瑞芬太尼调节AKT/GSK-3β/Snail信号通路对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的 探究瑞芬太尼(RF)调节蛋白激酶B(AKT)/糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)/Snail信号通路对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法 将非小细胞肺癌细胞A549分为低(RF-L)、中(RF-M)、高浓度RF(RF-H)组(10、20、40 nmol/L RF)、高浓度RF+AKT激活剂SC79(RF-H+SC79)组(40 nmol/L RF+4μg/mL SC79)和对照组(Control组)。CCK-8法检测细胞增殖能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞侵袭能力。流式细胞术测量细胞凋亡。实时荧光定量PCR测定AKT、GSK-3β、Snail mRNA水平。Western Blot测定蛋白表达。结果 相较于Control组,RF-M、RF-H组48和72 h的OD450、细胞侵袭数目、划痕愈合率、AKT、GSK-3β、Snail mRNA和蛋白表达、Bcl-2蛋白、EMT相关蛋白N-cadherin、Vimentin表达显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白、E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。SC79减弱了RF对肺癌细胞增殖和EMT进程的抑制作用,减弱细胞凋亡。结论 RF可阻碍肺癌细胞EMT和增殖,诱导凋亡,这可能与AKT/GSK-3β/Snail信号通路的抑制相关。

PLOD2、Snail和Slug在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的:研究食管鳞状细胞癌中PLOD2、Snail和Slug的表达情况。方法:采用免疫组织化学ElivisionTMplus法检测120例食管鳞状细胞癌、40例食管鳞状上皮非典型增生(中、重度)和40例正常食管鳞状上皮的PLOD2、Snail和Slug表达情况,分析三种标志物的表达与各临床病理因素和病人的生存预后之间的关系;以及PLOD2与EMT相关因子Snail和Slug的关系,探索PLOD2在EMT中的作用。结果:从正常食管鳞状上皮到非典型增生和食管鳞状细胞癌,PLOD2、Slug和Snail的表达逐渐明显上升(P<0.01);同时PLOD2、Snail和Slug的表达与肿瘤的浸润深度、分化程度、临床分期以及淋巴结转移有关(P<0.01)。另外,PLOD2与Snail、和Slug的表达均成正相关关系(r=0.812,r=0.759,P<0.01),Snail与Slug的表达成正相关关系(r=0.882,P<0.01)。同时,生存分析显示,PLOD2、Snail和Slug阳性表达组5年生存率明显低于阴性表达组(P<0.01)。结论:PLOD2、Snail和Slug的表达与食管鳞状细胞癌的发生发展和预后有关,联合检测其表达情况可能对食管鳞状细胞癌的进展及预后判断有重要意义。

宫颈癌中Snail、Slug和KAI1的表达及临床意义

目的检测宫颈癌中上皮间充质转化(EMT)相关标记物Snail、Slug和转移抑制因子KAI1的表达,并分析它们的相互关系及其临床病理意义。方法利用免疫组化Elivision TM plus法检测154例宫颈鳞状细胞癌(CSCC)、50例宫颈上皮内瘤变(CIN)和40例正常宫颈上皮组织中Snail、Slug和KAI1蛋白的表达。结果 Snail、Slug和KAI1在CSCC组、CIN组和对照组的阳性表达率分别为66.2%、66.9%、43.5%;32.0%、34.0%、64.0%和0%、2.5%、95.0%,两组相互之间差异有统计学意义(P<0.05)。Snail、Slug和KAI1蛋白的表达均与CSCC肿瘤组织的分化程度、淋巴结转移与否、浸润深度、FIGO分期及术后生存期均有关(P<0.05);Snail蛋白的表达与Slug蛋白的表达呈正相关关系(r=0.752,P<0.001),Snail和Slug蛋白的表达均与KAI1蛋白的表达呈负相关关系(P<0.001)。Kaplan-Meier生存分析表明,Snail和Slug蛋白表达阳性的患者其生存率明显低于其阴性表达的患者(P<0.001);KAI1蛋白表达阳性的患者其生存率明显高于其阴性表达的患者(P<0.001)。Cox回归分析显示Snail和KAI1蛋白的阳性表达及FIGO分期是影响CSCC患者术后生存的独立预后因素。结论 Snail、Slug和KAI1蛋白的表达水平在CSCC组织中与肿瘤组织的分化程度、FIGO、浸润深度、淋巴结转移与否及预后等均有关;在CSCC组织中早期联合检测Snail、Slug和KAI1对判断预后有价值。

