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间质干细胞培养上清对日本血吸虫SEA诱导活化的巨噬细胞株RAW264.7的抑制作用 被引量:2
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作者 徐会娟 钱晖 +5 位作者 朱伟 张徐 严永敏 张蕾蕾 毛飞 许文荣 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期425-430,共6页
目的观察大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)培养上清对日本血吸虫可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)诱导活化的巨噬细胞的抑制作用。方法用5、10、20和40μg/ml SEA分别诱导巨噬细胞株RAW264.7 12 h,或用20μg/ml ... 目的观察大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)培养上清对日本血吸虫可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)诱导活化的巨噬细胞的抑制作用。方法用5、10、20和40μg/ml SEA分别诱导巨噬细胞株RAW264.7 12 h,或用20μg/ml SEA分别诱导小鼠巨噬细胞株(RAW264.7)4、8、12和24 h后,用实时荧光定量PCR检测α肿瘤坏死因子(TNF-α)的mRNA水平,选择SEA的最佳作用浓度和作用时间。将巨噬细胞分成5组,分别为阴性对照组、SEA组、SEA+MSC上清组(MSC组)、SEA+大鼠肾小管上皮细胞株(NRK-52E)上清组(NRK-52E组)和SEA+DMEM细胞培养基组(DMEM组)。除阴性对照组外,其他各组给予20μg/ml SEA诱导巨噬细胞活化12 h后,MSC组、NRK-52E组和DMEM组换液撤SEA,分别给予MSC培养上清、NRK-52E细胞培养上清和DMEM培养液,继续培养。显微镜观察细胞上清培养12 h后各组细胞形态。实时荧光定量PCR检测细胞上清培养12 h和24 h后TNF-αmRNA水平。蛋白质印迹(Western blotting)分析检测细胞上清培养12 h后转化生长因子β1(TGF-β1)的蛋白表达水平。噻唑蓝比色法(MTT法)测定细胞上清培养24 h和48 h后巨噬细胞增殖情况。结果 SEA活化巨噬细胞的最佳浓度和时间分别为20μg/ml和12 h。镜下观察显示,MSC上清培养12 h后,MSC组与SEA组、NRK-52E组和DMEM组相比,细胞变圆,体积明显较小,伪足较少。MSC上清作用12 h和24 h后,MSC组TNF-αmRNA水平分别为阴性对照组的(1.0±0.4)和(1.0±0.5)倍,显著低于NRK-52E组[分别为(10.4±3.9)和(16.5±5.0)倍(12 h:P<0.05;24 h:P<0.01)]和DMEM组[分别为(6.0±2.1)和(2.4±0.7)倍(均P<0.05)]。MSC上清作用12 h后,MSC组蛋白TGF-β1/GAPDH为0.31±0.10,显著低于NRK-52E组(0.88±0.10,P<0.01)和DMEM组(0.58±0.06,P<0.05)。MSC上清作用48 h后,MSC组吸光度(A490值)为0.22±0.05,与NRK-52E组(0.53±0.02)和DMEM组(0.31±0.03)比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 MSC培养上清能抑制SEA诱导的巨噬细胞株RAW264.7活化。 展开更多
关键词 间质干细胞 日本血吸虫 巨噬细胞 可溶性虫卵抗原
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日本血吸虫尾蚴成虫及虫卵的早期诊断组分抗原分析 被引量:14
2
作者 华万全 许永良 +3 位作者 余传信 戴建荣 何伟 曹国群 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2005年第5期351-355,共5页
目的寻找具有血吸虫病早期诊断价值的组分抗原。方法以感染后不同时间的兔血清,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Westernblotting)方法,对日本血吸虫尾蚴、成虫和虫卵中的可溶性抗原的成分进行免疫分析。结果可溶性... 目的寻找具有血吸虫病早期诊断价值的组分抗原。方法以感染后不同时间的兔血清,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Westernblotting)方法,对日本血吸虫尾蚴、成虫和虫卵中的可溶性抗原的成分进行免疫分析。结果可溶性尾蚴抗原(SCA)94、48、41、40kDa和38kDa组分抗原最早出现免疫印迹反应,能被感染后2周兔血清所识别,可被感染后3周兔血清识别的SCA71、23kDa组分抗原反应最强。可溶性成虫抗原(AWA)最早出现反应的组分抗原是71、58kDa,能被感染后3周兔血清所识别。可溶性虫卵抗原(SEA)最早出现反应的组分抗原是270、151、73、69、50kDa和24kDa,能被感染后4周兔血清所识别。结论SCA94、71、48、41、40、38、23kDa,AWA71、58kDa和SEA270、151、73、69、50、24kDa能被急性感染兔血清所识别,是具有潜在早期诊断价值的组分抗原。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 早期诊断 可溶性尾蚴抗原 可溶性成虫抗原 可溶性虫卵抗原
