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Bone-marrow mesenchymal stem cells reduce rat intestinal ischemia-reperfusion injury, ZO-1 downregulation and tight junction disruption via a TNF-α-regulated mechanism 被引量:23
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作者 Zhong-Yang Shen Jing Zhang +1 位作者 Hong-Li Song Wei-Ping Zheng 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2013年第23期3583-3595,共13页
AIM: To investigate the effect of bone-marrow mesenchymal stem cells (BM MSCs) on the intestinal mucosa barrier in ischemia/reperfusion (I/R) injury. METHODS: BM MSCs were isolated from male Sprague-Dawley rats by den... AIM: To investigate the effect of bone-marrow mesenchymal stem cells (BM MSCs) on the intestinal mucosa barrier in ischemia/reperfusion (I/R) injury. METHODS: BM MSCs were isolated from male Sprague-Dawley rats by density gradient centrifugation, cultured, and analyzed by flow cytometry. I/R injury was induced by occlusion of the superior mesenteric artery for 30 min. Rats were treated with saline, BM MSCs (via intramucosal injection) or tumor necrosis factor (TNF)-α blocking antibodies (via the tail vein). I/R injury was assessed using transmission electron microscopy, hematoxylin and eosin (HE) staining, immunohistochemistry, western blotting and enzyme linked immunosorbent assay.RESULTS: Intestinal permeability increased, tight junctions (TJs) were disrupted, and zona occludens 1 (ZO-1) was downregulated after I/R injury. BM MSCs reduced intestinal mucosal barrier destruction, ZO-1 downregulation, and TJ disruption. The morphological abnormalities after intestinal I/R injury positively correlated with serum TNF-α levels. Administration of anti-TNF-α IgG or anti-TNF-α receptor 1 antibodies attenuated the intestinal ultrastructural changes, ZO-1 downregulation, and TJ disruption. CONCLUSION: Altered serum TNF-α levels play an important role in the ability of BM MSCs to protect against intestinal I/R injury. 展开更多
关键词 bone marrow mesenchymal stem cells Zona occludens 1 ISCHEMIA-REPERFUSION injury Intestinal MUCOSA Tumor necrosis factor-α
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miR-192-5p靶向CKIP-1促进骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化 被引量:1
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作者 鄂正康 辛红伟 +1 位作者 于清波 张允帅 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第13期2641-2647,共7页