转录因子Snail、Slug在人宫颈癌上皮-间质转化中的作用

目的探讨调控因子Snail、Slug对E-钙黏蛋白的调控和参与人宫颈癌细胞转移侵袭的机制。方法对20例正常宫颈组织标本及85例宫颈鳞癌标本制成石蜡包埋切片,采用免疫组织化学染色方法检测Slug基因和间质标志物波形蛋白(Vimentin)的表达;采用免疫荧光化学染色检测转录因子Snail蛋白和上皮标志物E-cadherin的表达。结果在宫颈鳞癌组织中Slug蛋白和Vimentin的阳性表达率明显高于正常宫颈组织(P<0.05),随着临床分期增高,其阳性表达率有升高趋势,但未达到统计学差异(P>0.05)。随着组织分化级别下降和肿瘤淋巴结转移,其阳性表达率明显上升(P<0.05);Snail蛋白在鳞癌组织中荧光强度高于正常宫颈组织,浸润癌组织高于宫颈CIN组织(P<0.05),随着组织分化级别下降和肿瘤淋巴结转移,其荧光强度明显增强,但差异亦无统计学意义(P>0.05);E-cadherin在正常宫颈组织中荧光强度高于肿瘤组织,宫颈CIN组织高于浸润癌组织(P<0.05),随着组织分化级别下降和肿瘤淋巴结转移,其荧光强度明显减弱(P<0.05)。结论人宫颈组织上皮-间质转化在宫颈癌侵袭进展中可能发挥重要的作用,同时Snail、Slug信号通路可能参与了宫颈癌的侵袭转移过程。

Snail、Slug在喉鳞状细胞癌中表达与上皮-间质转化及侵袭转移之间的关系

目的研究Snail、Slug基因在喉鳞状细胞癌中的表达,探讨其与肿瘤上皮-间质转化及侵袭转移之间的关系及临床意义。方法采用免疫组化EnVision法检测74例喉鳞状细胞癌组织及30例癌旁组织中Snail、Slug及Vimentin、E-cadherin的表达情况,统计分析其表达的相关性及与各临床病理指标之间的关系。结果 Snail、Slug蛋白在喉鳞状细胞癌组织中的阳性率为58.2%和55.4%,高于癌旁组织中阳性率(13.3%和16.7%,P<0.05)。Snail、Slug蛋白表达与E-cadherin呈负相关性(r=-0.567,P<0.001及r=-0.457,P<0.001),与Vimentin的表达呈正相关性(r=0.453,P<0.001及r=0.376,P<0.001)。Snai、Slug蛋白表达与分化程度、TNM分期及淋巴结转移密切相关(均P<0.05)。结论转录因子Snail、Slug可能通过参与与调控EMT过程,与喉鳞状细胞癌的发展和侵袭相关。

