镜鲤体质量、体长、体高和体厚的QTL定位分析

利用SLAF-seq高通量测序技术,对107尾6月龄的镜鲤(Cyprinus carpio)F1群体的DNA样本进行基因分型,采用区间作图法定位分析镜鲤体质量、体长、体高和体厚4个生长相关性状的QTL。共检测出4个生长性状显著相关的29个QTL区间,分别定位到11个连锁群上(LG3、LG5、LG6、LG7、LG12、LG16、LG30、LG38、LG44、LG46和LG47),LOD值介于2.50~4.09之间,解释表型变异介于9.0%~24.2%之间。解释表型变异最大的为QTL6_5,分别解释体质量和体长性状表型变异的24.2%和24.1%。LG5、LG6和LG38的连锁群最多,均为6个QTL区间;其次是LG30和LG12,分别为3个和2个,其余6个连锁群(LG3、LG7、LG16、LG44、LG46和LG47)均含有1个QTL区间。本研究还发现17个QTLs在不同生长性状间共享,其余12个QTLs仅与一个性状相关。QTL区间与鲤全基因组物理图谱比对发现,在12个QTL区间存在生长相关候选基因。本研究结果可用于镜鲤生长性状分子标记辅助选择,以提高育种效率。

温度对两种鲤耗氧率、排氨率及窒息点的影响

为了揭示温度对鲤呼吸代谢影响,采用密闭流水法测定了不同温度下两种规格松浦鲤(Cyprinus carpio Songpu)与松浦镜鲤(Cyprinus carpio Songpu mirror)的耗氧率与排氨率,密封进出水口测定窒息点。结果显示:两种鲤的耗氧率、排氨率与窒息点均随水温上升而增加,1龄松浦镜鲤的耗氧率与排氨率显著高于1龄松浦鲤的耗氧率与排氨率,2龄松浦镜鲤的耗氧率与排氨率低于2龄松浦鲤,但差异不显著。两种鲤的昼夜耗氧率与排氨率变化趋势基本一致。1龄松浦鲤与1龄松浦镜鲤的窒息点为0.38~0.60 mg/L,2龄松浦鲤与2龄松浦镜鲤的窒息点为0.11~0.37 mg/L,且各组间差异显著。结果表明温度对两种鲤的耗氧率、排氨率与窒息点影响较大,且1龄时期松浦镜鲤比1龄松浦鲤代谢旺盛,2龄时期两种鲤代谢程度相近。

西南地区松浦红镜鲤早繁及鱼苗培育试验

松浦红镜鲤(Cyprinus carpio Songpu red mirror)是中国水产科学研究院黑龙江水产研究所选育的鲤新品种。鲤在遵义地区繁殖季节为4月~5月,为实现商品鱼提早上市,在贵州省遵义市播州区鱼类繁育中心枫香基地,选择25尾成熟雌鱼和34尾成熟雄鱼松浦红镜鲤,开展早繁及鱼苗培育试验。通过亲鱼专池强化培育、温泉热水调节水温,使亲鱼性腺提早发育。注射催产剂,获得受精卵约305万粒,受精率为86.5%。经过15d的饲养,获得水花200万尾,孵化率为75.76%;培育乌仔134.58万尾,成活率67.29%;可将人工繁苗时间提早40d左右。

微卫星分子标记辅助镜鲤家系构建

用微卫星标记辅助进行镜鲤(Cyprinus carpio L.)家系的建立及选育,通过对亲本遗传结构及遗传差异的分析,预测产生优良家系的最佳配组。用28个微卫星分子标记评估松浦镜鲤亲本群体的遗传潜力,结果显示,群体的多态信息含量(PIC)达到0.5627,处于高度的遗传多样性水平,具备进一步繁育筛选优良群体的潜质。用x2检验和遗传偏离指数(d)估计Hardy-Weinberg平衡,结果表明群体处于平衡状态,但在16个位点表现出杂合子缺失,这可能跟长期的人工选择有关。依据个体间的遗传距离,连续2年共建立1对1亲本的繁育家系70个,用网箱分别养殖,2月龄家系体长均值为7.24～10.60cm,体质量均值为14.02～40.63g,方差分析显示家系间体长、体质量差异均极显著;对其中4个家系1龄鱼种生长情况及遗传结构分析也表明家系间的遗传分化较大,近交系数(Fst)达到0.1537,家系的多态信息含量在0.3056～0.4077之间,保持中度多态水平。由子代家系的生长和遗传结构两方面的实验结果证实了微卫星在辅助家系建立尤其是亲本选配方面具有较好的预测性,所获得的家系差异较大,具备进一步选育优良家系的潜力,从而证实了用此方法对现有镜鲤种质进行遗传改良是可行的。