背景:酪蛋白激酶2结合蛋白1(casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1)是一种重要的骨形成负调控基因,其敲除鼠骨质显著增强、骨形成和骨密度也显著提高。而miRNA作为较早发现的小分子调控物,对大多数编码基因具有调控作用,在成... 背景:酪蛋白激酶2结合蛋白1(casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1)是一种重要的骨形成负调控基因,其敲除鼠骨质显著增强、骨形成和骨密度也显著提高。而miRNA作为较早发现的小分子调控物,对大多数编码基因具有调控作用,在成骨分化中发挥重要作用。目的:探讨miRNA/CKIP-1对骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其分子机制。方法:采用miRNA-Seq技术检测2022年3-6月在开封市中心医院骨外科就诊32例骨质疏松患者及同期体检中心健康人群骨髓间充质干细胞中miRNA的变化情况;利用Targetscan网站预测靶向调控CKIP-1的miRNA,利用荧光素酶报告基因实验检测miRNA与CKIP-1启动子区DNA的结合;在骨髓间充质干细胞中转染miR-192-5p类似物(miR-192-5p mimics)/阴性对照(NC mimics)或miR-192-5p抑制剂(miR-192-5p inhibitor)/阴性对照(NC inhibitor),成骨诱导后第7,14天,通过实时荧光定量PCR技术及茜素红染色检测成骨标志基因Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素、抗骨桥蛋白、骨唾液蛋白及CKIP-1的表达水平和骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的情况;采用蛋白质免疫印迹实验及茜素红染色检测miR-192-5p/CKIP-1/轴对细胞成骨分化的的调控作用。结果与结论:与健康组相比,骨质疏松组有16个miRNA表达明显升高,53个miRNA表达明显降低(P<0.05);利用Targetscan网站预测,并通过荧光素酶报告基因实验验证,发现miR-192-5p与CKIP-1有互补的核苷酸序列(P<0.05);过表达miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),抑制miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),而沉默CKIP-1的表达后,Runx2、骨钙素及骨桥素的蛋白水平增加(P<0.05),逆转了敲低miR-192-5p对细胞成骨分化的抑制作用。上述结果证实,miR-192-5p在骨质疏松症中表达降低;miR-192-5p通过靶向抑制CKIP-1的表达,促进骨髓间充质干细胞成骨分化。 展开更多
关键词 骨质疏松 微小RNA miR-192-5p 酪蛋白激酶2结合蛋白1 骨髓间充质干细胞 成骨分化 Runt相关转录因子2 骨唾液蛋白
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老年血管性痴呆患者血清ANGPTL4和sTLT-1水平表达与其认知功能及预后的相关性研究
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作者 靳玉娟 王鹏飞 +1 位作者 王诗男 陈长英 《现代检验医学杂志》 CAS 2024年第4期105-109,160,共6页
目的 探讨老年血管性痴呆(vascular dementia, VD)患者血清血管生成素样蛋白4(angiopoietin-like protein 4,ANGPTL4)、可溶性骨髓细胞样转录因子-1(soluble bone marrow cell-like transcription factor-1,sTLT-1)水平表达与其认知功... 目的 探讨老年血管性痴呆(vascular dementia, VD)患者血清血管生成素样蛋白4(angiopoietin-like protein 4,ANGPTL4)、可溶性骨髓细胞样转录因子-1(soluble bone marrow cell-like transcription factor-1,sTLT-1)水平表达与其认知功能和预后的相关性研究。方法 选取2020年6月~2022年6月在河北燕达医院收治的92例老年血管性痴呆患者作为研究组,根据简易精神状态量表(minimum mental state examination,MMSE)评分分为轻度组(n=30)、中度组(n=36)和重度组(n=26),另选取同期健康体检者92例作为对照组。根据患者预后认知功能障碍情况分为Ⅰ~Ⅱ级和Ⅲ级;采用ELISA方法检测各组血清ANGPTL4和sTLT-1水平,采用Pearson和Spearman法分析血清ANGPTL4,sTLT-1与MOCA评分的相关性;采用Logistic回归分析老年血管性痴呆患者预后分级为Ⅲ级的影响因素;绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清ANGPTL4和sTLT-1水平对老年血管性痴呆患者预后分级为Ⅲ级的预测价值。结果 研究组血清ANGPTL4(987.57±53.25 pg/ml)水平显著低于对照组(1 108.35±62.13 pg/ml),血清sTLT-1(68.01±5.15 pg/ml)水平显著高于对照组(50.12±4.57 pg/ml),差异具有统计学意义(t=14.158,24.922,均P <0.05)。轻度、中度和重度组血清ANGPTL4水平和MOCA评分依次降低(F=33.495,66.617),血清sTLT-1水平依次升高(F=66.718),差异具有统计学意义(均P <0.05)。Pearson法分析显示,血清ANGPTL4与sTLT-1呈负相关(r=-0.621,P <0.05),Spearman法分析显示,血清ANGPTL4与MoCA评分呈正相关(r=0.545,P <0.05),sTLT-1水平与MoCA评分呈负相关(r=-0.557,P <0.05)。Ⅲ级预后患者血清ANGPTL4(953.45±51.16 pg/ml)水平显著低于Ⅰ~Ⅱ级(1 005.76±54.27 pg/mL),血清sTLT-1(73.14±5.40 pg/ml)水平显著高于Ⅰ~Ⅱ级(65.28±5.02pg/ml),差异具有统计学意义(t=4.490,6.967,均P <0.05)。Logistic回归分析得知,ANGPTL4低表达[OR(95%CI):5.089(1.833~14.129)],sTLT-1高表达[OR(95%CI):4.258(1.739~10.428)]均为影响老年血管性痴呆患者预后分级为Ⅲ级的危险因素(P <0.05)。根据ROC曲线得知,二者联合预测老年血管性痴呆患者预后分级为Ⅲ级优于ANGPTL4和sTLT-1各自单独预测(Z=2.135,3.268,均P <0.05)。结论 老年血管性痴呆患者血清ANGPTL4水平显著降低,sTLT-1水平显著升高,ANGPTL4和sTLT-1与认知功能和预后密切相关。 展开更多
