SNF2家族新成员Ercc6l的cDNA克隆与表达分析(英文)

SNF2家族蛋白在基因组复制、修复与表达中具有重要作用 .报道了SNF2家族新成员Ercc6l (excisionrepaircross complementingrodentrepairdeficiency,complementationgroup 6 like)的cDNA克隆、特性与表达分析 .通过表达序列标签 (EST)搜索和组装 ,获得了cDNA全长 4 0 0 2bp的新基因Ercc6l (GenBankAcc .NoAY172 6 88) ,然后通过RT PCR在小鼠胚胎心脏成功克隆了该基因 .Ercc6l在小鼠基因组中由两个外显子和一个内含子组成 ,定位于X染色体 ,最大开放阅读框 (ORF)编码一个含 12 4 0个氨基酸的假定蛋白质 .该假定蛋白质含有SNF2蛋白的 8个保守基序 (SNF2结构域 ) .通过与SNF2家族各亚家族的成员进行多重比对 ,初步确认Ercc6l属于ERCC6亚家族成员 .将Ercc6l编码区克隆到pEGFP C3然后转染HeLa ,3T3和B16细胞 ,融合蛋白主要定位于胞浆 .BLAST搜索检索出 6 9条小鼠EST与Ercc6l同源 ,这些EST主要来自胚胎和肿瘤组织 .对小鼠不同发育时期的多种组织进行RT PCR ,发现Ercc6l在胚胎期强表达 ,出生产后表达显著下调 .

龙眼染色质重塑因子Snf2基因家族的进化动力学研究及在体胚发生早期的表达

以龙眼(Dimocarpus longan Lour.)‘红核子’品种早期体细胞胚胎发生的胚性愈伤组织(embryogenic callus,EC)、不完全胚性紧实结构(incomplete embryogenic compact structures,ICpEC)和球形胚(globular embryos,GE)为材料,通过生物信息学方法鉴定和分析其染色质重塑因子DlSnf2家族成员及分子进化特性,并通过转录组和实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析其表达模式。龙眼DlSnf2家族包含35个成员,家族扩张受到全基因组或片段复制驱动。选择含有SNF2 N和HELICc结构域的31个成员,根据进化特征分为6大类19个亚族。蛋白互作、microRNA和启动子预测显示,部分成员能够发生互作,大部分基因受到microRNA的潜在调控,且存在与激素、胁迫、光、生长和发育相关顺式作用元件。转录组和qRT-PCR分析显示:大多数基因在ICpEC阶段中高表达,DlCHR18、DlCHR24、DlCHR25、DlCHR29和DlCHR31a从EC到GE的过程中表达逐渐下调,而DlCHR4、DlCHR15和DlCHR42表达逐渐上调。分析显示DlSnf2家族基因响应2,4-D、ABA、乙烯利、茉莉酸甲酯、4℃和40℃。DlCHR10和DlCHR11的表达被乙烯利上调,而DlCHR28b和DlCHR36被下调,DlCHR11被ABA和高温(40℃)下调,DlCHR10被茉莉酸甲酯下调,DlCHR36被低温(4℃)下调,DlCHR24和DlCHR35被高温(40℃)下调。Snf2基因家族在植物进化过程中可能具有功能的相对保守性及一定物种特异性。在植物生长调节剂和温度处理下,龙眼DlSnf2家族成员可能参与调控体胚发生和抵御高、低温胁迫,且推测DNA甲基化、microRNA和组蛋白修饰等其他表观调控机制参与了这一过程。

Mechanism of chromatin remodeling revealed by the Snf2-nucleosome structure

Subject Code:C05With the support from the National Natural Science Foundation of China,a collaborative study by the research teams led by Chen Zhucheng(陈柱成)and Li Xueming(李雪明)at the School of Life Sciences,Tsinghua University,recently reported their work,titled“Mechanism of chromatin remodeling revealed

