MG132对高糖条件下肾小管上皮细胞SnoN蛋白表达及纤维化效应的影响

目的:观察蛋白酶体抑制剂MG132对高糖培养条件下肾小管上皮细胞核转录共抑制因子Sno N蛋白表达的影响,探讨MG132减轻高糖状态下肾小管纤维化病变的作用及可能机制。方法:将体外培养的NRK-52E细胞分为正常组(NG)、高糖组(HG)和不同浓度MG132预处理后高糖培养组(HG+MG132),采用免疫荧光双染的方法观察E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肾小管上皮细胞中的表达和分布,用Western blotting方法检测Sno N、Samd泛素化调节因子2(Smurf2)、Arkadia、E-cadherin、α-SMA和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)等目标蛋白的相对表达量。结果:与NG组相比,HG组肾小管上皮细胞E-cadherin和Sno N表达减少(P<0.05),而α-SMA、Col-Ⅰ、Smurf2和Arkadia表达增多(P<0.05);与HG组相比,不同浓度MG132预处理肾小管上皮细胞后高糖培养,可见肾小管上皮细胞中Sno N和E-cadherin蛋白表达显著上调(P<0.05),而α-SMA和Col-Ⅰ蛋白的表达显著下调(P<0.05),并且这种效应呈量效依赖性,但MG132预处理对Smurf2和Arkadia的表达无影响。结论:MG132可对抗高糖介导的肾小管上皮细胞的纤维化效应,其机制可能是通过减少Sno N蛋白的泛素化降解作用实现的。

糖尿病大鼠肾组织中miR-21和SnoN表达的变化

目的探讨糖尿病(DM)大鼠肾组织中微小核糖核酸-21(miR-21)和核转录共抑制因子(SnoN)在肾纤维化过程中的表达变化及其可能机制。方法用链脲佐菌素复制DM大鼠模型,并设对照组(NC),每组n=8。10周后处死大鼠,观察肾组织形态变化;免疫组织化学染色、Western blot及RT-q PCR检测miR-21、SnoN、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、p-Smad3(Ser423/425)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)和胶原蛋白Ⅲ(collagenⅢ)的表达。结果与对照组相比,DM组肾组织p-Smad3(Ser423/425)、TGF-β1和α-SMA蛋白表达增加(P<0.05),SnoN、E-cadherin蛋白表达减少(P<0.05),但SnoN mRNA和miR-21表达明显上调(P<0.05),并伴有collagenⅠ、collagenⅢ和FN在间质沉积增多。结论 TGF-β1可能上调miR-21表达,抑制SnoN翻译水平的表达,促进DN的纤维化病变。

SnoN蛋白及TGF-β在早期糖尿病大鼠视网膜组织中表达及意义

目的观察SnoN蛋白及TGF-β在糖尿病大鼠视网膜上的表达,探讨SnoN蛋白及TGF-β与糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的关系,为DR发病机制的研究提供新的理论依据。方法选择健康雄性Wistar大鼠20只,随机分为正常对照组与糖尿病(DM)组,每组各10只。采用一次性腹腔注射50 mg·kg-1链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)的方法建立DM大鼠模型,正常对照组一次性给予等体积柠檬酸三钠-柠檬酸缓冲液腹腔注射。分别于造模后8周和12周处死各组大鼠,均完整摘除各组大鼠的左眼球制成眼杯,采用免疫组织化学方法检测各组大鼠视网膜上SnoN蛋白及TGF-β蛋白的表达。结果造模后8周和12周,DM组大鼠血糖值分别为(22.64±3.57)mmol·L-1、(24.08±1.60)mmol·L-1,均明显高于正常对照组的(4.64±0.91)mmol·L-1、(4.50±0.66)mmol·L-1,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。正常对照组大鼠视网膜上TGF-β无表达或弱表达,在造模后8周和12周时,DM组大鼠视网膜上TGF-β的OD值分别为0.121 0±0.005 6、0.155 0±0.007 0,均较正常对照组(0.022 0±0.007 9、0.025 0±0.007 0)明显增加(均为P<0.01)。正常对照组大鼠视网膜上SnoN蛋白高表达,在造模后8周和12周时,DM组大鼠视网膜上SnoN的OD值分别为0.412 0±0.011 3、0.214 0±0.006 9,均较正常对照组(0.945 0±0.007 0、0.944 0±0.005 1)明显降低(均为P<0.01),且随着病程的延长,降低更明显。结论 SnoN蛋白对TGF-β信号通路起负反馈抑制作用,能降低TGF-β信号的强度和持续时间,因此对DR的防治具有重要意义。

SnoN蛋白在糖尿病大鼠肾组织中的表达及其意义

目的:动态观察核转录共抑制因子SnoN蛋白在糖尿病大鼠肾组织中的表达变化,探讨其在糖尿病肾病(DN)发病机制中的作用。方法:SD大鼠随机分为3组,分别为糖尿病2周(DM2)、4周(DM4)和8周(DM8)组,每组均设相应的正常对照,链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病大鼠模型;免疫组织化学法检测肾组织中SnoN、TGF-β1、Smad2/3、APC的表达;Western印迹法检测肾皮质SnoN蛋白的水平;生化方法测定血糖、血肌酐及24h尿蛋白量;光镜检查肾组织的形态改变。结果:Western印迹和免疫组化检测发现DM2大鼠肾组织中SnoN的表达与正常组相比差异无显著,DM4组明显减少(P<0.01),至8周时减少为正常对照组的42%。DM2组,大鼠肾小管上皮细胞中TGF-β1、Smad2/3、APC较正常组显著增多,并随病程进展而增加(P<0.01);DM4和DM8组,SnoN蛋白表达的减少与TGF-β1、Smad2/3、APC表达增多呈显著负相关(P<0.01)。结论:糖尿病大鼠肾脏TGF-β1表达增多,可能通过APC依赖的泛素化作用使SnoN蛋白降解,从而在DN的发病机制中起重要作用。