KAI1,Snail,Slug,E-cadherin在鼻咽癌组织中的表达及其与患者预后的关系

目的 探讨KAI1、Snail、Slug、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)在鼻咽癌组织中的表达及其与患者预后的关系。方法 选取43例鼻咽癌患者,收集癌组织与癌旁正常组织,采用免疫组织化学法测定其KAI1、Snail、Slug、E-cadherin表达。分析四者与患者临床病理特征的关系;另随访3年,采用Kaplan-Meier法分析四者表达与鼻咽癌患者预后的关系。结果 癌组织中KAI1、E-cadherin阳性表达率低于癌旁组织,Snail、Slug阳性表达率高于癌旁组织,有统计学差异(P<0.05);KAI1、Snail、Slug、E-cadherin表达与鼻咽癌患者年龄、性别无关(P>0.05);KAI1、Snail、Slug、E-cadherin表达与肿瘤临床分期、分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05);癌组织KAI1、E-cadherin阴性表达与Snail、Slug阳性表达患者的3年生存率低于KAI1、E-cadherin阳性表达与Snail、Slug阴性表达患者,有统计学差异(P<0.05)。结论 KAI1、E-cadherin在鼻咽癌组织内呈低表达,Snail、Slug呈高表达,四项指标均参与疾病的发生、发展,与患者预后相关。

肝癌细胞株中VEGFR-1活化前后对Snail,Slug,Twist蛋白改变及意义

最近研究表明,上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）在恶性肿瘤的侵袭转移中发挥重要的作用。做为EMT的共同特征,上皮标志物E-钙黏蛋白（E-CD）的表达往往下调,在对E-CD表达调控的研究中发现锌指转录因子Snail，Slug，Twist在转录水平对E—CD的调节是EMT的中心环节。

COQ10B在食管鳞癌中的表达及其调控Snail表达促进食管鳞癌细胞增殖与侵袭

目的:探讨COQ10B对食管鳞癌细胞增殖、侵袭能力的影响及可能的分子机制。方法:通过TIMER2.0数据库分析COQ10B基因在各种肿瘤和相邻正常组织之间的表达水平。免疫组织化学检测COQ10B在食管鳞癌组织中的表达水平并进行临床病理特征分析及生存分析;利用慢病毒构建COQ10B敲减稳转株及Snail过表达稳转株,qRT-PCR和Western blot方法检测转染效率。MTT法、Celigo细胞计数及Transwell侵袭小室检测COQ10B对KYSE150细胞系增殖和侵袭能力的影响。通过GEPIA2数据库分析COQ10B表达水平与Snail的相关性;Western blot检测敲减COQ10B对Snail蛋白表达的影响。通过拯救实验分析COQ10B是否通过正调控Snail促进KYSE150细胞系增殖和侵袭能力。结果:COQ10B在ESCC组织及细胞系中均为高表达水平,且表达水平与临床病理特征病理分级相关。COQ10B与ESCC患者预后相关,高表达COQ10B的ESCC患者预后明显较差,且发现性别、肿瘤TNM分期是影响ESCC预后的独立危险因素。敲减COQ10B可降低ESCC细胞增殖及侵袭能力。COQ10B表达水平与Snail呈正相关,并通过正调控Snail促进KYSE150细胞系增殖和侵袭能力。结论:COQ10B通过正向调控Snail基因表达促进食管鳞癌增殖与侵袭。

Twist、Snail、Slug在口腔鳞状细胞癌中的表达及其与各临床病理因素的关系

目的：探讨Twist、Snail、Slug在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）中的表达水平及其与各临床病理因素之间的关系。方法：采用免疫组织化学方法检测术前未接受放化疗的有颈部淋巴结转移或无颈部淋巴结转移的60例原发OSCC患者肿瘤切除石蜡标本中Twist、Snail、Slug蛋白的表达情况,检测结果采用SPSS10.0软件包进行统计学分析。结果：60例OSCC组织标本中,Twist的表达率为70%;Twist在颈部淋巴结转移的OSCC标本中的表达率为64.3%,无颈部淋巴结转移OSCC中的表达率为35.7%;早期OSCC中的表达率为55.6%,晚期OSCC的表达率为81.8%。Twist表达水平在OSCC患者有无颈部淋巴结转移和不同肿瘤分期之间具有显著性差异（P=0.012,P=0.046）。60例OSCC患者随访时间37个月（6~59个月）,16例患者术后复发。Twist表达与肿瘤复发相关（P=0.025）;Cox回归模式分析表明Twist蛋白表达是OSCC患者预后的独立预测因素之一（P=0.042）。与患者年龄、性别、T分期、病理分级、吸烟、饮酒等无关（P〉0.05）。60例OSCC组织标本中,Snail和Slug表达率分别为63.3%,58.3%;表达水平在OSCC不同临床病理因素之间的差异无统计学意义,对预后无影响（P〉0.05）。结论：Twist、Snail、Slug蛋白在OSCC中高表达,Twist表达水平在OSCC患者有无颈部淋巴结转移和不同肿瘤分期之间具有显著性差异,Snail、Slug表达水平与OSCC临床病理因素无相关性。

