微小RNA-29b通过转化生长因子-β1/Smad信号通路在间质性肺疾病A549细胞上皮-间质转化中的作用机制研究

目的 探讨微小RNA(miR)-29b通过调控转化生长因子(TGF)-β1/Smad信号通路对间质性肺疾病(ILD)A549细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的影响机制。方法 将A549细胞分为空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β1)、miR-29b过表达组(TGF-β1+转染miR-29b mimic)和NC组(TGF-β1+转染miR-NC)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-29b及TGF-β1 mRNA表达水平;采用CCK-8、划痕实验与Transwell检测细胞增殖活力、迁移和侵袭能力;采用Western blot检测TGF-β/Smad通路相关蛋白表达水平。结果 与空白对照组比较,TGF-β1诱导组和NC组miR-29b表达水平、各时间点细胞增殖抑制率下降,TGF-β1 mRNA表达水平、侵袭细胞数量、划痕愈合率、TGF-β1、p-Smad2、N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达水平均上升;与TGF-β1诱导组和NC组比较,miR-29b过表达组miR-29b表达水平、细胞增殖抑制率均升高,TGF-β1 mRNA表达水平、侵袭细胞数量和划痕愈合率、TGF-β1、p-Smad2、N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达水平均降低(P<0.05)。结论 miR-29b可通过调节TGF-β1/Smad信号通路阻止EMT进程而抑制A549细胞增殖、迁移、侵袭。

妊娠期高血压患者血清转化生长因子-β1和Smad3、Smad4浓度与临床意义

目的探讨妊娠期高血压(hypertension during pregnancy,HDP)患者血清转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和Smad3、Smad4的浓度与临床意义。方法选取河北中石油中心医院妇产科2021年1月至2022年8月诊治的96例HDP患者作为研究组,同时选取96名在本院产检且一般资料与HDP患者相匹配的正常孕妇作为对照组。采用Logistic回归分析影响孕妇发生HDP的相关因素;采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析TGF-β1和Smad3、Smad4对HDP的诊断效能。结果两组患者年龄、孕周、孕次、三酰甘油(triacylglycerol,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(lowdensity lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。研究组患者血清TGF-β1、Smad3、Smad4浓度及有原发性高血压(高血压)家族史的患者所占比例均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。有高血压家族史、TGF-β1、Smad3、Smad4浓度升高均为孕妇发生HDP的危险因素(P<0.05)。血清TGF-β1、Smad3、Smad4诊断HDP的曲线下面积(AUC)分别为0.652、0.720、0.730,而三者联合诊断的曲线下面积为0.916,三者联合优于血清TGF-β1、Smad3、Smad4各自单独诊断(Z三者联合-TGF-β1=6.864、Z三者联合-Smad3=5.955、Z三者联合-Smad4=5.907,P均<0.001),其敏感度和特异度分别为82.29%、78.50%。结论血清TGF-β1、Smad3、Smad4浓度与HDP的发生密切相关,三者联合检测对HDP具有较高的诊断价值。

自体动静脉内瘘狭窄与转化生长因子-β1/Smad4信号通路的关系

目的探讨自体动静脉内瘘(AVF)狭窄与转化生长因子(TGF)-β1/Smad4信号通路的关系。方法选取2017年10月至2020年2月于贵州医科大学附属医院行AVF的60例患者为观察组,选取同期50例因外周血管疾病行血管切除的患者为对照组。比较两组患者的年龄、血钙、血磷、血红蛋白、血全段甲状旁腺激素(iPTH)、β2微球蛋白、C反应蛋白(CRP)水平、Smad4及TGF-β1蛋白水平。结果两组患者年龄、血钙、血磷、血红蛋白、血iPTH、β2微球蛋白、CRP水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组Smad4蛋白表达量低于对照组,TGF-β1蛋白表达量高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论TGF-β1、Smad4在透析患者AVF狭窄组织中异常表达,并在静脉内膜增生引起瘘管狭窄的过程中发挥重要作用。