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卵黄抗体IgY检测血吸虫病人循环抗原的初步研究 被引量:8
3
作者 张炜明 吴玉龙 +4 位作者 刘文琪 仇镇宁 冯振卿 李雍龙 管晓虹 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2008年第1期16-19,共4页
目的探讨抗可溶性虫卵抗原(SEA)卵黄抗体(IgY)检测血吸虫循环抗原的应用价值。方法以纯化的鸡IgY作为捕捉抗体,以酶标抗SEA单克隆抗体NP28-5B为检测抗体的双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(S-ELISA)检测急、慢性血吸虫病人和健康人血清,并... 目的探讨抗可溶性虫卵抗原(SEA)卵黄抗体(IgY)检测血吸虫循环抗原的应用价值。方法以纯化的鸡IgY作为捕捉抗体,以酶标抗SEA单克隆抗体NP28-5B为检测抗体的双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(S-ELISA)检测急、慢性血吸虫病人和健康人血清,并与常规检测抗体的酶联免疫吸附试验法(SEA-ELISA)作比较。结果S-ELISA测得SEA浓度(y)与吸光度(A450)值(x)呈明显的正相关(y=459.22x-108.14,r=0.9481)。急性血吸虫病人循环抗原的阳性率为100.00%(9/9),慢性血吸虫病人循环抗原的阳性率为84.44%(38/45),健康人的特异性为96.00%(48/50)。两种方法对血吸虫病的检出率差异无统计学意义(P>0.05)。结论S-ELISA具有较好的敏感性和特异性,可用于血吸虫病免疫诊断。 展开更多
关键词 血吸虫病 免疫诊断 循环抗原 IGY 可溶性虫卵抗原 酶联免疫吸附试验
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重组Sj26(rSj26)抗原免疫酶测定新方法诊断日本血吸虫病的研究 被引量:22
4
作者 谢可鸣 陈家旭 +5 位作者 刘述先 龚唯 胡永德 夏超明 宋光承 李允鹤 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 1995年第4期219-222,共4页
将日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和重组Sj26(rSj26)抗原致敏的硝酸纤维素膜片(NCD)用于膜片免疫酶测定(D-IEA),分别检测同批日本血吸虫病人、卫氏并殖吸虫病人、华支睾吸虫病人和健康人血清104例的特异性抗体,同时用目测及光密度(OD)... 将日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和重组Sj26(rSj26)抗原致敏的硝酸纤维素膜片(NCD)用于膜片免疫酶测定(D-IEA),分别检测同批日本血吸虫病人、卫氏并殖吸虫病人、华支睾吸虫病人和健康人血清104例的特异性抗体,同时用目测及光密度(OD)值测定两种方法判断反应结果。结果显示,分别采用上述两种抗原检测所获的阳性率或假阳性率间无显著性差异。此结果首次提示rSj26抗原的血清诊断效果与目前血吸虫病血清学方法常用抗原SEA相似。本文报告的免疫酶测定新方法,可同时采用两种方法判断结果,迄今尚未见到类似报道。试验结果均表明用D-IEA检测时显示高度的敏感性(92.1%—94.7%)和特异性(0.0%—2.9%),具有实用价值。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 血清学诊断 膜片免疫酶测定法 重组Sj26抗原 可溶性血吸虫卵抗原
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过碘酸钠氧化可溶性虫卵抗原ELISA诊断血吸虫病的研究 被引量:5
5
作者 黄跃龙 易新元 +2 位作者 曾宪芳 张冉 袁仕善 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期238-241,共4页