SRCAP和CEACAM5蛋白水平对结肠癌根治术后复发转移的预测价值

目的探讨Snf2相关CREBBP激活蛋白(SRCAP)和癌胚抗原相关细胞黏附分子5(CEACAM5)蛋白水平对结肠癌根治术后复发转移的预测价值。方法选择2016年12月至2019年12月在同济大学附属杨浦医院接受腹腔镜结肠癌根治术治疗的100例结肠癌患者纳入研究。所有受试者在腹腔镜下采集结肠癌组织及癌旁正常结肠黏膜组织。采用免疫组织化学染色法测定SRCAP和CEACAM5的表达水平。采用电话和门诊复查的方式对患者进行随访,记录复发转移情况并计算无病进展生存率(PFS)。结果结肠癌组织中SRCAP和CEACAM5蛋白阳性表达率分别高于癌旁正常结肠黏膜组织,差异均有统计学意义(P均<0.05)。肿瘤直径≥3 cm、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、浸润侵及浆膜层、高分化、有淋巴结转移、有神经侵犯的结肠癌患者组织中SRCAP蛋白的阳性表达率较高,肿瘤直径≥3 cm、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、浸润侵及浆膜层、有淋巴结转移、有神经侵犯的结肠癌患者组织中CEACAM5蛋白的阳性表达率较高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。SRCAP和CEACAM5蛋白阳性表达者的PFS均低于阴性表达者(P均<0.05)。Cox回归模型分析结果显示,TNM分期、分化程度、淋巴结转移、SRCAP蛋白水平、CEACAM5蛋白水平是结肠癌根治术后复发转移的危险因素(P均<0.05)。ROC曲线分析结果显示,SRCAP蛋白水平预测结肠癌根治术后复发转移的敏感度、特异度、曲线下面积(AUC)分别为76.34%、73.98%和0.723(95%CI:0.702~0.853),CEACAM5蛋白水平预测结肠癌根治术后复发转移的敏感度、特异度、AUC分别为73.08%、71.28%和0.696(95%CI:0.678~0.706),两者联合检测预测结肠癌根治术后复发转移的敏感度、特异度、AUC分别为79.74%、77.72%和0.789(95%CI:0.741~0.832),均高于单项检测(P均<0.05)。结论结肠癌组织中SRCAP和CEACAM5蛋白阳性表达率较高,且SRCAP和CEACAM5蛋白阳性表达者的术后复发转移率较高,其可作为结肠癌根治术后复发转移的预测指标。

发育相关基因Ercc6l的分子克隆与表达分析及其在酒精致畸中的作用

背景与目的 :在GeneBank中筛选新的小鼠发育相关基因 ,研究其在酒精致畸中的作用。材料与方法 :利用EST介导的基因克隆和表达谱分析进行新基因克隆、表达和同源性分析 ;利用RT-PCR、绿色荧光蛋白标记基因转染、全胚胎原位杂交、石蜡切片原位杂交和Northern杂交进行新基因的验证、亚细胞和组织定位及其在酒精致畸中的表达变化研究。结果 :成功克隆小鼠基因Ercc6l,其在胚胎期正常组织中强表达 ,在新生鼠表达明显减弱 ,在成年鼠几乎不表达。酒精染毒体内、外实验均显示畸变胚胎Ercc6l的表达显著降低。结论 :Ercc6l是小鼠胚胎发育相关基因 ,同时是酒精致畸作用的分子靶点。

SnF_2标准生成Gibbs自由能的测定

采用LaF3单晶(掺杂)作为固体电解质,在多次抽空充氩气的操作箱内,将Pb,Sn磨细过筛,按照4∶1的比例分别将Pb,PbF2,Sn,SnF2混合并压成片·Pb PbF2为参比电极,Sn SnF2为工作电极,银丝为电极引线组成工作电池·电池的结构为:(+)Ag|Pb,PbF2|LaF3单晶(掺杂)|Sn,SnF2|Ag(-)·用高阻数字电压表准确测定了电池在293 15～353 15K范围内的电动势·以两种PbF2标准生成Gibbs自由能数据和电池电动势为基础,计算得到SnF2标准生成自由能同温度的关系·电池电动势测量的实验误差远远小于PbF2标准生成Gibbs自由能数据中所给定的误差,采用两种不同的PbF2标准生成Gibbs自由能数据所得到的SnF2标准生成自由能的数值,彼此之间的偏差很小·所以上述两种计算结果都是可靠的·

新型T+1断裂蛋白质内含子的构建

首次从天然C端外显子为苏氨酸(Thr)的标准蛋白质内含子(TerSnf2)构建出两类T+1型断裂蛋白质内含子:Snf-S0和Snf-S1,通过蛋白印迹法测定Snf-S0和Snf-S1介导的蛋白质反式剪接效率分别达到53.5%和33.3%;当这两类断裂蛋白质内含子C端外显子分别为半胱氨酸(Cys)和丝氨酸(Ser)时均具有剪接活性.所获的两类具有剪接活性的T+1型断裂蛋白质内含子具备一定的插入位点通用性,这一特点为蛋白质反式剪接技术在蛋白质工程领域广泛应用提供了新的契机.

