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Sonic hedgehog阻断抗体增强外周血单个核细胞抗宫颈癌HeLa细胞的作用 被引量:2
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作者 孙艳 黄莉霞 +1 位作者 黄文浩 黄斌 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期2241-2246,共6页
目的:探讨Sonic hedgehog(Shh)阻断抗体对外周血单个核细胞(PBMCs)抗宫颈癌HeLa细胞作用的影响。方法:免疫细胞化学技术和RT-PCR法检测Shh及其信号分子在HeLa细胞中的表达;Ficoll密度梯度离心法分离正常人PBMCs,并与HeLa细胞建立共培养... 目的:探讨Sonic hedgehog(Shh)阻断抗体对外周血单个核细胞(PBMCs)抗宫颈癌HeLa细胞作用的影响。方法:免疫细胞化学技术和RT-PCR法检测Shh及其信号分子在HeLa细胞中的表达;Ficoll密度梯度离心法分离正常人PBMCs,并与HeLa细胞建立共培养体系;于共培养体系中加入Shh阻断抗体,流式细胞术检测CD3、CD69和CD71分子表达;ELISA法检测细胞因子IFN-γ、IL-10和IL-4分泌;显微镜观察PBMCs对HeLa细胞的杀伤。结果:HeLa细胞表达Shh及其信号分子,HeLa细胞传代6次对Shh的表达水平没有影响;共培养体系中CD3+细胞增多;Shh阻断抗体可以促进CD69、CD71表达和IFN-γ的分泌,但抑制IL-10分泌,对IL-4分泌没有显著影响;Shh阻断抗体增强PBMCs对HeLa细胞的杀伤。结论:Shh阻断抗体可以促进PBMCs活化,增强PBMCs抗宫颈癌HeLa细胞的作用。 展开更多
关键词 sonic hedgehog蛋白 宫颈肿瘤 淋巴细胞
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Sonic hedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Gli1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义 被引量:14
2
作者 戎祯祥 方驰华 +1 位作者 朱达坚 刘胜军 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1728-1731,共4页
目的探讨Sonichedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Gli1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义。方法收集85例胃癌组织及25例正常胃粘膜组织构建成组织芯片,应用免疫组化S-P法检测胃癌组织中Smo蛋白及Gli1蛋白的表达,并以正常胃粘膜组织... 目的探讨Sonichedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Gli1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义。方法收集85例胃癌组织及25例正常胃粘膜组织构建成组织芯片,应用免疫组化S-P法检测胃癌组织中Smo蛋白及Gli1蛋白的表达,并以正常胃粘膜组织作对照,分析两者的相关性。结果Smo和Gli1蛋白均在正常胃粘膜中不表达或弱表达;在胃乳头状腺癌、管状腺癌、低分化腺癌中,两者的表达强度和阳性表达率显著高于正常胃粘膜(P<0.05,并随着胃腺癌分化程度下降而上升;相关分析显示Smo和Gli1蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关,相关系数为0.989,P<0.001。结论胃癌发生过程中的Sonichedgehog信号通路异常激活可能通过Smo蛋白高表达上调下游转录因子Gli1蛋白的表达参与部分胃腺癌的发生。 展开更多
关键词 胃肿瘤 组织芯片 免疫组化 sonic hedgehog信号通路 Smo蛋白 GLI1蛋白
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Sonic Hedgehog与前列腺生长调控 被引量:1
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作者 杨立 申吉泓 刘孝东 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2007年第8期730-733,共4页
Sonic hedgehog(Shh)是一类在胚胎发育过程中起关键作用的信号调节因子。研究认为Shh信号在前列腺导管形成分化以及基质-上皮的相互作用等机制中发挥着重要作用,从而调节前列腺发育、生长和细胞增殖;Shh信号作用途径的紊乱可导致肿瘤细... Sonic hedgehog(Shh)是一类在胚胎发育过程中起关键作用的信号调节因子。研究认为Shh信号在前列腺导管形成分化以及基质-上皮的相互作用等机制中发挥着重要作用,从而调节前列腺发育、生长和细胞增殖;Shh信号作用途径的紊乱可导致肿瘤细胞的生成和增殖。探讨Shh信号机制在前列腺正常生长和疾病状态中的作用将为研究前列腺疾病的发病机制提供重要的思路。 展开更多
关键词 sonic hedgehog 信号蛋白 前列腺 生长调控
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Cloning and bioinformatical analysis of the N-terminus of the sonic hedgehog gene