关键词 血管性痴呆 血管生成素样蛋白4 可溶性骨髓细胞样转录因子-1 认知功能
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过表达FOXO1的BMSCs对哮喘模型小鼠肺嗜酸性粒细胞浸润和气道重构的抑制作用及其机制 被引量:1
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作者 何小双 徐丽娜 +1 位作者 崔梅 辛雯艳 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1192-1201,共10页
目的:探讨过表达叉头转录因子1(FOXO1)的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对哮喘小鼠肺嗜酸性粒细胞浸润和气道重构的抑制作用,并阐明其可能的作用机制。方法:分离小鼠的BMSCs,采用油红O染色和茜素红染色鉴定BMSCs,流式细胞术鉴定BMSCs的表型。... 目的:探讨过表达叉头转录因子1(FOXO1)的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对哮喘小鼠肺嗜酸性粒细胞浸润和气道重构的抑制作用,并阐明其可能的作用机制。方法:分离小鼠的BMSCs,采用油红O染色和茜素红染色鉴定BMSCs,流式细胞术鉴定BMSCs的表型。取对数生长期的BMSCs,分为对照组(不进行处理),FOXO1-BMSCs组(感染携带FOXO1基因的重组慢病毒)和NC-BMSCs组(感染阴性对照重组慢病毒)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组BMSCs中FOXO1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组BMSCs中FOXO1蛋白表达水平。将40只小鼠随机分为对照组(给予生理盐水)、模型组(给予生理盐水)、NC-BMSCs组(给予NCBMSCs悬液)和FOXO1-BMSCs组(给予FOXO1-BMSCs悬液),每组10只。除对照组外,其他3组小鼠采用卵清蛋白(OVA)和雾化激发的方法制备哮喘动物模型。检测各组小鼠BALF中细胞分类计数,HE染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现,免疫荧光法检测各组小鼠肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和增殖细胞核蛋白(PCNA)表达情况,Image-Pro Plus软件测量各组小鼠支气管管腔内周长(Pi)、管壁面积(W)、支气管平滑肌面积(S)和支气管平滑肌细胞核数目(N),并计算S/Pi、W/Pi和N/Pi,Western blotting法检测各组小鼠肺组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶12(MMP-12)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)蛋白表达水平。结果:分离培养的BMSCs呈纺锤形,油红O染色和茜素红染色后可见明显红色脂滴形成和橘红色沉淀,BMSCs表面CD29、CD44和CD71表达量升高,CD34、CD45和HLA-DR表达量降低。与对照组和NCBMSCs组比较,FOXO1-BMSCs组BMSCs中FOXO1 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。与模型组和NC-BMSCs组比较,FOXO1-BMSCs组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数减少(P<0.05),气道及肺泡中炎性细胞浸润程度减轻,S/Pi、W/Pi和N/Pi降低(P<0.05),肺组织中α-SMA和PCNA表达量降低,MMP-9、MMP-12和TIMP-1蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:过表达FOXO1的BMSCs能够减轻哮喘小鼠肺部炎性细胞浸润,尤其以嗜酸性粒细胞为主,并抑制气道重构,从而缓解哮喘的症状。 展开更多
关键词 哮喘 叉头转录因子1 骨髓间充质干细胞 嗜酸性粒细胞 气道重塑
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骨髓细胞学及血清sVCAM-1、Foxp3水平联合检测在再生障碍性贫血诊断中的价值
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作者 王晓娟 《中国民康医学》 2023年第18期143-145,共3页