基于β-catenin/Slug信号通路表达探讨LPCAT1对子宫颈癌生物学行为的影响

目的观察β-catenin/Slug信号特异性抑制剂FH535与EMT的关系,探讨LPCAT1在调节子宫颈癌细胞侵袭、转移和生长中的作用。方法采用sh-NC和sh-LPCAT1转染Hela细胞,利用载体(Vector)组和LPCAT1过表达质粒转染SiHa细胞,将SiHa细胞分为对照组(Con)、LPCAT1组、LPCAT1+FH535组和FH535组。运用CCK-8法和集落形成试验检测子宫颈癌细胞的增殖。通过伤口愈合试验和Transwell实验检测子宫颈癌细胞的转移、侵袭能力。应用Western blot分析细胞中LPCAT1、β-catenin/Slug信号通路和EMT相关蛋白的表达。结果与Vector组相比,LPCAT1组SiHa细胞的活力、集落数、迁移和侵袭细胞数均显著增加(P<0.05);与sh-NC组相比,sh-LPCAT1组Hela细胞的活力、集落数、迁移和侵袭细胞数均显著降低(P<0.05)。与LPCAT1组相比,LPCAT1+FH535组SiHa细胞中Wnt4(1.18±0.05 vs 0.80±0.06)、β-catenin(1.05±0.08 vs 0.77±0.05)、Slug(1.13±0.06 vs 0.28±0.02)、Cyclin D1(0.99±0.06 vs 0.44±0.02)、N-cadherin(0.91±0.07 vs 0.46±0.03)和vimentin(0.95±0.06 vs 0.49±0.03)表达降低(P<0.05),E-cadherin(0.44±0.03 vs 0.58±0.03)表达增加(P<0.05)。此外,与LPCAT1组相比,LPCAT1+FH535组SiHa细胞的集落数(224±15 vs 146±11)、迁移数(85±3 vs 51±4)和侵袭数(166±10 vs 90±5)均降低(P<0.05)。结论LPCAT1表达增加可能通过激活β-catenin/Slug信号通路促进子宫颈癌的转移和进展,LPCAT1的靶向治疗有望提高子宫颈癌患者的预后。

上皮-间充质转分化与转录因子Snail、Slug、Twist在口腔鳞状细胞癌发生、发展中的作用

上皮-间充质转分化(EMT)是上皮细胞在特定生理和病理情况下向间充质细胞转化的现象,它在上皮性肿瘤的演进中发挥了关键作用。肿瘤发生过程中,转录因子Snail、Slug、Twist等常可引发EMT,促使肿瘤的侵袭与转移。Snail、Slug和Twist在口腔鳞癌演变过程中,尤其在浸润和转移中发挥重要作用。该文介绍EMT的概念、特征以及Snail、Slug和Twist的基因结构特点、生物学特性等,特别对其在口腔鳞癌中的作用进行了综述。

Snail+Slug在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨Snail+Slug在宫颈癌组织中的表达及其临床意义。方法利用免疫组化检测Snail+Slug在60例宫颈癌组织和40例正常宫颈组织中的表达,分析Snail+Slug在宫颈癌组织中的表达状况以及与宫颈癌临床参数的关系。结果 Snail+Slug在宫颈癌组织和正常宫颈组织中阳性表达率分别为71.7%(43/60)、17.5%(7/40),两组间有统计学意义(χ2=29.917,P<0.05);Snail+Slug在宫颈癌组织中的表达明显高于正常宫颈组织,在正常组织中偶见核表达。Snail+Slug的过表达与患者年龄无关(χ2=0.002,P>0.05),与宫颈癌的组织学分化程度、临床分期、有无淋巴转移等有明显相关性,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Snail+Slug在宫颈癌中高表达,提示其可能参与了肿瘤的发生和发展,并有望成为临床诊断及评价患者预后的新型标志物。