镜鲤体长、体高、体厚性状QTL定位分析

以镜鲤全同胞家系为材料,用246个SSR和306个SNP标记构建了鲤鱼的连锁图谱,利用GridQTL软件对体长（SL）、体高（H）、体厚（BT）和体长/体高（SLH）进行了QTL定位分析。结果显示：共检测到14个相关的QTL,分布在7个连锁群上。其中,7个与体长相关的QTL——LG6、LG17、LG21、LG23和LG35连锁群上的QTL为显著水平（P〈0.05）,LG1和LG28上达到极显著水平（P〈0.01）,可解释表型变异为6.6%~12.6%;3个与体高相关的QTL均为极显著水平（P〈0.01）位于LG17、LG23和LG28上,可解释表型变异分别为11.6%、12.7%和15.6%;2个与体厚相关的QTL均为显著水平（P〈0.05）位于LG23和LG28上,可解释表型变异分别为8.6%和7.2%;2个与体长/体高相关的QTL均为显著水平（P〈0.05）位于LG21和LG35上,可解释表型变异均为8.2%。

松浦红镜鲤保种群体的遗传结构

应用35对多态性较高的微卫星标记对鲤新品种——松浦红镜鲤（Cyprinuscarpiovar.songpuredmirrorcarpl的保种群体进行了遗传结构研究。结果显示，在91尾松浦红镜鲤个体中，共检测到140个等位基因，每个位点等位基因数3-6个，平均有效等位基因数为3．0426；期望杂合度范围为0．3750-0．8274，均值为0．6493；多态信息含量范围为0．396-0．912，均值为O．5869；哈迪-温伯格平衡检验结果表明群体处于不平衡状态；平均固定系数为-0．026，说明该群体存在杂合子过剩现象；瓶颈效应分析表明，群体已经历了瓶颈效应；根据连锁不平衡方法计算有效群体大小为31．2。该研究表明松浦红镜鲤遗传多样性较为丰富，为了在下一步保种工作中避免或降低瓶颈效应，应加强保护工作，从而保持其丰富遗传多样性和优良的经济性状。

4种重金属对松浦鲤生长及组织的影响

采用汞、镉、铜、锌 4种重金属对松浦鲤(CyprinuscarpioSongpucarp)进行不同时间、不同浓度的中毒试验,分别测定其生长速度及组织的损伤程度。试验表明当汞在 5μg/L、镉在 20μg/L浓度作用 10d以下时其组织未发生病变,且对松浦鲤生长有促进作用。随着试验浓度增高、时间的延长,即汞在 10μg/L以上,镉在 20μg/L20d以上,生长受到抑制。同时随汞、镉试验浓度的不断增高,鳃、肾组织发生了不同阶段的病变:首先鳃组织分泌的粘液增多,继而出现鳃血管扩张、出血,呼吸上皮肿胀;上皮细胞增生,鳃丝呈棍棒状,相邻几条鳃丝发生融合,形成一片细胞板,一些鳃小片细胞脱离,病状严重时造成鳃小片坏死、解体。肾组织上的肾小球萎缩,肾拟淋巴组织坏死,而铜、锌重金属对各组织及各重金属对肝组织未造成病变。