血清转化生长因子β1、白细胞介素-6、Toll样受体-4、核转录因子κB联合评估非小细胞肺癌放射性肺炎病情严重程度的价值

目的探讨血清转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)、Toll样受体-4(TLR-4)和核转录因子κB(NF-κB)联合评估非小细胞肺癌(NSCLC)放射性肺炎(RP)病情严重程度的价值。方法选取104例NSCLC放疗后继发RP患者作为研究组,另选取52例NSCLC放疗后未继发RP患者作为对照组。比较2组患者放疗前后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平。比较研究组不同程度RP患者放疗前后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平,分析各血清指标单独及联合评估NSCLC放疗后RP病情程度的价值。结果放疗结束后,研究组患者血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);放疗结束后,随着RP病情程度的增加,研究组患者血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平呈升高趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,放疗结束后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平评估1级RP的曲线下面积(AUC)分别为0.787、0.718、0.783、0.801,评估≥2级RP的AUC分别为0.729、0.740、0.793、0.825;血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB阳性表达患者发生≥2级RP的风险分别是阴性表达患者的2.473、2.275、2.610、5.267倍(P<0.05);血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB联合评估≥2级RP的AUC为0.939,敏感度为76.00%,特异度为97.47%。结论NSCLC患者放疗结束后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平均与RP病情严重程度呈正相关,四者联合评估≥2级RP的价值显著,可为临床控制RP病情提供参考依据。

活血利水复方对自发性高血压大鼠转化生长因子-β1/SMAD家族蛋白信号通路介导下游结缔组织生长因子及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达及血管重塑的影响

目的:基于转化生长因子-β1/SMAD家族蛋白信号通路探讨活血利水中药复方对自发性高血压大鼠血管重塑的保护作用及机制。方法:将自发性高血压大鼠随机分为模型组、卡托普利组、活血利水复方低剂量组、活血利水复方中剂量组、活血利水复方高剂量组,Wistar大鼠作为空白组,每组10只。给予相应药物灌胃,4周后采用酶联免疫吸附试验方法检测血清中C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6的含量;采用逆转录聚合酶链反应检测大鼠主动脉组织转化生长因子-β1、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达,并取冠状动脉组织进行马松三色染色。结果:与空白组比较,模型组血清中C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6的含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,各药物组大鼠干预后血清中C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6的含量不同程度降低(P<0.01)。其中,卡托普利组和活血利水复方高剂量组上述3项指标表达最低,与其他组的差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);卡托普利组和活血利水复方高剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组大鼠主动脉转化生长因子-β1、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,卡托普利组及活血利水复方低剂量组、活血利水复方中剂量组、活血利水复方高剂量组大鼠主动脉组织转化生长因子-β1、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达不同程度降低(P<0.05或P<0.01)。结论:活血利水中药复方可通过调控转化生长因子-β1/SMAD家族蛋白信号通路及下游结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达水平,降低C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6等炎症因子的表达,抑制炎症反应,从而改善高血压病炎症状态及血管重塑,其机制可能与降低转化生长因子-β1、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白沉积有关。

转化生长因子-β1及其信号传导分子Smad2与Smad4在羊驼睾丸的表达

目的研究转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad2、Smad4在羊驼睾丸的表达与定位,探索TGF-β1在羊驼睾丸发育及精子发生中的作用。方法以24月龄的羊驼睾丸为研究对象,采用Western blotting技术及免疫组织化学SABC法对TGF-β1、Smad2、Smad4在羊驼睾丸的表达进行研究。结果Western blotting结果显示,羊驼睾丸组织粗蛋白提取物中存在分子量约为25kD5、2kD、62kD,与多克隆兔抗TGF-β1、Smad2、Smad4抗体发生免疫阳性反应的蛋白条带;免疫组织化学结果显示,TGF-β1、Smad2、Smad4在24月龄羊驼睾丸的间质细胞、支持细胞和各级生精细胞均有不同程度的表达。结论TGF-β1通过Smad2与Smad4传导途径参与性成熟羊驼睾丸组织的发育与精子发生的调控。

