目的:研究丁酸钠、曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)及腺病毒E1A相关的300 kD蛋白(adenoviral E1A binding protein of 300 kD,P300)介导的组蛋白乙酰化在人非小细胞肺癌A549细胞及人支气管上皮BEAS-2B细胞中对哮喘易感的解整合素金属...目的:研究丁酸钠、曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)及腺病毒E1A相关的300 kD蛋白(adenoviral E1A binding protein of 300 kD,P300)介导的组蛋白乙酰化在人非小细胞肺癌A549细胞及人支气管上皮BEAS-2B细胞中对哮喘易感的解整合素金属蛋白酶33(a disintegrin and metalloproteinase 33,ADAM33)基因表达的影响。方法:将A549细胞及BEAS-2B细胞分别分为丁酸钠对照组(双蒸水处理)和1、2.5、5 mmol/L丁酸钠组,TSA对照组(0.1%二甲基亚砜处理)和0.2、0.4、0.8μmol/L TSA组,按照组别分别予以相应处理;另将BEAS-2B细胞分为对照组(转染P300突变质粒)和P300组(转染P300表达质粒);采用双荧光素酶报告基因法分析ADAM33启动子活性的变化,实时荧光定量PCR(quantitative real time-PCR,qRT-PCR)检测ADAM33 mRNA表达,蛋白质印迹法检测ADAM33蛋白表达。结果:在人非小细胞肺癌A549细胞中,与对照组相比,1 mmol/L丁酸钠组及0.2μmol/L TSA组ADAM33基因启动子活性明显降低(P<0.01);在BEAS-2B细胞中,与对照组相比,1 mmol/L丁酸钠组及0.2μmol/L TSA组ADAM33基因启动子活性、mRNA及蛋白相对表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。加大丁酸钠、TSA药物浓度,ADAM33表达无显著差异。在人支气管上皮BEAS-2B细胞中,与对照组相比,P300组ADAM33启动子活性、mRNA和蛋白相对表达水平明显降低(P<0.05)。结论:丁酸钠、TSA通过组蛋白乙酰化降低人非小细胞肺癌A549细胞和人支气管上皮BEAS-2B细胞中ADAM33表达,P300通过组蛋白乙酰化降低人支气管上皮BEAS-2B细胞中ADAM33表达。展开更多
目的探讨白介素-4(IL-4)和白介素-13(IL-13)对人肺成纤维细胞ADAM33(a disintegrin and a metal-loproteinase33,ADAM33)mRNA表达的影响。方法以不同浓度的IL-4或/和IL-13刺激培养的人肺成纤维细胞(MRC-5),然后用实时定量反转录多聚酶...目的探讨白介素-4(IL-4)和白介素-13(IL-13)对人肺成纤维细胞ADAM33(a disintegrin and a metal-loproteinase33,ADAM33)mRNA表达的影响。方法以不同浓度的IL-4或/和IL-13刺激培养的人肺成纤维细胞(MRC-5),然后用实时定量反转录多聚酶链反应(real-time RT-PCR)法测定ADAM33mRNA表达的变化。结果人肺成纤维细胞上存在着ADAM33mRNA的表达,当分别以10ng/mL的IL-4或IL-13刺激时,AD-AM33mRNA的表达增加呈现时间依赖性,至24h达到高峰。随着IL-4和IL-13刺激浓度的增加,ADAM33mRNA的表达也明显增加:以100ng/mL的IL-4和100ng/mL的IL-13刺激时,ADAM33mRNA的表达较未刺激细胞分别增加了(9.49±2.83)倍和(14.21±3.35)倍(P<0.01);而以10ng/mL的IL-4和10ng/mL的IL-13联合刺激时,ADAM33mRNA的表达较未刺激细胞增加了(15.06±4.57)倍(P<0.01)。结论IL-4和IL-13能明显促进肺成纤维细胞ADAM33mRNA的表达。展开更多
目的探索整合素-金属蛋白酶33(A Disintegrin And Metalloproteinase33,ADAM33)基因T2位点多态性与支气管哮喘的相关性。方法研究对象选取本院呼吸内科2015年6月~2016年12月期间收治的哮喘患儿120例作为观察组,同期入本院体检的12...目的探索整合素-金属蛋白酶33(A Disintegrin And Metalloproteinase33,ADAM33)基因T2位点多态性与支气管哮喘的相关性。方法研究对象选取本院呼吸内科2015年6月~2016年12月期间收治的哮喘患儿120例作为观察组,同期入本院体检的120名健康儿童作为对照组。患儿入院均行上肢肘静脉抽血并提取DNA,随后进行聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism,PCR-RFLP)和测序分型。比较2组患儿按照Hardy-Weinberg平衡定律检验结果、T2位点基因型分布频率以及T2位点基因频率分布及其与哮喘相对危险度。结果2组受试对象T2位点基因频率均满足Hardy-Weinberg平衡定律,具有良好的群体代表性;观察组受试对象T2等位基因中A的基因频率明显高于对照组,2组受试对象比较差异有统计学意义(χ2=8.09,P=0.00),且A等位基因的增加是患哮喘的高危因素(OR=2.32);观察组受试对象T2位点AG基因型频率明显高于对照组,2组受试对象间比较差异有统计学意义(χ2=4.21,P=0.04),且AG等位基因的增加是患哮喘的高危因素(OR=1.89)。结论ADAM33基因T2位点多态性与支气管哮喘明显相关,其能显著增加患支气管哮喘的可能性。展开更多
