印迹基因Snrpn在人类卵母细胞及植入前胚胎mRNA表达

目的了解印迹基因Snrpn在人类卵母细胞和植入前胚胎的表达,以分析Snrpn基因表达对人类卵母细胞和早期胚胎发育的影响。方法采用单细胞巢式逆转录多聚酶链式反应(Single Cell Nested RT-PCR)方法,检测人类卵子和植入前各个阶段胚胎的印迹基因Snrpn mRNA表达情况。结果Snrpn在人类卵母细胞GV、MI、MII和植入前胚胎2、4、6、8细胞期都有表达,单卵母细胞扩增成功率为87.5%,单个胚胎为75.8%,平均扩增成功率为79.1%。单个卵母细胞和单个卵裂球扩增成功率无显著性差异(P>0.05),但单卵母细胞较单个卵裂球高。结论建立了比较稳定、可靠的单细胞巢式RT-PCR技术检测基因表达。印迹基因Snrpn在人类卵细胞和植入前胚胎的表达对卵子生长和胚胎发育有着重要意义。

人类卵母细胞及植入前胚胎中母性效应基因Mater mRNA的表达

目的:了解母性效应基因Mater表达与人类卵母细胞及早期胚胎发育不同阶段的关系。方法:用巢式逆转录多聚酶链式反应(single cell nested RT-PCR)方法检测人类卵子和植入前各阶段胚胎的母性效应基因Mater mRNA的表达。结果:Mater在人类卵母细胞GV、MⅠ、MⅡ都有表达,植入前胚胎1、2、4、6细胞期表达量逐渐下降,到8细胞期、囊胚、孵出囊胚期均未检测到Mater mRNA表达。结论:人类卵母细胞和植入前胚胎Mater基因的表达量随发育时间的改变而变化,对卵子生长和胚胎发育有重要意义,与母性效应基因在小鼠等其他哺乳动物中的表达模式相似。

不同印迹基因在人类不同阶段卵母细胞及植入前胚胎的表达及意义

目的:研究印迹基因lgf2r、H19、RB1、IPW在人类卵母细胞及植入前胚胎的表达,完善印迹基因在人类种植前胚胎的表达图谱。方法:应用RT-PCR技术检测目前尚未有明确报道在人类卵子及胚胎有正常表达的4条印迹基因在卵子和胚胎中的表达情况。结果:IPW在单个不同阶段卵母细胞和各期种植前胚胎均表达,其余在卵子和各期种植前胚胎均无明显表达。而4条目的基因在阳性对照人子宫内膜组织中均正常表达。结论:IPW在卵子和各期种植前胚胎均表达,其余在在卵子和各期种植前胚胎均无明显表达。完善印迹基因在人类种植前胚胎的表达图谱,尤其单细胞的研究,更有助于开展种植前遗传学诊断,为探讨印迹基因与辅助生殖、先天性印迹疾病以及肿瘤的关系提供理论依据。

黄体生成素在人类卵母细胞和种植前胚胎的表达

【目的】研究人类卵母细胞和种植前胚胎黄体生成素的表达。【方法】应用免疫荧光标记激光共聚焦显微镜方法对不成熟和成熟卵母细胞及种植前胚胎进行黄体生成素表达的观察。【结果】人类卵母细胞和种植前胚胎均存在黄体生成索的表达。不成熟和成熟卵母细胞及2-8细胞期种植前胚胎阶段主要分布在细胞膜:桑葚胚和囊胚阶段分布在细胞膜和细胞浆。多精受精组和正常受精组、新鲜胚胎组和冻融胚胎组黄体生成索的表达没有差异。【结论】人类卵母细胞和种植前胚胎存在黄体生成素的表达。黄体生成素可能以旁或/和自分泌方式影响人类卵母细胞和胚胎发育,并在种植过程胚胎与母体子宫内膜的对话中起直接作用。

葡萄糖代谢对卵母细胞成熟和植入前胚胎发育的影响

葡萄糖主要通过糖酵解途径、磷酸戊糖途径、己糖胺生物合成途径和多元醇途径进行代谢,在卵母细胞发育成熟及植入前胚胎发育过程中起重要作用。葡萄糖代谢异常,可导致卵母细胞成熟障碍和胚胎发育异常。本文对上述四条葡萄糖代谢途径在卵母细胞和植入前胚胎发育过程中的作用进行综述。进一步研究卵母细胞成熟和植入前胚胎发育过程中葡萄糖代谢途径的调控机制,有利于改善卵母细胞体外成熟和胚胎的培养条件,提高体外培养的卵母细胞和胚胎的发育能力。

人类植入前胚胎形态与染色体异常关系初探

【目的】探讨人类植入前胚胎发育及形态与染色体异常之间的关系。【方法】对6例染色体异常患者的67个胚胎进行植入前遗传学诊断,对其进行形态评定,并用荧光原位杂交方法对胚胎进行染色体分析,分为染色体正常胚胎组及异常组。【结果】分析的67个胚胎中,染色体正常16个,异常51个。染色体正常及异常的胚胎在取卵后72h发育至6细胞以上的比率分别为68.75%,62.75%;正常与异常的胚胎中碎片均<20%的胚胎分别占100%、94.12%;胚胎活检后继续发育率分别为73.33%,79.54%;差异均不具显著性。【结论】用荧光原位杂交方法可对植入前胚胎进行染色体分析并研究早期胚胎形态与染色体异常之间的关系。