目的 改进可溶性虫卵抗原-酶联免疫吸附试验(SEA-ELISA),进一步提高其诊断血吸虫病的敏感性、特异性及疗效考核价值。方法 应用过碘酸钠(sodium Perodate,SP)处理SEA,氧化其糖基化表位,建立SP-SEA-ELISA,检测血吸虫病患者血清中的特异... 目的 改进可溶性虫卵抗原-酶联免疫吸附试验(SEA-ELISA),进一步提高其诊断血吸虫病的敏感性、特异性及疗效考核价值。方法 应用过碘酸钠(sodium Perodate,SP)处理SEA,氧化其糖基化表位,建立SP-SEA-ELISA,检测血吸虫病患者血清中的特异性抗体,并与常规SEA-ELISA进行比较。结果 分别用两种方法检测患者血清,其中慢性血吸虫病64例、华支睾吸虫病34例、卫氏并殖吸虫病33例、囊尾蚴病36例,检测健康人血清119例。SP-SEA-ELISA特异性为99.2%,高于SEA-ELISA,敏感性为98.4%,与SEA-ELISA比较无明显降低。用SP-SEA-ELISA及SEA-ELISA检测治疗后12个月的慢性血吸虫病患者血清,阴性率为89.0%,明显优于SEA-ELISA(42.1%)。结论 过碘酸钠处理SEA,可提高免疫诊断特异性,降低交叉反应,有一定的疗效考核价值。 展开更多
关键词 过碘酸钠 氧化 可溶性虫卵抗原 ELISA 诊断 血吸虫病
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检测日本血吸虫抗体标准化间接血凝试剂盒的研制 被引量:22
6
作者 王恩木 许强 +4 位作者 张世清 章乐生 谢静芬 郝晓君 肖祥 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第6期421-423,403,共4页
目的研制检测日本血吸虫抗体(IHA)的标准化间接血凝试剂盒。方法通过不同筛目尼龙绢和低频超声等方法制备、纯化日本血吸虫可溶性虫卵抗原,致敏人"O"型血红细胞;按医学决定水平确定免疫学质量控制标准及参考,优选原材料质量,... 目的研制检测日本血吸虫抗体(IHA)的标准化间接血凝试剂盒。方法通过不同筛目尼龙绢和低频超声等方法制备、纯化日本血吸虫可溶性虫卵抗原,致敏人"O"型血红细胞;按医学决定水平确定免疫学质量控制标准及参考,优选原材料质量,规范生产工艺,研究制定反应体系的标准化,生产IHA试剂盒并进行鉴定。结果用生产的IHA试剂盒检测50例急性血吸虫病人血清全部阳性,检测201份慢性血吸虫病患者血清,193份阳性,敏感性96.0%;200份健康人血清均为阴性,特异性100%;肝吸虫、姜片虫、钩虫及乙肝患者血清均为阴性,肺吸虫病的交叉反应率为19.4%(6/31)。IHA试剂盒批内变异和批间变异小,有效诊断率为97.9%。同一批试剂盒在室温、4℃条件下保存3年未见效价明显改变。结论研制的IHA试剂盒具有较高的特异性和敏感性,可标准化生产。该试剂盒具有操作方便、快速、结果判断容易,不需要特殊的仪器设备,价格低廉等优点,可广泛用于现场查病。 展开更多
关键词 血吸虫 日本 可容性虫卵抗原 IHA 标准化
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黄芪总苷对血吸虫卵抗原活化的肝星状细胞增殖与胶原合成的影响 被引量:10
7
作者 朱虹 吴强 +3 位作者 杨雁 袁小松 汪学龙 沈继龙 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期555-558,共4页
目的观察黄芪总苷对血吸虫卵抗原活化的肝星状细胞增殖与胶原合成的影响。方法小鼠腹腔注射日本血吸虫可溶性虫卵抗原(Solub le egg antigen,SEA),制备SEA活化的腹腔巨噬细胞条件培养基(Solub le egg antigen inducedm acrophage cond i... 目的观察黄芪总苷对血吸虫卵抗原活化的肝星状细胞增殖与胶原合成的影响。方法小鼠腹腔注射日本血吸虫可溶性虫卵抗原(Solub le egg antigen,SEA),制备SEA活化的腹腔巨噬细胞条件培养基(Solub le egg antigen inducedm acrophage cond itioned m ed ium,SEA-MCM)。采用肝星状细胞株HSC-T6细胞,以细胞增殖抑制率为指标,用噻唑蓝(MTT)测定黄芪总苷对SEA-MCM诱导的HSC-T6细胞增殖的影响;通过3H-脯氨酸参入法测定黄芪总苷对SEA-MCM诱导的HSC-T6细胞胶原合成的影响。结果SEA-MCM能明显促进HSC-T6细胞的增殖和胶原合成。黄芪总苷(32.5、65和130 mg.L-1)对SEA-MCM诱导的HSC-T6细胞增殖及胶原合成有明显的抑制作用,且呈药物浓度依赖性关系。结论黄芪总苷对SEA-MCM诱导的肝星状细胞增殖及胶原合成有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 黄芪总苷 血吸虫可溶性虫卵抗原 肝星状细胞 增殖 胶原合成
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日本血吸虫可溶性虫卵抗原38kDa分子Dipstick快速诊断模式的初步建立 被引量:8
8
作者 周晓红 陈晓光 +3 位作者 戴琳 胡旭初 李华 刘国章 《热带医学杂志》 CAS 2001年第1期25-27,共3页
