组相比,淫羊藿苷+柚皮苷组和淫羊藿苷+薯蓣皂苷元组成骨细胞增殖能力及Smad4m RNA表达水平增加,且培养72 h时,淫羊藿苷+柚皮苷组成骨细胞增殖能力最强。48 h时,淫羊藿苷+柚皮苷组和淫羊藿苷+薯蓣皂苷元组成骨细胞碱性磷酸酶活性高于对照组;72 h,淫羊藿苷+柚皮苷组和淫羊藿苷+梓醇组成骨细胞碱性磷酸酶活性高于对照组。提示淫羊藿苷等补肾中药成分配伍可以影响成骨细胞的成骨活性,且其中以淫羊藿苷配伍柚皮苷的作用最强。

Smad4在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨Smad4 mRNA的表达在结肠癌组织与癌旁正常组织之间的表达差异,及与结肠癌临床病理参数与预后的关系。方法选择78例结肠癌手术切除的标本,选取结肠癌组织和相应的癌旁正常组织;采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组Smad4 mRNA表达水平,Kaplan-Meier法和Cox比例回归模型分析Smad4 mRNA表达与结肠癌临床病理参数与预后之间的关系。结果结肠癌组织中Smad4 mRNA表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。淋巴结转移、血管淋巴管浸润、肿瘤TNM分期与Smad4-mRNA负相关(P<0.05)。Kaplan-meier生存分析显示Smad4高表达的结肠癌患者有更长的生存期。多因素分析结果显示Smad4 mRNA表达水平是影响结肠癌预后的独立影响因子。结论 Smad4表达在结肠癌的发生、发展发挥着抑制因子的作用,是影响结肠癌预后的独立影响因子。

Smad4基因沉默对胰腺上皮内瘤变细胞基因表达谱影响的初步研究

背景:抑癌基因Smad4失活可使由Kras基因突变启动的胰腺上皮内瘤变(PanIN)细胞发生恶性转化,但其具体机制尚未阐明。目的:探讨Smad4基因沉默的PanIN细胞(PanIN-S细胞)基因表达谱的变化,分析Smad4基因沉默致PanIN细胞增殖和恶性转化的可能分子机制。方法:通过RNA干扰沉默PanIN细胞的内源性Smad4基因表达以构建PanIN-S细胞,小鼠全基因表达谱芯片筛查PanIN细胞与PanIN-S细胞的基因表达谱差异,实时荧光定量RT-PCR验证基因芯片筛选出的细胞周期相关差异表达基因。结果:基因芯片共筛选出237个差异表达基因,其中148个基因在PanIN-S细胞中表达上调,89个表达下调。差异表达基因主要涉及细胞周期、增殖、凋亡、黏附、转录活性等。实时荧光定量RT-PCR验证示细胞周期相关基因p27、p19、细胞周期蛋白(cyclin)D1表达在PanIN细胞与PanIN-S细胞间存在显著差异,与基因芯片筛选结果一致。结论:PanIN-S细胞p27、p19和cyclin D1基因表达发生明显改变,可能参与了PanIN-S细胞的增殖和恶性转化。

miR-145-5p通过SMAD4基因对食管鳞状细胞癌细胞增殖与凋亡影响

目的探究miR-145-5p靶向调控SMAD4基因对食管鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法收集68例食管鳞状细胞癌病人癌组织及其癌旁正常组织,采用免疫组织化学方法检测SMAD4蛋白阳性表达率,应用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测食管鳞状细胞癌及其癌旁正常组织中miR-145-5p和SMAD4表达水平。筛选合适食管鳞状细胞癌细胞株分为Blank组、NC组、miR-145-5pmimic组、miR-145-5pinhibitor组、siRNA-SMAD4组和miR-145-5pinhibitor+siRNA-SMAD4组。生物学网站和双荧光素酶实验验证miR-145-5p和SMAD4的靶向关系。qRT-PCR检测miR-145-5p、SMAD4、TGF-β、Bcl-2和Bax的mRNA表达水平,WesternBlot分别检测SMAD4、TGF-β、Bcl-2和Bax的蛋白的表达水平。CCK8方法检测细胞增殖活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果免疫组织化学检测显示,SMAD4阳性颗粒主要表达于细胞浆或细胞核,且与癌旁正常组织相比,食管鳞状细胞癌组织中SMAD4阳性率明显升高( χ^(2)=14.251,P<0.05);而qRT-PCR显示miR-145-5p表达水平显著降低(t=109.800,P<0.05)。相比其他细胞株,ECA-109细胞中的miR-145-5p表达量最低(F=48.000,P<0.05),选用于后续实验。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-145-5p可靶向调控SMAD4(t=21.820,P<0.05)。与Blank组相比,NC组的各项指标无显著差异(P均>0.05);与Blank组和NC组相比,miR-145-5pmimic组miR-145-5p和Bax表达增加,SMAD4、TGF-β和Bcl-2表达降低,细胞增殖能力明显下降,细胞凋亡率显著上升(P均<0.05);siRNA-SMAD4组miR-145-5p表达无明显变化,Bax表达增加,SMAD4、TGF-β和Bcl-2表达降低,细胞增殖能力明显下降,细胞凋亡率显著上升(P均<0.05);miR-145-5pinhibitor组miR-145-5p和Bax表达降低,SMAD4、TGF-β和Bcl-2表达上升,细胞增殖能力明显上升,细胞凋亡率显著下降(P均<0.05);而miR-145-5pinhibitor+siRNA-SMAD4组与Blank组和NC组相比组间差异无显著性(P均>0.05)。结论miR-145-5p高表达可通过靶向抑制SMAD4基因表达,抑制TGF-β/Smad4信号通路的激活,抑制食管鳞状细胞癌细胞增殖并促进细胞凋亡。

