蛇床子素调控LncRNA SNHG5对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的 探讨蛇床子素对高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡、炎症反应的影响及其对长链非编码RNA(LncRNA)SNHG5的调控作用。方法 采用高糖诱导的肾小管上皮细胞HK-2建立细胞损伤模型,用不同浓度的蛇床子素处理HK-2细胞;pcDNA、pcDNA-SNHG5转染HK-2细胞后加入30 mmol/L葡萄糖处理细胞;si-NC、si-SNHG5分别转染HK-2细胞后加入100 nmol/L蛇床子素与30 mmol/L葡萄糖的处理细胞;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SNHG5的表达量;采用CCK-8法、流式细胞术分别检测细胞活力、凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6的水平。结果 蛇床子素处理高糖诱导的HK-2细胞后可明显提高SNHG5的表达水平,明显增强细胞活力,而明显降低凋亡率、TNF-α、IL-6的水平(P<0.05);高糖诱导的HK-2细胞中转染pcDNA-SNHG5后细胞活力明显升高,而凋亡率、TNF-α、IL-6水平明显降低(P<0.05);转染si-SNHG5与蛇床子素联合处理高糖诱导的HK-2细胞后细胞活力明显降低,而凋亡率、TNF-α、IL-6水平明显升高(P<0.05)。结论 蛇床子素可通过促进SNHG5的表达增强细胞增殖能力而抑制细胞凋亡及炎症反应从而减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤。

反复不明原因自然流产孕妇外周血单核细胞中lncRNASNHG5、KLF4表达及临床意义

目的:探讨反复不明原因自然流产(URSA)孕妇外周血单核细胞中长链非编码RNA(lncRNA)SNHG5、KLF4表达水平及临床意义。方法:选取2018年4月-2019年12月本院收治的URSA孕妇40例为流产组,正常妊娠要求人工流产孕妇40例为早孕组,健康非孕妇女40例为非孕组。测定外周血单核细胞中lncRNA SNHG5、KLF4表达水平,血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素4(IL-4)、IL-12水平。采用多因素logistic回归模型分析URSA发生相关因素。结果:非孕组、早孕组、流产组外周血单核细胞中lncRNA SNHG5 mRNA、KLF4 mRNA和蛋白表达,血清TNF-α、IL-4、IL-12水平均依次升高(均P<0.05)。外周血单核细胞中lncRNA SNHG5 mRNA、KLF4 mRNA和蛋白表达与血清TNF-α、IL-4、IL-12均呈正相关(均P<0.05)。异常高水平lncRNA SNHG5 mRNA、KLF4 mRNA和蛋白均为URSA发生的相关因素(P<0.05)。结论:URSA孕妇外周血单核细胞中lncRNA SNHG5、KLF4表达水平异常升高,且是URSA发生的影响因素。

川崎病患儿外周血LncRNA SNHG5 miR-132的差异表达及临床意义

目的研究川崎病(KD)患儿外周血长链非编码RNA(LncRNA)SNHG5、微小RNA(miR)-132的差异表达及临床意义。方法选择2016年1月至2020年12月在苏州市中西医结合医院儿科确诊的62例KD患儿作为KD组,另选取同期进行健康体检的80例健康儿童作为对照组。采用荧光定量聚合酶链式反应检测两组受试者外周血LncRNA LINC00999、miR-6780、LncRNA PSORS1C3、miR-216a、LncRNA SNHG5、miR-132、miR-92的表达水平,采用超声心动图评估KD患儿的冠状动脉病变(CAL)情况并分为CAL组和无CAL(NCAL)组;采用Pearson检验分析LncRNA SNHG5与miR-132的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析lncRNA SNHG5及miR-132对KD及KD合并CAL的诊断价值。结果KD组外周血中LncRNA SNHG5的表达水平高于对照组,miR-132的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA LINC00999、miR-6780、LncRNA PSORS1C3、miR-216a、miR-92表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);KD组外周血中LncRNA SNHG5与miR-132的表达水平呈负相关(r=-0.527,P<0.001);KD组中CAL组患儿外周血中LncRNA SNHG5的表达水平高于NCAL组,miR-132的表达水平低于NCAL组,差异有统计学意义(P<0.05)。经ROC曲线分析,LncRNA SNHG5及miR-132的表达水平对KD(截断值分别为1.205、0.871,灵敏度分别为86.25%、75.00%,特异度分别为88.71%、85.48%)及KD合并CAL(截断值分别为1.138、0.643,灵敏度分别为63.46%、67.31%,特异度分别为80.00%、80.00%)均具有诊断价值。结论KD患儿外周血中LncRNA SNHG5表达增加、miR-132表达降低,两者可作为诊断KD及KD合并CAL的标志物。

