电针对膝骨关节炎MIA模型大鼠软骨组织中Ⅰ型胶原蛋白基因表达的影响

目的观察抑制Ⅰ型胶原蛋白基因表达是否为电针改善膝骨关节炎的作用机制之一。方法将40只成年SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、药物组和电针组,每组10只。采用注射单体碘乙酸钠(MIA)并驱赶大鼠运动来建立膝骨关节炎MIA模型,药物组造模后采用塞来昔布溶入到10%DMSO中进行灌胃,电针组采用电针足三里、阳陵泉治疗。比较各组大鼠治疗前后痛阈及软骨组织内Ⅰ型胶原蛋白m RNA表达水平的变化情况。结果模型组、药物组及电针组大鼠造模后痛阈与正常组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。药物组和电针组大鼠处死前痛阈与模型组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。药物组大鼠处死前痛阈与电针组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组、药物组及电针组大鼠Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达与正常组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。药物组和电针组大鼠Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达与模型组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。电针组大鼠Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达与药物组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论电针与药物对治疗膝骨关节炎的作用机制可能与抑制Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达有关。

Cartiex^(TM)Ⅱ型胶原蛋白对大鼠骨关节炎治疗效果研究

为探讨Cartiex^(TM)Ⅱ型胶原蛋白对碘乙酸钠诱导的大鼠骨关节炎(OA)的治疗作用,大鼠膝关节腔内单次注射碘乙酸钠溶液,建立大鼠骨关节炎模型;造模后分别以Ⅱ型胶原蛋白及牛骨胶原蛋白灌胃;试验期间每周测量大鼠饮食、饮水、体重、足底机械痛;试验结束后心脏采血测量血清中前列腺素E2(PGE-2)、转化生长因子β(TGF-β)、金属基质降解酶13(MMP-13)、白介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;取膝关节甲醛固定、脱钙后进行病理检查。结果表明:造模大鼠膝关节在试验期间出现明显肿胀,各给药组与OA模型组相比均有不同程度缓解。Ⅱ型胶原蛋白高、低剂量组能显著升高大鼠机械痛值,并显著降低血清中MMP-13、IL-1β、IL-6、TNF-α含量,显著升高PGE-2、TGF-β含量。Ⅱ型胶原蛋白干预后,大鼠关节炎症状明显改善,软骨组织增生,炎症细胞浸润明显减少,Mankin’s评分显著降低。综上,Ⅱ型胶原蛋白可调节骨关节炎大鼠血液中相关炎症因子表达,降低关节痛,减少炎症细胞浸润,改善滑膜组织炎症,并促进软骨增生,进而缓解骨关节炎症状;相对于阳性对照品,Cartiex^(TM)Ⅱ型胶原蛋白具有用量少、效果好、起效快的优点。

贝前列素钠对全脑缺血／再灌注大鼠脑损伤的作用及机制

目的探讨贝前列素钠对全脑缺血/再灌注大鼠脑损伤的保护作用及对PGIS-PGI2-IP信号通路的影响。方法采用夹闭双侧颈总动脉合并低血压的方法建立大鼠全脑缺血/再灌注脑损伤模型,贝前列素钠(50、100μg·kg-1)术前30 min灌胃给药,水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,黄嘌呤氧化酶法、TBA法分别测定大鼠海马中SOD活性、MDA含量变化,ELISA测定大鼠海马PGI2含量,RT-PCR检测大鼠海马COX-2、PGIS与IP mRNA表达情况。结果与假手术组相比,全脑缺血/再灌注大鼠寻台潜伏期,寻台路径明显增加;SOD活性明显降低,MDA含量明显增加;PGI2含量明显增加,COX-2、PGIS、IP mRNA表达明显增加。与模型组相比较,贝前列素钠能明显改善大鼠空间学习记忆能力;升高海马SOD活性,降低MDA含量;明显降低海马PGI2含量,抑制海马COX-2、PGIS及IP mRNA的表达。结论贝前列素钠对全脑缺血/再灌注大鼠脑损伤具有明显的保护作用,其机制可能涉及调控PGIS-PGI2-IP信号通路平衡。

