蛇毒神经生长因子抗肿瘤体外实验研究

目的 :探讨蛇毒神经生长因子 (NGF)对人肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法 :采用噻唑蓝 (MTT)法、台盼蓝拒染法和集落形成作为观察指标 ,以NGF 5 ,10 ,15 ,2 0 μg /ml处理 4种人肿瘤细胞 (人白血病细胞株K 5 6 2、人胰癌细胞株JF 30 5 ,人肺癌细胞株AGZY 83a和人胃癌细胞株MG 80 3) ,选用不同作用时间 ,分别观察NGF对上述细胞的影响。阿霉素 (Adr)为阳性对照药。结果 :NGF对 4种人肿瘤细胞均有细胞毒性作用 ,K 5 6 2和JF 30 5比后两者显示出更好的量效关系 (P均 <0 .0 5 )。NGF处理 2 4 ,4 8和 96h后K 5 6 2和JF 30 5细胞的生长均受到抑制 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。并有显著的剂量效应关系。处理JF 30 5细胞 2 4 ,4 8和 96h ,NGF的半抑制浓度 (IC50 ) ,时间 效应关系亦明显 ;NGF对K 5 6 2细胞的生长抑制作用以 4 8h为显著。NGF还可显著抑制JF 30 5细胞的集落形成 ,并有明显的量效关系 (P <0 .0 1) ,其IC50 为 12 .86 μg/ml。 结论 :NGF对 4种人肿瘤细胞均具有细胞毒性和生长抑制作用 ,对K 5 6 2、JF 30

眼镜蛇毒神经生长因子对去部分背根猫脊髓背角内GAP-43表达的影响

目的观察眼镜蛇毒分离纯化出的神经生长因子(NGF)对去部分背根猫脊髓背角内生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响。方法对45只成年雄性家猫切除一侧L1-L5、L7-S2背根节,保留L6背根及背根节为备用背根,按给药剂量将动物分成小剂量NGF组(1μg/kg)、大剂量NGF组(2μg/kg)和生理盐水对照组,每组15只,术后分别存活3、6、12d,对L6节段脊髓作GAP-43免疫组织化学检测。结果术后术侧GAP-43阳性反应产物主要分布在脊髓、、板层的神经终末;中央管室管膜细胞呈阳性反应;脊髓前角神经毯呈阳性反应,整个脊髓板层未见阳性反应的神经元。术后3d,三组术侧、、板层即有GAP-43阳性神经纤维的表达;术后6d,三组GAP-43阳性神经纤维数量明显增多,至术后第12d,神经纤维数量增加达高峰,治疗组神经终末数量增加明显,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),不同时间段均以大剂量组的增多尤为显著。结论蛇毒NGF能有效诱导脊髓损伤修复过程中神经元GAP-43的合成而促进保留背根的侧支出芽,其密度与蛇毒神经生长因子的治疗剂量有关。

蛇毒NGF与胶原蛋白联合治疗急性感染控制后痤疮

目的:探讨蛇毒神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)与胶原蛋白联合使用治疗急性感染控制后痤疮的临床疗效。方法:收集100例寻常痤疮患者,随机分为治疗组和对照组。前4周,两组均先抗感染治疗;后4周,治疗组给予蛇毒NGF+胶原蛋白+替硝唑;对照组给予蛋黄+替硝唑。以上药物两组均使用美容仪器导入面部,每次治疗15￣20min,每周治疗2次。结果:治疗组痊愈率83.3%,总有效率98.3%;对照组痊愈率52.5%,总有效率72.5%,两组痊愈率和总有效率比较有统计学意义(P<0.01),在整个治疗过程中,未观察到皮肤出现任何不良反应,治疗后随访患者1￣2年,未见1例复发。结论:治疗组痊愈率和总有效率明显高于对照组,使用蛇毒NGF和胶原蛋白可提高痤疮皮肤的免疫功能,加速损伤部位的皮肤修复,不留瘢痕,无色素沉着,美容效果明显提高。