SMAD4基因新突变体对胰腺导管腺癌细胞迁移能力的影响

目的研究SMAD4新突变体对胰腺导管腺癌(PDAC)发生发展的影响。方法 将构建好的空白对照组(NC组)、野生型组(SMAD4 wt组)、突变型组(SMAD4 Y353C组)3组质粒用TransIntro TM EL转染试剂分别导入PDAC细胞PANC-1中,首先进行实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western Blot实验,分析不同质粒对PDAC细胞mRNA和蛋白质表达的影响,然后进行伤口愈合实验和细胞侵袭实验,研究不同质粒对PDAC细胞PANC-1伤口愈合和侵袭能力的影响。结果 RT-qPCR和Western Blot检测结果显示,NC组、SMAD4 wt组、SMAD4 Y353C组PDAC细胞PANC-1 SMAD4 mRNA和蛋白表达量比较差异均有统计学意义( F =695.76、 194.98 , P <0.05),而且SMAD4 Y353C组mRNA和蛋白表达量均低于SMAD4 wt组,高于NC组,差异均有显著性( P <0.05)。体外伤口愈合实验和细胞侵袭实验结果显示,NC组、SMAD4 wt组和SMAD4 Y353C组细胞的迁移面积和侵袭能力比较差异有统计学意义( F =1 741.15、299.12, P <0.05),SMAD4 Y353C组细胞的迁移面积和侵袭能力明显大于SMAD4 wt组细胞,小于NC组细胞,差异均有显著意义( P <0.05)。结论 突变型SMAD4 Y353C能抑制PANC-1细胞 SMAD4 mRNA和蛋白质的表达,促进PANC-1细胞的迁移和侵袭,为PDAC的治疗提供理论依据。

miRNA-196a-5p调控Smad4表达对胃癌干细胞特性的影响

背景:miRNA-196a是新近发现的与乳腺癌、宫颈癌等多种肿瘤相关的microRNAs生物靶分子。研究证实,miRNA-196a-5p在胃癌细胞株和胃癌组织中均表达增加,然而,关于miRNA-196a-5p在胃癌干细胞中的功能和机制研究甚少。目的:分析miRNA-196a-5p在胃癌干细胞侵袭中的作用及机制。方法:流式细胞术分选胃癌BGC-823细胞株中的CD44^+细胞(即胃癌干细胞),qRT-PCR检测miRNA-196a-5p表达,Transwell实验检测细胞侵袭能力;参照Lipofectamine 2000转染试剂说明书的操作步骤,将miRNA-196a-5p inhibitor(即miRNA-196a-5p INH)转染至细胞中;双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-196a-5p对Smad4基因的调控作用;Western blotting实验检测上皮-间质转化相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)和Smad4蛋白表达。结果与结论:(1)miRNA-196a-5p在胃癌干细胞中表达增加(P<0.05);(2)抑制miRNA-196a-5p表达后,能够降低胃癌干细胞的侵袭能力(P<0.05),增加E-cadherin蛋白表达(P<0.05),降低N-cadherin和Vimentin蛋白表达(P均<0.05),增加Smad4蛋白表达(P<0.05);(3)结果表明,miRNA-196a-5p通过调控Smad4表达在胃癌干细胞上皮-间质转化和侵袭过程中发挥重要作用,miRNA-196a-5p具有作为胃癌治疗靶标的潜能。