血清lncRNA SNHG5与老年结直肠癌患者临床病理的关系及其诊断价值

目的分析血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因(lncRNA SNHG)5与老年结直肠癌患者临床病理的关系及其诊断价值。方法结直肠癌患者74例作为结直肠癌组,另选取同时期30例结直肠息肉患者作为息肉对照组,30例同时期健康志愿者作为健康对照组。采用实时荧光定量PCR检测血清lncRNA SNHG5的相对表达量,采用全自动电化学发光免疫分析仪检测血清癌胚抗原(CEA)及糖类抗原(CA)199的水平。结果结直肠癌组的血清lncRNA SNHG5、CEA、CA199水平明显高于息肉对照组和健康对照组(P<0.05)。经分析,结直肠癌患者血清lncRNA SNHG5与性别、年龄均不相关(P>0.05),与肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移及分化程度有关(P<0.05)。经Pearson线性相关分析显示,结直肠癌患者血清lncRNA SNHG5与CEA、CA199均呈正相关(P<0.05)。经接收者工作特征曲线(ROC)分析显示,血清lncRNA SNHG5、CEA、CA199诊断结直肠癌的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.784、0.763、0.746,而三指标联合检测可以在一定程度上提高诊断价值,AUC为0.876。结论老年结直肠癌患者的血清lncRNA SNHG5表达异常升高,且其表达水平与不良临床病理特征有关,血清lncRNA SNHG5与CEA、CA199联合检测对结直肠癌有较高的诊断价值。

长链非编码RNA SNHG5对肝癌上皮间质转化及肿瘤干细胞增殖的影响

目的探讨长链非编码RNA SNHG5在肝癌组织中的表达及对肝癌上皮间质转化(EMT)和肿瘤干细胞增殖的影响。方法收集48例患者的肝癌组织与对应癌旁组织,qRT-PCR检测SNHG5在肝癌组织及对应癌旁组织中的表达,分析其与临床病理特征之间的关系;构建SNHG5敲除慢病毒,转染肝癌细胞系,qRT-PCR验证敲除效率;Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力的变化,干细胞瘤球形成实验检测肝癌干细胞的形成与增殖能力;qRT-PCR和Western blot检测EMT与干细胞调控相关基因 mRNA和蛋白水平的表达。结果48例肝癌患者中,SNHG5在肝癌组织中的表达较对应癌旁组织明显升高,其高表达与肝癌的肿瘤大小、HBV感染、病理分化类型和临床分期有关(P<0.05)。在细胞水平,敲除SNHG5能抑制肝癌细胞HepG2和Huh7的侵袭迁移能力和干细胞球数量及直径;同时SNHG5敲除组E-cadherin表达明显增高,而N-cadherin和干细胞调控基因OCT4、SOX2表达均明显降低(P<0.05)。结论SNHG5在肝癌中高表达,敲除SNHG5抑制肝癌细胞的侵袭迁移与肿瘤干细胞的增殖,其机制可能与敲除SNHG5促进肝癌细胞系EMT的逆转、降低肝癌干细胞特性获得有关。