眼镜蛇毒NGF对去部分背根后备用背根节内GAP-43表达的影响

目的探讨从眼镜蛇毒分离纯化出的神经生长因子(NGF)对去部分背根猫备用背根节(DRG)内生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响。方法对45只成年雄性家猫切除一侧L1～L5、L7～S2DRG,保留L6DRG及背根,随机分为小剂量蛇毒NGF组(1μg/kg)、大剂量蛇毒NGF组(2μg/kg)、生理盐水对照组(0.1mL/kg),每组15只。术后损伤背髓局部即刻给予蛇毒NGF或生理盐水,分别于术后3、6、12d(存活12d的动物术后第6d再从椎间隙内注射上述剂量蛇毒NGF或生理盐水1次)处死动物。对L6备用DRG作GAP-43免疫组织化学检测,计数各组术侧GAP-43阳性大、中小神经元数量。结果GAP-43表达主要分布于DRG大神经元的胞核和中小神经元的胞浆。治疗组和对照组术后3d在术侧即可见到GAP-43阳性反应的大、中小神经元,6d达高峰,第12d有所下降;其中,中小神经元的变化尤为明显。治疗组术侧GAP-43阳性中小神经元数量多,反应强,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),其中大剂量蛇毒NGF组在各时间点阳性中小神经元的数量增多更为明显,与小剂量蛇毒NGF组相比差异有统计学意义(P<0.01);而不同时相各组术侧GAP-43阳性大神经元数量变化不明显。结论外源蛇毒NGF可能通过上调备用根DRG内中小神经元GAP-43的表达而发挥促进备用根轴突再生出芽的作用;其再生的强弱与蛇毒NGF的治疗剂量有关。

蛇毒神经生长因子在大鼠体内的药物代谢动力学与周围神经分布

用［１２５Ｉ］标记结合高效液相色谱法和酸沉法研究大鼠体内蛇毒神经生长因子（ｖＮＧＦ）药物代谢动力学．［１２５Ｉ］ｖＮＧＦ体外有刺激神经突起生长活性．药后血清存在游离和结合［１２５Ｉ］ｖＮＧＦ及［１２５Ｉ］降解物．１２ｍｇ·ｋｇ－１ｉｖ后ｔ１／２α为０．１３ｈ，ｔ１／２β为３．８ｈ；１２和４８ｍｇ·ｋｇ－１ｉｍ后ｔ１／２β为７．１和４．１ｈ，ＡＵＣ与剂量呈正比，ＣＬＳ相近，生物利用度为０．６２．体外［１２５Ｉ］ｖＮＧＦ与血清最大结合率２４．６％±０．４％，平衡解离常数３．２±０．３ｎｍｏｌ·Ｌ－１．ｉｍ后颈上神经节，注药侧和对侧坐骨神经放射性明显高于血清，注药侧最高，不被１００倍非标ｖＮＧＦ抑制．主要经尿排泄，２ｄ排出约８６％．

神经生长因子在康复医学中的应用(Ⅰ)——白眉蝮蛇乌苏里亚种蛇毒神经生长因子的分离纯化与鉴定

本研究结果表明:白眉蝮蛇乌苏里亚种蛇毒中含有神经生长因子(NGF),分离纯化该种NGF是可行的。经SDS-聚丙酰胺凝胶电泳分析,NGF呈一条区带。它在20ng/ml浓度下,可刺激大鼠胚脑组织的生长。用电泳法测得NGF的分子量为45000。

蛇毒神经生长因子抑瘤作用的实验研究

目的 :探讨神经生长因子 (NGF)对小鼠荷腹水瘤H2 2细胞的抑制作用。方法 :用不同剂量 (5 ,10 ,2 0 μg/kg)的NGF对荷腹水瘤H2 2小鼠进行治疗 ,观察其对小鼠腹水瘤H2 2的影响。利用放射免疫测定法 (RIA)测定荷瘤小鼠血浆内皮素 (ET)含量。结果 :NGF大剂量组对小鼠腹水瘤H2 2有明显的抑制作用 (抑瘤率 4 6 .36 % )。荷腹水瘤H2 2小鼠ET水平明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,大剂量组小鼠ET含量明显降低 (P<0 .0 5 )。结论 :NGF对小鼠腹水瘤H2 2细胞的生长具有抑制作用 ,可能与其降低荷瘤鼠ET水平有关。