E-cadherin、WISP2和Slug蛋白与在胃食管交界腺癌临床病理因素及预后的关系

目的探究E-钙黏蛋白(E-cadherin)、wnt-1诱导分泌蛋白2(wnt-1 inducible secreted protein-2,WISP2)和Slug蛋白与食管胃交界腺癌(adenocarcinoma of the esophagogastric junction,AEG)临床病理因素及预后的关系。方法选取2021年1月至2022年3月在本院胃肠外科行手术治疗的114例AEG确诊患者,术中留取其癌灶组织与癌旁组织,通过免疫组化染色检测组织中E-cadherin、WISP2、Slug蛋白的表达情况,分析上述指标表达与AEG病理因素的关系,绘制KM曲线探究不同E-cadherin、WISP2、Slug蛋白表达患者的预后情况。结果癌灶组织E-cadherin、WISP2蛋白表达阳性率均低于癌旁组织(P<0.05),但其Slug蛋白表达阳性率高于癌旁组织(P<0.05)。在E-cadherin表达阳性率上,年龄≥50岁患者低于<50岁患者(P<0.05);TNM分期Ⅲ期患者低于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05);浸润深度>1/2患者低于≤1/2患者(P<0.05)。在WISP2表达阳性率上,高分化患者低于低、中分化患者(P<0.05);浸润深度>1/2患者低于≤1/2患者(P<0.05)。在Slug蛋白表达阳性率上,高分化高于低、中分化患者(P<0.05);浸润深度>1/2患者高于≤1/2患者(P<0.05);淋巴结转移患者高于无淋巴结转移患者(P<0.05)。Slug蛋白均分别与E-cadherin、WISP2呈负相关(r=-0.301、-0.289,P<0.05)。E-cadherin表达阳性组、阴性组生存时间分别为为(19.71±0.84)个月、(15.85±1.02)个月,阳性组生存时间长于阴性组(P<0.05)。WISP2表达阳性组、阴性组生存时间分别为(19.84±0.83)个月、(18.52±1.82)个月,阳性组生存时间长于阴性组(P<0.05)。Slug表达阳性组、阴性组生存时间分别为为(16.06±0.93)个月、(19.66±0.92)个月,阳性组生存时间短于阴性组(P<0.05)。结论E-cadherin、WISP2、Slug蛋白在AEG患者中异常表达,其表达与AEG的发生、转移以及侵袭等病理因素相关,可作为临床预测AEG患者预后的潜在指标。

茶黄素调节Snail/Slug信号通路对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响

目的研究茶黄素调节Snail/Slug信号通路对口腔鳞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响。方法采用MTT法检测25、50、100、150、175 mg/L茶黄素处理的人OSCC细胞SCC-25存活率,筛选出茶黄素的合适作用浓度。体外培养SCC-25细胞并构建OSCC移植瘤模型,分为对照组、茶黄素低剂量组、茶黄素高剂量组、茶黄素高剂量+空载组、茶黄素高剂量+Snail过表达组。采用实时荧光定量PCR与免疫印迹检测各组细胞Snail、Slug表达;采用MTT法与流式细胞术分别检测各组细胞增殖、凋亡;采用细胞划痕与Transwell侵袭实验分别检测各组SCC-25细胞迁移、侵袭;采用免疫印迹检测各组SCC-25细胞凋亡及上皮间质转化相关蛋白表达;检测各组裸鼠肿瘤体积、肿瘤质量。结果与对照组相比,茶黄素低剂量组、茶黄素高剂量组细胞存活率、迁移率、侵袭数、Snail mRNA及蛋白表达、Slug m RNA及蛋白表达、Bcl-2、N-cadherin蛋白表达、裸鼠肿瘤质量及体积均降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、ZO-1及E-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05),高剂量茶黄素作用更强。与茶黄素高剂量组相比,茶黄素高剂量+空载组各指标差异无统计学意义(P>0.05);过表达Snail可逆转茶黄素对细胞及裸鼠各指标的影响。结论茶黄素可下调Snail/Slug通路蛋白表达,从而抑制OSCC细胞的上皮间质转化、增殖、迁移及侵袭,促使其凋亡,并可延缓裸鼠移植瘤的生长。