LncRNA SNHG5靶向miR-421调控胶质母细胞瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的机制

目的探讨SNHG5靶向miR-421调控多形性胶质母细胞瘤(GBM)发生与发展的分子机制。方法收集31例GBM肿瘤与32例正常脑组织标本,实时荧光定量PCR法检测标本中SNHG5与miR-421的表达水平;通过慢病毒或质粒转染U87细胞上调或下调SNHG5的表达水平,采用实时荧光定量PCR检测转染后U87细胞中miR-421的表达水平,分析GBM中miR-421与SNHG5表达的相关性。双荧光素报告基因实验验证SNHG5对miR-421的靶向关系。利用SNHG5与miR-421两者均低表达的质粒转染U87细胞进行拯救实验,通过CCK-8、Transwell、流式细胞学分析及裸鼠体内实验验证SNHG5通过靶向miR-421调控GBM细胞增殖、侵袭及凋亡。结果上调U87细胞中SNHG5表达后miR-421的表达水平显著下降,下调U87细胞中SNHG5表达后miR-421表达水平明显升高(P<0.05),两者表达呈显著负相关。双荧光素酶报告基因实验结果提示SNHG5可靶向结合miR-421。拯救实验结果表明,相比si-SNHG5+miR-421-inhibitor组,si-SNHG5+control-inhibitor组的U87细胞增殖、侵袭及抗凋亡能力均显著下降,且BAX与p21蛋白表达水平升高,CyclinD1与Bcl-2蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论SNHG5可通过靶向miR-421并影响CyclinD1、p21、BAX、Bcl-2蛋白表达进而促进GBM细胞的增殖、侵袭及抗凋亡行为。miR-421在GBM中呈低表达与SNHG5表达水平升高有关。

lncRNA SNHG5在缺氧诱导肝细胞癌细胞侵袭及迁移中的作用

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)SNHG5在缺氧诱导肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞侵袭及迁移中的作用。方法:收集2017年1月至2018年6月西安交通大学第一附属医院手术切除的20例HCC患者的癌与癌旁组织标本,以及人HCC细胞系HepG2、MHCC-97L、MHCC-97H、Huh7和永生化人肝细胞LO2。利用生物信息学方法分析缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)与SNHG5的结合位点,将pCMV-HIF-1α、shRNA-SNHG5(sh-SNHG5)质粒转染进HCC细胞,用qPCR法检测HCC组织和缺氧条件下HCC细胞中SNHG5的表达水平,用Western botting检测HCC细胞中HIF-1α蛋白的表达水平,用Transwell小室法检测沉默SNHG5后常氧和缺氧条件下对HCC细胞侵袭及迁移能力的影响。结果:分别与癌旁组织和LO2细胞比较,HCC组织和各细胞系中SNHG5表达水平显著上调(均P<0.01)。缺氧可上调HCC细胞中SNHG5的表达水平,其机制可能与缺氧活化HIF-1α与SNHG5启动子结合从而促进其转录有关;缺氧能够增强HepG2和MHCC-97L细胞的侵袭及迁移能力(均P<0.01),沉默SNHG5表达能够显著抑制缺氧条件下HepG2和MHCC-97L细胞的侵袭及迁移能力(均P<0.01)。结论:SNHG5在HCC组织及细胞系中高表达,并在缺氧诱导的HCC细胞侵袭及迁移中发挥重要作用。