人类基因编辑实验的法律规制——兼论胚胎植入前基因诊断的法律议题

人类胚胎基因实验以人类胚胎或前胚胎为实验对象,在技术上有基因检测、基因诊断、基因筛选、基因编辑(基因改造)等类型,引发了一系列伦理、社会和法律争议。在国际范围内,人类胚胎基因编辑被严格禁止或限制,而胚胎植入前基因诊断则可能为各国接受。对后者进行法律规范的焦点在于风险决策中的权利冲突及其衡平,我国也对其持较为宽容的技术规制立场。未来应坚持全面立法、严格限制、法定许可的政策立场,保持行业主管和审查机构的中立性,提高机构伦理委员会的独立性,实行个案审批制度。就法律体系而言,公法规范与私法规范应当相互配合,私法上特别要以基因自主权之保护和权利冲突之衡平为中心。在尚不具有个性的前胚胎阶段,在符合法定条件、伦理原则和程序等前提下,可以适度放宽人类胚胎基因编辑实验研究的限制。参与者的基因自主权和研究者的研究自由需要得到保障,但必须以尊重人的尊严、公共利益和他人自主选择生活的权利为前提。无论如何,我们必须避免让基因成为人类社会不平等的一个新根源。

人类胚胎植入前诊断的研究进展

植入前遗传学诊断（PGD）是在人类辅助生殖技术的基础上筛选无染色体异常的胚胎，诊断并选择未见遗传缺陷的胚胎植入子宫，帮助妊娠成功、减少出生缺陷。1990年一对X-性连锁疾病夫妇通过PGD诞下一名健康女婴，标志着PGD走入临床应用阶段。

人类植入前体外培养过程中染色体嵌合型的发生率、类型及与胚胎后果的关系

在不孕症治疗中,IVF技术得到了广泛的应用,同时人们也发现在体外培养中分裂的胚胎有很大部分是染色体嵌合型的,即二倍体细胞与非二倍体细胞同时存在。常规的诊断方法是染色体核型分析。本研究采用多种探针荧光原位杂交(FISH)方法,检测从2-细胞到囊胚阶段胚胎中染色体嵌合型的发生率、类型以及不同类型的嵌合型与胚胎发育及存活之间的联系。 研究对象为81例接受IVF或ICSI治疗的患者。

浅谈植入前胚胎遗传学诊断的伦理争议

胚胎植入前遗传学诊断（PGD）是指在体外受精过程中,结合显微操作技术和现代分子生物学技术筛选出正常或遗传表型正常的胚胎移植入宫腔,用以预防生育有遗传病的患儿。PGD的最初目的是防止遗传疾病基因携带者生育患有严重遗传疾病的子女。这一新兴技术是对传统助孕过程的有效补充,给反复着床失败。

韦-伯综合征相关印记基因在人类卵母细胞及植入前胚胎的正常表达(英文)

目的检测韦伯综合征(BeckwithWiedemannsyndrome,BWS)相关印记基因在人类卵母细胞和植入前胚胎的正常表达,探讨辅助生殖技术(assistedreproductivetechnology,ART)和BWS的关系。方法应用嵌套式逆转录聚合酶链反应技术检测印记基因P57KIP2、LIT1、TSSC3在人类卵母细胞及植入前胚胎的正常表达。结果卵母细胞和各期植入前胚胎、囊胚泡中均存在P57KIP2表达。LIT1自8细胞胚胎开始表达,持续至囊胚泡期。TSSC3于卵母细胞及各期植入前胚胎中均未表达。结论BWS相关印迹基因LIT1、P57KIP2表达于植入前胚胎,ART技术的体外干预可能影响其印迹基因的正常表达。

胚胎植入前单基因遗传学检测结合HLA配型诊疗X连锁高IgM综合征1例

目的 探讨胚胎植入前单基因遗传学检测(PGT-M)基因突变结合人类白细胞抗原(HLA)配型在X连锁高IgM综合征(X-HIGM)患者临床诊疗中的应用效率及可行性。方法 应用多重PCR结合二代测序技术针对X-HIGM的致病基因CD40LG及临近区域特异性单核苷酸多态性(SNP)位点进行鉴别构建单体型,另外针对HLA-A、HLA-B、HLA-DRA、HLA-DQB1及临近区域特异性SNP位点进行鉴别构建单体型。经本中心常规促排卵、体外受精及胚胎培养,随后进行胚胎活检;对于目标基因CD40LG进行PGT-M,包括直接突变检测和间接单体型连锁分析;对于HLA采用HLA复合体中多个位点的连锁分析来选择相合的胚胎。结果 先证者男孩,临床诊断为X-HIGM,基因检测分析显示其X染色体上的CD40LG基因有1个半合子突变,c.49_59del(p.L17Hfs*28)。该基因突变会导致X-HIGM。经家系验证发现,先证者母亲在该位点存在和先证者相同的杂合变异。对该家系通过单体型连锁分析之后进行CD40LG基因检测+HLA配型双重PGT。由于先证者母亲卵巢储备不足,只获得3枚卵子,受精后养成的囊胚也只有1枚,这枚囊胚的PGT结果为整倍体+未携带CD40LG基因突变+HLA配型半相合。此枚胚胎发育出生的婴儿没有患上X-HIGM,而且他的半相合的造血干细胞成功移植给了先证者。结论 PGT-M技术在该类血液遗传病家系中不仅可以阻断基因突变垂直传递,同时HLA相合胚胎的选择也为先证者儿童的造血干细胞移植治疗提供了新的曙光。