目的:探讨转录因子GATA结合蛋白3(GATA binding protein 3,GATA3)对解整合素金属蛋白酶33(a disintegrin and metalloproteinase 33,ADAM33)基因启动子活性及mRNA表达的影响。方法:以人正常肺上皮BEAS-2B细胞DNA为模板经PCR扩增得到ADA...目的:探讨转录因子GATA结合蛋白3(GATA binding protein 3,GATA3)对解整合素金属蛋白酶33(a disintegrin and metalloproteinase 33,ADAM33)基因启动子活性及mRNA表达的影响。方法:以人正常肺上皮BEAS-2B细胞DNA为模板经PCR扩增得到ADAM33基因启动子区1953 bp片段。通过双酶切、连接、转化等步骤将该片段克隆至pGL3-Basic载体构建ADAM33启动子重组质粒,并将其转染至人HEK293T、BEAS-2B细胞中;利用双荧光素酶报告基因技术检测HEK293T、BEAS-2B细胞中所构建的质粒启动子活性。将HEK293T、BEAS-2B细胞分为pcDNA-GATA3组和pcDNA3.1对照组,分别转染GATA3过表达质粒和空白对照质粒,用双荧光素酶报告基因技术检测荧光素酶活性;用实时荧光定量PCR检测BEAS-2B细胞中ADAM33 mRNA相对表达水平。结果:通过PCR、双酶切和测序鉴定,成功构建含ADAM33启动子片段的重组质粒;重组质粒的ADAM33启动子活性较pGL3-Basic对照组明显增高。与pcDNA3.1组相比,HEK293T、BEAS-2B细胞中pcDNA-GATA3组ADAM33启动子区荧光素酶活性明显增高(P<0.05或P<0.01);BEAS-2B细胞中pcDNA-GATA3组ADAM33 mRNA相对表达水平明显增高(P<0.01)。结论:转录因子GATA3上调哮喘易感基因ADAM33启动子活性及mRNA表达。展开更多
文摘目的探讨白介素-4(IL-4)和白介素-13(IL-13)对人肺成纤维细胞ADAM33(a disintegrin and a metal-loproteinase33,ADAM33)mRNA表达的影响。方法以不同浓度的IL-4或/和IL-13刺激培养的人肺成纤维细胞(MRC-5),然后用实时定量反转录多聚酶链反应(real-time RT-PCR)法测定ADAM33mRNA表达的变化。结果人肺成纤维细胞上存在着ADAM33mRNA的表达,当分别以10ng/mL的IL-4或IL-13刺激时,AD-AM33mRNA的表达增加呈现时间依赖性,至24h达到高峰。随着IL-4和IL-13刺激浓度的增加,ADAM33mRNA的表达也明显增加:以100ng/mL的IL-4和100ng/mL的IL-13刺激时,ADAM33mRNA的表达较未刺激细胞分别增加了(9.49±2.83)倍和(14.21±3.35)倍(P<0.01);而以10ng/mL的IL-4和10ng/mL的IL-13联合刺激时,ADAM33mRNA的表达较未刺激细胞增加了(15.06±4.57)倍(P<0.01)。结论IL-4和IL-13能明显促进肺成纤维细胞ADAM33mRNA的表达。
文摘目的探索整合素-金属蛋白酶33(A Disintegrin And Metalloproteinase33,ADAM33)基因T2位点多态性与支气管哮喘的相关性。方法研究对象选取本院呼吸内科2015年6月~2016年12月期间收治的哮喘患儿120例作为观察组,同期入本院体检的120名健康儿童作为对照组。患儿入院均行上肢肘静脉抽血并提取DNA,随后进行聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism,PCR-RFLP)和测序分型。比较2组患儿按照Hardy-Weinberg平衡定律检验结果、T2位点基因型分布频率以及T2位点基因频率分布及其与哮喘相对危险度。结果2组受试对象T2位点基因频率均满足Hardy-Weinberg平衡定律,具有良好的群体代表性;观察组受试对象T2等位基因中A的基因频率明显高于对照组,2组受试对象比较差异有统计学意义(χ2=8.09,P=0.00),且A等位基因的增加是患哮喘的高危因素(OR=2.32);观察组受试对象T2位点AG基因型频率明显高于对照组,2组受试对象间比较差异有统计学意义(χ2=4.21,P=0.04),且AG等位基因的增加是患哮喘的高危因素(OR=1.89)。结论ADAM33基因T2位点多态性与支气管哮喘明显相关,其能显著增加患支气管哮喘的可能性。