SNHG5调控的ZC3HAV1在胶质母细胞瘤的表达与作用

目的 探索ZC3HAV1在多形性胶质母细胞瘤(GBM)中的表达及作用。方法 收集35例于2018年1月-2020年10月于河北医科大学第二医院手术治疗的胶质母细胞瘤患者肿瘤标本(肿瘤组)及同期重度颅脑创伤患者正常脑组织标本(对照组)20例,利用Western blot与PCR方法检测两组ZC3HAV1的表达水平;通过慢病毒转染U87细胞下调ZC3HAV1的表达水平,再利用CCK、Transwell与流式测凋亡实验验证ZC3HAV1低表达对GBM细胞增殖、侵袭与凋亡的作用;利用PCR检测35例肿瘤组织中SNHG5与ZC3HAV1的表达水平并分析两者表达的相关性;通过pcDNA及siRNA转染U87细胞上调或下调中SNHG5的表达水平,再利用Western blot检测ZC3HAV1的表达水平的变化来探索在GBM中SNHG5对ZC3HAV1表达的影响。结果 肿瘤组中ZC3HAV1的表达水平显著高于对照组(P<0.05);下调U87细胞中ZC3HAV1的表达水平可有效抑制U87细胞的增殖、侵袭并促进其细胞凋亡。GBM标本组织中SNHG5与ZC3HAV1的表达水平呈正相关,抬高U87细胞中SNHG5表达后3HAV1ZC的表达水平显著上升,下调U87细胞中SNHG5表达后ZC3HAV1表达水平明显下降(P<0.05)。结论 ZC3HAV1在多形性胶质母细胞瘤呈显著高表达并促进肿瘤的发生与进展,在胶质母细胞瘤中SNHG5可正向调控ZC3HAV1的表达。

胃癌细胞中长链非编码RNA SNHG5与miR-26b间的相互作用

目的探讨胃癌细胞中长链非编码RNA SNHG5与miR-26b的相互作用。方法实时定量PCR检测SNHG5在GES-1胃黏膜正常上皮细胞与胃癌细胞中的表达差异,通过瞬时转染SNHG5过表达质粒,Taq Man定量PCR检测MGC-803细胞中miR-26b及pri-miR-26b的表达变化,同时瞬时转染miR-26b mimics检测其对SNHG5表达的影响。结果 SNHG5在胃癌细胞中的表达明显高于胃黏膜正常上皮细胞GES-1(P<0.05),SNHG5能够抑制miR-26b与pri-miR-26b的表达(P<0.01),但miR-26b不能对SNHG5的表达产生影响。结论 SNHG5可抑制miR-26b的表达,具体作用机制还需要进一步分析。

长链非编码RNA SNHG5在肝癌中表达及其对HepG2细胞增殖、凋亡的影响

目的检测长链非编码RNA SNHG5在肝癌组织中的表达,并探讨其对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡等生物学行为的调控作用与相关机制。方法采用荧光定量PCR(QPCR)检测30例肝癌组织和对应癌旁组织中SNHG5的表达水平;采用小干扰RNA(siRNA)技术敲低肝癌HepG2细胞SNHG5的表达量,采用CCK-8法、流式细胞术、QPCR以及Western blotting检测HepG2细胞的增殖、凋亡情况以及凋亡通路相关标志物表达水平的变化。结果肝癌组织中SNHG5的表达水平较其配对癌旁组织明显上调(P<0.05)。敲低SNHG5表达后HepG2细胞的增殖、抗凋亡能力均受到抑制,细胞凋亡蛋白cleaved caspase-3、BAX表达上调。结论相较于正常组织,肝癌组织中长链非编码SNHG5呈高表达,SNHG5可能通过调节肝癌细胞的增殖、凋亡能力以及抑制凋亡通路激活进程而发挥促癌作用,可能是肝癌治疗的潜在靶点。

LncRNA SNHG5调控miR-23a-3p影响恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的作用机制