蛇毒神经生长因子对鼠视网膜神经节细胞微管相关蛋白-1B的影响

目的通过对视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）微管相关蛋白-1B（microtubule associated protein-1B,MAP-1B）的研究,观察蛇毒神经生长因子（venom nerve growth factor,vNGF）在鼠视神经夹伤后对RGCs的保护作用。方法将Wistar大鼠40只随机分为实验对照组、实验治疗组,每组20只。制作视神经夹伤模型,用头部宽1mm的微型血管夹夹伤大鼠右眼视神经后,实验治疗组向右眼玻璃体内注入vNGF 100 BU（0.025mL）。实验对照组向右眼玻璃体内注入0.025mL平衡盐液。2组的左眼均未做任何处理,作为正常对照组。于损伤后3d、7d、14d、30d、60d取材,在光镜下计数RGCs,透射电镜观察不同时间段各组视网膜形态学变化,并进行MAP-1B免疫组织化学染色分析。结果光镜下,伤后3～30d实验治疗组的RGCs数目高于实验对照组,差异有显著统计学意义（P〈0.01）,伤后2组RGCs数目均比正常对照组少,差异有显著统计学意义（P〈0.01）。伤后60d,实验治疗组与实验对照组之间的RGCs数目差异无统计学意义（P〉0.05）,实验治疗组、实验对照组与正常对照组差异有显著统计学意义（P〈0.01）。电镜下,伤后14d实验治疗组视网膜微管数目比实验对照组多,排列也较整齐。免疫组织化学结果：实验治疗组2周内MAP-1B表达逐渐增强,1个月时明显减弱;实验对照组3d时有MAP-1B表达,到2周时表达明显减弱。结论在视神经损伤早期,vNGF能减轻视神经夹伤后微管的损坏,提高MAP-1B的表达强度,提高RGCs的存活数量,对RGCs有明显的保护作用。

蛇毒神经生长因子对大鼠坐骨神经损伤功能恢复的量效作用

目的 研究蛇毒神经生长因子 (Snakenervegrowthfactor,sNGF)对大鼠坐骨神经损伤修复的量效作用。方法 建立大鼠坐骨神经钳夹模型 ,术后肌注不同剂量 ( 3 0 0、90 0、2 70 0U kg)的sNGF ,通过展爪反射 ,趾间距 ,脊髓诱发电位、运动诱发电位观察 ,评定蛇毒神经生长因子对大鼠坐骨神经损伤修复的量效作用。结果 不同剂量sNGF明显促进受损周围神经运动和感觉功能的恢复 ,sNGF的上述作用与NGF的剂量有关。中剂量 90 0U kg效果较明显。

血府逐瘀汤、Svate-3和NGF联合应用对MCI大鼠海马神经递质变化的实验研究

目的:探讨血府逐瘀汤、蝮蛇抗栓酶及神经生长因子联合应用对多发性脑梗死的影响。方法:采用微栓子栓塞阻断法,建立多发性脑梗死大鼠模型,通过大鼠海马的组织病理学改变,探讨血府逐瘀汤、蝮蛇抗栓酶及神经生长因子联合应用对多发性脑梗死大鼠模型的影响。结果:术后7 d,治疗组与模型组比较NKB阳性神经元百分率明显增高(P<0.01)。结论:血府逐瘀汤、蝮蛇抗栓酶及神经生长因子联合应用能使多发性脑梗死大鼠海马组织缺血部位有所恢复,对多发性脑梗死的治疗有重要的临床意义。

蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂重组蛋白对人肝癌MHCC97H细胞TGF-β2、TNF-α表达的影响

目的研究蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(snake venom cystatin,sv-cystatin)重组蛋白对人肝癌MHCC97H细胞转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响。方法采用ELISA方法检测不同浓度sv-cystatin重组蛋白对人肝癌MHCC97H细胞TGF-β2、TNF-α分泌的影响;实时定量PCR和Western blot法分别分析不同浓度sv-cystatin重组蛋白体外处理人肝癌MHCC97H细胞后TGF-β2、TNF-α的mRNA及蛋白表达。结果与对照组相比,5种浓度的sv-cystatin重组蛋白对MHCC97H细胞TGF-β2、TNF-α的分泌具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性(P<0.05);25、50、100、200 mg·L-14种浓度的重组蛋白能够抑制TGF-β2的mRNA及蛋白表达,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);而50、100、200 mg·L-13种浓度的重组蛋白能够抑制TNF-α的mRNA及蛋白表达,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 sv-cystatin重组蛋白可能通过抑制TGF-β2和TNF-α的表达来发挥多方面的抗肿瘤作用。

蛇毒神经生长因子对大鼠坐骨神经损伤功能修复的时效作用研究

目的 :研究蛇毒神经生长因子 (SNGF)对大鼠坐骨神经损伤修复的时效作用。方法 :建立大鼠坐骨神经钳夹模型 ,局部滴加药物和术后肌注 90 0Bu/kg的SNGF ,分别给药 14、2 1和 2 8d。通过展爪反射、趾间距、脊髓诱发电位(SEP)、运动诱发电位 (MEP)观察 ,评定蛇毒神经生长因子对大鼠坐骨神经损伤修复的时效作用。结果 :蛇毒NGF以90 0Bu/kg剂量 ,每天于伤侧肌肉注射一次 ,分别给药 14、2 1、2 8d均有促进伤侧神经功能恢复的作用 ,且具有一定的时效关系 ,给药 2 1、2 8d组治疗效果较给药 14d组效果好 (P <0 .0 5 )。 2 1d组与 2 8d组间无明显差别。结论 :SNGF对大鼠坐骨神经损伤的修复作用具有一定的时效作用。