转化生长因子-β_1、Smad4与Smad7蛋白在肾癌组织中的表达及意义

目的:通过检测转化生长因子(TGF)-β1、Smad4与Smad7蛋白在肾癌组织中的表达,研究它们与肾癌发生、发展的关系。方法:应用S-P免疫组化检测方法,对10例正常肾组织、45例未转移的肾癌与10例已有转移的肾癌组织的TGF-β1、Smad4与Smad7蛋白的表达进行检测。结果:Smad4蛋白在正常肾组织和未转移组肾癌组织中的表达明显高于转移组肾癌组织,且肾癌分化程度越低,阳性表达率越低(P<0.05)。TGF-β1、Smad7蛋白在转移组肾癌组织中的表达明显高于正常肾组织和未转移组肾癌组织(P<0.05)。TGF-β1、Smad4及Smad7蛋白的表达均与淋巴结转移相关。结论:TGF-β1、Smad4与Smad7蛋白三者表达的异常可能与肾癌的发生、发展和转移相关,可能成为研究肾癌分化与转移的生物学标记物。

刺山柑总生物碱对系统性硬皮病转化生长因子-β_1/Smad4通路的调控作用

目的研究刺山柑总生物碱对系统性硬皮病(SSc)转化生长因子-β_1(TGF-β_1) Smad4通路的调控作用。方法将90只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、青霉胺组(125 mg·kg^(-1))及刺山柑总生物碱小(225 mg·kg^(-1))、中(450 mg·kg^(-1))、大(900 mg·kg^(-1))剂量组。除正常对照组外,其余5组小鼠背部注射盐酸博莱霉素建立SSc模型,成模后受试药组小鼠背部外敷刺山柑总生物碱乳膏,青霉胺组给予青霉胺灌胃,正常对照组、模型对照组背部外敷不含药基质,每天1次,连续60 d。末次给药后,Western blotting检测皮肤TGF-β_1表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠皮肤组织激活素受体样激酶1(ALK1)、Smad4及核因子-κB (NF-κB)水平。结果与模型对照组比较,刺山柑总生物碱各剂量组TGF-β_1及刺山柑总生物碱大剂量组ALK1和Smad4表达明显降低(P<0.05或P<0.01),皮肤NF-κB含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论刺山柑总生物碱能下调SSc小鼠TGF-β_1、ALK1与Smad4异常表达,对SSc小鼠TGF-β_1/Smad4通路有一定抑制作用。

妇炎康联合物理因子治疗慢性盆腔炎的疗效及对微小RNA-224-3P及转化生长因子β/Smad信号通路表达的影响

目的探讨妇炎康联合物理因子治疗慢性盆腔炎(CPID)的疗效及对微小RNA(miRNA)-224-3P及转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路表达的影响。方法将62例CPID患者随机分为观察组和对照组,每组31例。对照组给予诺氟沙星和甲硝唑抗感染治疗,观察组在对照组治疗方案基础上,给予妇炎康联合物理因子治疗。治疗1个疗程后,比较两组患者血清miRNA-224-3P、TGF-β1、Smad-3和Smad-7水平及治疗效果。结果治疗后,两组患者血清miRNA-224-3P、TGF-β1和Smad-3水平均较治疗前降低,Smad-7水平较治疗前升高,且观察组血清miRNA-224-3P、TGF-β1和Smad-3水平低于对照组,Smad-7水平高于对照组,观察组疗效优于对照组(均P<0.05)。结论妇炎康联合物理因子治疗CPID患者的疗效优于常规抗感染治疗,可能与其通过调节miRNA-224-3P和TGF-β/Smad信号通路表达从而抑制炎症反应有关。