4
作者 Yi Zhang Shu Zhao +6 位作者 Weiren Dong Suifen He Haihong Wang Lihua Zhang Yinjuan Tang Jiasong Guo Suiqun Guo 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2013年第3期258-263,共6页
The sonic hedgehog protein not only plays a key role in early embryonic development, but also has essential effects on the adult nervous system, including neural stem cell proliferation, differentiation migration and ... The sonic hedgehog protein not only plays a key role in early embryonic development, but also has essential effects on the adult nervous system, including neural stem cell proliferation, differentiation migration and neuronal axon guidance. The N-terminal fragment of sonic hedgehog is the key functional element in this process. Therefore, this study aimed to clone and analyze the N-terminal fragment of the sonic hedgehog gene. Total RNA was extracted from the notochord of a Sprague-Dawley rat at embryonic day 9 and the N-terminal fragment of sonic hedgehog was amplified by nested reverse transcription-PCR. The N-terminal fragment of the sonic hedgehog gene was successfully cloned. The secondary and tertiary structures of the N-terminal fragment of the sonic hedgehog protein were predicted using Jpred and Phyre online. 展开更多
关键词 neural regeneration basic research sonic hedgehog protein CLONING nested reversetranscription-PCR secondary structure tertiary structure central nervous system developmentalneurobiology rats grants-supported paper photographs-containing paper neuroregeneration
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Hedgehog信号通路活化在结直肠病变的意义 被引量:2
5
作者 翁子毅 子树明 +2 位作者 杨明 崔龙 于恩达 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期379-381,327,共3页
目的探讨Hedgehog(Hh)信号通路蛋白表达在结直肠病变中的意义。方法采用免疫组织化学技术检测人正常结直肠黏膜、结直肠息肉及结直肠癌组织中Hh信号通路蛋白音刺猬因子(sonic hedgehog,SHh)、受体patched(PTCH)和分泌型Frz相关蛋白(SFR... 目的探讨Hedgehog(Hh)信号通路蛋白表达在结直肠病变中的意义。方法采用免疫组织化学技术检测人正常结直肠黏膜、结直肠息肉及结直肠癌组织中Hh信号通路蛋白音刺猬因子(sonic hedgehog,SHh)、受体patched(PTCH)和分泌型Frz相关蛋白(SFRP1)的表达水平。结果正常结直肠组织中,SHh和PTCH蛋白不表达或轻度表达,SFRP1蛋白在细胞质和间质细胞轻度表达。结直肠息肉组织中,SHh轻度表达,PTCH和SFRP1不表达或轻中度表达。结直肠恶性肿瘤组织的SHh、PTCH和SFRP1大多呈高度表达。不同结直肠病变的SHh、PTCH和SFRP1蛋白表达的差异均有统计学意义(P值分别<0.01、0.05)。结论 Hh信号通路蛋白在正常结直肠黏膜几乎不表达,在结直肠息肉中有不同程度地表达,在结直肠癌中大多高度表达,提示其逐步量变与结直肠恶性病变的进程有关。 展开更多
关键词 音刺猬因子 PATCHED 分泌型Frz相关蛋白 结直肠癌 结直肠息肉
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冬凌草甲素对骨质疏松大鼠骨折愈合的影响及其机制
6
作者 成翕悦 李丹丹 +4 位作者 崔如 靖博雅 曹岩 赵晶 刘俊川 《山西医科大学学报》 CAS 2023年第12期1625-1631,共7页