MATER蛋白在人类卵母细胞及着床前胚胎中的表达

目的探讨M ater在人卵发生和胚胎早期发育中的表达情况。方法收集体外受精助孕过程中未成熟的卵母细胞及不适合移植及冷冻保存的胚胎,采用免疫荧光联合激光共聚焦显微镜技术检测人类卵母细胞及着床前胚胎MATER蛋白的表达。结果16个未成熟卵母细胞15个MATER蛋白表达阳性;58个2-8细胞期人类早期胚胎中40个MATER蛋白检测阳性;5个囊胚和4个孵化出囊胚内细胞团均为阴性,滋养层细胞为弱阳性。结论MATER蛋白在人类卵母细胞中存在,并随着早期胚胎的发育其表达阳性率逐渐降低,至囊胚期只有滋养层细胞少量表达,这符合母性效应基因在哺乳动物中的表达模式。

相关印迹基因在人卵母细胞及植入前胚胎中的表达

基因印迹是指亲源依赖性单等位基因表达，即只有一个父源性或母源性等位基因表达，印迹基因的表达不符合经典的孟德尔遗传定律。动物实验表明，基因印迹发生于配子形成过程中，可影响胚胎形成、发育、胎儿生长及胎盘分化。

先锋转录因子DUX4在人类胚胎合子基因组激活中的作用

总结近几年人类DUX4(double homeobox 4,DUX4)基因在细胞模型和早期胚胎基因组激活中的研究进展,发现先锋转录因子可与靶标基因的特定序列结合,诱导早期胚胎特异性染色质开放性建立及合子基因组激活(zygotic genome activation,ZGA),在母型-合子转换中发挥关键作用。探究先锋转录因子在人类早期胚胎ZGA中的作用,DUX4蛋白参与启动其他合子基因组激活基因的表达,可能是人类合子基因组激活的先锋转录因子,并对未来研究方向进行展望。

人类白细胞抗原基因型的胚胎植入前遗传学诊断

目的建立人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)基因配型,为开展HLA配型的胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)联合或不联合单基因病的临床工作提供技术支持。方法采用多重置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)的方法扩增3~5个滋养层细胞的全基因组,并用多重聚合酶链式反应(PCR)方法扩增多个短串联重复多态性(polymorphic short tandem repeat,STR)位点,通过毛细管电泳技术验证STR位点的特异性。结果微量细胞全基因组的扩增成功率为93.75%,筛选了HLA基因的5个杂合度高、特异性强的STR位点,等位基因脱扣(allele drop-out,ADO)率为10.34%。结论微量细胞MDA结合多重PCR的方法可以同时检测HLA-A、HLA-B、DRA、DQB位点,扩增成功率高,ADO率低,可以有效地筛选出相匹配的胚胎,为同胞患儿提供造血干细胞来源具有可行性。

人类21号染色体转录调节相关基因作为早期分子诊断标记物的可行性研究

目的分析与转录调节相关的人类21号染色体(HC21)基因在小鼠植入前胚胎发育过程中的表达模式,初步阐明这些基因与早期胚胎发育的关系,发现这些基因作为分子诊断标记物的可行性。方法应用植入前胚胎的GlobalRT-PCR方法,对BACH1、RUNX1、SIM-2、ERG、KIAA0136、GCFC、SON、PKNOX1、HSF2BP和NRIP1小鼠同源基因在植入前发育阶段的表达模式进行研究。结果RUNX1、ERG和SON在整个植入前发育过程中都未见表达。其他基因的表达呈现出阶段特异性表达的特点:BACH1几乎在整个发育过程中都有表达,但是存在着胚胎个体之间的差异,不适于作为分子标记物;SIM-2只在1和2细胞期表达;Kiaa0136在2、4细胞期以外的各个阶段均表达;除了1-和2-细胞期,GCFC在其它阶段普遍表达;PKNOX1只在1、8细胞以及桑椹期表达;而HSF2BP和NRIP1的表达仅见于成熟的卵母细胞和1细胞期胚胎。结论与转录相关的小鼠HC21同源基因大部分参与了早期胚胎发育的转录调节,这些基因的阶段特异性表达说明他们参与了早期胚胎发育的不同转录调节环节,对这些基因的深入研究是认识唐氏综合症发生的分子机制和发现早期分子诊断标记的基础。