目的 建立简便的血吸虫病Dipstick快速诊断比方法 以纯化的日本血吸虫虫卵可溶性抗原(SEA)38kDa分子为诊断抗原,以胶体金标记的鼠抗人IgG为二抗,建立 Dipstick快速诊断体系;检测日本血吸虫病人血清,... 目的 建立简便的血吸虫病Dipstick快速诊断比方法 以纯化的日本血吸虫虫卵可溶性抗原(SEA)38kDa分子为诊断抗原,以胶体金标记的鼠抗人IgG为二抗,建立 Dipstick快速诊断体系;检测日本血吸虫病人血清,急性期37例、慢性期30例,正常人52例,肝吸虫病人血清30例。结果 所测得的阳性率分别为94.6%、86.7%、1.9%、0%.伯论 以 EA 38kDa纯化分子建立的血吸虫病Dipstick快速诊断法具有较好的敏感性和特异性,且简便快捷。 展开更多
关键词 日本血吸虫 可溶性虫卵抗原 38kDa抗原 免疫诊断 DIPSTICK
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日本血吸虫卵与卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原内的共同抗原组分研究 被引量:12
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作者 曾庆仁 张悟澄 +2 位作者 陈翠娥 聂崇兴 刘多 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第1期31-34,共4页
应用凝胶电泳和免疫印斑技术对日本血吸虫卵与卫氏并殖吸虫成虫的水溶性抗原(JSEA、PAA)和尿素溶性抗原(JEA-u、PAA-u)进行了抗原蛋白组分比较分析。结果显示:两者的特异性抗原显色主带,JSEA、JEA-u分别有8条和3条,PAA、PAA-u分别有9条... 应用凝胶电泳和免疫印斑技术对日本血吸虫卵与卫氏并殖吸虫成虫的水溶性抗原(JSEA、PAA)和尿素溶性抗原(JEA-u、PAA-u)进行了抗原蛋白组分比较分析。结果显示:两者的特异性抗原显色主带,JSEA、JEA-u分别有8条和3条,PAA、PAA-u分别有9条和2条;其中JSEA、JEA-u分别有1条和2条,PAA、PAA-u分别有1条和2条对异种抗血清呈现交叉反应显色带。表明两种吸虫的可溶性抗原均存在共同抗原组分。慢性血吸虫病患者血清与并殖吸虫成虫抗原的交叉反应仅见于PAA,而未见于PAA-u,提示PAA-u在避免交叉反应和抗原纯化方面比PAA较为优越。 展开更多
关键词 血吸虫卵 并殖吸虫成虫 免疫印斑
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芍药苷对小鼠巨噬细胞产生TGF-β1的影响 被引量:13
10
作者 储德勇 李丛磊 +5 位作者 李静 罗飞 郑美娟 吴强 罗庆礼 沈继龙 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期81-85,共5页
目的探讨芍药苷(paeoniflorin,PAE)对血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)刺激小鼠腹腔巨噬细胞(PMs)产生转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法研磨法制备SEA,分别加入含有小鼠PMs的培养板、培养瓶及培养皿中,培养24h,ELISA法测定TGF-β1含量,RT... 目的探讨芍药苷(paeoniflorin,PAE)对血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)刺激小鼠腹腔巨噬细胞(PMs)产生转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法研磨法制备SEA,分别加入含有小鼠PMs的培养板、培养瓶及培养皿中,培养24h,ELISA法测定TGF-β1含量,RT-PCR检测PMs内TGF-β1基因的表达,Western blotting检测PMs内TGF-β1蛋白的表达;在含PMs的培养瓶和培养皿中分别加入10mg/LSEA5ml,培养12h,再分别加入不同浓度的PAE(0、7.5、15、30、60及120mg/L),继续培养12h和24h。RT-PCR与蛋白质印迹(Westernblotting)分别检测PAE对SEA刺激的PMs内TGF-β1基因与蛋白的表达。结果10mg/L的SEA可明显刺激PMs产生TGF-β1(235.86±3.43ng/L),PAE呈浓度依赖性地抑制TGF-β1mRNA的表达(r=-0.827,P<0.01)和TGF-β1蛋白的表达(r=-0.952,P<0.01)。结论PAE能抑制SEA刺激的PMs产生TGF-β1。 展开更多
关键词 芍药苷 日本血吸虫 虫卵可溶性抗原 肝纤维化 转化生长因子Β1 巨噬细胞
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日本血吸虫可溶性虫卵抗原38kDa分子的纯化及诊断价值的初步评估 被引量:14
11
作者 周晓红 陈晓光 +5 位作者 冯明钊 戴泗维 李华 沈树满 徐莉 刘国章 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第3期135-137,共3页