目的探讨冬凌草甲素对骨质疏松大鼠骨折愈合的影响及其机制。方法将SD大鼠随机分为对照组、模型组、冬凌草甲素低剂量组、冬凌草甲素高剂量组、戊酸雌二醇组、冬凌草甲素高剂量+环巴胺组,每组12只。X射线检测评估大鼠骨折愈合情况;ELIS... 目的探讨冬凌草甲素对骨质疏松大鼠骨折愈合的影响及其机制。方法将SD大鼠随机分为对照组、模型组、冬凌草甲素低剂量组、冬凌草甲素高剂量组、戊酸雌二醇组、冬凌草甲素高剂量+环巴胺组,每组12只。X射线检测评估大鼠骨折愈合情况;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;三点弯曲实验检测股骨最大载荷和最大位移;双能X线骨密度扫描仪检测股骨骨密度;HE-阿尔新蓝染色检测骨痂组织病理变化;Western blot检测碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、Shh、Gli1蛋白表达。结果与对照组比较,模型组骨小梁结构紊乱,骨折线清晰,血清中TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05),股骨最大载荷、最大位移、骨密度及ALP、Runx2、Shh和Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,冬凌草甲素低剂量组、冬凌草甲素高剂量组和戊酸雌二醇组骨小梁排列较密集,骨折线模糊不清,血清中TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05),股骨最大载荷、最大位移、骨密度及ALP、Runx2、Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与冬凌草甲素高剂量组比较,冬凌草甲素高剂量+环巴胺组骨小梁结构疏松,骨折线较清晰,血清中TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05),股骨最大载荷、最大位移、骨密度及ALP、Runx2、Shh和Gli1蛋白表达降低(P<0.05)。结论冬凌草甲素可能通过激活声波刺猬(Shh)/Gli家族锌指蛋白1(Gli1)信号通路促进骨质疏松大鼠骨折愈合。 展开更多
关键词 冬凌草甲素 声波刺猬/Gli家族锌指蛋白1通路 骨质疏松 骨折愈合 炎症
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Shh-PARP-1信号通路在茶多酚拮抗胰岛微血管内皮细胞脂毒性中的调控作用 被引量:2
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作者 田蜜 雷琪 +1 位作者 鄢韵升 李龙坤 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期975-981,共7页
目的探讨Sonic Hedgehog(Shh)-聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1[poly(ADP-ribose)polymerase 1,PARP-1]信号通路在茶多酚拮抗胰岛微血管内皮细胞脂毒性中的调控作用。方法以小鼠胰岛微血管内皮MS-1细胞为研究对象,分为正常对照组、溶剂对照组... 目的探讨Sonic Hedgehog(Shh)-聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1[poly(ADP-ribose)polymerase 1,PARP-1]信号通路在茶多酚拮抗胰岛微血管内皮细胞脂毒性中的调控作用。方法以小鼠胰岛微血管内皮MS-1细胞为研究对象,分为正常对照组、溶剂对照组、脂肪酸(0.25mmol/L软脂酸+0.5mmol/L油酸)组、茶多酚(25μmol/L)组、脂肪酸+茶多酚组、PARP-1抑制剂(8μmol/L BYK204165)+脂肪酸组、PARP-1抑制剂+脂肪酸+茶多酚组、Shh抑制剂(2.5μmol/L环巴胺)+脂肪酸组、Shh抑制剂+脂肪酸+茶多酚组及Shh抑制剂+PARP-1抑制剂+脂肪酸+茶多酚组,分别检测各组细胞活力、凋亡水平、一氧化氮(NO)合成及氧化应激相关指标的改变。结果脂肪酸处理后,MS-1细胞存活率下降,细胞凋亡率增高(P<0.05);同时,细胞内NO的含量及总一氧化氮合酶(tNOS)、诱导型NOS(iNOS)和结构型NOS(cNOS)的活性均升高(P<0.05);而且,脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量增加(P<0.05),抗氧化物质谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平下降(P<0.05),并增强了PARP-1和磷酸化Shh的表达水平(P<0.05)。茶多酚干预后,各项指标的水平均得以改善(P<0.05);而且,利用BYK204165和环巴胺预处理1h后,茶多酚对脂肪酸的拮抗效应更为显著,各项检测指标与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论脂肪酸可诱发胰岛微血管内皮功能损伤,茶多酚具有拮抗脂肪酸毒性的作用,且抑制Shh-PARP-1信号通路能增强茶多酚的保护效应。 展开更多
关键词 茶多酚 脂肪酸类 胰岛微血管内皮功能 聚ADP核糖聚合酶1 sonic hedgehog蛋白质
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激活Shh信号通路促进BMP9诱导小鼠成肌细胞C2C12向成骨分化 被引量:3
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作者 李丽 欧欣颖 +3 位作者 吉彩霞 刘晓骅 何通川 罗进勇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期481-488,共8页