目的:探究骨髓细胞学及血清可溶性血管细胞黏附分子-1(sVCAM-1)、叉头状/翅膀状旋转转录因子(Foxp3)水平联合检测在再生障碍性贫血诊断中的价值。方法:回顾性分析2021年4月至2022年5月该院收治的32例再生障碍性贫血患者的临床资料作为... 目的:探究骨髓细胞学及血清可溶性血管细胞黏附分子-1(sVCAM-1)、叉头状/翅膀状旋转转录因子(Foxp3)水平联合检测在再生障碍性贫血诊断中的价值。方法:回顾性分析2021年4月至2022年5月该院收治的32例再生障碍性贫血患者的临床资料作为研究组,另选择同期32例非再生障碍性贫血患者的临床资料作为对照组。所有患者均行骨髓细胞学及血清sVCAM-1、Foxp3水平检测,比较两组骨髓细胞学检查结果(细胞内、细胞外铁水平)、sVCAM-1、Foxp3水平,绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析骨髓细胞学、血清sVCAM-1、Foxp3水平单项及联合检测在再生障碍性贫血诊断中的价值。结果:研究组细胞内铁水平低于对照组,细胞外铁水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组sVCAM-1水平高于对照组,Foxp3水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);ROC曲线结果显示,骨髓细胞学、sVCAM-1、Foxp3水平单项及联合检测诊断再生障碍性贫血的曲线下面积分别为0.838、0.714、0.718、0.995,均具有诊断价值,且联合检测诊断价值高于三者单项检测诊断价值。结论:骨髓细胞学及血清sVCAM-1、Foxp3水平联合检测诊断再生障碍性贫血的价值高于三者单项检测。 展开更多
关键词 骨髓细胞学 可溶性血管细胞黏附分子-1 叉头状/翅膀状旋转转录因子3 再生障碍性贫血 诊断 价值
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PECAM-1、GFAP、sTLT-1在急性脑梗死患者中的表达及相关性研究 被引量:1
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作者 袁亚春 《罕少疾病杂志》 2023年第11期20-22,共3页
目的 血小板-内皮细胞粘附分子-1(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、可溶性骨髓细胞样转录因子-1(soluble bone marrow cell-like transcription fac... 目的 血小板-内皮细胞粘附分子-1(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、可溶性骨髓细胞样转录因子-1(soluble bone marrow cell-like transcription factor-1,sTLT-1)在急性脑梗死(acute cerebral infarction,ACI)患者中的表达及相关性研究。方法 选取2019年5月-2020年10月我院收治的ACI患者77例作为实验组,按照神经功能缺损评分量表(national institute of health stroke scale,NIHSS)评分分为轻度患者36例,中度患者25例,重度患者16例;根据磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)反应的梗死面积将患者分为小面积梗死灶(small area of infarction,SI)38例、中度面积梗死灶(moderate area of infarct,MI)26例以及大面积梗死灶(large area of infarction,LI)13例,同时选取在我院同一时间点进行健康体检的健康人员77例作为正常组,采用酶联免疫吸附法检测PECAM-1、GFAP、sTLT-1水平。结果 与正常组相比,实验组PECAM-1、GFAP、sTLT-1显著升高,具有统计学差异(P<0.05);与轻度组相比,中度组和重度组水平升高,与中度组相比,重度组水平显著升高,具有统计学差异(P<0.05);与SI相比,Ml和LI水平升高,与MI相比,LI水平显著升高,具有统计学差异(P<0.05)。结论 PECAM-1、GFAP、sTLT-1在ACI患者血清中表现异常,与患者的严重程度、梗死面积有密切关系,可能参与ACI的发生发展,提示PECAM-1、GFAP、sTLT-1在ACI的临床诊断中具有一定作用。 展开更多
关键词 血小板-内皮细胞粘附分子-1 胶质纤维酸性蛋白 可溶性骨髓细胞样转录因子-1 急性脑梗死
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缺氧预处理激活HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路促进骨髓间充质干细胞生存和血管再生 被引量:24
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作者 侯婧瑛 于萌蕾 +2 位作者 郭天柱 龙会宝 吴浩 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2021年第7期985-990,共6页
背景:既往研究发现缺氧预处理能够提高骨髓间充质干细胞生存和改善其移植治疗效率,且此效应主要由缺氧诱导因子1α(hypoxia induced factor-1α,HIF-1α)介导,但下游机制未明。目的:体外观察缺氧预处理对骨髓间充质干细胞生存和血管再... 背景:既往研究发现缺氧预处理能够提高骨髓间充质干细胞生存和改善其移植治疗效率,且此效应主要由缺氧诱导因子1α(hypoxia induced factor-1α,HIF-1α)介导,但下游机制未明。目的:体外观察缺氧预处理对骨髓间充质干细胞生存和血管再生能力的影响,探讨HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路在其中的调控作用。方法:将体外培养的骨髓间充质干细胞分为缺氧实验组(体积分数为1%O2)和常氧对照组(体积分数为20%O2),培养24 h后检测细胞增殖、凋亡以及血管形成情况以及HIF-1α、MALAT1和VEGFA的表达;在此基础上,分别采用相应的siRNA抑制HIF-1α以及MALAT1的表达,以HIF-1αsiRNA scramble和MALAT1 siRNA scramble作为阴性对照,再进行缺氧预处理,检测并比较各组通路因子的表达变化。