钠离子通道基因突变相关儿童癫痫脑病患儿的临床特点及遗传学分析

目的:探讨总结Na^(+)通道基因突变相关儿童癫痫性脑病患儿的临床和基因突变特点。方法:采集2017年11月至2019年12月就诊于湖南省儿童医院神经内科的不明原因癫痫性脑病患儿及其父母外周血,应用靶向捕获二代测序方法进行基因测序分析,并应用Sanger测序对变异及来源进行验证,筛选出20例Na^(+)通道基因阳性突变的患儿,收集其临床资料,对其临床特征、基因突变、治疗及随访情况进行分析总结。结果:20例Na+通道基因突变相关儿童癫痫脑病患儿中女性7例,男性13例,起病年龄2 d至10个月。14例为SCNlA基因突变,5例为SCN2A基因突变,1例为SCN8A基因突变,均为新生突变。其中,14例临床诊断为Dmvet综合征(DS),2例诊断为大田原综合征(OS),4例诊断为不能分类的儿童癫痫脑病。20例患儿给予多种抗癫痫药物治疗,随访6〜63个月,9例癫痫发作未控制(其中1例夭折),7例癫痫发作部分控制,4例癫痫发作控制,所有患儿均有智力及运动发育落后。结论:Na^(+)通道基因突变是儿童癫痫性脑病常见的遗传性病因,Na^(+)通道基因突变可引起不同表型癫痫脑病.基因检测可明确病因诊断,并为精准治疗提供依据。

诱发心律失常的离子通道病变特征、类型和治疗药

严重心律失常是心脏病主要死因之一。本文讨论了诱发心律失常的离子通道基本病变，介绍了近年来在先天性长ＱＴ症候群的家族成员中发现的与钾通道及钠通道有关的ＤＮＡ突变。提出：心律失常的形成有二种基本机制，其对药物敏感性各不同，因此单纯型阻断Ｉｋｒ的Ⅲ类药不是抗心律失常的最佳选择，抗心律失常药应能双相性调节ＡＰＤ，而不是单纯性延长ＡＰＤ的观点。

胆管癌相关FXYD6基因功能区在大肠埃希菌表达的初步研究

目的对胆管癌相关基因FXYD6基因的功能区进行克隆和表达,以便进一步展开该基因功能研究。方法借助生物信息学方法分析FXYD6基因,设计FXYD6基因信号肽剪切后功能区蛋白体外表达序列,并将其克隆到pBV220表达载体上,继而以大肠埃希菌为表达系统,使功能区蛋白(不含信号肽)获得体外表达。结果该基因主要功能位点位于18～95 aa。PCR扩增出剪切掉信号肽序列的功能区序列(即包含18～95 aa的肽链段),并成功构建pBV220/FXYD6-ex基因功能区重组表达质粒克隆,其在大肠埃希菌DH5α中表达量最高,表达产物主要以包涵体形式存在。结论获得胆管癌相关FXYD6基因融合蛋白表达产物,为后续研究打下基础。

支持向量机方法预测离子通道蛋白

讨论一种基于蛋白质结构域的方法预测离子通道蛋白。通过将蛋白质的结构域转化成为固定长度的向量,使用支持向量机方法进行离子通道蛋白的预测,并将预测结果与线性判别分析以及利用InterPro与GO映射规则进行预测的结果进行了比较。通过留一法交叉验证,取得最好的预测效果,敏感度为95.9%,专一性为98.3%。

胆管癌相关基因FXYD6的克隆及功能区定位

目的从人组织cDNA文库克隆胆管癌相关基因FXYD6并进行功能区定位分析。方法利用人胎肝、脑及脾cDNA文库,通过Goldkey软件进行引物设计,从组织cDNA文库获得FXYD6全长和转录编码区序列,对其进行克隆与纯化;对FXYD6基因重组克隆进行测序鉴定;并应用GenBank核酸数据库及Goldkey软件对其功能区进行定位分析。结果在胎肝和脑cDNA文库中,扩增出FXYD6特异条带,但在脾cDNA文库未见扩增产物。将PCR扩增产物与pGEM-T载体连接,进行转化后确认回收组、阳性对照组均可见单菌落生长。选取阳性克隆进行菌落收获和质粒提取,并行测序分析,该序列包含已测序FXYD6基因大片段和可能的编码区序列。通过序列分析,得到最可能编码区序列为+1相位编码区序列,进一步分析得到该基因产物作为膜蛋白的可能功能区分布。结论 FXYD6基因克隆、纯化及功能区定位的成功为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

全面性癫痫伴热性惊厥附加症SCN1A基因G302D突变的膜片钳电生理研究

目的:探讨全面性癫痫伴热性惊厥附加症(GEFS+)SCN1A基因G302D突变的电生理机制。方法:采用体外定点诱变法构建携带有基因突变G302D的pCMV-SCN1A的表达载体,lipo2000脂质体转染法共转染pCMV-SCN1A-G302D质粒和pCD8-IRES-SCN1B质粒到HEK-293细胞系,进行全细胞膜片钳电生理实验记录Navl.1通道电流及动力学参数,由pClamp10.0以及OriginPro8.0软件分析。结果:SCN1A-G302D突变体与野生型相比,电流密度降低,激活速度减慢,失活后恢复时间延长。失活参数两者相比没有显著性统计学差异。结论:SCN1A基因G302D突变导致Navl.1通道功能部分丧失,可能是导致GEFS+的病因。