近年来骨组织工程技术迅猛发展,小鼠成肌细胞C2C12因其来源广泛等优点可望成为有效的种子细胞应用于组织工程.然而,对于C2C12细胞的成骨分化机制仍需深入研究.为了观察Sonic hedgehog(Shh)信号通路对骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic... 近年来骨组织工程技术迅猛发展,小鼠成肌细胞C2C12因其来源广泛等优点可望成为有效的种子细胞应用于组织工程.然而,对于C2C12细胞的成骨分化机制仍需深入研究.为了观察Sonic hedgehog(Shh)信号通路对骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导的C2C12细胞成骨分化的影响,构建过表达腺病毒Ad-Shh,并作用于BMP9处理的C2C12细胞,检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的变化,茜素红S染色检测钙盐沉积,RT-PCR检测Shh、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、Runx2、Dlx5、Id1和Id2基因表达,Western印迹检测Shh、OPN、OCN、Runx2和Dlx5的蛋白质表达,Micro-CT和H&E染色检测裸鼠皮下异位成骨包块情况.结果表明,活化Shh信号通路可促进BMP9诱导的C2C12细胞早晚期成骨分化,以及裸鼠皮下异位成骨.体内外实验证明,Shh信号通路能促进BMP9诱导小鼠成肌细胞C2C12向成骨分化. 展开更多
关键词 sonic hedgehog信号通路 骨形态发生蛋白9 小鼠成肌细胞C2C12 成骨分化
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Sonic Hedgehog通过调控促分裂原活化的蛋白激酶/胞外信号调节激酶信号通路促进类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖 被引量:1
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作者 刘芳 朱尚玲 +6 位作者 冯晓雪 罗敏琪 张白玉 李朝霞 王晓红 潘云峰 黄建林 《中华风湿病学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期310-315,I0001,共7页
目的初步探讨促分裂原活化的蛋白激酶/胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)信号通路在Sonic Hedgehog(Shh)调控RA成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)增殖中的作用。方法收集病情活动(DAS28≥3.2)的RA患者经关节镜下滑膜清理术或关节置换术切除的... 目的初步探讨促分裂原活化的蛋白激酶/胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)信号通路在Sonic Hedgehog(Shh)调控RA成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)增殖中的作用。方法收集病情活动(DAS28≥3.2)的RA患者经关节镜下滑膜清理术或关节置换术切除的滑膜组织,组织块培养法培养分离RA-FLS,分别予Shh激动剂purmorphamine、抑制剂cyclopamine及MAPK/ERK信号通路抑制剂U0126处理,采用蛋白质印迹法检测RA-FLS细胞MAPK/ERK信号通路关键蛋白phospho ERK1/2(p-ERK1/2)磷酸化水平,细胞增殖与毒性试剂盒(CCK8)检测细胞增殖活力,以及流式细胞术检测细胞增殖情况,采用单因素方差分析和Kruskal-Wallis H(K)方法对数据进行分析。结果与对照组相比,浓度为1 μmol/L的purmorphmine可短时间内引起p-ERK1/2蛋白表达增加,作用15 min时显著(P〈0.01),经U0126和cyclopamine处理后,p-ERK1/2蛋白表达明显下降(P〈0.01)。RA-FLS经purmorphmine(1 μmol/L)处理后,细胞增殖活力为(114±5)%,明显高于对照组(100±0)%(P〈0.01),purmorphmine(1 μmol/L)组S期细胞占(8.39±0.60)%,较对照组(3.29±0.69)%明显增加(P〈0.01);经cyclopamine(10 μmol/L)处理后,细胞增殖活力为(89±1)%(P〈0.05),S期细胞占(1.53±0.22)%(P〈0.05);经purmorphamine(1 μmol/L)和U0126(10 μmol/L)共同处理后,细胞增殖活力为(89±2)%(P〈0.05),S期细胞占(1.07±0.25)%(P〈0.05)。结论Shh可能通过调控MAPK/ERK信号通路,促进RA-FLS细胞增殖,促进滑膜增生,导致RA疾病的进展。 展开更多
关键词 关节炎 类风湿 sonic hedgehog 丝裂原激活蛋白激酶激酶类 细胞增殖
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Sonic Hedgehog在非小细胞肺癌中的表达及其与患者生存周期的关系 被引量:1
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作者 李岩 吴爱萍 +2 位作者 李欣 张蕾 周海英 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2717-2718,共2页