目的探讨长链非编码RNA SNHG5(LncRNA SNHG5)对恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人黑色素瘤细胞株A375、G361、M14、WM115与人类皮肤黑色素细胞(NHEM)。实验将A375细胞随机分为NC组、si-con组、si-SNHG5组、si-SNHG5+anti-miR-con组、si-SNHG5+anti-miR-23a-3p组。采用qRT-PCR法检测细胞SNHG5与miR-23a-3p表达。MTT法与Annexin V/PI染色法检测转染后各组A375细胞增殖活性及凋亡率。采用双荧光素酶报告实验证实SNHG5的靶作用位点。Western blotting法检测Bcl-2、Bax及AKT信号通路相关蛋白表达。结果与NHEM相比,不同黑色素瘤细胞中SNHG5表达水平显著上调(P<0.05),而miR-23a-3p表达水平显著下调(P<0.05);沉默SNHG5表达可显著抑制黑色素瘤A375细胞增殖并促进细胞凋亡;双荧光素酶报告实验证实miR-23a-3p是SNHG5的直接靶点;干扰miR-23a-3p可部分逆转沉默SNHG5对A375细胞的抑制作用;沉默SNHG5表达可促进Bax表达,抑制Bcl-2与p-AKT表达,但沉默miR-23a-3p后Bcl-2与p-AKT表达上调,而Bax表达下调。结论沉默SNHG5通过调控miR-23a-3p表达进而抑制黑色素瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡。

甘草甜素对缺氧复氧损伤心肌细胞的保护作用及其lnc-SNHG5表达的影响

目的:研究甘草甜素对心肌缺氧复氧损伤的保护作用及其与小核仁RNA宿主基因5(lnc-SNHG5)表达的相关性。方法:H9C2心肌细胞分为4组,正常对照组(Control)、模型组(Hypoxia Reoxygenation,HR)、转染组(Transfection group,TG)、甘草甜素组(Glycyrrhizin group,GP),其中模型组、转染组、甘草甜素组均构建心肌细胞缺氧复氧模型,转染组预先腺病毒转染沉默lnc-SNHG5表达,甘草甜素组预先给药,浓度为40μmol/L,CCK8检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡,qPCR检测lnc-SNHG5表达。结果:与模型组比较,转染组与甘草甜素组细胞存活率均提高(均P<0.05),细胞凋亡率均下降(均P<0.05);与正常对照组比较,模型组lnc-SNHG5表达显著升高(P<0.05),甘草甜素组相较于模型组,lnc-SNHG5表达显著降低(P<0.05)。结论:甘草甜素可能通过抑制lnc-SNHG5的表达发挥对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。

非小细胞肺癌患者外周血中lncRNA SNHG5的表达及诊断意义

目的探讨血清lncRNA SNHG5在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况及其诊断价值。方法收集我院60例行手术治疗的NSCLC患者和60例健康体检者的血清样本,使用RT-qPCR法检测血清中SNHG5的表达水平。分析血清SNHG5水平与NSCLC患者临床病理参数和传统血清学指标的关系;利用ROC曲线分析SNHG5对NSCLC的早期诊断价值。结果健康体检者、肺良性结节患者和NSCLC患者血清SNHG5表达水平分别为(2.03±0.63)和(1.61±0.57),差异有统计学意义(P=0.002)。血清SNHG5表达与肿瘤大小具有相关性(P=0.036),但与年龄、性别、吸烟史和TNM无相关性(均P>0.05)。与健康体检者比较,Ⅰ期NSCLC患者血清SNHG5表达下降(P <0.001);但Ⅱ期和Ⅲ期的NSCLC患者血清SNHG5表达与健康体检者比较差异无统计学意义(均P> 0.05)。血清SNHG5水平与NSE和CA125无相关性,而与CEA(P=0.028)和CA199(P <0.001)有相关性。ROC曲线结果表明,血清SNHG5早期诊断NSCLC的AUC为0.735(0.647~0.812),敏感性和特异性为68.33%和76.67%。结论 SNHG5在NSCLC患者血清中表达下降,有望成为早期诊断NSCLC的新型分子标志物。