木瓜蛋白酶、碘乙酸钠和Ⅱ型胶原蛋白酶致膝骨关节炎大鼠模型的对比研究

目的研究木瓜蛋白酶、碘乙酸钠和Ⅱ型胶原蛋白酶造模对大鼠行为学、细胞因子和病理的影响。方法SD大鼠随机分为八组,即空白雌性对照组、空白雄性对照组、木瓜蛋白酶雌性组、木瓜蛋白酶雄性组、碘乙酸钠雌性组、碘乙酸钠雄性组、Ⅱ型胶原蛋白酶雌性组和Ⅱ型胶原蛋白酶雄性组。除空白雄性和雌性对照组注射0.1mL生理盐水外,木瓜蛋白酶雄性组雌性组第1、4、7天注射0.1mL的8%木瓜蛋白酶生理盐水溶液,碘乙酸钠雄性组和雌性组注射0.05mL碘乙酸钠溶液(20mg/mL),Ⅱ型胶原蛋白酶雄性组和雌性组第1、4天注射0.05mLⅡ型胶原蛋白酶溶液(4mg/mL)。造模前开场实验观察大鼠行为学,第28天观察大鼠行为学后处死大鼠,右侧膝关节进行病理检测,Elisa检测血清IL-6、MMP3和MMP13。结果与空白对照组比较,木瓜蛋白酶、碘乙酸钠和Ⅱ型胶原蛋白酶雌雄模型大鼠运动距离和运动时间均显著升高,站立次数明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),但各模型组及雌雄之间差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组比较,各模型组IL-6、MMP3和MMP13均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),各模型组及雌性组间无统计学差异;与空白对照组比较,木瓜蛋白酶组和Ⅱ型胶原蛋白酶组膝关节软骨和滑膜病理评分显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),碘乙酸钠组相较木瓜蛋白酶组和Ⅱ型胶原蛋白酶组膝关节软骨病理评分显著升高(P<0.05)。结论木瓜蛋白酶、碘乙酸钠和Ⅱ型胶原蛋白酶均可致大鼠膝骨性关节炎模型且雌雄组别无显著差异,碘乙酸钠模型关节病理特征更为显著。

阿卡波糖产生菌代谢调控的研究

目的探索4种可能的调节物对阿卡波糖生物合成的调节作用,以提高阿卡波糖的发酵产量。方法根据阿卡波糖的生物合成途径,在阿卡波糖发酵的不同阶段添加不同浓度的代谢调节物质,依据阿卡波糖的发酵水平确定添加代谢调节物质的最佳时间和最佳质量浓度。结果 0 h于发酵培养基中添加1 mg.L-1碘乙酸,发酵结束时阿卡波糖的发酵单位提高了8.9%;48 h添加1 mg.L-1NaF,发酵单位提高了13.3%;72 h添加0.5 g.L-1柠檬酸钠,发酵单位提高了6.2%;48 h添加2 g.L-1莽草酸,发酵单位提高了17.3%。结论这4种化合物对阿卡波糖的生物合成都有一定的调节作用,在最佳的时间以最适的浓度添加可以提高阿卡波糖的发酵产量。

组方优化的阳和胶囊对碘乙酸钠诱导大鼠骨关节炎的作用研究

目的探讨组方优化的阳和胶囊对碘乙酸钠诱导的大鼠骨关节炎的治疗作用及其机制研究。方法采用大鼠膝关节腔内注射4%碘乙酸钠溶液0.1 ml,连续注射7天,建立大鼠骨关节炎模型。于造模后分别灌胃给予组方优化的阳和胶囊高、中、低剂量及阳性对照双醋瑞因胶囊(8.0mg/kg),每日1次,连续给药4周。实验期间每周测定大鼠膝关节肿胀度。实验结束后测定大鼠膝关节灌洗液中NO、PGE-2含量,血清中IL-1β、TNF-α含量,及软骨组织中MMP-1、MMP-13含量。结果实验期间模型组大鼠膝关节显著肿胀(P<0.01),各给药组与模型组相比均有不同程度缓解。组方优化的阳和胶囊高、中剂量组能够显著降低膝关节灌洗液中NO、PGE-2含量(P<0.01)、显著降低血清中IL-1β、TNF-α含量(P<0.01)明显降低软骨组织中MMP-1、MMP-13含量(P<0.05)。结论组方优化的阳和胶囊对碘乙酸钠诱导的大鼠骨关节炎具有治疗作用,其机制可能与降低膝关节灌洗液及血清中NO、PGE-2、IL-1β、TNF-α水平及软骨组织中MMP-1、MMP-13含量有关。