目的 观察非小细胞肺癌患者Sonic Hedgehog(Shh)信号通路相关蛋白的表达,探讨在肺癌发展过程中的作用.方法 选择本院2013年1月至6月非小细胞肺癌手术患者46例,取切除肺癌组织为观察组,取癌旁组织39例,以非非小细胞肺癌患者28例肺部组... 目的 观察非小细胞肺癌患者Sonic Hedgehog(Shh)信号通路相关蛋白的表达,探讨在肺癌发展过程中的作用.方法 选择本院2013年1月至6月非小细胞肺癌手术患者46例,取切除肺癌组织为观察组,取癌旁组织39例,以非非小细胞肺癌患者28例肺部组织为对照组.采用免疫组织化学方法观察Shh和Gli2蛋白表达.结果 观察组Shh和Gli1蛋白阳性率分别为73.91%(34/46)和67.40%(31/46),均高于癌旁组织和对照组(P<0.05),Ⅳ、Ⅲ期患者Shh和Gli1蛋白阳性率分别为80.95%(17/21)、71.43% (15/21)和91.67%(11/12)、83.33%(10/12),均高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05).结论 Shh信号通路可能通过激活Shh蛋白和Gli蛋白表达促进非小细胞肺癌组织异常增殖及细胞癌变. 展开更多
关键词 sonic hedgehog通路 非小细胞肺癌 Shh蛋白 GLI1蛋白
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大鼠Shh-N融合蛋白的表达、纯化及功能研究
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作者 孙朝晖 赖燕来 +3 位作者 曾文文 郭雅南 左焕琮 谢佐平 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第6期969-973,共5页
为了获得重组SonichedgehogN端蛋白 (Shh N)并研究其功能 ,应用PCR技术扩增Shh NcDNA ,然后克隆至原核表达质粒中 ,转化E .coli后获得表达菌株 ,经 1mmol/LIPTG诱导高效表达出带有His tag的融合蛋白 ,其中大部分为可溶性蛋白 ,少量为包... 为了获得重组SonichedgehogN端蛋白 (Shh N)并研究其功能 ,应用PCR技术扩增Shh NcDNA ,然后克隆至原核表达质粒中 ,转化E .coli后获得表达菌株 ,经 1mmol/LIPTG诱导高效表达出带有His tag的融合蛋白 ,其中大部分为可溶性蛋白 ,少量为包涵体 .用His tag特异性结合树脂纯化可溶性融合蛋白 ,经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一区带 ,凝胶自动扫描分析表明 ,Shh N的纯度达 85%以上 .纯化后的Shh N在成纤维生长因子 8(FGF8)的协同作用下 ,能诱导神经前体细胞 (NPC)向酪氨酸羟化酶阳性神经元 (TH+ )发育 .在此基础上可以诱导不同类型的人类干细胞定向分化为多巴胺 (DA)神经元 ,从而为临床治疗帕金森病 (PD) 展开更多
关键词 重组融合蛋白 蛋白质纯化 神经前体细胞 TH免疫阳性神经元
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核因子C(Nfic)在人类牙根和骨组织发育中调控作用研究进展 被引量:1
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作者 张凤成 李亚男 《口腔颌面修复学杂志》 2017年第2期117-121,共5页
人体牙齿与骨组织的发育和形成均取决于间充质干细胞的分化,在众多信号通路的调控下形成最终的牙及骨。虽然二者的复杂程度不一,但牙齿和骨在组织结构和物理特性上都具有相似性,同时在发育基础上亦具有共通性。目前已证实,存在于牙乳头... 人体牙齿与骨组织的发育和形成均取决于间充质干细胞的分化,在众多信号通路的调控下形成最终的牙及骨。虽然二者的复杂程度不一,但牙齿和骨在组织结构和物理特性上都具有相似性,同时在发育基础上亦具有共通性。目前已证实,存在于牙乳头间充质细胞内的核因子I(nuclear factor I,NFI)家族成员C(Nfic),对牙根部牙本质形成起到关键的作用。而近些年的研究亦表明Nfic在骨组织发育的过程中同样起到非常重要的调控作用,尤其是在骨形成通路中发挥着不可替代的功能,但其具体机制仍不明确。本文就Nfic对牙根和骨发育调控作用的研究情况作一综述。 展开更多
关键词 核因子C 成牙本质细胞 郝特维希上皮根鞘 SHH信号通路 成骨细胞 骨形成蛋白
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从分子生物学角度对成釉细胞瘤诊断及治疗的考量 被引量:2
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作者 钱颖 龚佳幸 +5 位作者 俞梦飞 刘宇 魏栋 朱子羽 陆科杰 王慧明 《国际口腔医学杂志》 CAS CSCD 2021年第5期570-578,共9页