环状RNA 42398调控转化生长因子-β1/Smad信号通路在大鼠胆道闭锁肝纤维化中的作用机制

目的探讨环状RNA(circRNA)42398调控转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路在大鼠胆道闭锁肝纤维化中的作用机制。方法取大鼠肝星状细胞株HSC-T6构建慢病毒稳定感染的细胞系,根据转染RNA的不同将细胞分为阴性对照组、circRNA过表达组和circRNA敲低组。阴性对照组细胞转染阴性对照序列,circRNA过表达组细胞转染circRNA过表达序列,circRNA敲低组细胞转染circRNA低表达序列。应用细胞计数试剂盒-8检测各组细胞活性,采用实量定量聚合酶链式反应检测各组细胞中TGF-β1、Smad2和Smad3 mRNA的表达,采用Western blot法检测各组细胞中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白的表达。结果各组细胞活性比较差异均无统计学意义(P>0.05)。circRNA过表达组与阴性对照组细胞中TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白的相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。circRNA敲低组细胞中TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白的相对表达量均显著高于阴性对照组(P<0.05)。结论在大鼠细胞水平,circRNA 42398可通过调控TGF-β1/Smad信号通路而抑制肝星状细胞活化,从而抑制胆道闭锁肝纤维化,这为胆道闭锁肝纤维化的治疗和预防提供了依据。

右美托咪定通过调控白细胞介素-17及转化生长因子-β1/Smad蛋白3信号通路对脂多糖诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨右美托咪定介导白细胞介素(IL)-17对脂多糖(LPS)诱导的人Ⅱ型肺泡上皮A549细胞(以下简称“A549细胞”)炎症、增殖、迁移、上皮间质转化及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad蛋白3(Smad3)信号通路的调控作用。方法体外培养A549细胞,将其分为对照组(不做干预)、LPS组(10.00μg/ml LPS)和实验组(10.00μg/ml LPS+1.25、2.50、5.00、10.00μg/ml右美托咪定),分别采用CCK-8试剂盒和反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法测定细胞活力和IL-17 mRNA表达水平以筛选右美托咪定最适实验浓度;随后将细胞分为对照组、LPS组、IL-17组、右美托咪定组和IL-17+右美托咪定组,干预24 h。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子IL-17、IL-8和IL-6的表达水平;5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)试剂盒用来检测细胞增殖率;划痕实验用来检测细胞迁移率;蛋白免疫印迹(WB)法测定肺泡上皮间质转化(EMT)相关蛋白、TGF-β1/Smad3通路相关蛋白及IL-17蛋白表达水平。结果右美托咪定逆转了LPS对A549细胞活力的抑制作用和IL-17 mRNA表达水平的促进作用,且10.00μg/ml浓度的右美托咪定组的效果最好,因此选择10.00μg/ml右美托咪定用于后续实验。LPS组细胞中IL-17、IL-8、IL-6表达水平、细胞迁移率、N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤维粘连蛋白(FN)、Smad3的磷酸化(p-Smad3)/Smad3、TGF-β1和IL-17蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞增殖率、E-钙黏蛋白和Smad7蛋白表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-17+右美托咪定组IL-17、IL-8、IL-6表达水平、细胞迁移率、N-钙黏蛋白、波形蛋白、FN、p-Smad3/Smad3、TGF-β1和IL-17蛋白表达水平低于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05);IL-17+右美托咪定组细胞增殖率、E-钙黏蛋白和Smad7蛋白表达水平高于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论右美托咪定通过抑制IL-17的分泌恢复LPS诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤,促进LPS诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖并抑制其迁移和EMT进程,其作用机制与抑制TGF-β1/Smad3通路的信号转导有关。