云南白药通过抗炎作用缓解碘乙酸钠诱导的大鼠膝骨关节炎疼痛

目的:研究云南白药对碘乙酸钠(sodium iodoacetate,MIA)诱导的大鼠膝骨关节炎疼痛改善机制。方法:选取健康SD雄性大鼠,随机分为4组,每组10只,分别为正常组(B)、模型组(C)、云南白药组(YB,125 mg/kg)和双氯芬酸钠组(Diclofenac sodium,DF,2.5 mg/kg)。除正常组外,每只鼠右后膝关节注射2 mg MIA。造模前1 d,测每只鼠右后肢的机械痛阈值及冷痛潜伏期作为各指标的基础值。造模后给药组按剂量灌胃给药,并每周测两次机械痛及冷痛潜伏期。药物治疗35 d后测定大鼠血清PGE_2水平,行膝骨关节HE染色,参照Markin评分标准评价治疗效果。将数据进行统计学分析。结果:与空白组相比,模型组大鼠膝骨关节炎机械痛阈值显著降低(P<0.01),血清PGE_2水平增高(P<0.01)。与模型组相比,云南白药和双氯芬酸钠能显著提高大鼠膝骨关节炎机械痛阈值(P<0.01),降低膝骨关节炎大鼠血清PGE_2水平(P<0.05),延缓膝骨关节炎软骨损伤。结论:云南白药可能通过抗炎作用显著缓解MIA诱导的大鼠膝骨关节炎疼痛症状。

负载型Pt/CeO_(2)催化剂对碘乙酸的催化加氢脱碘研究

采用硼氢化钠还原法制备了一系列不同载体(氧化铈、氧化铝、氧化硅和商用碳)的负载型Pt基催化剂.通过透射电子显微镜(TEM)、X射线衍射(XRD)、X射线光电子能谱(XPS)、电感耦合等离子体发射光谱(ICP-OES)等手段对催化剂的结构进行了详细表征,并对碘乙酸(MIAA)的液相催化加氢脱碘反应进行了研究.结果表明,Pt/CeO_(2)具有比其他催化剂高得多的MIAA催化加氢脱碘活性;Pt/CeO_(2)催化活性与溶液pH呈现先升后降的火山型变化,且随Pt负载量的增加而提高;MIAA的催化加氢脱碘反应符合朗格缪尔-欣谢尔伍德(Langmuir-Hinshelwood)模型,表明MIAA脱碘反应的速率控制步骤是污染物MIAA在催化剂表面的吸附过程;经4次循环使用后,Pt/CeO_(2)催化剂仍能去除93.4%的MIAA,具有较高的活性.

碘乙酸钠鼠爪炎性痛模型的建立及TRPV1介导的痛敏机制的研究

目的探讨鼠爪注射碘乙酸钠创建炎性痛动物模型的可行性以及研究TRPV1介导的碘乙酸钠炎性痛大鼠痛敏机制。方法低、中、高剂量碘乙酸钠组大鼠左后肢足底分别注射含碘乙酸钠0.11mg、0.33mg、1mg的溶液100μl,观察注射后大鼠热痛阈值、机械痛阈值和足负重等痛觉行为学指标以及鼠爪体积的变化。分别给予瞬时受体电位香草酸亚型1(transient receptor potential vanilloid type 1,TRPV1)的拮抗剂辣椒平和TRPV1的激动剂辣椒素去阻断和激活TRPV1,以观察TRPV1在碘乙酸钠诱导的炎性痛的发生发展中的作用。结果与对照组相比,高剂量碘乙酸钠可成功降低大鼠的热痛阈值、机械痛阈值和足负重,痛敏时程长达4~6d;碘乙酸钠注射鼠爪肿胀程度明显;碘乙酸钠注射后第2天,给予辣椒平能有效缓解碘乙酸钠诱导的热痛阈值、机械痛阈值和足负重的减小程度;给予辣椒素后,与正常大鼠相比,碘乙酸钠炎性痛大鼠的舔爪及抬爪等保卫性行为显著增多。结论碘乙酸钠注射鼠爪后,可导致大鼠发生痛觉过敏,由此制作出了一种新型的慢性炎性痛动物模型;TRPV1可能参与介导碘乙酸钠诱导的痛觉过敏。