成釉细胞瘤是较为常见的牙源性肿瘤。它易复发、易恶变,属于临界瘤。成釉细胞瘤具有许多特殊的标志物,虽然目前其组织来源及发病机制尚未明确,但其发生与多种信号转导途径密切相关,包括有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、Sonic Hed... 成釉细胞瘤是较为常见的牙源性肿瘤。它易复发、易恶变,属于临界瘤。成釉细胞瘤具有许多特殊的标志物,虽然目前其组织来源及发病机制尚未明确,但其发生与多种信号转导途径密切相关,包括有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、Sonic Hedgehog(SHH)信号通路和经典WNT/β-catenin信号通路。鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(BRAF)突变、大鼠肉瘤病毒致癌基因同源物(RAS)突变和Smoothened(SMO)突变等多种突变基因型已在成釉细胞瘤中被发现,不同突变型的成釉细胞瘤有不同的临床特点和生物学行为,结合组织学特点可用于指导分型,对治疗及预后具有重要意义。为了进一步探讨这种与临床相关的基因型-表型相关性,本文就成釉细胞瘤的分类、分子水平标志物、发病机制、靶向治疗及预后进行综述,以期对今后的诊断和治疗有所帮助。 展开更多
关键词 成釉细胞瘤 基因突变 有丝分裂原活化蛋白激酶信号通路 sonic hedgehog信号通路 靶向治疗开
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重组人SHH蛋白N端在HEK293T细胞中的分泌表达与鉴定
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作者 龙凤 仇玮祎 +4 位作者 常旭 林建波 朱恒奇 张景海 王双 《生物技术通讯》 CAS 2014年第5期660-663,共4页
目的:获得有活性的Sonic Hedgehog(SHH)蛋白N端结构域蛋白纯品,该结构域是SHH蛋白与受体结合结构域,可用作抗原,用于研制抗SHH的中和抗体。方法:应用PCR技术从商业化人Shh基因中分别扩增该基因5'端591和600 bp的片段,并插入真核表... 目的:获得有活性的Sonic Hedgehog(SHH)蛋白N端结构域蛋白纯品,该结构域是SHH蛋白与受体结合结构域,可用作抗原,用于研制抗SHH的中和抗体。方法:应用PCR技术从商业化人Shh基因中分别扩增该基因5'端591和600 bp的片段,并插入真核表达载体pL293,分别在HEK293T细胞中进行瞬时分泌表达,通过His标签纯化后获得SHH-591和SHH-600蛋白纯品,SDS-PAGE和Western印迹对表达产物进行分析,并通过ELISA进行结合活性鉴定。结果:构建了重组表达载体pL293-Shh-N591和pL293-Shh-N600,酶切鉴定和测序证实含有目的基因片段,真核瞬时表达产物均在相对分子质量约20×103处可见与预期相符的条带,该条带可被His标签抗体所识别;纯化获得了SHH-591-His和SHH-600-His蛋白纯品;ELISA结合实验结果显示SHH-591-His和SHH-600-His均能与抗His标签抗体结合,而SHH-591-His与SHH中和抗体的结合能力更强。结论:获得了真核表达的SHH-N蛋白SHH-591-His,可用于下一步中和抗体药物的筛选和后续研究。 展开更多
关键词 sonic hedgehog蛋白 真核表达 中和抗体
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外周血单个核细胞在Sonic hedgehog信号通路中的活化表达
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作者 赵乾焜 梁森 闫慧明 《中华普通外科学文献(电子版)》 2015年第2期12-14,共3页
目的探讨Sonic hedgehog阻断抗体(Shh Ab)对外周血单个核细胞(PBMCs)抗胃癌MC细胞作用的表达。方法 Ficoll密度梯度离心法分离正常人PBMCs,并与胃癌MC细胞(GES-1细胞经亚硝酰胺类化合物处理)建立共培养体系;RT-PCR观察Shh、Gli-1基因的... 目的探讨Sonic hedgehog阻断抗体(Shh Ab)对外周血单个核细胞(PBMCs)抗胃癌MC细胞作用的表达。方法 Ficoll密度梯度离心法分离正常人PBMCs,并与胃癌MC细胞(GES-1细胞经亚硝酰胺类化合物处理)建立共培养体系;RT-PCR观察Shh、Gli-1基因的表达并进行半定量数据分析;于共培养体系中加入Shh阻断抗体,流式细胞术检测CD3、CD5、CD69分子表达。结果RT-PCR结果显示Gli-1m RNA在MC+Shh Ab细胞组值为0.284 5±0.002 5,低于MC细胞组的0.516 7±0.010 9(P<0.05);流式细胞检测Shh Ab可促进CD3、CD69分子表达,对CD5分子没有显著影响;Shh Ab增强PBMCs对MC细胞的杀伤。结论 Shh Ab可促进PBMCs化,增强PBMCs抗亚硝酰胺类化合物致癌机制的作用。 展开更多
关键词 sonic hedgehog蛋白 GES-1细胞 MNNG 淋巴细胞
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Primary cilia as a novel horizon between neuron and environment 被引量:1
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作者 Gregory W.Kirschen Qiaojie Xiong 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2017年第8期1225-1230,共6页