[目的 ]探讨日本血吸虫虫卵可溶性抗原 (SEA) 38k Da分子诊断血吸虫病的应用价值。 [方法 ]用 SDS-PAGE配合电渗洗脱技术分离纯化了诊断靶抗原 SEA38k Da,并经 SDS- PAGE和 Western blot鉴定 ;将 SEA38k Da分子和 SEA用于 EL ISA法检测... [目的 ]探讨日本血吸虫虫卵可溶性抗原 (SEA) 38k Da分子诊断血吸虫病的应用价值。 [方法 ]用 SDS-PAGE配合电渗洗脱技术分离纯化了诊断靶抗原 SEA38k Da,并经 SDS- PAGE和 Western blot鉴定 ;将 SEA38k Da分子和 SEA用于 EL ISA法检测日本血吸虫病患者血清 ,急性期 31例、慢性期 31例 ,正常人 6 0例 ,华支睾吸虫病患者血清 30例 ,并殖吸虫病患者血清 30例。 [结果 ]SEA38k Da分子抗原和 SEA所测得的阳性率分别为90 .3%、90 .3%、1.7%、0、0和 90 .3%、83.9%、3.3%、0、0。将 SEA 38k Da分子和 SEA在 EL ISA中的 P/N比值进行比较 ,经 t检验 ,发现在检测急性血吸虫病患者 ,慢性血吸虫病患者和正常人血清时 ,两者间的 P/N比值在 3组间差异均有显著性意义 (P值均 <0 .0 0 1) ;SEA 38k Da分子在检测患者血清时的 P/N比值显著高于 SEA,而检测正常人血清时的 P/N比值显著低于 SEA。 [结论 ]纯化 SEA38k Da具有较好的敏感性和特异性 。 展开更多
关键词 日本血吸虫 可溶性虫卵抗原 纯化 免疫诊断
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快速诊断家畜日本血吸虫病免疫层析试纸条的研制与初步应用 被引量:4
12
作者 彭运潮 刘金明 +8 位作者 孙安国 柴春彦 石耀军 李浩 陆珂 刘增再 李海辉 胡述光 林矫矫 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2006年第3期197-200,共4页
目的开发研制敏感、简便、快速、经济的日本血吸虫病诊断试纸条。方法利用双抗原夹心法,以日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)为检测抗原,以胶体金标记SEA为探针,采用自行设计的免疫层析试纸条装置,检测家畜血清中血吸虫特异性IgG抗体,并用E... 目的开发研制敏感、简便、快速、经济的日本血吸虫病诊断试纸条。方法利用双抗原夹心法,以日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)为检测抗原,以胶体金标记SEA为探针,采用自行设计的免疫层析试纸条装置,检测家畜血清中血吸虫特异性IgG抗体,并用ELISA方法进行比较。结果用该试纸条检测107份人工感染血吸虫病羊血清,其检出率为91.6%;检测80份健康绵羊血清,阴性符合率为87.5%;检测20份粪检阳性水牛血清及15份粪检阴性血清,其阳性符合率为100.0%,阴性符合率为86.7%;检测24份肝片形吸虫病羊血清,交叉反应率为12.5%,与锥虫病牛血清未见交叉反应;与ELISA检测结果比较,两种方法具有良好的一致性。结论应用试纸条诊断家畜日本血吸虫病敏感性高、特异性强,且操作简便、快速,不需特殊仪器设备,适合于基层使用。 展开更多
关键词 可溶性虫卵抗原 金标免疫层析法 诊断 日本血吸虫病
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日本血吸虫成虫和虫卵可溶性抗原及其组分抗原的研究 被引量:4
13
作者 姜旭淦 傅行礼 +4 位作者 陈盛霞 徐会娟 帅连云 曹建平 仇锦波 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2007年第1期19-22,56,共5页
目的:探讨日本血吸虫雄虫、雌虫、虫卵的可溶性抗原雄虫(AWA-m、雌虫AWA-f、虫卵SEA)及其组分抗原的特性。方法:用DE22纤维素层析柱对日本血吸虫AWA-m,AWA-f,SEA抗原进行纯化,得到相应组分抗原。分别以SDS-PAGE和W estern b lot对组分... 目的:探讨日本血吸虫雄虫、雌虫、虫卵的可溶性抗原雄虫(AWA-m、雌虫AWA-f、虫卵SEA)及其组分抗原的特性。方法:用DE22纤维素层析柱对日本血吸虫AWA-m,AWA-f,SEA抗原进行纯化,得到相应组分抗原。分别以SDS-PAGE和W estern b lot对组分抗原进行全面分析,并与相应未经纯化的可溶性抗原作比较。结果:经DE22纤维素层析处理的AWA-m,AWA-f,SEA,均能获得含多种蛋白的组分抗原。SDS-PAGE结果表明,AWA-m见10条主带和9条次带,其中Mr37 000,28 000,25 000为特异性条带,出现8条免疫反应阳性带;而AWA-m组分抗原为9条蛋白带和6条免疫反应阳性带。AWA-f见15条蛋白带,其中Mr26 500为特异性条带,组分抗原为8条蛋白带。AWA-f粗抗原及其组分抗原均见9条反应带。SEA见8条主带和10条次带,13条为免疫反应阳性条带;SEA组分抗原见11条带,其中9条为免疫反应阳性带。结论:AWA-m,AWA-f,SEA经DE22纤维素层析纯化获得组分抗原,方法简单、可靠。该组分抗原含有粗抗原的主要免疫反应成分,去除了多种与日本血吸虫病免疫反应无关的蛋白。 展开更多