重组人白细胞介素-1受体拮抗剂治疗骨关节炎的药效学分析

目的观察重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(recombinant human interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1Ra)对碘乙酸钠(sodium iodoacetate,MIA)诱导的骨关节炎(osteoarthritis,OA)大鼠的治疗作用。方法将雌性Wistar大鼠根据热痛阈值均衡分为正常对照组(11只)和造模组(55只),造模3 d后,依据左后肢膝关节肿胀率将造模组随机分为溶剂对照模型组(安慰剂)及原料药低(9 mg/kg rhIL-1Ra)、高(18 mg/kg rhIL-1Ra)剂量组,每组12只,均经颈部皮下注射给药,1 mL/kg,1次/d,连续14 d。分别于造模前后3 d及首次给药后2、4、7、14 d,测量左后肢膝关节同一处的直径,计算肿胀度、肿胀率及肿胀抑制率;取左后肢膝关节标本固定,经石蜡包埋、切片后,番红O染色,显微镜下进行病理损伤评分。结果造模3 d后,除正常对照组外,其他各组大鼠膝关节肿胀率均约达30%;与溶剂对照模型组比较,原料药低剂量组肿胀度和肿胀率在给药后2、4 d(1.52±0.38、1.26±0.43)时均降低(t分别为1.924、1.945,P均<0.05),而原料药高剂量组在给药后2、4、7 d(1.51±0.37、1.15±0.24、1.14±0.39)时均显著降低(t分别为2.976、2.874、2.902,P均<0.01)。与溶剂对照模型组比较,原料药低、高剂量组(8.33±1.86、8.17±2.79)大鼠关节软骨病变程度相似,病理评分统计结果显示有轻微降低(t=1.814,P均>0.05),造模成功。结论给药14 d,高剂量rhIL-1Ra能显著减轻MIA诱导的大鼠骨关节炎急性期关节肿胀,但对MIA诱导的慢性骨关节炎的痛觉感受无明显影响,且未见其显著逆转MIA诱导的膝关节软骨损伤。

甘草附子汤对大鼠骨关节炎及关节软骨蛋白质组学的影响

采用碘乙酸钠膝关节腔注射复制大鼠骨关节炎模型,探究甘草附子汤对大鼠骨关节炎防治作用及关节软骨蛋白质组的影响。将60只体质量230~250 g的SD大鼠随机分为正常组、模型组、硫酸氨基葡萄糖组以及甘草附子汤高、中、低剂量组。除正常组外其余各组均进行碘乙酸钠(每侧腿给药3 mg)膝关节腔注射诱导骨关节炎模型。造模后,各给药组灌胃1个月,给药期间每周进行关节疼痛测试、关节宽度测量,观察大鼠自主行为。应用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠关节灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)的含量;应用苏木精-伊红(HE)染色法观察骨关节形态;应用Nano-LC-LTQ-Orbitrap系统检测关节软骨蛋白。结果显示,与模型组比较,甘草附子汤能显著改善骨关节炎大鼠的关节疼痛和关节肿胀;显著降低关节腔灌洗液中TNF-α,IL-1β,MMP-3的含量,升高TIMP-1的含量;减轻关节腔间隙变大、软骨边缘破裂粗糙、软骨层厚薄不一、软骨细胞排列紊乱等炎性病变;各组之间的蛋白进行比较后筛选出差异蛋白273个,KEGG分析发现上述差异蛋白共涉及systemic lupus erythematosus等43条信号通路,其中与骨关节炎相关的信号通路有11条。以上结果表明,甘草附子汤对骨关节炎有防治作用,其作用机制可能是通过调节骨关节炎相关信号通路的蛋白表达来完成的。

尪痹胶囊治疗碘乙酸钠致膝关节炎软骨降解的药效学研究

目的研究尪痹胶囊抗碘乙酸钠(MIA)所致大鼠膝关节炎软骨降解的作用。方法48只SD大鼠,随机分为空白组、模型组、氨基葡萄糖阳性药组、尪痹胶囊低剂量组、尪痹胶囊中剂量组、尪痹胶囊高剂量组,使用向大鼠左侧膝关节腔缓慢注射MIA的方法来建立膝关节炎软骨降解模型。ELISA法检测各组大鼠血清中TNF-α、IL-1β表达水平;取大鼠右侧膝关节进行大鼠膝关节直径测定和关节评分并且进行Micro-CT扫描,获得骨结构参数结果;取右侧膝关节软骨组织,进行苏木素-伊红(HE)染色与番红-O-固绿染色。结果与模型组相比,经低、中、高剂量尪痹胶囊治疗后,关节肿胀得到消退,软骨表面光泽度、缺损情况得到改善,骨体积分数的上升与骨小梁数量的下降得到抑制,IL-1β和TNF-α的浓度出现下降(P<0.05)。结论尪痹胶囊能有效改善MIA所致大鼠膝关节炎软骨降解。