松浦镜鲤越冬期的形态、组织结构及生化组成变化

利用电子标记跟踪同期孵化、同条件养殖的松浦镜鲤（Cyprinus carpio var.songpu mirror）在越冬前后的生长过程,比较实验鱼在125 d（越冬前）、170 d（结冰初期）及325 d（越冬后）的形态、组织结构及生化组成变化,并探讨越冬后鱼体主要供能物质含量与越冬体重损失的关系。结果显示,鲤325 d的体重（BW）、肥满度（CF）、脏体指数（VSI）、肝体指数（HSI）和肠体指数（ISI）均显著低于125 d（P〈0.05）;与125 d相比,325 d时的肝和前肠组织结构变化明显,主要表现在肝细胞体积变小,细胞界限模糊,糖原和脂滴丢失。前肠直径、绒毛高度和肌层厚度均显著下降（P〈0.05）,柱状上皮杯状细胞减少,纹状缘萎缩;鲤内脏脂肪和肝糖原含量在越冬期各测定时段均显著下降（P〈0.05）,肌肉和全鱼蛋白质含量仅在冰下阶段（170～325 d）下降明显（P〈0.05）。越冬后肌肉蛋白质含量与体重损失率呈显著的负相关（P〈0.05）,但内脏脂肪含量与越冬体重损失率无相关（P〉0.05）。以上结果表明,越冬导致鲤体重相关的形体指标显著变化;越冬长期饥饿引起了肝和前肠组织退化;越冬期间鲤贮能物质的消耗存在阶段性,在结冰前阶段（125～170 d）,能量来源以肝糖原和脂肪为主。在冰下阶段（170～325 d）,肝糖原、脂肪和蛋白质共同参与能量代谢。越冬后肌肉蛋白质含量可作为衡量越冬期体重损失程度的参考指标。

镜鲤体长性状的QTL定位分析

以镜鲤良种后代为祖父母本所培育的杂交F2群体的68个个体为材料,利用553个分子标记（217个SSR和336个SNP标记）对其进行基因型检测,运用JoinMap4.0软件包对遗传连锁图谱进行构建。利用MapQTL5.0区间作图法（Interval mapping）进行QTL检测,通过置换实验（1 000次重复）确定连锁群显著性水平阈值。在对体长的区间定位中共检测到12个与体长性状相关的QTLs区间,分布在BL-1-1（SNP0137-SNP1481）、BL-4-1（SNP0092-HLJ797）、BL-5-1（SNP1268-HLJ423）、BL-7-1（HLJ870-SNP0702）、BL-12-1（SNP0922-HLJ639）、BL-16-1（HLJE351-SNP0674）、BL-25-1（SNP0394-SNP0862）、BL-35-1（HLJ668-SNP0832）、BL-43-1（SNP0389-SNP1425）、BL-47-1（HLJ057-HLJ1113）、BL-47-2（HLJ1439-HLJ1418）等11个连锁群上,解释表型变异范围是13.8%~64.9%,其中贡献率大于20%的主效QTLs有8个,是体长性状的主效QTLs区间。

镜鲤体重的QTL定位

本研究利用217个微卫星标记和336个SNPs标记对德国镜鲤F2代68个个体基因组DNA进行基因型检测。其中507个标记共组成62个连锁群,覆盖基因组总长度为2805.85cM,标记间平均距离为6.31cM;利用软件MapQTL4.0采用区间作图法对体重性状进行QTL定位分析。研究结果共检测到14个与体重性状有关的QTLs,分布于9个连锁群。其中BW-5-1有最大的LOD值,为4.46;BW-1-1的LOD值最小,为2.25。单个QTL平均解释表型变异介于14.10%～45.50%之间,其中贡献率大于20%的主效QTLs有9个。通过BLASTX与斑马鱼蛋白质序列数据库进行序列比对,找到了与斑马鱼酰基辅酶A脱氢酶蛋白、胰淀粉酶α2蛋白、Apoeb protein和甘油醛-3-磷酸脱氢酶蛋白同源的分子标记。本研究结果对分子标记辅助育种具有重要应用价值。