关键词 日本血吸虫 可溶性成虫抗原 可溶性虫卵抗原 组分抗原
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日本血吸虫可溶性虫卵抗原经两种免疫途径获得的鸡卵黄抗体IgY动态观察 被引量:4
14
作者 蔡玉春 陈家旭 +3 位作者 郭俭 陈韶红 童小妹 田利光 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期121-124,共4页
目的对比两种免疫途径产生抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的特异性IgY抗体水平动态变化。方法7只新西兰兔感染日本血吸虫尾蚴(1500/只)42d后解剖收集虫卵,制备SEA。将SEA分别经皮下和静脉注射免疫健康海蓝蛋鸡(3只/组),首次和第2次免... 目的对比两种免疫途径产生抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的特异性IgY抗体水平动态变化。方法7只新西兰兔感染日本血吸虫尾蚴(1500/只)42d后解剖收集虫卵,制备SEA。将SEA分别经皮下和静脉注射免疫健康海蓝蛋鸡(3只/组),首次和第2次免疫间隔2周,之后每次间隔4周,共免疫5次,50μg/(只·次)。取两组免疫前,以及首次免疫后2~18周生产的鸡蛋,用水稀释法粗提IgY,ELISA检测每2周IgY的动态变化。IgY纯化试剂盒(EGGstract IgY Purifiction System)纯化静脉组首次免疫后8~18周的IgY,紫外吸收法检测抗体浓度,琼脂糖双扩散法和ELISA检测IgY峰值水平的抗体效价,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析比较免疫前后抗体特异性。结果静脉组和皮下组分别在首次免疫后8和12周IgY抗体水平达高峰,A492值分别为1.28和0.78,静脉组IgY水平至18周仍维持较高水平,皮下组抗体水平达到峰值后逐渐下降。纯化后IgY浓度约为6.5~9.0mg/ml,琼脂糖双扩散法和ELISA测得静脉注射组峰值水平抗体效价分别为1∶16和1∶51200。经SDS-PAGE和Western blotting分析,纯化后的IgY在相对分子质量(Mr)25000和68000处各有一条清晰条带,且免疫后IgY可与SEA发生特异性反应。结论静脉注射法比皮下注射法能获得更高水平的鸡抗日本血吸虫SEA特异性IgY抗体,且纯化后的IgY抗体具有较好的特异性。 展开更多
关键词 日本血吸虫 可溶性虫卵抗原 IGY 免疫
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日本血吸虫成虫及虫卵可溶性抗原的早期诊断分子筛选 被引量:27
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作者 周晓红 陈晓光 +2 位作者 冯明钊 李华 刘国章 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2000年第1期24-29,共6页
为获取有效的日本血吸虫病早期诊断靶抗原分子。以感染前和感染后2周、4周、6周兔混合血清以及急性、慢性日本血吸虫病人和正常人血清,用Westernblot对日本血吸虫成虫可溶性抗原(AWA)和虫卵可溶性抗原(SEA)进行了全面的分析与筛选。SEA1... 为获取有效的日本血吸虫病早期诊断靶抗原分子。以感染前和感染后2周、4周、6周兔混合血清以及急性、慢性日本血吸虫病人和正常人血清,用Westernblot对日本血吸虫成虫可溶性抗原(AWA)和虫卵可溶性抗原(SEA)进行了全面的分析与筛选。SEA140kDa和AWA54kDa、21kDa、20kDa分子出现最早,能被感染后2周兔血清所识别;SEA69kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA72kDa、45kDa、34kDa、15kDa相继能被感染后4周兔血清所识别;其中SEA140kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA34kDa、21kDa、54kDa、15kDa与病人血清反应同6周兔血清反应效果相仿,均为免疫反应主带,且在SDS-PAGE上有对应的蛋白主带,具有潜在的早期诊断价值。进一步对SEA进行抗体类型的分析,发现SEA能刺激机体产生IgG、IgM和IgA反应,其中SEA50kDa、45kDa、38kDa三个抗原分子均能被IgG、IgM、IgA三种抗体所识别,且均为反应主带;SEA140kDa以IgM反应带最深;SEA100kDa反应带仅出现于病人血清,以IgM反应最强,且其与IgM反应带在急性病人血清明显深于慢性病人血清,表明针对IgM的SEA100kDa分子也具有一定的早期诊断和区分病程的价值。SEA140kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA34kDa、21kDa、54kDa、15kDa和针对IgM的SEA100kDa分子是具有潜在早期诊断价值的优势靶抗原分子。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 早期诊断 AWA sea IGG IGM IGA