慢阻肺患者外周血单个核细胞lncRNA SNHG5的表达与炎症因子水平相关性研究

目的探讨慢阻肺(COPD)患者外周血单个核细胞lncRNA SNHG5的表达与炎症因子水平相关性.方法选取COPD稳定期患者80例,急性加重期患者80例,健康志愿者80名为对照组.分离外周血单个核细胞,RT-PCR检测lncRNA SNHG5、核苷酸结合寡聚化结构域1(NOD1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)的mRNA表达;Western blot检测NOD1、NLRP3的蛋白表达;酶联免疫吸附法检测血清C反应蛋白、肿瘤坏死因子α、白细胞介素-6(IL-6)表达水平.结果COPD急性加重期组lncRNA SNHG5的表达水平明显低于COPD稳定期组和对照组,COPD稳定期组明显低于对照组(P<0.05).COPD急性加重期组NOD1、NLRP3的mRNA和蛋白表达水平明显高于COPD稳定期组和对照组,COPD稳定期组明显高于对照组(P<0.05).COPD急性加重期组血清C反应蛋白、肿瘤坏死因子α、IL-6水平明显高于COPD稳定期组和对照组,COPD稳定期组明显高于对照组(P<0.05).Pearson相关性分析显示:COPD患者外周血单核细胞中lncRNA SNHG5表达与血清C反应蛋白、肿瘤坏死因子α、IL-6呈负相关关系(r=-0.719、-0.734、-0.760,均P<0.001).COPD患者外周血单核细胞中NOD1、NLRP3表达与血清C反应蛋白、肿瘤坏死因子α、IL-6呈正相关关系(r=0.736、0.750、0.728,均P<0.001;r=0.765、0.792、0.780,均P<0.001).结论慢阻肺患者外周血单核细胞中lncRNA SNHG5、NOD1、NLRP3可能通过调控炎症因子C反应蛋白、肿瘤坏死因子α、IL-6的表达参与COPD病情的发生与进展,其结果可用于临床诊断和预后评估.

长链非编码RNA SNHG5在胰腺癌中的表达及作用研究

目的研究长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因5(lncRNA SNHG5)在胰腺癌组织中的表达水平及其临床意义,并探讨lncRNA SNHG5在胰腺癌中的生物学作用。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测lncRNA SNHG5在42例胰腺癌组织及其邻近的非癌组织中的相对表达量,并分析胰腺癌组织中SNHG5的相对表达量与患者临床病理参数的关系。SNHG5 siRNA转染胰腺癌细胞系PANC-1,分为si-NC组和si-SNHG5组,采用qRT-PCR检测SNHG5 siRNA转染效果。成功沉默SNHG5的表达后,采用CCK8实验检测细胞的增殖能力,Transwell实验检测细胞的转移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blotting检测细胞中β-catenin、cMYC和BCL-2蛋白的表达情况。结果qRT-PCR结果显示lncRNA SNHG5在胰腺癌组织中的相对表达量高于非癌组织(P<0.05),其相对表达量与TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。沉默PANC-1细胞中lncRNA SNHG5的表达后,细胞的增殖和转移能力下降,细胞凋亡增多,细胞中β-catenin、cMYC和BCL-2蛋白的表达减少。结论lncRNA SNHG5在胰腺癌中表达上调,且其表达水平与TNM分期和淋巴结转移有关。lncRNA SNHG5可能是通过调控β-catenin、cMYC和BCL-2蛋白的表达促进胰腺癌的发生发展。

LncRNA SNHG5、miR-26b在NSCLC组织中的表达及意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中核仁小RNA宿主基因5(LncRNA SNHG5)与微小RNA-26b(miR-26b)的表达及意义。方法应用RT-qPCR法检测NSCLC组织及癌旁组织中LncRNA SNHG5与miR-26b的相对表达量,分析LncRNA SNHG5、miR-26b表达与患者临床病理特征的关系。随访3年,采用Kaplan-Meier法分析LncRNA SNHG5、miR-26b表达与NSCLC患者预后的关系。结果NSCLC组织中LncRNA SNHG5与miR-26b相对表达量均低于癌旁组织(P均<0.05)。NSCLC组织中LncRNA SNHG5、miR-26b表达与TNM分期、组织分化程度及淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者年龄、性别、是否吸烟及肿瘤直径无关(P均>0.05)。Kaplan-Meier检验结果显示,LncRNA SNHG5、miR-26b高表达组3年生存率高于其低表达组(P均<0.05)。结论NSCLC组织中LncRNA SNHG5与miR-26b表达低于癌旁组织,检测二者表达有助于NSCLC诊断及预后评估。