不同糖及糖水平对松浦镜鲤养殖过程中糖代谢相关基因表达的影响

为探讨在养殖不同阶段,不同糖及糖水平对松浦镜鲤肝脏糖酵解酶(GK和HK)、糖异生酶(G6Pase和PEPCK)和糖代谢相关基因(IGF-Ⅰ和GHR)m RNA表达水平的影响,实验采用2×2双因素设计实验,选择淀粉和葡萄糖2种糖源,2个糖水平(25%和50%),共4个实验组,分别为低淀粉组(LS)、高淀粉组(HS)、低葡萄糖组(LG)和高葡萄糖组(HG)。选用初始体质量为(8.30±0.15)g的松浦镜鲤420尾,随机分为4组,每组3个重复,每个重复35尾鱼。实验周期为7周。结果显示,不同养殖阶段,HK基因和IGF-Ⅰ基因在不同实验组中的表达趋势基本一致,HK基因在养殖1周时表达量显著升高,之后开始降低,IGF-Ⅰ基因在养殖3周时表达量显著升高。在不同养殖阶段,GK、PEPCK、G6Pase和GHR基因的表达趋势受糖水平和糖种类的影响。在低糖水平下(LS组和LG组),这些基因表现了相同的变化趋势,GK和GHR基因在1周时表达量最高,之后开始下降;PEPCK基因在3周时表达量最高;G6Pase在1周时表达量升高,之后下降,在7周时表达量又有上升趋势。在高糖水平下,HS组的GK基因的表达量在各个养殖阶段差异不显著,而HG组的GK基因则在1周时表达量显著升高;HS组和HG组的PEPCK基因的表达量在各个养殖阶段差异不显著;HS组的G6Pase基因的表达量在各个养殖阶段差异不显著,而HG组的G6Pase基因则在3周时表达量显著升高;HG组的GHR基因的表达量在各个养殖阶段差异不显著,而HS组的GHR基因则在3周时表达量显著升高。在养殖初期(1周),高糖饲料显著促进了HK基因的表达,并抑制了PEPCK、G6Pase和GHR基因的表达。

微卫星分子标记指导镜鲤群体选育

本文用26个扩增效果好的微卫星分子标记分析了镜鲤（Cyprinus carpio L.）养殖亲本群体的遗传结构,指导其群体选育。本研究共检测到153个等位基因,片段大小为108~400 bp,平均等位基因数（A）5.8846个,平均有效等位基因数（Ne）2.8625个,平均观察杂合度（Ho）0.5063,平均期望杂合度（He）0.5602,平均多态信息含量（PIC）0.5292,表明该繁育群体处于较高的遗传多样性水平。用χ2检验和遗传偏离指数估计Hardy-Weinberg平衡,表明群体处于平衡状态,但在多个位点表现出杂合子缺失严重,显示出人工选择的痕迹。用PHYLIP3.6软件绘制基于Nei氏标准遗传距离的UPGMA聚类图,依据亲本个体间的遗传差异,以避免近亲交配为原则,建立最佳亲本配组体系,繁育获得2个选育群体,以常规群体繁育子代群体作为对照组,对子代群体的遗传结构及数量性状分析显示,选育群体保持了较高的遗传多样性水平,群体平均期望杂合度在0.5414~0.5449之间,其生长速度较对照群体快14.81%~63.71%。连续2年的生长实验证实,微卫星标记指导群体选育技术在保持群体的遗传多样性水平,避免近交衰退,快速建立优良种群方面具有一定的优势。

松浦红镜鲤形态学特征及主要经济性状的初步研究

将松浦红镜鲤(Cyprinus carpio Songpu red mirror)、散鳞镜鲤(Cyprinus carpio L.mirror)和荷包红鲤(Cyprinus carpio red var.Vuguanensis)抗寒品系乌仔各705尾放养到0.047hm^2池塘中,同塘培育到鱼种;春片鱼种各500尾放养到0.2hm^2池塘中;各池塘的投喂和饲养管理相同,按GB/T18654.2-2008和GB/T18654.3-2008标准测定鱼体质量和形态性状。结果显示,松浦红镜鲤体长/体高、体长/尾柄高、体长/头长、头长/吻长大于散鳞镜鲤和荷包红鲤抗寒品系;三个品种的8个可量比例性状主成分分析构建的3个主成分贡献率分别为:50.94%、17.08%、13.68%,累计贡献率达81.70%;主成分散点图显示,松浦红镜鲤聚成独立一簇,与其他品种明显区分;特定增重率、相对增重率、净增重、饲养成活率及越冬成活率等主要经济性状均显著高于荷包红鲤抗寒品系(P<0.05),但与散鳞镜鲤无明显差异。