NLK通过Smad4负调控TGFβ信号通路

目的探讨NLK对转化生长因子β(TGFβ)信号通路的影响及其分子机制。方法采用蛋白质稳定性实验检测NLK对Smad4蛋白质降解的影响;体内泛素化实验检测过表达NLK对Smad4泛素化修饰的影响;荧光素酶报告基因实验检测NLK对TGFβ信号通路报告基因载体CAGA-luc和3TP-luc的影响;实时定量PCR技术检测NLK对TGFβ信号通路靶基因p21和PAI-1的影响。结果在HEK293T细胞内,过表达NLK促进Smad4的降解和泛素化修饰;在HEK293T细胞内过表达NLK抑制细胞因子TGFβ对CAGA-luc和3TP-luc的激活作用;在HepG2细胞内过表达NLK抑制TGFβ信号通路靶基因p21和PAI-1的表达。结论 NLK促进Smad4的泛素化修饰和降解,进而抑制TGFβ信号通路。

上皮性卵巢癌组织中SMAD4基因突变的检测

目的检测上皮性卵巢癌(EOC)组织中SMAD4基因突变情况,进一步为其个体化治疗提供理论依据。方法 SMAD4基因第1、2、3、4、8、11外显子在恶性肿瘤中易发生缺失和突变,卵巢癌中第9外显子存在非同义突变。收集107例EOC石蜡组织,采用多聚酶链式反应(PCR)和Sanger测序筛查第2、8、9、11外显子基因突变情况。结果第2、3外显子连接处内含子结构域发现1例单核苷酸多态性;其余外显子中未发现突变。结论EOC中SMAD4基因第2、8、9、11外显子突变明显少见。检测SMAD4基因突变用于初筛EOC的研究仍需进一步探讨。

石蜡包埋人胰腺癌组织中Smad4蛋白和转化生长因子β_1及其Ⅱ型受体的表达

目的 探讨转化生长因子 (TGF) β通路中Smad4蛋白、TGFβ1和转化生长因子 βⅡ型受体 (TβRⅡ )的关系及它们在胰腺癌中的可能作用机制。 方法 用EnVision免疫组织化学技术检测5 6份石蜡包埋人胰腺癌标本Smad4蛋白、TGFβ1和TβRⅡ蛋白表达的情况。 结果 5 6份胰腺癌组织Smad4、TGFβ1和TβRⅡ阳性率分别为 5 8 93%(33)、6 6 0 7%(37)和 6 0 71%(34 ) ,对应正常胰腺组织阳性率分别为 89 2 9%(5 0 )、2 5 0 0 %(14)和 2 5 0 0 %(14)。TGFβ1的表达与临床分期、肿瘤的有无转移相关 (P <0 0 5 )。TGFβ1与TβRⅡ之间也有相关关系 (P <0 0 5 )。 结论 胰腺癌组织中Smad4表达降低 ,TGFβ1与TβRⅡ则呈过表达。TGFβ1与TβRⅡ对胰腺癌的发生可能有协同作用。Smad4在TGF β诱导基因表达调控和随后的生长抑制中是关键的转录因子 ,但TGFβ有时也可能以与Smad4无关的形式起作用。

Smad4 siRNA对乳腺癌细胞侵袭力和MMP-9表达的影响

目的:探讨Smad4特异性小分子干扰RNA(siRNA)对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭力及MMP-9表达的影响。方法:构建Smad4 siRNA,将细胞分为空白对照组,Smad4 siRNA转染组,TGF-β处理组,Smad4 siRNA转染+TGF-β处理组。首先用Western blot法检测转染Smad4 siRNA后细胞中Smad4蛋白的表达,以及用荧光素酶报告基因法检测TGF-β处理后细胞Smad结合元件(4xSBE)的活性;然后用Transwell小室模型和Western blot法检测各组细胞的黏附侵袭能力以及基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白的表达水平。结果:转染Smad4 siRNA后,乳腺癌细胞的Smad4蛋白表达及其TGF-β诱导的4xSBE活性增强均被明显抑制(均P<0.05);与对照组细胞比较,细胞经TGF-β刺激后的侵袭能力及MMP-9的表达量均明显增加(均P<0.05),但预先转染Smad4 siRNA的细胞的上述TGF-β刺激作用被明显抑制(均P<0.05),单纯Smad4 siRNA转染对细胞的侵袭能力及MMP-9的表达量无明显影响。结论:Smad4 siRNA能减弱TGF-β诱导的MDA-MB-231细胞的侵袭能力,该作用可能与其抑制MMP-9的表达有关。