心肌细胞特异性Snhg5过表达转基因小鼠的建立和应用

目的 建立心肌细胞特异性过表达Snhg5的转基因小鼠,用于研究Snhg5在心脏稳态维持中发挥的功能。方法 通过构建心肌细胞特异性过表达Snhg5的转基因载体,利用显微注射导入小鼠的受精卵中,经过胚胎移植获得转基因首建者小鼠。利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR,qRT-PCR)检测子代小鼠Snhg5基因整合情况,并检测Snhg5在各个组织中的表达情况,进一步通过形态观察、组织学和分子水平的检测分析转基因小鼠的心脏表型。结果 成功构建心肌细胞特异性过表达Snhg5的转基因载体,利用受精卵显微注射技术获得Snhg5转基因首建者小鼠4只。通过对子代小鼠各组织中Snhg5的表达进行检测,发现Snhg5只在心脏组织中特异性地过表达。进一步的表型分析发现,与对照小鼠相比,转基因小鼠在异丙肾上腺素刺激下更容易发生病理性心脏重塑。结论 成功建立了心肌细胞特异性Snhg5过表达的转基因小鼠,为研究Snhg5在心脏组织中的功能及病理性心脏重塑的发生机制提供了良好的动物模型。

LncRNA SNHG5对高糖缺氧环境下视网膜血管内皮细胞增殖及迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因5(SNHG5)对高糖缺氧环境下培养的人视网膜血管内皮细胞(HRCECs)凋亡和迁移能力的影响。方法将HRCECs分为5组,正常对照组(A组)培养于含5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基中,高糖组(B组)培养于含30 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基中,高糖缺氧组(C组)培养于含体积分数0.01 O2以及30 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基中,高糖缺氧过表达组(D组)将含有SNHG5目的基因的质粒转染进入HRCECs以后,培养于含有体积分数0.01 O2以及30 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基中,高糖缺氧空载组(E组)将含有与D组等量的阴性对照质粒转染进入HRCECs后,与D组进行相同条件培养。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中SNHG5的表达量;采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞法检测各组细胞的凋亡百分比;采用细胞划痕法和Image J图像分析软件检测并计算各组细胞相对迁移面积。结果与A组比较,B组HRCECs中SNHG5基因的表达量降低(P<0.05),凋亡百分比增高(P<0.05),第36小时细胞的相对迁移面积增大(P<0.05);与B组比较,C组HRCECs中SNHG5的表达量降低(P<0.05),凋亡百分比增高(P<0.05),第36小时细胞相对迁移面积增高(P<0.05);与C组比较,D组HRCECs中SNHG5的表达量增高(P<0.05),凋亡百分比降低(P<0.05),第36小时细胞相对迁移面积降低(P<0.05);与E组比较,D组HRCECs中SNHG5的表达量增高(P<0.05),凋亡百分比降低(P<0.05),第36小时细胞相对迁移面积降低(P<0.05),且时间、组别及其交互作用均对HRCECs相对迁移面积有明显影响(F组别=252.93,F时间=791.36,F时间*组别=169.89,P<0.05)。结论高糖缺氧环境下培养可下调HRCECs中SNHG5的表达,过表达的SNHG5对HRCECs在高糖缺氧环境下引起的凋亡和迁移起明显的抑制作用。