蛇毒神经生长因子对大鼠坐骨神经损伤修复作用的实验研究

目的 研究外源性给予江浙蝮蛇毒提取的神经生长因子 (sNGF)对大鼠坐骨神经损伤的修复作用。方法 建立大鼠坐骨神经钳夹模型 ,局部滴加药物和术后肌注sNGF ,通过展爪反射、趾间距、自切及脊髓诱发电位 (SEP)、运动诱发电位 (MEP)评定 ,观察坐骨神经修复情况。结果 sNGF治疗可使伤后SEP、MEP提早出现 ,减轻自切 ,改善后肢运动功能。结论 蛇毒提取的NGF对大鼠坐骨神经损伤修复具有促进作用。

广西眼镜蛇蛇毒神经生长因子基因在NIH3T3细胞中的表达

目的:构建广西眼镜蛇蛇毒神经生长因子(NGF)基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NGF,并在NIH3T3细胞中进行表达。方法:采用RT-PCR的方法扩增蛇毒NGF的基因片段,将目的基因、真核表达载体pcDNA3.1(-)分别酶切后回收,连接、转化而构建重组表达载体pcDNA3.1(-)-NGF,经酶切和测序对重组体进行鉴定。利用脂质体Lipofectamine～(TM) 2000方法转染NIH3T3细胞,对阳性克隆裂解上清中NGF的表达用SDS-PAGE、Western-blot的方法检测。结果:重组载体经酶切、测序分析,插入的基因片段为表达蛇毒NGF的基因,NGF基因在NIH3T3细胞中获得表达。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-NGF,并检测出在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步开展NGF基因治疗神经系统的疾病奠定了实验基础。

眼镜蛇毒神经生长因子对成年猫坐骨神经损伤后的作用

目的 探讨从眼镜蛇毒分离纯化出的神经生长因子 (nerve growth factor,NGF)对成年猫坐骨神经损伤后的影响。方法 制成成年猫坐骨神经损伤模型 ,损伤局部注射蛇毒 NGF 2μg/ (kg· d) ,分别治疗 10 d和 30d,并与对照组 (损伤坐骨神经 ,不给药物 )比较。结果 术后 10 d,对照组术侧远端神经纤维数量比治疗组明显减少(P<0 .0 1) ,治疗组术侧足底刺激出现早 ,肢体活动恢复快。术后 30 d,治疗组术侧远端神经纤维大量再生 ,再生神经纤维数量已明显超过对照组和术后 10 d组水平 (P<0 .0 1) ,但结构紊乱 ,轴突和郎氏结消失。术侧肢体在连续注射 NGF 16 d左右出现足底刺激反应消失 ,肢体瘫痪等改变。结论 眼镜蛇毒 NGF在神经损伤早期应用能减轻神经纤维发生的溃变 ,促进受损神经的再生与功能恢复 ;而损伤局部长时间注射蛇毒 NGF则会导致神经纤维增生过度 。

蛇毒NGF对PC12细胞MAPK表达的影响

有丝分裂原激活的蛋白激酶 (MAPK)是磷酸化瀑布中涉及的一类重要蛋白激酶 .阐明各种胞外因素对MAPK的调节 ,以及各种外界信息所经历的具体过程是摆在研究者面前的挑战性任务 .用含有长白白眉蝮蛇(A .halys)蛇毒神经生长因子 (NGF)的培养基培养PC12细胞 ,观察MAPK和MAPK激酶 (MAPKK)表达及MAPK的活性 .结果表明 ,A .halys蛇毒NGF使PC12细胞的MAPK和MAPKK的表达及MAPK活性明显增加 .当蛇毒NGF浓度在 2 5～ 10 0 μg/L时 ,随浓度的增加 ,酶的表达和活性呈线性增加 .由A .halys蛇毒NGF诱导的MAPK和MAPKK表达的增加依赖于蛋白激酶C (PKC)

蛇毒有效成分治疗心肌梗死的研究进展

蛇毒中富含多种对人体治疗疾病有利的蛋白质及相关活性物质。本文介绍了目前蛇毒中对治疗心肌梗死的一些有效成分,分析了去整合素、蛇毒生长因子、尖吻蝮蛇毒血浆蛋白C激活物PCA、蛇毒去纤溶酶、库尼茨型缓蚀剂、血栓素2(Lebetin2)等物质从不同角度对心肌梗死的治疗作用,以及蛇毒对心肌梗死的诊断及治疗取得的一些成果,旨在明确蛇毒对心肌梗死有效成分的作用机制,为心肌梗死的治疗提供新的研究方向。