归肾丸调控TGF-β/Snail信号通路介导上皮间质转化抑制宫腔粘连的研究

目的研究归肾丸对原代子宫内膜上皮细胞(Primary endometrial epithelial cells,PEEC)纤维化及对TGF-β/Snail信号通路介导上皮间质转化(Epithelial mesenchymal transition,EMT)的调控作用,以阐明其对宫腔粘连(Intrauterine adhesions,IUA)的潜在治疗作用及分子机制。方法利用TGF-β1体外诱导PEEC 48 h以发生EMT,再使用归肾丸含药血清处理PEEC 24 h,通过定量PCR(Quantitative polymerase chain reaction,qPCR)和蛋白质印迹(Western Blot,WB)分别检测TGF-β1下游基因Snail,EMT标志物Vimentin、E-cadherin、N-cadherin,细胞纤维化标志物α-SMA的mRNA水平和蛋白水平的表达。结果归肾丸含药血清经验证无细胞毒性。TGF-β1成功诱导了PEEC发生EMT,表现为Snail、Vimentin、N-cadherin和α-SMA的表达升高,及E-cadherin的表达降低。归肾丸血清抑制了PEEC的EMT并降低了PEEC的纤维化水平,表现为Snail、Vimentin、N-cadherin和α-SMA的表达降低,及E-cadherin的表达升高。结论归肾丸可通过抑制TGF-β/Snail信号通路介导的EMT降低PEEC纤维化水平以治疗宫腔粘连。

结肠腺癌组织中Cripto-1蛋白和锌指转录因子Snail与基质金属蛋白酶-9的表达及临床意义

目的研究结肠腺癌组织中畸胎瘤衍生生长因子-1(Cripto-1)、锌指转录因子(Snail)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达情况及临床病理特征。方法回顾性分析2020年1月至2021年8月于韶关市粤北人民医院胃肠外科92例行手术切除结肠腺癌患者的临床资料,手术切除标本92个。另选取癌旁不典型增生组织56例和正常结肠组织35例作为对照。采用免疫组化检测并比较Cripto-1、Snail和MMP-9在结肠腺癌组织、不典型增生和正常结肠黏膜组织中的表达情况,采用Spearman相关分析Cripto-1、Snail和MMP-9与结肠腺癌临床病理特征的相关性。结果结肠腺癌、不典型增生、正常结肠组织的CR-1、Snail和MMP-9阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);结肠腺癌及不典型增生组织中CR-1、Snail和MMP-9阳性率均高于正常结肠组织,结肠腺癌组织中Snail和MMP-9阳性率均高于不典型增生组织,差异均有统计学意义(P<0.05);结肠腺癌组织与不典型增生组织中CR-1阳性率比较差异无统计学意义。肿瘤的浸润深度、临床TNM分期及淋巴结转移情况不同的患者Cripto-1、Snail和MMP-9在结肠腺癌组织中的表达阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤浸润T3~T4、临床分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移的患者结肠腺癌组织中CR-l、Snail和MMP-9的表达阳性率均高于肿瘤浸润T1~T2、临床分期Ⅰ~Ⅱ期和无淋巴结转移的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结肠腺癌组织中CR-1表达与Snail和MMP-9的表达呈正相关(r>0,P<0.05),MMP-9表达与Snail表达亦呈正相关(r>0,P<0.05)。结论Cripto-1、Snail和MMP-9在结肠癌的浸润和转移中起协同调节作用。