建鲤生长性状QTL区间及其与镜鲤同源性比对

以建鲤（Cyprinus carpio var．jian）F．群体的94尾个体为材料，利用254个微卫星标记构建了建鲤的遗传图谱，并对体长、体高和体厚性状进行了QTL定位，共检测到17个生长相关性状QTL，分布在10个连锁群上，解释表型变异为10．8％～35．2％。以相同的分子标记，构建建鲤与镜鲤（Cyprinus carpio L．）的比较图谱，分析了建鲤和镜鲤群体生长性状QTL的同源性关系。结果表明，建鲤与镜鲤图谱具有广泛的共线性或同线性关系，建鲤每个连锁群在镜鲤图谱中均找到了对应的同源连锁群，其中建鲤10个生长性状QTL与镜鲤13个相同性状QTL具有同源性，同源比例高达58．8％。同时发现，建鲤QTL置信区间相对较大，与之同源的镜鲤QTL置信区间较小，通常位于建鲤QTL子区间内，定位结果更精细。此外，建鲤与镜鲤连锁群上都存在QTL的富集区域，而这些富集区域常常存在于同源连锁群的共线性区域，可作为标记辅助选择的重点区域。鲤通用QTL的发掘，为分子标记辅助育种和更进一步的精细定位打下基础。

饲料亚油酸/亚麻酸比率对松浦镜鲤生长和健康状况的影响

评估不同LA/LNA比率对松浦镜鲤（Cyprinus Carpio Songpu mirror）生长、血清生化及抗氧化指标的影响。对照组（CD）以大豆油作为脂肪源,试验组以猪油、豆油、亚麻油为脂肪源调整LA/LNA比率为0.5、1.0、2.0、4.0和8.0,配制6组等氮等能的纯化饲料。将324尾松浦镜鲤稚鱼（平均体重（15.39±0.14）g）随机平均分配到18个循环水养殖缸中,每组饲料随机饲喂3个缸,饲喂周期为60 d。结果显示,处理组间不同LA/LNA比率对松浦镜鲤生长没有显著性的影响（P〉0.05）,但处理组的末重和特定生长率均明显高于CD组。生物学性状方面,LA/LNA 4.0组肝体指数显著高于LA/LNA 0.5-2.0组和CD组（P〈0.05）,其他生物学性状上均无显著性差异（P〉0.05）。LA/LNA 4.0组表现出最低的血清T-chol和HDL-c含量（P〈0.05）。处理组的血清MDA含量显著低于CD组,且LA/LNA 1.0-4.0组SOD活性显著高于CD组和LA/LNA 0.5组（P〈0.05）。结果表明,不同LA/LNA比率对松浦镜鲤生长没有显著影响,LA/LNA比率在1.0-4.0之内能够有利于鱼体抗氧化能力,过量添加PUFA则会降低鱼体的生长以及易引起氧化应激。

镜鲤体质量和体长的QTL定位研究

以镜鲤(Cyprinus carpio L.)全同胞家系为材料,用940对微卫星(SSR)标记进行基因组扫描,采用半同胞家系的分析策略对体质量(BW)和体长(SL)进行QTL定位分析。QTL检测显示:基于父系的QTL分析,共检测到8个QTL区间。5个与体质量相关的QTL区间中,1个QTL为95%基因组水平(genome-wide)显著性,位于LG26连锁群,其他4个QTL均为95%染色体水平(chromosome-wide)显著性;3个与体长相关的QTL区间与体质量的QTL区间重叠,其中,1个QTL为99%基因组水平显著性,其余2个QTL均为95%染色体水平显著性。基于母系的QTL分析,共检测到11个QTL区间。6个与体质量相关的QTL区间中,1个QTL为99%基因组水平显著性,位于LG26,2个QTL为99%染色体水平显著性,其余3个QTL均为95%染色体水平显著性;5个与体长相关的QTL中有4个与体质量QTL区间重叠,其中,1个QTL为99%基因组水平显著性,1个QTL为99%染色体水平显著性,其余3个QTL均为95%显著性染色体水平。结果表明,在LG26上,存在着与体质量和体长都显著相关的QTL区间,且均达到基因组显著性水平,最小置信区间为3 cM。此QTL结果可以应用于鲤鱼分子标记辅助育种。

