氯霉素毛细管电泳免疫分析方法研究

针对目前食品安全领域中氯霉素的检测,建立一种快速灵敏的氯霉素毛细管电泳免疫分析方法。该方法对氯霉素检测的线性范围和最低检测限分别为0.008～5μg/L和0.0016μg/L。与相应固相酶联免疫分析ELISA相比,对氯霉素的检测灵敏提高了约20倍且有效缩短了分析时间。建立的氯霉素毛细管电泳免疫分析方法对动物源性食物(牛奶、鸡肉和鱼肉)进行分析,得到氯霉素在实际样品中的检测限为0.035μg/kg。

稀土荧光化合物的合成与表征

以研制新型固相时间分辨荧光免疫分析螯合剂为目的,以4,4'-二硝基-2,2'-联吡啶-6,6'-二亚甲基双三氟乙酸酯作为起始原料,经过水解、溴化、酯化、对氨基苯乙炔取代等反应,合成了4,4'-二(对氨基苯乙炔基)-6,6'-二[N,N-二(乙氧基羰甲基)氨甲基]-2,2'-联吡啶和4,4'-二(对氨基苯乙炔基)-6,6'-二[N,N-二(叔丁氧基羰甲基)氨甲基]-2,2'-联吡啶,通过熔点、红外光谱、核磁共振、高分辨质谱表征,证实了两种化合物的结构,并对其性质和功能进行了比较。

多功能灵敏固相时间分辨荧光免疫分析仪设计

针对固相时间分辨荧光光谱的测量,设计出一种全新的固相时间分辨荧光免疫分析系统。使用氮分子激光器作为激发光源,采用积分球和单色仪相结合的荧光收集结构,使杂散光对样品荧光的影响降到最低;用光电倍增管进行光电转换,在500～700 nm范围实现了高分辨荧光光谱测量;利用数字方式实现取样积分功能,提高了系统的信噪比。系统可实现荧光寿命、时间分辨荧光光谱、物质浓度的自动测量,仪器的检测灵敏度可达10-12 mol/L,线性范围为10-12～10-9 mol/L,稳定性相对误差小于3%,荧光光谱分辨为0.5 nm。

4,4′-二硝基-6,6′-二甲基-2,2′-联吡啶-N,N′-氧化物的合成

从时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂合成出发,设计了固相时间分辨荧光免疫分析螯合剂中间体4,4′-二硝基-6,6′-二甲基-2,2′-联吡啶-N,N′-氧化物的合成路线.以2-氨基-6-甲基吡啶为原料,经过重氮化溴化、乌尔曼偶联、氧化、硝化四步合成了该化合物,通过熔点、红外光谱、元素分析1、H NMR对其进行了表征.证明了该结构的正确性和合成方法的可靠性.

固相时间分辨荧光免疫分析螯合剂(Ⅰ)中间体—4,4′-二溴-6,6′-二甲基2,2′-联吡啶的合成

目的:合成固相时间分辨荧光免疫分析螯合剂的中间体-4,4′-二溴-6,6′二甲基2,2′-二吡啶。方法:根据自行设计的合成路线,以2-氨基6-甲基吡啶为原料,经重氮化、乌尔曼偶联合成6,6′-二甲基-2,2′-二吡啶,再经氧化、硝化、溴化、脱氧等合成4,4′-二溴-6,6′二甲基2,2′-二吡啶。结果:经元素分析、红外光谱,核磁共振波谱等方法证明:成功的合成了4,4′-二溴-6,6′二甲基2,2′-二吡啶。结论:通过自行设计路线完成了4,4′-二溴-6,6′二甲基2,2′-二吡啶的合成,为固相时间分辨荧光免疫分析的应用提供了有价值的中间体和制备方法。

R-藻红蛋白固相免疫荧光检测中洗涤条件的筛选

目的筛选 R-藻红蛋白免疫荧光检测中适宜的洗涤条件。方法采用二步法改变洗涤液离子强度、p H值 ,比较弱阳性血清的检出率及阴性假阳性率 ,由此筛选最佳洗涤条件。结果洗涤液离子强度的增加有助于降低阴性血清假阳性现象。在本实验所涉及样品范围内 ,摩尔浓度大于 10 0 mm ol/ L 时 ,假阳性率可降低到 0 ;12 0 m mol/ L 时 ,阳性检出率最高值达93.3% ;中性、偏碱性的 p H值对检出率影响较小。结论以 12 0 m mol/ L PBS(p H7.5 )为洗涤液有利于提高 R-藻红蛋白荧光免疫法的特异性和灵敏度。

4,4'-二(对氨基苯乙炔基)-6,6'-二[N,N-二(乙氧基羰甲基)氨甲基]-2,2'-联吡啶的合成与表征

以4,4'-二硝基-2,2'-联吡啶-6,6'-二亚甲基双三氟乙酸酯作为起始原料,经水解、溴化、酯化和对氨基苯乙炔取代4步反应合成了4,4'-二(对氨基苯乙炔基)-6,6'-二[N,N-二(乙氧基羰甲基)氨甲基]-2,2'-联吡啶.通过红外光谱、核磁共振波谱、高分辨质谱等表征了该化合物的结构.该化合物经水解后与铕离子形成稀土荧光螯合物,在紫外光激发下,发射出具有铕离子特征的荧光光谱.

4,4’-二溴-6,6’-二氨甲基-二乙羰基-2,2’-联吡啶的合成

双功能螯合剂的合成需要用时间分辨荧光免疫法来分析,因此设计了采用固相时间分辨荧光免疫法来分析螯合剂中间体4,4’-二溴-6,6’-二氨甲基-二乙羰基-2,2’-联吡啶的合成路线。以4,4’-二硝基-6,6’-二甲基-2,2’-联吡啶-N,N-二氧化物为原料,经过乙酰溴溴化、脱氧、NBS溴化、胺解四步合成了该化合物。通过熔点、红外光谱、元素分析、核磁共振对其进行了表征。

固相萃取-HPLC测定人血清万古霉素、去甲万古霉素浓度及其与荧光偏振免疫法测定结果的比较

目的 建立固相萃取-高效液相色谱法（SPE-HPLC）测定人血清中万古霉素和去甲万古霉素浓度,并与荧光偏振免疫法（FPIA）测定结果进行相关性分析。方法 血清样品经C18固相萃取小柱净化后进样。色谱柱为HyperSil C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为0.05 mol.L 1磷酸二氢钾-乙腈（91︰9）,柱温25℃,流速1 mL.min 1,检测波长236 nm,进样量30μL;28例患者的血浆分别用SPE-HPLC和FPIA测定,考察2种方法的相关程度。结果 万古霉素、去甲万古霉素的标准曲线范围分别为0.4~80 mg.L 1和1~50 mg.L 1,回收率分别为87.2%和89.8%,日内、日间精密度均〈7%;SPE-HPLC和FPIA 2种方法的测定值差异无统计学意义。结论 SPE-HPLC法快速简便,准确,灵敏度高,适用于万古霉素和去甲万古霉素血药浓度检测;2种测定方法有良好的相关性。