Smad4条件基因敲除小鼠内耳前庭的组织学变化

目的观察Smad4条件基因敲除小鼠内耳前庭的组织学变化，探讨Smad4基因在内耳前庭发育中的作用。方法应用冰冻切片、免疫荧光化学、激光扫描共聚焦显微镜、扫描电镜、透射电镜等技术，观察软骨组织Smad4条件基因敲除小鼠内耳前庭组织形态的变化。结果Smad4一／一小鼠内耳软骨囊Smad4免疫反应阴性，Smad4＋／一小鼠阳性，Smad4＋／＋小鼠强阳性，而在前庭感觉上皮——壶腹嵴和囊斑里Smad4免疫反应均呈阳性，三个基因型间没有差别；通过扫描电镜和透射电镜以及神经丝免疫荧光染色观察，三个基因型小鼠内耳前庭均未发现病变。结论Smad4条件基因敲除小鼠的内耳软骨囊里Smad4基因被有效剔除，但其对内耳前庭的组织结构和形态影响有限。

胃癌患者幽门螺杆菌感染和Smad4表达及其临床病理学意义的研究

目的检测幽门螺杆菌(Hp)阳性和阴性胃癌患者的病变组织中Smad4的表达分布,并分析其与胃癌患者临床病理学特征之间的关系。方法选取39例胃癌患者的胃镜活检组织标本,采用快速尿素酶试验(RUT)结合Giemsa染色判断Hp感染,采用冰冻切片免疫组化染色方法在蛋白水平检测Smad4的表达分布。结果胃癌组织中Hp阳性者Smad4表达(42.9%)显著低于其阴性者(90.9%,P<0.05),胃癌患者Hp的感染与Smad4的表达呈负相关(r=-0.436,P<0.05)。Smad4在胃癌组织中的表达(56.4%)显著低于其在正常胃黏膜中的表达(100%,P<0.05)。Smad4的表达与胃癌的浸润及细胞分化程度相关,浸润程度越重、分化程度越低,其阳性表达率亦越低(P<0.05);而Smad4蛋白的表达与性别、年龄、TNM分期、淋巴结及远处转移无关。结论胃癌患者中Hp感染与Smad4的表达有相关性,Smad4在胃癌发生、发展中发挥着重要作用,可能作为胃癌诊断和预后的分子标志,Hp可能通过Smad4而在胃癌的发生发展中起到重要作用。

大鼠非酒精性脂肪性肝病转化生长因子β1／Smad4信号通路表达的研究

目的观察转化生长因子（TGF）β1、转化生长因子β受体（TβR）-Ⅰ、TpR-Ⅱ和胞内Smad 4信号通道蛋白以及转录因子激活剂蛋白-1（AP-1）家族中Jun蛋白质因子在大鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）中的表达，探讨NAFLD发生肝纤维化的可能机制。方法将18只大鼠分为对照组与模型组，每组9只。对照组喂饲普通饲料，模型组喂饲高脂饲料（88％标准普通饲料＋10％猪油＋2％胆固醇）造模。在20周处死所有大鼠，免疫组化法检测TGFβ1、Smad4的表达；RT—PCR检测肝组织TGFβ1、TβR—Ⅰ、TβR—Ⅱ的表达；Western印迹法测定磷酸化C—Jun蛋白的表达。结果成功建立NAFLD动物模型。免疫组化法检测结果显示，TGFβ1和Smad4在对照组大鼠肝实质细胞的胞质内均有少量表达。TGFβ1在模型组大鼠肝实质细胞胞质、肝血窦周围的表达明显增强，尤其在汇管区更为明显。Smad4在模型组大鼠肝实质细胞胞质表达亦明显增强，而在汇管区的表达更为明显。RT-PCR检测结果显示，模型组大鼠肝组织TGFβ1、TβRI、TBR-Ⅱ mRNA的A值分别为0．46±0．12、5．24±2．70和3．35±1．95，明显高于对照组（0．21±0．09、1．36±0．77和0．524-0．19，P值均〈0．01）。Western印迹检测显示，模型组磷酸化C—Jun蛋白表达同内参灰度值比为0．93±0．41，较对照组显著增高（0．32±0．25，P=0．001）。结论TGFβ1／Smad4信号通路可能参与了NAFLD进展为肝纤维化的过程。阻断TGFβ／Smad4信号传导通路，可开辟治疗NAFLD新的思路。