结果与结论:①与常氧对照组相比,缺氧实验组细胞生存力明显增强,凋亡比例显著减少,血管管腔样结构明显增多(P<0.01),HIF-1α、MALAT1和VEGFA的表达均明显增高(P<0.01);②在抑制HIF-1α的基础上进行缺氧预处理,MALAT1和VEGFA表达均明显下降(P<0.01);而抑制MALAT1后,VEGFA的表达亦显著降低(P<0.01);③结果表明,缺氧预处理能够通过激活HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路促进骨髓间充质干细胞生存和血管再生。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓间充质干细胞 缺氧预处理 血管再生 缺氧诱导因子1Α 长链非编码RNA 肺腺癌转移相关转录本1 血管内皮生长因子A
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补髓生血颗粒剂对慢性再障患者骨髓基质细胞粘附分子ICAM-1、VCAM-1的影响 被引量:4
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作者 俞亚琴 孙伟正 +1 位作者 孙风 罗梅宏 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2004年第6期476-478,共3页
目的 探讨补髓生血颗粒剂对慢性再障患者(CAA)的作用机制。方法 将慢性再障患者随机分为补髓生血颗粒剂组和再障生血片对照组,采用免疫荧光法检测慢性再障患者治疗前后骨髓基质细胞(BMSC)血管间粘附分子(VCAM-1)、细胞间粘附分子(ICAM... 目的 探讨补髓生血颗粒剂对慢性再障患者(CAA)的作用机制。方法 将慢性再障患者随机分为补髓生血颗粒剂组和再障生血片对照组,采用免疫荧光法检测慢性再障患者治疗前后骨髓基质细胞(BMSC)血管间粘附分子(VCAM-1)、细胞间粘附分子(ICAM-1)抗原表达水平。结果 两组患者治疗前粘附分子水平ICAM-1、VCAM-1明显低于正常对照组(P<0.001),治疗后两组患者ICAM-1、VCAM-1抗原水平都有不同程度的升高,并且在提高VCAM-1方面补髓生血颗粒剂组优于再障生血片对照组。阳虚型比阴虚型恢复好。结论 慢性再障患者骨髓基质细胞ICAM-1、VCAM-1抗原表达水平异常,补髓生血颗粒剂可提高粘附分子ICAM-1、VCAM-1的表达,从而促进骨髓造血。进一步证实“阳虚易治,阴虚难调”的理论。 展开更多
关键词 补髓生血颗粒剂 慢性再障 基质细胞 ICAM-1 VCAM-1
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白血病骨髓基质细胞中GATA-1和GATA-2基因的表达特点
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作者 吴秀丽 李扬秋 +5 位作者 王震 杨力建 陈少华 张洹 朱康儿 韩忠朝 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期70-75,共6页
为了解转录因子GATA 1和GATA 2基因在白血病和正常骨髓基质细胞 (BMSC)中表达的情况 ,采集了4 2例白血病患者的骨髓标本及 34例正常骨髓标本并分离骨髓单个核细胞 ,在体外扩增培养后收集悬浮细胞 (骨髓细胞 )和扩增后的贴壁细胞 (BMSC) ... 为了解转录因子GATA 1和GATA 2基因在白血病和正常骨髓基质细胞 (BMSC)中表达的情况 ,采集了4 2例白血病患者的骨髓标本及 34例正常骨髓标本并分离骨髓单个核细胞 ,在体外扩增培养后收集悬浮细胞 (骨髓细胞 )和扩增后的贴壁细胞 (BMSC) ,应用RT PCR ELISA方法分别检测GATA 1和GATA 2基因的表达情况 ,并对其相对表达水平进行半定量分析。结果发现 ,GATA 1和GATA 2基因在正常和白血病的BMSC和骨髓细胞中均有一定的表达。在BMSC中急性淋巴细胞白血病 (ALL)组的GATA 1基因表达率 (85 .7% )与正常组 (88.2 % )相近 ,而急性髓性白血病 (AML)和慢性粒细胞白血病 (CML)组的GATA 1表达率 (5 5 .6 %和 4 1.2 % )均比正常组低(P =0 .0 0 8,0 .0 0 0 ) ,且ALL的BMSC中GATA 1基因表达水平 >AML >正常 >CML(P均 <0 .0 5 ) ;而各白血病组BMSC中GATA 2的表达率和表达水平与正常组相比均无显著性差异 (P均 >0 .0 5 )。骨髓细胞中AML组的GATA 1基因表达水平 >正常 >ALL >CML ,AML组的GATA 2基因表达水平 >CML >ALL >正常 (P均 <0 .0 5 )。AML、CML和正常组的BMSC和骨髓细胞中均以GATA 2的表达占优势。可以推论 ,转录因子GATA 1和GATA 2基因在正常和白血病BMSC的表达可能影响骨髓微环境的造血调控作用。是否对白血病的发生? 展开更多
关键词 转录因子 GATA-1 GATA-2 白血病 骨髓基质细胞 基因表达
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山奈酚通过mTORC1信号促进牵张力下小鼠骨髓间充质细胞成骨分化机制研究 被引量:7
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作者 崔琳娜 蒋校文 +1 位作者 黄华庆 陈金勇 《口腔疾病防治》 2021年第4期234-240,共7页