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日本血吸虫未成熟卵单链抗体库的构建、筛选及初步应用 被引量:13
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作者 何卓 汪世平 +4 位作者 肖小芹 曾少华 刘明社 李林 周帅锋 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第8期921-928,共8页
运用噬菌体展示技术构建日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)单链抗体(scFv)表达文库,以天然分子候选疫苗SIEA26~28ku为靶抗原筛选SIEA单链抗体库,获得特异性单链抗体.并将该scFv基因亚克隆至原核高效表达载体PET32a,诱导SIEA26~28k... 运用噬菌体展示技术构建日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)单链抗体(scFv)表达文库,以天然分子候选疫苗SIEA26~28ku为靶抗原筛选SIEA单链抗体库,获得特异性单链抗体.并将该scFv基因亚克隆至原核高效表达载体PET32a,诱导SIEA26~28ku特异性scFv大量表达.随后以此为探针筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库,以期获得SIEA26~28ku天然分子候选疫苗相关的编码基因.结果显示,所获得的SIEA26~28ku特异性scFv,表达量高,采用该探针初步筛选出相关基因核糖体蛋白S4.SIEA26~28ku特异性scFv的获得,为进一步筛选、分析鉴定抗日本血吸虫病天然分子候选疫苗SIEA26~28ku的编码基因奠定了基础. 展开更多
关键词 日本血吸虫 未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA) 单链抗体(scFv) 噬菌体展示抗体库 CDNA文库
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应用免疫蛋白质组学方法鉴定日本血吸虫虫卵诊断抗原 被引量:3
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作者 王越 杨再峰 +4 位作者 马安 施晓华 陈璋辉 刘晓龙 干小仙 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期861-865,881,共6页
目的虫卵可溶性抗原(soluble egg antigen,SEA)是目前日本血吸虫病免疫诊断中最常用的抗原。本研究联合应用双向凝胶电泳(2-DE)、Western blot和MALDI-TOF质谱等技术,鉴定SEA中诊断抗原蛋白质。方法 SEA经2-DE分离蛋白质后进行银染,或... 目的虫卵可溶性抗原(soluble egg antigen,SEA)是目前日本血吸虫病免疫诊断中最常用的抗原。本研究联合应用双向凝胶电泳(2-DE)、Western blot和MALDI-TOF质谱等技术,鉴定SEA中诊断抗原蛋白质。方法 SEA经2-DE分离蛋白质后进行银染,或应用日本血吸虫感染兔血清Western blot筛选抗原蛋白点,用MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定每一抗原蛋白质分子。结果虫卵可溶性蛋白分子经2-DE分离后转印PVDF膜上,与感染兔血清孵育出现29个特异性阳性反应点,与健康兔血清出现3个非特异的阳性反应点;29个特异性抗阳性反应点中,从银染2-DE胶图上找到21个匹配的抗原蛋白质点;MALDI-TOF/TOF质谱鉴定和NCBI数据库检索,13个点(61.9%)获得匹配蛋白质,4个点(19.0%)获得匹配EST,4个点(19.0%)未能从数据库中找到相匹配的信息。重组表达筛选出的SjCHGC06040和SjP40两个抗原蛋白质,Western blot结果显示reSjCHGC06040、reSjP40均能与感染兔血清抗体发生特异性反应,具有潜在的应用价值。结论 2-DE、MALDI-TOF质谱联合Western blot的免疫蛋白质组学研究方法,用于筛选、鉴定SEA中诊断抗原蛋白质,是切实可行的;但该方法存在一定的局限性,有待进一步改进。 展开更多
关键词 日本血吸虫 虫卵可溶性抗原 免疫蛋白质组学
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胶体金SPA双联抗体检测试纸条法诊断日本血吸虫病的初步研究 被引量:4