鳖甲煎丸调控lncRNA SNHG5/miRNA-26a-5p/GSK-3β信号轴干预原发性肝癌的作用机制

目的:基于长链非编码RNA SNHG5(lncRNA SNHG5)/微小RNA-26a-5p(miRNA-26a-5p)/糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)信号轴探究鳖甲煎丸干预原发性肝癌的作用机制。方法:双荧光素酶报告实验验证HepG2细胞内lncRNA SNHG5与miRNA-26a-5p,miRNA-26a-5p与GSK-3β的靶向互作关系。建立人肝癌HepG2裸鼠移植瘤模型,随机分为模型组,鳖甲煎丸低、中、高剂量组(0.5、1.0、2.0 g·kg^(-1)),索拉非尼组(100 mg·kg^(-1)),每组10只。分别予以生理盐水或药物灌胃28 d,并于不同时间测量裸鼠瘤体积。苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织形态学改变;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织中lncRNA SNHG5、miRNA-26a-5p、GSK-3β及β-连环蛋白(β-catenin)mRNA的核酸水平差异;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织中GSK-3β、β-catenin的蛋白表达水平。结果:与SNHG5-野生型(WT)+miRNA内参(NC)组比较,SNHG5-WT+miRNA-26a-5p mimic(模拟物)组的相对荧光素酶活性明显降低(P<0.05)。与GSK-3β-WT+miRNA NC组比较,GSK-3β-WT+miRNA-26a-5p mimic组的相对荧光素酶活性明显降低(P<0.05)。与模型组比较,鳖甲煎丸低、中、高剂量组裸鼠肿瘤体积明显减小(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,鳖甲煎丸各剂量组裸鼠瘤体组织内细胞排列明显稀疏,部分细胞坏死,且呈浓度依赖性变化。与模型组比较,鳖甲煎丸各剂量组lncRNA SNHG5、GSK-3β及β-catenin的表达均明显下降(P<0.05,P<0.01),miRNA-26a-5p的表达均明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,鳖甲煎丸各剂量组的关键蛋白GSK-3β及β-catenin表达均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:鳖甲煎丸可能通过lncRNA SNHG5/miRNA-26a-5p/GSK-3β信号轴,影响肝癌细胞坏死从而发挥抗肿瘤作用,该研究为鳖甲煎丸临床应用提供更多的理论依据。

过表达SNHG5对高糖诱导HK-2细胞凋亡及氧化应激的影响

该文探讨小核仁RNA宿主基因5(small nucleolar RNA host gene 5,SNHG5)对高糖(high glucose,HG)诱导的HK-2凋亡、氧化应激的影响及分子机制。采用30 mmol/L葡萄糖处理HK-2细胞48 h,将pcDNA、pcDNA-SNHG5、anti-miR-阴性对照(negative control,NC)、微小RNA-196a(microRNA-196a,miRNA/miR-196a) inhibitor、pcDNA-SNHG5分别与miR-NC、miR-196a mimic共转染至HK-2细胞中,用30 mmol/L葡萄糖处理48 h。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测SNHG5和miR-196a的表达水平;细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot法检测蛋白表达水平;丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)试剂盒分别检测MDA含量及SOD、GSH-Px活性;双荧光素酶报告实验检测SNHG5和miR-196a的靶向关系。该研究得出,高糖诱导的HK-2细胞活性以及细胞中的SNHG5表达水平、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)表达水平均降低,miR-196a表达水平、凋亡率、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Cleaved-caspase3)表达水平、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)表达水平、MDA含量均升高,SOD、GSH-Px活性降低(P<0.05)。过表达SNHG5或抑制miR-196a表达后,高糖诱导的HK-2的细胞活性显著上升且细胞死亡率降低,Bcl-2表达水平显著上升,Bax、Cleaved-caspase3与MDA含量明显降低,SOD、GSH-Px活性升高(P<0.05)。SNHG5靶向调控miR-196a,miR-196a过表达可逆转SNHG5对高糖诱导的HK-2细胞活性、凋亡和氧化应激的影响。总之,过表达SNHG5可能通过下调miR-196a抑制高糖诱导的HK-2凋亡及氧化应激。