目的探讨山奈酚(kaempferol,Kae)对周期性单轴牵张力下小鼠骨髓间充质细胞(bone marrow mes⁃enchymal cells,BMMCs)成骨分化过程中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mammalian target of rapamycin com⁃plex 1,mTORC1)信号通路的作用。方... 目的探讨山奈酚(kaempferol,Kae)对周期性单轴牵张力下小鼠骨髓间充质细胞(bone marrow mes⁃enchymal cells,BMMCs)成骨分化过程中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mammalian target of rapamycin com⁃plex 1,mTORC1)信号通路的作用。方法对体外分离培养的小鼠BMMCs施加形变量10%的单轴动态牵张力,通过细胞毒性试验筛选出合适浓度Kae,并添加工具药pp242改变内源性mTOR信号,在牵张后4 h利用化学比色法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性变化、ELISA法检测骨钙素(osteocalcin,OCN)表达量,流式细胞仪检测细胞内钙离子相对含量;利用Western Blot检测内源性mTORC1信号通路主要分子哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、核糖体蛋白S6激酶(ribosomal proteinS6 kinases,S6K)、4E/BP1的磷酸化表达及成骨转录因子Runx2和Osterix的表达变化,qRT⁃PCR检测上述因子mRNA表达水平。结果10μmol/L Kae对细胞的抑制作用较小,且成骨能力最强。加力结束后4 h,Kae能够有效促进BMMCs成骨分化,ALP表达为(153.04±18.72)U/mg,OCN表达为(1.64±0.25)U,成骨转录因子Runx2、Osterix的mRNA水平和蛋白水平表达上调,细胞内钙离子含量下降,同时mTORC1信号通路中mTOR、S6K mRNA水平及蛋白磷酸化表达上调,4E/BP1 mRNA水平及蛋白磷酸化表达下调;在加入pp242抑制mTORC1信号表达后,mTOR、S6K mRNA水平及蛋白磷酸化表达下调,4E/BP1 mRNA水平及蛋白磷酸化表达上调,BMMCs成骨分化效应显著被抑制,Runx2、Osterix的mRNA水平和蛋白表达显著下调,ALP及OCN表达下调,细胞内钙离子含量增高。结论Kae通过mTORC1信号通路促进牵张力下小鼠BMMCs成骨分化。 展开更多
关键词 骨髓间充质细胞 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1 单轴牵张力 牵张成骨 碱性磷酸酶 骨钙素 Runt相关转录因子 核糖体蛋白S6激酶 山奈酚
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The gene expression patterns of BMPR2,EP300,TGFβ2,and TNFAIP3 in B-Lymphoma cells 被引量:1
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作者 Dong-Mei He Hong Wu +3 位作者 Xiu-Li Wu Li Ding Ling Xu Yang-Qiu Li 《Cancer Biology & Medicine》 SCIE CAS CSCD 2014年第3期202-207,共6页
Objective: The results of a previous study showed that a clear dysregulation was evident in the global gene expression of the BCL11A-suppressed B-lymphoma cells. In this study, the bone morphogenetic protein receptor,... Objective: The results of a previous study showed that a clear dysregulation was evident in the global gene expression of the BCL11A-suppressed B-lymphoma cells. In this study, the bone morphogenetic protein receptor, type II(BMPR2), E1 A binding protein p300(EP300), transforming growth factor-β2(TGFβ2), and tumor necrosis factor, and alpha-induced protein 3(TNFAIP3) gene expression patterns in B-cell malignancies were studied. Methods: The relative expression levels of BMPR2, EP300, TGFβ2, and TNFAIP3 mRNA in B-lymphoma cell lines, myeloid cell lines, as well as in cells from healthy volunteers, were determined by real-time quantitative reverse transcriptpolymerase chain reaction(qRT-PCR) with SYBR Green Dye. Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH) was used as reference. Results: The expression level of TGFβ2 mRNA in B-lymphoma cell lines was significantly higher than those in the cells from the healthy control(P<0.05). However, the expression level of TNFAIP3 mRNA in B-malignant cells was significantly lower than that of the healthy control(P<0.05). The expression levels of BMPR2 and EP300 mRNA showed no significant difference between B-malignant cell lines and the healthy group(P>0.05). In B-lymphoma cell lines, correlation analyses revealed that the expression of BMPR2 and TNFAIP3(r=0.882, P=0.04) had significant positive relation. The expression levels of BMPR2, EP300, and TNFAIP3 mRNA in cell lines from myeloid leukemia were significantly lower than those in the cells from the healthy control(P<0.05). The expression levels of TGFβ2 mRNA showed no significant difference between myeloid leukemia cell lines and the healthy control or B-malignant cell lines(P>0.05). The expression levels of BMPR2, EP300, and TNFAIP3 mRNA in B-lymphoma cells were significantly higher than those of the myeloid leukemia cells(P<0.05).Conclusion: Different expression patterns of BMPR2, EP300, TGFβ2, and TNFAIP3 genes in B-lymphoma cells exist. 展开更多
关键词 bone morphogenetic protein receptor type II(BMPR2) E1A binding protein p300(EP300) transforming growth factor-β2(TGFβ2) tumor necrosis factor and alpha-induced protein 3(TNFAIP3) B-lymphoma cells myeloid leukemia cells quantitative reverse transcription polymerase chain reaction(qRT-PCR)
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mTORC1信号通路在张应力下对小鼠骨髓间充质细胞成骨分化的作用 被引量:2
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作者 彭海艳 蒋校文 +1 位作者 黄华庆 陈金勇 《口腔疾病防治》 2020年第4期219-223,共5页
目的探讨哺乳动物雷帕霉素复合物1(mammalian target of rapamycin complex 1,m TORC1)信号通路在周期性单轴牵张力作用下对小鼠骨髓间充质细胞(bone marrow mesenchymal cells,BMMSCs)的成骨分化的作用。方法对体外分离培养的小鼠BMMSC... 目的探讨哺乳动物雷帕霉素复合物1(mammalian target of rapamycin complex 1,m TORC1)信号通路在周期性单轴牵张力作用下对小鼠骨髓间充质细胞(bone marrow mesenchymal cells,BMMSCs)的成骨分化的作用。方法对体外分离培养的小鼠BMMSCs施加形变量10%的单轴动态牵张力,在牵张后0、1、2、4、8 h利用western blot检测内源性mTORC1信号通路主要分子mTOR、Raptor、核糖体蛋白S6激酶(ribosomal proteinS6kinases,S6K)的表达变化,并利用化学比色法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的活性变化,ELISA法检测检测骨钙素(osteocalcin,OCN)表达量,RT-PCR法检测Runt相关转录因子(Runt-related transcription factor 2,Runx2)的mRNA表达变化。将BMMSCs分为抑制组、激活组及对照组,分别加入工具药PP242、MHY1485及PBS,加力2 h后用上述方法检测S6K与成骨信号相关因子的活性或表达变化。结果Western blot结果显示,mTORC1信号通路主要分子在牵张力作用后的8 h内均有表达,并在加力后2 h表达最高。与对照组相比,抑制mTORC1信号通路表达后,ALP活性、OCN表达下降,Runx2的mRNA水平上升,差异均具有统计学意义(P<0.001);激活mTORC1信号通路表达后,ALP活性、OCN表达上升,而Runx2 mRNA水平下降,差异均具有统计学意义(P<0.001)。结论 mTORC1信号通路参与了牵张力下小鼠BMMSCs成骨分化过程,激活该信号通路可以促进其成骨分化。 展开更多