镜鲤酸性磷酸酶的QTL分析

利用992个微卫星标记检测了德国镜鲤(Cyprinus carpio)F1代190个个体基因组DNA进行基因型检测,共组成51个连锁群,覆盖基因组总长度为5138.2cM,标记间平均距离为5.19cM;利用软件MapQTL 6.0采用区间作图法对酸性磷酸酶性状进行数量性状基因座(QTL)定位分析。研究结果共检测到9个与酸性磷酸酶有关的QTLs,分布于8个连锁群。其中LG24连锁群LOD值最大(5.37),位于LG24连锁群,最大的可解释表型变异为13.8%。通过BLAST与斑马鱼进行序列比对,找到了与斑马鱼富含亮氨酸重复蛋白、横跨膜蛋白50a、ADP核糖化因子和细胞因子受体家族b8同源的分子标记。本研究结果对鲤鱼分子标记辅助育种和疾病调控具有重要应用价值。

维生素K_3对松浦镜鲤幼鱼血清生化指标的影响

为研究饵料中维生素K3添加水平对松浦镜鲤（Cyprinus carpioSongpu carp）血清生化指标的影响,寻找维生素K3产生毒性的敏感指标,为饲料中维生素K3的添加限量提供数据。在水温24℃,溶氧7.46~8.61 mg/L条件下,在以豆粕和鱼粉为蛋白源的基础饲料中（维生素K1含量0.54 mg/kg,维生素K2未检出）添加不同水平的维生素K3（甲萘醌烟酰胺亚硫酸盐,甲萘醌≥49.9%）,得到甲萘醌实际浓度为0,2.92,4.86,9.71,19.48,38.66,980.00 mg/kg 7组试验饲料,饲喂初始体质量为（2.58±0.16）g的松浦镜鲤,饲养试验时间为60 d。结果表明：饲料中维生素K3添加水平对松浦镜鲤血清中的总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、间接胆红素（IBIL）、补体C3、C4的含量以及谷—草转氨酶的活性均无显著影响（P〉0.05）。在最高剂量组（980 mg/kg）中,血清中谷—丙转氨酶的活性显著大于2.92 mg/kg试验组,肌酐含量显著大于9.71 mg/kg试验组（P〈0.05）;尿素氮在高剂量组（≥38.66 mg/kg）的含量是其他试验组的2~3倍。可见,60 d投喂不添加维生素K3的日粮不会对松浦镜鲤幼鱼血清生化指标产生不利影响,肾脏对维生素K3的反应早于肝脏,当维生素K3添加量≥38.66 mg/kg时,会影响松浦镜鲤的肾脏功能。

镜鲤肌肉品质性状的微卫星标记分析

利用233个微卫星标记检测镜鲤(Cyprinus carpio L.)一个家系的107尾个体的基因型,采用GLM方法对肌肉脂肪含量和蛋白质含量4种经济性状进行单标记回归分析。Permutation检验结果显示:有17个标记分别与肌肉脂肪和蛋白质含量具有显著相关性(P<0.05),其中,有4个标记(HLJ030、HLJ2560、HLJ3633,和HLJ3554)与肌肉蛋白质含量呈极显著相关(P<0.01),表明这些标记与性状间可能存在连锁关系。对同一标记不同基因型之间进行了多重比较,找到了与这两种性状相关的优势基因型,为鲤的肌肉品质性状选育提供了有效的依据。

空气暴露对松浦镜血清生理指标的影响

为研究空气暴露对松浦镜鲤的影响,气温21℃时,将体质量约600 g的鱼,分别于空气中暴露15,30,50,60,77 min后,尾静脉取血测定血清血糖GLU、超氧化物歧化酶SOD、丙二醛MDA、甘油三酯TG、总蛋白TP、白蛋白ALB、溶菌酶活性LZM、皮质醇COR。结果显示:松浦镜鲤对空气暴露应激表现出较强的抗逆性,77 min空气暴露后松浦镜鲤成活率为100%,各实验组血清COR、GLU和ALB有显著性差异(P<0.05),SOD、MDA、LZM和TG总体无显著性差异(P>0.05),50 min是重要的时间节点,超过50 min的空气暴露可能对机体造成损伤。