Smad4和转化生长因子-β_1在肝细胞癌组织芯片中的表达和意义

目的研究Smad4和转化生长因子-β(1TGF-β1)在肝细胞癌组织芯片中的表达和意义。方法使用组织芯片技术,选取200例肝细胞癌患者癌组织及癌旁肝组织,32例肝血管瘤患者瘤旁正常肝组织进行对照,分别进行Smad4和TGF-β1免疫组织化学染色,在显微镜下观察其表达的阳性率。结果 Smad4在对照组肝组织、癌旁肝组织、肝细胞癌中的表达呈逐渐下降的趋势,即Smad4在癌组织中表达有缺失,差异有统计学意义。在表达强度上,癌旁肝组织以强阳性表达为主,肝细胞癌中主要以弱阳性表达为主。TGF-β1在癌旁肝组织中的阳性表达率为96%,高于对照组,但在肝细胞癌中的阳性表达率降低为49.5%。对照组肝组织中的TGF-β1表达以弱阳性为主,占40.6%,在癌旁肝组织中以中度阳性为主,占51.5%,在肝细胞癌组,以阴性表达为主,占50.5%。由对照组到癌旁组织到肝细胞癌组,TGF-β1的表达呈现先升后降的趋势。结论 Smad4、TGF-β1与肝细胞癌的发生和肿瘤的生物学行为密切相关,TGF-β1可能作为肿瘤抑制因子和促进因子,发挥双向调节作用,缺失导致肝细胞癌发生,但过高表达可能使肿瘤细胞侵袭能力加强。

转化生长因子-β和Smad4在绝经过渡期大鼠卵巢颗粒细胞中的表达

目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)、Smad4在绝经过渡期大鼠卵巢颗粒细胞中的表达,分析其与卵巢功能衰退的关系。方法雌性SD大鼠分为对照组(C组,6月龄,阴道涂片筛选,n=9)、绝经过渡期组(MT组,12~14月龄,阴道涂片筛选,n=8),大鼠麻醉处死后迅速取出卵巢,采用机械分离方法释放卵泡颗粒细胞,于CO2培养箱中培养,利用免疫细胞化学法检测促卵泡刺激素受体(FSHR)蛋白的表达,鉴定卵巢颗粒细胞;免疫细胞化学法检测TGF-β、Smad4蛋白在两组卵巢颗粒细胞的表达;采用Real-time PCR的方法检测各组颗粒细胞中TGF-β、Smad4 mRNA的表达。结果免疫细胞化学显示分离培养的颗粒细胞纯度>95%,MT组TGF-β、Smad4蛋白表达水平低于对照组(P<0.05);Real-time PCR结果显示,两组均有TGF-β、Smad4 mRNA的表达,MT组TGF-β、Smad4 mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05)。结论 TGF-β、Smad4参与绝经过渡期大鼠卵巢功能的衰退过程,绝经过渡期大鼠功能衰退的部分原因可能与卵巢颗粒细胞中TGF-β、Smad4的表达降低有关。

转化生长因子-β_1及Smad2/3在宫腔粘连患者子宫内膜组织中的表达及意义

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)及Smad2/3在宫腔粘连患者子宫内膜组织中的表达及意义。方法根据粘连程度将59例宫腔粘连患者分成轻度粘连组、中度粘连组、重度粘连组3组。采用免疫组化半定量法检测3组及对照组(非宫腔粘连患者)子宫内膜组织中TGF-β1、Smad2/3的蛋白表达量。结果随着宫腔粘连程度加重,患者子宫内膜组织中TGF-β1及Smad2/3的蛋白表达量均逐渐升高;中度、重度粘连组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论子宫内膜组织中TGF-β1及Smad2/3的过度表达可能参与宫腔粘连的发生发展。