胃癌组织中SnoN、Egr3和SFRP1的表达情况及临床意义

目的探讨核转录共抑制因子Sno N、早期生长反应基因3(Egr3)和分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)在胃癌组织中的表达水平,分析三者与胃癌临床病理特征的关系。方法收集75例胃癌组织及62例癌旁组织标本,采用免疫组化Elivision法检测以上组织石蜡切片中Sno N、Egr3及SFRP1的表达情况,分析3种蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系。结果胃癌组织中Sno N、SFRP1的高表达率为45.3%(34/75)和38.7%(29/75),均低于癌旁组织的62.9%(39/62)和58.1%(36/62);而Egr3的高表达率为69.3%(52/75),高于癌旁组织的38.7%(24/62)。以上差异均有统计学意义(P<0.05)。Sno N、Egr3和SFRP1的表达均与临床分期、分化程度有关,Sno N表达还与年龄、浸润深度及淋巴结转移有关,SFRP1表达与年龄、肿瘤大小及浸润深度有关。Sno N、SFRP1与Egr3的表达均呈负相关,相关系数依次为r=-0.324、-0.244(P均<0.05);Sno N与SFRP1的表达呈正相关(r=0.487,P<0.001)。结论胃癌组织中Sno N、SFRP1呈低表达,而Egr3呈高表达,三者表达均与临床分期、分化程度有关,提示三者在胃癌发生、发展中有重要意义,可用于辅助胃癌的诊断和病情评估。

SnoN蛋白在全脑缺血大鼠海马组织中的表达及意义

目的通过观察全脑缺血大鼠海马组织中转录共轭因子SnoN表达水平的变化,探讨其在脑缺血中的作用。方法 30只雄性SD大鼠随机分成手术组和假手术组,假手术组、手术1、3 d组各10只。手术组采用Pulsinelli四血管结扎法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,假手术组仅暴露第一椎间孔及颈动脉。免疫组织化学法检测海马组织神经元及SnoN的表达;Western blot检测SnoN及TGF-β蛋白水平的变化。结果全脑缺血再灌注后1、3 d海马CA1区部分神经元缺失,与假手术组相比,手术组术后1、3 d海马区SnoN、TGF-β表达量明显升高(P<0.05)。结论大鼠全脑缺血后海马组织SnoN表达增高,可能通过激活TGF-β通路参与神经元缺血性凋亡过程。

SnoN的基本特征、生物学功能及其在肝纤维化中的作用

SnoN是一种核转录共抑制因子,在细胞核和细胞浆中均能阻断TGFβ1/Smad信号转导,是该信号通路的重要负调控因子之一。SnoN在肝纤维化发生发展中的作用已有研究报道,并日益引起人们的关注。因此,本文回顾了有关SnoN方面的研究进展,对其基本特征、生物学功能及其在肝纤维化中的作用作一综述。

补肾泻肝汤对大鼠前列腺组织SnoN蛋白表达的影响

目的:观察补肾泻肝汤对实验性大鼠前列腺增生组织SnoN蛋白表达的影响及探讨SnoN蛋白表达在前列腺增生中的作用。方法:去势加丙酸睾酮注射法复制大鼠前列腺增生模型,免疫组织化学法检测大鼠前列腺增生组织及正常前列腺组织SnoN蛋白的表达。结果:模型组大鼠前列腺组织SnoN表达水平升高,与正常前列腺组织及补肾泻肝汤组阳性表达率比较,差别有显著意义(P<0.05)。结论:SnoN参与了前列腺增生的病理过程,补肾泻肝汤对前列腺增生组织SnoN表达的改变有调节作用。

基于网络药理学和实验验证探讨降糖通脉方治疗糖尿病肺损害的作用机制

目的通过网络药理学挖掘降糖通脉方治疗糖尿病肺损害的可能活性成分及靶点,并在动物实验中验证降糖通脉方治疗糖尿病肺损害的作用和机制。方法应用TCMSP数据库及BATMAN-TCM数据库检索降糖通脉方中的活性成分及靶基因,通过GeneCards数据库筛选得到肺损害的疾病靶点,通过GO生物功能分析、KEGG通路富集和Cytoscape 3.7.2软件构建药物-疾病-活性成分-信号通路互作网络图。观察降糖通脉方对糖尿病肺损害大鼠模型肺组织TGF-β1/Smads信号通路上的相关蛋白表达的影响,验证降糖通脉方治疗糖尿病肺损害的作用和机制。结果降糖通脉方中共得到36个活性分子,作用靶点有109个,其中与糖尿病肺损害相关的作用靶点有95个,核心靶基因Smad2、Smad3、Smad7、Skil相关蛋白通过TGF-β1信号通路、AGE-RAGE信号通路以及TNF信号通路等干预糖尿病肺损害。动物实验表明,与模型组相比,降糖通脉方低、中、高剂量均能改善糖尿病肺损害,减少炎症细胞浸润,降低Smad2/3表达(P<0.01),上调Smad7水平(P<0.05),增加SnoN蛋白表达(P<0.05),减少TGF-β1表达(P<0.05)。结论降糖通脉方具有“多成分-多靶点”的网络作用效应,其发挥作用的机制可能与调控SnoN蛋白干预TGF-β1/Smads信号通路相关。