山奈酚调节AKT/GSK-3β/Snail信号通路对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探讨山奈酚对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响,并探究其作用机制。方法:将CNE-2细胞分为对照组、山奈酚低浓度组、山奈酚中浓度组、山奈酚高浓度组、山奈酚高浓度+SC-79(AKT激活剂)组。CCK-8法和克隆实验测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测各蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化Akt(p-AKT)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)、Snail的表达水平。构建鼻咽癌裸鼠模型,分为裸鼠NC组、山奈酚组、山奈酚+SC-79组,测量肿瘤质量与体积,免疫组化法检测移植瘤组织p-AKT、p-GSK-3β、Snail蛋白表达。结果:山奈酚对人鼻咽癌上皮细胞活力无显著影响(P>0.05);鼻咽癌细胞活力随着山奈酚浓度的升高而逐渐降低(P<0.05),选择CNE-2作为后续实验细胞,选择25、50、100μmol/L山奈酚作为后续实验浓度。与对照组相比,山奈酚低、中、高组细胞活力、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、Snail水平显著下降,凋亡率、Bax、Caspase-3、E-cadherin上升(P<0.05);与山奈酚高浓度组相比,山奈酚高浓度+SC-79组细胞活力、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、Snail水平显著上升,凋亡率、Bax、Caspase-3、E-cadherin下降(P<0.05)。山奈酚能抑制移植瘤质量和体积,降低p-AKT、p-GSK-3β、Snail蛋白表达(P<0.05);SC-79逆转山奈酚对移植瘤的抑制作用,促进AKT/GSK-3β/Snail通路蛋白表达(P<0.05)。结论:山奈酚能抑制鼻咽癌细胞增殖和EMT,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制AKT/GSK-3β/Snail信号通路有关。

秦川牛Snail1克隆、表达特性分析及其对牛脂肪细胞增殖的作用研究

【目的】肉牛肌内脂肪沉积与牛肉的风味、多汁性和嫩度密切相关。脂肪沉积过程表现为脂肪细胞的增殖(数量增多)和分化(脂质生成),受到了多基因协同调控。前人研究发现,小鼠中Snail1可以参与肌肉发育和脂质稳态调控,但其在牛脂肪生成过程中的作用仍未知,有待进一步研究。【方法】以秦川牛为研究对象,克隆得到Snail1 CDS区序列,构建Snail1时空表达谱,运用生物信息学软件对其功能结构及靶基因进行预测。进一步,通过RNAi干扰结合CCK8、EdU、细胞流式及实时荧光定量PCR等方法探究Snail1对牛脂肪细胞增殖的影响。【结果】秦川牛Snail1与NCBI公布序列相比存在2处碱基同义突变,其在秦川牛新生牛肺、肾周脂肪、小肠呈现较高丰度表达;而在成年牛中,Snail1在肾周脂肪组织中的表达量最高,背最长肌中的表达量次之,肺脏组织中的表达量最低。生物信息学分析发现,Snail1启动子区存在1个651 bp CpG岛及C/EBP、PPARα等与脂肪生成相关的转录因子结合位点。CKⅠ(Ser92/96)、CKⅡ(Ser25/119,Thr89)、CDK1(Ser13/104/112/119/143/183/214/221)、CDK5(Ser105/107)等多个细胞周期相关激酶可能参与了Snail1蛋白的磷酸化修饰。通过对牛已注释基因启动子区提取、靶基因预测及KEGG动态网络构建发现,成脂相关的MAPK、PI3K-Akt、mTOR等信号通路为Snail1参与脂肪生成相关的潜在节点信号通路。进一步,通过RNAi干扰试验对其功能研究表明,Snail1下调促进了牛前体脂肪细胞的增殖,增加了复制期阳性细胞的比例(P<0.01)且促进了G1/S细胞周期转换。RT-qPCR和Western-blot检测表明,干扰Snail1显著上调了促增殖调控基因CCNB1、CCND2、CDK2、CDK4(P<0.05)和蛋白的表达。【结论】Snail1在新生牛肾周脂肪及成年牛肾周脂肪和背最长肌中表达量相对较高。干扰Snail1促进了牛前体脂肪细胞的增殖、G1/S细胞周期转变和CCNB1、CCND2、CDK2、CDK4等增殖相关基因表达;CKⅠ、CKⅡ、CDK1/5等多个细胞周期相关激酶可能通过磷酸化修饰Snail1蛋白进而参与细胞增殖调控,而MAPK、PI3K-Akt、mTOR等为Snail1影响牛脂肪细胞增殖潜在的关键节点通路。研究结果为进一步探究Snail1参与牛脂肪生成作用机制奠定了基础。