The primary cilium, a hair-like sensory organelle found on most mammalian cells, has gained recent attention within the field of neuroscience. Although neural primary cilia have been known to play a role in embryonic ... The primary cilium, a hair-like sensory organelle found on most mammalian cells, has gained recent attention within the field of neuroscience. Although neural primary cilia have been known to play a role in embryonic central nervous system patterning, we are just beginning to appreciate their importance in the mature organism. After several decades of investigation and controversy, the neural primary cilium is emerging as an important regulator of neuroplasticity in the healthy adult central nervous system. Further, primary cilia have recently been implicated in disease states such as cancer and epilepsy. Intriguingly, while primary cilia are expressed throughout the central nervous system, their structure, receptors, and signaling pathways vary by anatomical region and neural cell type. These differences likely bear relevance to both their homeostatic and neuropathological functions, although much remains to be uncovered. In this review, we provide a brief historical overview of neural primary cilia and highlight several key advances in the field over the past few decades. We then set forth a proposed research agenda to fill in the gaps in our knowledge regarding how the primary cilium functions and malfunctions in nervous tissue, with the ultimate goal of targeting this sensory structure for neural repair following injury. 展开更多
关键词 G protein-coupled receptor sonic hedgehog SEIZURE stroke stem cell NEUROGENESIS plasticity
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Smo蛋白及Gli-1蛋白在人子宫内膜癌组织中的表达及临床意义 被引量:1
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作者 张铮铮 刘筱 +3 位作者 徐浩 经莉 杜文升 陆晓媛 《徐州医科大学学报》 CAS 2017年第8期530-533,共4页
目的探讨Sonic hedgehog(Shh)信号通路中Smo蛋白及Gli-1蛋白在人子宫内膜癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测15例人正常子宫内膜、15例非典型增生子宫内膜及50例子宫内膜癌组织中Smo和Gli-1蛋白的表达情况。结果正常... 目的探讨Sonic hedgehog(Shh)信号通路中Smo蛋白及Gli-1蛋白在人子宫内膜癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测15例人正常子宫内膜、15例非典型增生子宫内膜及50例子宫内膜癌组织中Smo和Gli-1蛋白的表达情况。结果正常子宫内膜组织中,Smo和Gli-1蛋白不表达或轻度表达,非典型增生子宫内膜组织中Smo和Gli-1蛋白轻度表达,子宫内膜癌组织中Smo和Gli-1蛋白大多呈高表达,不同子宫内膜组织中Smo和Gli-1蛋白表达的差异均有统计学意义(P〈0.05)。相关性分析结果显示Smo和Gli-1蛋白在子宫内膜癌组织中的表达呈正相关(r=0.624,P〈0.05)。结论Shh信号通路相关蛋白Smo和Gli-1的高表达与子宫内膜癌的发生密切相关,可能与Smo蛋白高表达并上调其下游的转录因子Gli-1蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 免疫组织化学 sonic hedgehog信号通路 Smo蛋白 Gli-1蛋白
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脊椎动物神经管背-腹图式形成中形态素的调控作用综述