Smad4与女性生殖系统恶性肿瘤关系的研究进展

Smad4作为转化生长因子(TGF)-β信号通路中的细胞内信使,越来越受到关注。众多研究发现,Smad4在女性生殖系统恶性肿瘤中起着抑癌基因的作用。Smad4蛋白在肿瘤中表达降低或缺失,可促进肿瘤发生、发展。Smad4与女性生殖系统恶性肿瘤患者的低生存率及不良预后关系密切。随着研究的深入,Smad4有望成为女性生殖系统恶性肿瘤有价值的诊断与预后评估标志物,以及治疗靶点。笔者拟就Smad4与女性生殖系统恶性肿瘤关系的研究进展进行综述如下。

Smad4、Smad7在大鼠慢性前列腺炎前列腺组织中的表达及意义

目的研究慢性前列腺炎SD大鼠前列腺组织Smad4和Smad7的表达,并初步探讨它对慢性前列腺炎发病机制的意义。方法将40只6月龄SD大鼠随机分为正常对照组和CP实验组,每组20只。实验组采用去势+高剂量苯甲酸雌二醇肌注方法建模,并以免疫组化和蛋白免疫印迹实验方法检测Smad4、Smad7在前列腺组织中的表达变化。结果与正常对照组相比,Smad7表达显著下调(P<0.01),Smad4表达亦显著下调(P<0.01);Smad4与Smad7在慢性前列腺炎大鼠前列腺组织中表达无相关性。结论Smad4、Smad7在慢性前列腺炎前列腺组织中表达异常,提示可能参与CP的病理过程。

Smad4、雌激素受体表达与乳腺癌临床病理特征的相关性

目的探讨Smad4和雌激素受体（ER）在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌临床病理特征之间的关系，以及二者的相关性。方法应用免疫组织化学SP法检测50例浸润性乳腺癌、12例原位癌及15例正常乳腺组织中Smad4和ER的表达，分析二者在不同的临床分期、分化程度及淋巴结转移中的表达差异，探讨二者的相关性。结果Smad4在浸润性乳腺癌和正常乳腺组织中的阳性表达率为分别为52.00%、93.33%，差异有统计学意义（χ2=8.329，P=0.004），ER阳性表达率分别为60.00%、40.00%，差异无统计学意义（χ2=1.868，P=0.172）。原位癌与浸润性乳腺癌比较，Smad4阳性表达率分别为75.00%和52.00%，差异无统计学意义（χ2=2.082，P=0.149），ER阳性表达率表达分别为58.33%、60.00%，差异无统计学意义（χ2=0.011，P=0.916）。Smad4表达与乳腺癌TNM分期（χ2=6.392，P=0.011）和淋巴结转移（χ2=6.738，P=0.009）有关，与组织学分级（χ2=0.542，P=0.462）无关。ER表达与乳腺癌淋巴结转移（χ2=4.133，P=0.042）和组织学分级（χ2=5.357，P=0.021）有关，与TNM分期（χ2=1.159，P=0.282）无关。Smad4蛋白与ER在乳腺癌组织中的表达呈正相关（r=0.263，P=0.032）。结论Smad4在乳腺癌中表达低于正常组织，Smad4与ER的表达与乳腺癌不同的临床病理特征之间具有一定的相关性，且二者表达呈正相关。

Smad4表达异常与结直肠癌的相关性研究

目的探讨结直肠组织Smad4 mRNA及其蛋白表达水平变化、Smad4基因CpG岛异常甲基化与结直肠癌及其临床病理特征的关联性。方法应用RT-PCR方法及测序、半定量RT-PCR方法、甲基化特异性PCR（MSP）技术和免疫组织化学方法，各自检测43例患者的结直肠癌组织、癌旁组织及30例结直肠腺瘤组织、12例健康人结肠黏膜组织。结果43例结直肠癌组织中有25例（58．14％）Smad4 mRNA检测到阳性表达，其阳性表达率（58．14％）及表达水平（0．73±0．25）均低于相应的癌旁组织（88．37％，0.95±0．29）、腺瘤组织（90．63％，1、01±0．37）和健康人黏膜组织（100．00％，1.18±0.33），差异均有统计学意义（P〈0.05）。Smad4基因启动子甲基化阳性率结直肠癌组织（60．53％）明显高于癌旁组织（27．03％）、腺瘤组织（25．00％）和健康人黏膜组织（16.67％），差异均有统计学意义（P〈0．05）。Smad4蛋白表达的阳性率结直肠癌组织（44.19％）明显低于癌旁组织（81．40％）、腺瘤组织（87．50％）和健康人黏膜组织（91．67％），差异均有统计学意义（P〈0.05），并随着浸润深度加深和淋巴结转移，阳性率也随之下降。结论Smad4的低表达与结直肠癌的发展、生物学行为和预后可能有关，可作为重要的生物学标志及病期评估的标志之一。