退火温度对SnF_2掺杂SnO_2薄膜性能的影响

利用电子束蒸镀技术在石英玻璃上沉积SnF_2掺杂SnO_2(FTO)薄膜。研究了不同退火温度对FTO薄膜结构和光电性能的影响。研究结果表明:升高退火温度可促进FTO薄膜中晶粒逐渐变大,结晶度变好,同时薄膜在可见光范围内的透射率随着退火温度升高逐渐增加,吸收边发生蓝移,禁带宽度显著变宽,这是由于载流子浓度增加导致的Moss-Burstein效应。升高温度时,薄膜电学性能随着退火温度升高有了很大改善,700℃退火处理后得到电阻率低至2.74×10^(-3)Ω·cm、载流子浓度为2.09×10^(20) cm^(-3)、迁移率为9.93cm^2·V^(-1)·s^(-1)的FTO薄膜。

Na_2SnF_6水解反应的高温高压实验方法研究

用四种不同类型高压釜研究Na_2SnF_6在200—647℃、1 kbar条件下的水解特征。实验表明,淬火速率影响实验结果的精度。快速淬火高压釜及金袋摇摆釜是研究这类化学平衡反应的理想设备,采用水解法可获得水解常数及热焓。

CO_2激光联合氟化亚锡凝胶治疗牙颈部敏感症的疗效分析

目的:评价CO2激光和氟化亚锡凝胶联合应用治疗牙颈部敏感症的临床效果。方法:选取85例(182颗)患者分为3组。第1组用氟化亚锡凝胶涂擦牙齿敏感处,再用CO2激光进行照射治疗;第2组单独使用CO2激光进行照射治疗;第3组单独使用氟化亚锡凝胶进行脱敏治疗。根据患者主观感受评价治疗前后牙面的敏感度,观察治疗后即刻、1个月、3个月的疗效。结果:第1组即刻治愈率为100%,1个月治愈率为95%,3个月治愈率为90.3%,3组疗效比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:氟化亚锡凝胶联合CO2激光治疗组的近期临床疗效肯定,对牙周组织无损害,方法简单易操作,具有临床推广价值。

染色质重构因子CHD蛋白家族的研究进展

染色质重构是DNA修复、基因表达调控过程中的一个重要环节。染色质重构使染色质组织结构发生一系列重要的变化,如染色质去凝集,核小体变成开放式的疏松结构,使转录因子等更易接近并结合核小体DNA,从而调控基因转录等。CHD蛋白是目前已知的染色质重构复合物之一。目前已鉴定了6个人类CHD蛋白成员,主要有3种功能结构域:N端的两个染色质调节域,位于中部的类SWI2／SNF2 ATP酶／解旋酶域,以及C端的DNA结合域。CHD基因突变或表达异常与人类某些疾病有关。

毒害艾美耳球虫蔗糖非酵解解旋酶2基因片段的克隆与原核表达

为了研究毒害艾美耳球虫蔗糖非酵解解旋酶2(SNF2)基因的功能,以提取的毒害艾美耳球虫子孢子总RNA为模板,应用RT-PCR技术扩增SNF2基因片段,克隆至pGEM-T-Easy载体,测序后构建pET30a-EnSNF2表达载体,转化大肠杆菌BL21,重组菌经测序鉴定后诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定。结果显示:克隆的片段长822 bp,编码274个氨基酸;重组蛋白大小为36 ku左右,以包涵体形式为多,能被组氨酸(HIS)单抗特异性识别,表明该基因片段获得成功表达。研究结果为制备针对毒害艾美耳球虫SNF2的多抗和进一步研究该基因的功能奠定了基础。

乳酸锌和氟化亚锡对铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和变异链球菌生物被膜的抑制作用

乳酸锌(Zn lactate·3H_2O)和氟化亚锡(SnF_2)常作为牙膏中的活性物质添加剂用来预防龋齿及口腔生物被膜的形成。文中评估了Zn lactate·3H_2O和SnF_2对铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和变异链球菌生物被膜的作用。对铜绿假单胞菌PAO1生物被膜的抑制实验证实乳酸锌和氟化亚锡都具有抑制其生物被膜的功能,联用效果尤佳。乳酸锌通过干扰胞外多糖基质网的形成起作用,而氟化亚锡则可以明显降低生物被膜的生物量。更为重要的是,工作浓度的两种化合物联用几乎可以完全抑制3种实验菌株生物被膜的形成。