关键词 骨髓间充质细胞 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1 周期性单轴牵张力 牵张成骨 碱性磷酸酶 骨钙素 Runt相关转录因子 核糖体蛋白S6激酶
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四项免疫组化标志物在诊断甲状腺乳头状癌中的临床意义 被引量:4
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作者 李天一 吴钢 蔡端 《上海医药》 CAS 2014年第10期24-27,共4页
目的 :探讨Ki67核抗原(Ki67),甲状腺转录因子-1(TTF-1),人表皮生长因子受体-2(HER-2/neu)和人骨髓内皮细胞-1(HBME-1)对于鉴别诊断甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)和甲状腺良性结节的临床意义。方法 :回顾分析180例PTC... 目的 :探讨Ki67核抗原(Ki67),甲状腺转录因子-1(TTF-1),人表皮生长因子受体-2(HER-2/neu)和人骨髓内皮细胞-1(HBME-1)对于鉴别诊断甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)和甲状腺良性结节的临床意义。方法 :回顾分析180例PTC和190例甲状腺良性结节的石蜡切片,采用免疫组化法检测Ki67,TTF-1,HBME-1和HER-2/neu水平。结果 :4种标志物在PTC中表达的阳性率明显高于甲状腺良性结节(P=0.000)。采用单一标志物检测时,HER-2/neu的敏感性最高(79.4%),TTF-1的特异性最高(96.8%)。Ki67+HER-2/neu+HBME-1 3者联合检测的敏感性最高(89.8%),HER-2/neu+TTF-1和HER-2/neu+TTF-1+HBME-1联合检测具有相同的特异性(99.4%,P<0.01)。结论:在PTC中,Ki67和TTF-1在联合HER-2/neu或(和)HBME-1检测时,可显著提高单项指标检测PTC的敏感性和特异性。 展开更多
关键词 甲状腺乳头状癌 Ki67核抗原 甲状腺转录因子-1 人表皮生长因子受体-2 人骨髓上皮细胞-1
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高迁移率族蛋白B1调控Janus激酶2/信号转导与转录激活子3信号促进骨髓间充质干细胞成骨分化
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作者 赵明志 肖家正 +8 位作者 周钊鑫 朱豪爽 白超文 董启榕 徐又佳 徐炜 周海斌 周晓中 佘昶 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2023年第11期2184-2187,共4页
目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMBG1)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响,分析可能的基础机制。方法:根据成骨培养基含HMGB1浓度的不同,分组处理BMSCs,使用蛋白质印迹法(Western blot)、QPCR和碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红染色等方... 目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMBG1)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响,分析可能的基础机制。方法:根据成骨培养基含HMGB1浓度的不同,分组处理BMSCs,使用蛋白质印迹法(Western blot)、QPCR和碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红染色等方法检测其信号激活、成骨标志蛋白表达和成骨分化矿化情况。使用含Janus激酶2/信号转导与转录激活子3(JAK2/STAT3)通路抑制剂和含HMGB1的成骨培养基处理BMSCs,通过Western blot验证JAK2/STAT3通路与HMGB1成骨分化能力的相关性。选用C57BL/6小鼠构建股骨骨折模型,使用HMGB1腹腔注射骨折模型小鼠,μCT扫描统计两组BV/TV值,以上实验使用t检验用于两组间比较。结果:在BMSCs中HMGB1能刺激关键转录因子JAK2和STAT3蛋白磷酸化,对照组成骨标志蛋白与基因的表达水平低于50 ng/ml HMGB1组(1.035±0.280比11.560±0.317,t=49.420,P<0.001;1.000±0.078比12.910±2.115,t=11.280,P<0.001),ALP染色及茜素红染色结果证明,HMGB1促进了BMSCs的成骨分化与矿化。使用JAK2/STAT3通路抑制剂后,HMGB1组成骨标志物的表达高于Stattic组和AG490组(0.670±0.036比0.171±0.031,t=18.140,P<0.001;0.670±0.036比0.138±0.019,t=22.630,P<0.001。1.025±0.038比0.482±0.046,t=15.770,P<0.001,1.025±0.038比0.539±0.038,t=6.124,P<0.01),骨折模型小鼠对照组的BV/TV值低于HMGB1组(0.442±0.044比0.605±0.015,P<0.05)也验证了其促骨折愈合的作用。结论:HMGB1在体外可以通过JAK2/STAT3通路促进BMSCs的成骨分化,由此推测HMGB1可能是在PMOP的骨循环中起复杂作用的重要靶点。 展开更多
关键词 JANUS激酶2 信号转导和转录激活因子3 高迁移率族蛋白B1 骨髓间充质干细胞
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