转化生长因子β及其信号转导分子Smad4在肾小球硬化中的作用研究

目的:探讨转化生长因子β(TGF-β1)及其信号转导分子Smad4在肾小球肾炎中的表达及其意义。方法:以20例正常肾组织为对照组,对38例各种不同组织学类型肾小球肾炎的肾活检标本,分别行免疫组化方法观察TGF-β1、Smad4、胶原Ⅰ(collagentypeⅠ)在肾小球中的染色强度,并对其检测结果作图像分析处理;以体外培养的人系膜细胞为对象,观察TGFβ1对系膜细胞表达Smad4、胶原Ⅰ的影响,Smad4、胶原Ⅰ的基因表达用RT-PCR检测,蛋白表达用Westernblotting检测。结果:所有增生、硬化病理类型肾炎中病变肾小球TGFβ1、Smad4、胶原Ⅰ蛋白表达均高于对照组(P<0.05),且TGFβ1、Smad4两者在肾小球中的表达与胶原Ⅰ在肾小球中的堆积呈多重相关(P<0.05);外源性TGFβ1刺激人肾系膜细胞后,细胞的Smad4基因表达和蛋白表达增高(P<0.05);胶原Ⅰ的基因表达和蛋白表达也相应增高(P<0.05)。结论:TGFβ1及其信号转导分子Smad4可能参与病变肾小球ECM的过量堆积,在肾小球硬化过程中起重要作用。

益气养阴化浊通络方对糖尿病肾病大鼠转化生长因子-β1/Smads信号通路的影响

目的观察益气养阴化浊通络方对糖尿病肾病(DN)大鼠转化生长因子(TGF)-β1/Smads信号通路的影响,探讨其对DN的作用机制及治疗效果。方法选择50只健康雄性SD大鼠,随机分为正常组10只,造模组40只。造模组大鼠接受单侧肾切除手术2 w后,给予高糖高脂饮食4 w,再加用小剂量链脲佐菌素(30 mg/kg)腹腔注射,造模组在DN模型成模后,随机分为模型组、中药组、西药组。中药组给予益气养阴化浊通络方煎剂,西药组给予贝那普利,治疗8 w后处死大鼠。测定血糖、24 h尿蛋白定量、血尿素氮及肌酐的变化,同时检测肾组织TGF-β1、p-Smad2/3、Smad7蛋白的表达。结果与模型组相比,中药组血糖、24 h尿蛋白量、血尿素氮及肌酐均显著降低(P<0.01),TGF-β1、p-Smad2/3蛋白表达下调,Smad7蛋白表达增强(P<0.05,P<0.01)。结论在DN大鼠模型中,益气养阴化浊通络方能够改善肾功能,保护肾组织,调节TGF-β1/Smad信号通路是其作用机制之一。

Smad4 siRNA对转化生长因子β诱导Ⅰ型胶原表达的作用

背景:近期研究表明,阻断smad传导通路可能成为一个阻断转化生长因子β引起的肝纤维化的新的靶点。目的:验证Smad4小分子干扰RNA(siRNA)对转化生长因子β诱导的Ⅰ型胶原的作用。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-09/2008-10在哈尔滨医科大学药学院完成。材料:肝星状细胞HSC-T6体外培养,siRNA和荧光素酶报告基因采用Lipofectamine试剂转染,以含巨细胞病毒-β-半乳糖苷酶质粒作为转染阳性对照。方法:根据不同处理将细胞分为4组,空白对照组;Smad4siRNA转染组;转化生长因子β处理组;Smad4siRNA转染后转化生长因子β处理组,将Smad4siRNA转染入肝星状细胞后行转化生长因子β刺激。各组分别于培养24h后收集细胞。主要观察指标:利用荧光素酶报告基因法测定Smad结合转写因子(4XSBE)的活性;反转录-聚合酶链反应法检测Ⅰ型胶原mRNA表达的变化;Western印迹分析观察Smad4蛋白、Ⅰ型胶原蛋白的变化。结果:Smad4siRNA有意义的抑制Smad4蛋白表达;Smad4siRNA抑制转化生长因子β诱导的4XSBE转录报告基因的活性;Smad4siRNA从mRNA和蛋白水平有效抑制转化生长因子β激活的Ⅰ型胶原的表达。结论:Smad4siRNA能够有效地阻断转化生长因子β诱导的Ⅰ型胶原表达。