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作者 喻鑫玲 何永康 +3 位作者 杨瑞清 罗新松 赵雅琴 李岳生 《实用预防医学》 CAS 2006年第3期521-523,共3页
目的建立一种简便快速且可同时检测两种抗体的试纸条免疫诊断方法。方法用可溶性虫卵抗原(SEA)、童虫抗原(SSA)作检测抗原,建立胶体金SPA双联抗体检测试纸条法(F-SPA-dipstick),并与可溶性虫卵抗原胶体金染料试纸条法(SEA-DDIA)及间接... 目的建立一种简便快速且可同时检测两种抗体的试纸条免疫诊断方法。方法用可溶性虫卵抗原(SEA)、童虫抗原(SSA)作检测抗原,建立胶体金SPA双联抗体检测试纸条法(F-SPA-dipstick),并与可溶性虫卵抗原胶体金染料试纸条法(SEA-DDIA)及间接血凝试验(IHA)作对比检测观察。结果用F-SPA-dipstick法检测急性血吸虫病人血清32份、慢性血吸虫病人血清78份,其敏感性分别为100%和94.87%;检测健康人血清85份,其特异性为97.65%;检测肝吸虫病人血清和肺吸虫病人各35份,其交叉反应率分别为2.86%和5.71%。检测结果与SEA-DDIA及IHA相似。结论F-SPA-dipstick法可作为一种血吸虫病快速诊断方法,具有较高的敏感性和特异性,操作简便快速,不需特殊仪器设备,有着较好的开发应用前景。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 胶体金标记SPA 试纸条 可溶性虫卵抗原 可溶性童虫抗原
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日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30对虫卵肉芽肿形成的致敏作用 被引量:5
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作者 冯振卿 薛婉芬 +4 位作者 李玉华 管晓虹 仇镇宁 吴宜琴 周晶晶 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 1995年第4期249-254,共6页
应用日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30腹腔注射致敏C57BL/6小鼠,继之经脾脏注射虫卵形成的肝虫卵肉芽肿模型。用SEA致敏组作阳性对照,SP2/0腹水组作阴性对照。实验结果表明,在虫卵攻击后第4d,NP30致敏组... 应用日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30腹腔注射致敏C57BL/6小鼠,继之经脾脏注射虫卵形成的肝虫卵肉芽肿模型。用SEA致敏组作阳性对照,SP2/0腹水组作阴性对照。实验结果表明,在虫卵攻击后第4d,NP30致敏组肝虫卵肉芽肿面积、体积即开始明显增加,出现多量嗜酸性粒细胞浸润。肉芽肿面积在第8d、体积在第15d达高峰值,与SEA致敏组的高峰值相近(P>0.05)。而SP2/0腹水组肉芽肿的面积、体积至第32d才达高峰值,其高峰值低于NP30致敏组(面积P<0.05,体积P<0.01)。本文提示NP30对肝虫卵肉芽肿的形成具有致敏作用。 展开更多
关键词 日本血吸虫 虫卵肉芽肿 抗独特型抗体
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检测日本血吸虫病胶体碳试纸条的研制与初步应用(英文) 被引量:3
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作者 汪世平 余路新 +4 位作者 车宏莉 陈秀春 秦永华 高冬梅 刘明社 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1063-1069,共7页
目的:开发一种快速检测血清中日本血吸虫抗体的免疫诊断方法。方法:用胶体碳标记日本血吸虫成熟虫卵可溶性抗原(SEA),与待测血清中日本血吸虫抗体结合,再用SEA包被在硝酸纤维素膜(NC膜)上以捕捉碳标SEA-血吸虫抗体复合物,达到检测血吸... 目的:开发一种快速检测血清中日本血吸虫抗体的免疫诊断方法。方法:用胶体碳标记日本血吸虫成熟虫卵可溶性抗原(SEA),与待测血清中日本血吸虫抗体结合,再用SEA包被在硝酸纤维素膜(NC膜)上以捕捉碳标SEA-血吸虫抗体复合物,达到检测血吸虫抗体的目的。结果:检测137份血清,与间接血凝法(indirect haemagglutination assay,IHA)检测结果一致性为98.54%,如经IHA试剂盒检测呈阳性者即视为阳性血清,则该方法的检测敏感性为98.99%,特异性为97.37%;且检测条带的灰度与血清效价具有曲线关系,因而可以对待测血清作半定量分析。结论:胶体碳试条层析法操作简便,快速,具有较高的敏感性和特异性,适合作血吸虫现场检测。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 胶体碳试纸条 抗体检测 可溶性虫卵抗原
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