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作者 刘聪 徐鹏飞 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期543-556,共14页
脊椎动物中枢神经系统的形成依赖于胚胎早期神经管前-后、背-腹等图式的正确建立和后期细胞分化的精细调控。在神经管形成过程中,其前体细胞受到形态素浓度梯度的调控,沿着身体背-腹轴方向呈有规律的排列,其中最重要的2种形态素是骨形... 脊椎动物中枢神经系统的形成依赖于胚胎早期神经管前-后、背-腹等图式的正确建立和后期细胞分化的精细调控。在神经管形成过程中,其前体细胞受到形态素浓度梯度的调控,沿着身体背-腹轴方向呈有规律的排列,其中最重要的2种形态素是骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)和音猬因子(Sonic hedgehog,Shh)。从顶板分泌的BMP和从底板分泌的Shh在神经管中形成反向平行的浓度梯度,神经前体细胞在这些形态素的作用下获得其位置信息并逐渐决定其分化命运。本文系统总结了不同模式生物神经管发育的相关研究,着重综述了BMP和Shh这2种形态素在脊椎动物神经管背-腹图式形成中的重要作用。此外,对神经系统在体内发育机制的更深理解可为体外构建神经管类器官提供指导,因此,在本综述的最后,我们总结了神经管类器官培养的最新进展,并探讨了其未来发展策略。 展开更多
关键词 形态素 神经管发育 骨形成蛋白 音猬因子 类器官
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音猬因子在乳腺癌中的表达及其临床意义 被引量:2
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作者 姚春 邵力伟 +4 位作者 郑刚 刘锦修 郜朝霞 任德发 伍龙 《中华乳腺病杂志(电子版)》 CAS 2014年第5期24-27,共4页
目的观察音猬因子(Shh)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法收集2008年1月至2012年12月在武汉市第五医院手术治疗的乳腺癌患者的乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织各46例。采用实时荧光定量PCR法和免疫组织化学染色检测乳腺癌组织及癌... 目的观察音猬因子(Shh)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法收集2008年1月至2012年12月在武汉市第五医院手术治疗的乳腺癌患者的乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织各46例。采用实时荧光定量PCR法和免疫组织化学染色检测乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织中Shh mRNA和Shh蛋白的表达,并探讨Shh蛋白与乳腺癌临床病理特征的关系。计数资料比较采用χ2检验,计量资料比较采用独立样本t检验或单因素方差分析。结果乳腺癌组织中Shh mRNA表达水平明显高于癌旁正常乳腺组织(1.54±0.47比0.60±0.38,t=-12.02,P=0.000),Shh蛋白阳性表达率也明显高于癌旁正常乳腺组织[69.6%(32/46)比17.4%(8/46),χ2=25.48,P=0.000],并且其表达水平与乳腺癌的临床分期密切相关,患者临床分期越晚,Shh蛋白表达水平越高[Ⅲ期+Ⅳ期∶Ⅰ期+Ⅱ期:77.8%(28/36)比4/10,χ2=5.28,P=0.022]。结论 Shh信号在乳腺癌组织中被激活。Shh异常表达可能与乳腺癌的发生、发展相关,其可以作为一个潜在的肿瘤标志物应用于临床。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 猬蛋白质类 人类 病理学 临床
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恒河猴骨髓源性神经样细胞分化分子机制的基础研究
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作者 宋革 张阳 +3 位作者 郑炜炜 江儒章 刘炳乾 孙雪融 《中华显微外科杂志》 CSCD 北大核心 2011年第6期472-475,I0006,共5页
目的探讨神经发育音猬因子(SHH)诱导恒河猴骨髓间质细胞(BMSCs)向神经样细胞分化的丝裂原活化蛋白激酶信号分子变化。方法密度梯度离心法分离培养恒河猴骨髓干细胞,应用Western—blot方法检测SHH诱导细胞内信号蛋白变化,免疫组化... 目的探讨神经发育音猬因子(SHH)诱导恒河猴骨髓间质细胞(BMSCs)向神经样细胞分化的丝裂原活化蛋白激酶信号分子变化。方法密度梯度离心法分离培养恒河猴骨髓干细胞,应用Western—blot方法检测SHH诱导细胞内信号蛋白变化,免疫组化方法观察丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)特异性抑制剂对细胞诱导过程的影响。结果SHH诱导恒河猴BMSCs分化为神经样细胞分化过程,细胞内激酶p38在加入诱导液5min后即被激活,随着时间的延长持续升高,1h达到最高峰,诱导前、后p38的总量未见变化;而磷酸化的ERKI/2被抑制,5min时即开始减少,在2h内逐渐降低,诱导前、后ERKI/2的总量未见变化。结论MAPK激酶系统参与SHH诱导恒河猴MSCs分化为神经样细胞分化过程,p38被激活,而ERK被抑制。 展开更多
关键词 音猬因子 丝裂原活化蛋白激酶 恒河猴 骨髓间充质细胞 神经干细胞
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