活血祛痰方对糖尿病肾病大鼠肾脏转化生长因子-β和Smad7表达的影响

目的观察活血祛痰方对糖尿病肾病大鼠肾脏转化生长因子-β(TGF-β)、Smad7表达的影响,探讨其对糖尿病肾病的防治作用及机制。方法将24只SD大鼠随机分正常组、模型组和中药组,每组8只。模型组和中药组建立链脲佐菌素诱导糖尿病肾病大鼠模型,正常组大鼠未经链脲佐菌素诱导。中药组每天予活血祛痰复方中药灌胃2次,正常组及模型组灌服等量生理盐水。30 d后处死大鼠,观察各组大鼠24 h尿蛋白定量、血白蛋白(Alb)、血肌酐(Cr)、空腹血糖(Glu)水平等指标;病理切片HE、PAS染色观察肾脏的病理改变;并采用半定量RT-PCR测定3组大鼠肾脏组织TGF-β、Smad7的表达量。结果与正常组比较,模型组24 h尿蛋白定量、Cr、Glu水平均明显升高(P<0.01),Alb水平明显下降(P<0.05);与模型组比较,中药组24 h尿蛋白定量、Cr、Glu水平均明显下降(P<0.05,P<0.01),Alb水平明显升高(P<0.05)。正常组肾小球结构及体积正常;模型组肾小球体积明显增大,系膜增生明显,系膜细胞增多,肾小管上皮细胞肿胀;中药组肾小球略显肥大,但体积较模型组减少,系膜增生减轻,系膜细胞无明显增多,肾小管上皮细胞肿胀减轻。模型组TGF-β的表达量较正常组明显升高(P<0.01),中药组TGF-β的表达量较模型组明显下降(P<0.01);模型组Smad7的表达量较正常组明显下降(P<0.01),中药组Smad7的表达量较模型组明显升高(P<0.01)。结论活血祛痰方通过下调TGF-β及上调Smad7的表达,从而延缓糖尿病肾病的肾纤维化进展,对糖尿病肾病大鼠肾脏发挥保护作用。

转化生长因子-β_1/Smad信号转导途径在大黄酸保护糖尿病大鼠肾脏中的机制探讨

目的研究大黄酸对高脂饮食诱导的2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用。方法采用高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素(STZ)35 mg/kg诱导2型糖尿病大鼠模型,分为模型组,大黄酸低、中、高剂量(50、100、150 mg/kg)组,二甲双胍(300mg/kg)组,另设正常对照组。分别于0、2、4、8周测定大鼠血糖、尿微量白蛋白;8周末检测大鼠血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、总胆固醇(TC)与三酰甘油(TG)水平;HE染色观察肾脏组织病理;蛋白印记法检测大黄酸对糖尿病大鼠肾组织转化生长因子-β_1(TGF-β_1)与Smad3蛋白表达的影响。结果模型组大鼠血糖及尿微量白蛋白较正常对照组均明显升高,大黄酸各剂量组均能降低糖尿病大鼠血糖及尿微量白蛋白水平,其中,大黄酸高剂量组能显著降低糖尿病大鼠血糖及尿微量白蛋白水平(P<0.05);与模型组相比,大黄酸各剂量组可降低大鼠血清Cr、BUN、TC与TG值,但是大黄酸高剂量组能显著降低糖尿病大鼠血清Cr、BUN、TC与TG值(P<0.05);病理学观察显示模型组大鼠肾组织病变较为明显,大黄酸高剂量组肾组织病变明显改善,且糖尿病大鼠肾组织TGF-β_1与Smad3蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论大黄酸对糖尿病肾病有预防作用,其机制可能与改善肾功能、调节血脂及下调肾组织TGF-β_1与Smad3蛋白的表达有关。