Biological activities of gastropods secretions:snail and slug slime

Gastropods,a mollusk class including slugs and snails,represent an extraordinarily diverse and ecologically significant group of organisms featuring the largest class of invertebrates.They can be classified as aquatic and terrestrial animals having coiled shells,although some species have reduced or absent shells.Their unique body structure includes a muscular foot for locomotion,a visceral mass containing essential organs,and a distinct head region with sensory organs such as tentacles and eyes.They are used to secrete a complex mixture of glycoproteins,enzymes,peptides,mucus and other bioactive compounds,namely slime,which represents a tool to allow locomotion,protection,and interaction within different habitats.The biological activities of the slime have attracted considerable interest due to their diverse and potentially valuable properties ranging from defense mechanisms to potential therapeutic applications in wound healing,antimicrobial therapy,management of inflammation,and neurological disorders.This review aims at exploring the beneficial effects of snail and slug slime focusing,in particular,on the improvement of the biological processes underlying them.Continued exploration of the intricate components of these slimy secretions promises to discover new bioactive molecules with diverse applications in various scientific and industrial fields.

HIF-1α、E-Cadherin、Snail+Slug在宫颈鳞癌中的表达及意义

目的研究宫颈鳞癌中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与上皮间充质转化(EMT)相关蛋白E-Cadherin、Snail+Slug的表达及其相关性。方法运用基因芯片免疫组织化学方法检测HIF-1α、E-Cadherin、Snail+Slug在20例正常宫颈组织(NC组)和80例宫颈鳞癌组织(ICC组)中的表达。结果HIF-1α、E-Cadherin、Snail+Slug在ICC组的阳性表达率分别为77.50%(62/80)、67.50%(54/80)、36.25%(29/80),在NC组的阳性表达率分别为5.00%(1/20)、95.00%(19/20)、0(0/20);HIF-1α、E-Cadherin及Snail+Slug在NC组及ICC组中的阳性表达率比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。80例宫颈鳞癌患者中,HIF-1α阳性62例(77.50%),E-Cadherin阳性54例(67.50%),Snail+Slug阳性29例(36.25%)。临床分期Ⅱ期患者的HIF-1α阳性率高于临床分期Ⅰ期患者(P<0.05);临床分期Ⅰ期、高+中分化程度、浸润深度<1/2宫颈间质、无淋巴结转移患者的E-Cadherin阳性率分别高于临床分期Ⅱ期、低分化程度、浸润深度≥1/2宫颈间质、有淋巴结转移患者(P<0.05);低分化程度、浸润深度≥1/2宫颈间质患者的HIF-1α、Snail+Slug阳性率分别高于高+中分化程度、浸润深度<1/2宫颈间质患者(P<0.05);有淋巴结转移患者的Snail+Slug阳性率高于无淋巴结转移患者(P<0.05)。相关性分析结果显示,HIF-1α与E-Cadherin的表达呈负相关,与Snail+Slug的表达呈正相关(P<0.05)。结论HIF-1α蛋白的表达水平与宫颈鳞癌的分化程度、浸润深度密切相关。HIF-1α的过表达可能通过EMT途径促进宫颈鳞癌的浸润与转移,联合检测HIF-1α蛋白表达可作为评价患者预后的生物学指标。