牦牛睫毛毛囊的形态发生及其Shh与β-catenin的时空表达

以胚龄（Ed）45-240牦牛上睑皮肤为材料,同一个体背部皮肤作为对照,通过组织切片HE染色和免疫组化方法研究睫毛毛囊的形态发生过程,检测Shh和β-catenin在牦牛睫毛毛囊形态发生中的时空表达和互作规律。结果表明,在睫毛毛囊的形态发生中表皮-间充质相互作用以表皮为主导间充质随着表皮而变化,β-catenin从基板表皮开始表达,逐渐增强,从毛芽至形成毛囊维持高水平,间充质变化幅度较小;Shh则在睫毛形态发生中变化剧烈,刺激基板—毛芽—毛钉—毛囊。Shh与β-catenin睫毛形态发生中既有协同作用,也有各自的分工,Shh负责发出信号指导细胞分化决定细胞命运,β-catenin则主管维持细胞分化状态并大量增殖。提示两种信号的表达强度与精细分工差异可能是决定毛囊类型的关键因素。

Smo、Gli1在大鼠肝癌中的表达及维生素D3对Smo、Gli1的抑制

背景与目的:研究表明Sonic Hedgehog(Shh)信号通路与肿瘤的发生有重要联系,本实验通过检测大鼠肝癌模型中Smo、Gli1的表达,探讨其与肝癌发生发展的关系,了解维生素D3(Vitamin D3,VitD3)对Smo、Gli1的作用。方法:取48只5～6周龄的健康雄性SD大鼠,并随机分组。对照组:一般饲养的8只大鼠;DEN组:二乙基亚硝胺(diethylnirtosamine,DEN)诱癌的20只大鼠;DEN+VitD3组:DEN+VitD3干预的20只大鼠;分别于实验12周和20周处死各组一半数量的大鼠,采用Western blot检测大鼠肝脏中Smo、Gli1蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测两种蛋白mRNA的表达。结果:对照组中12周和20周大鼠肝脏的Smo、Gli1的mRNA及蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05);DEN组或DEN+VitD3组中20周的Smo、Gli1表达高于12周(P<0.05);相同实验周期:DEN的Smo、Gli1表达高于VitD3组(P<0.05);与其他两组相比,对照组表达最低(P<0.01)。结论:Smo、Gli1可能参与肝癌的发生发展,VitD3对Smo、Gli1具有一定抑制作用。

bFGF及Shh时序传递促进骨再生的实验研究

骨再生的治疗应着重于模拟机体自然的骨修复过程。我们假设在骨再生治疗的早期阶段应用促血管生成因子联合促骨再生因子来模拟自然的骨再生过程能更好更快的促进成骨。首先我们利用腺相关病毒分别携带这两个关键因子,构建了rAAV2-tet-off-bFGF and rAAV2-Shh,前者还加入了四环素调控系统,能通过四环素的添加来控制bFGF的表达。将这两种病毒共感染骨髓间充质干细胞,通过实时定量RT-PCT检测诸如核心结合因子1、碱性磷酸酶及骨钙素等成骨相关的标志因子,同时应用Western blot检测转基因的蛋白表达变化。接着,将这些转基因细胞与β-磷酸三钙颗粒复合,植入到大鼠的标准颅骨缺损中(直径为8mm)。30只SD大鼠平均分为6组,每组5只大鼠。A组植入两种转基因细胞及材料复合物;B组植入rAAV2-tet-off-bFGF转基因细胞及材料复合物;C组植入rAAV2-Shh转基因细胞及材料复合物;D组植入rAAV2-EGFP转基因细胞及材料复合物;E组植入单纯的骨髓间充质干细胞及材料复合物;F组为空白组,不植入任何细胞及材料。术后后5天,除B组外,每日在其它组的动物饮水中添加四环素的衍生物---强力霉素来关闭A组中bFGF的表达,并消除其它对照组的组间差异。术后4周收集颅骨标本,行Micro CT扫描及骨组织形态学分析。结果分析中我们发现,双因子共感染的细胞内成骨相关因子有显著的升高趋势(p<0.05),Micro CT及骨组织切片看见双因子时序调控的治疗组有相当显著的新骨再生,其中新生骨的面积及血管密度显著高于其它对照组,有统计学意义(p<0.05)。因此,我们得出结论,在骨再生初期的治疗过程中引入促血管生成因子及促成骨生成因子的时序协同作用能模拟机体自身的骨再生过程,能显著促进及加快新骨再生。

RT-PCR法研究soni chedgehog基因及其受体patched在小鼠牙胚钟状晚期的表达

目的 :判断sonichedgehog(Shh)基因及其受体patched(Ptc)是否在小鼠牙胚钟状晚期有表达。 方法 :用RT PCR法研究Shh及其受体Ptc在小鼠牙胚钟状晚期的表达。设计Shh及其受体Ptc的PCR引物 ;选取新生鼠第 1天 (P1)、第 3天 (P3)、第 7天 (P7)的牙胚为研究对象 ,提取总RNA。两步法进行RT PCR反应 ,10 g·L- 1 琼脂糖电泳观察。结果 :出生后第 1天、第 3天、第 7天小鼠牙胚RT PCR产物可见Shh、Ptc条带。结论 :Shh及其受体Ptc在小鼠牙胚钟状晚期有表达。

Sonic hedgehog调控T细胞分化和功能的研究

T细胞是体内重要的免疫细胞,T细胞介导的细胞免疫应答参与了肿瘤、自身免疫性疾病等疾病的病理生理过程.研究T细胞分化和功能调控机制将有助于阐明相关疾病的发病机制,并为疾病防治提供思路.近来有国外研究显示,早期胚胎发育过程中的关键成形素(mophorgen)——Sonic hedgehog(SHH)不仅调控T细胞发育的各个阶段,还对外周成熟T细胞的增殖、活化产生影响,因此可能是T细胞分化和功能实现的重要调控机制之一.本研究就SHH信号通路及其生物学功能、SHH对T细胞分化各个阶段的调控及功能的影响作一综述.

SHH在人牙胚钟状期的表达

目的观察信号分子Sonichedgehog(Shh)在人牙胚钟状期的表达,探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法采用免疫组化方法观察人牙胚钟状期中Shh的表达。结果在钟状早期,Shh在成釉细胞强阳性表达,成牙本质细胞亦可见Shh阳性信号,而牙乳头细胞、星网层和中间层细胞无明显表达。钟状晚期即硬组织形成期,Shh在成釉细胞的表达仍强于成牙本质细胞,成釉器星网层未见表达。

Shh信号通路对髁突肥大软骨细胞凋亡活性影响的研究

目的:探讨Sonic hedgehog(Shh)信号通路对髁突肥大软骨细胞凋亡活性的影响。方法:取正常髁突软骨3例,髁突肥大软骨6例,酶消化法分离培养其软骨细胞后,用Western blotting和Real-time PCR法分别检测两种软骨细胞中凋亡效应因子cleaved-caspase-3和BCL-2的表达;用免疫组化和Western blotting法比较正常髁突软骨和髁突肥大软骨中Shh和Smo的表达;用Shh、Cyclopamine、LY294002和U0126分别刺激两种软骨细胞,观察cleaved-caspase-3和BCL-2表达的变化。结果:与正常髁突软骨相比,髁突肥大软骨细胞中cleaved-caspase-3的表达水平降低,BCL-2 m RNA的表达水平升高(P<0.05);在髁突肥大软骨中Shh、Smo呈高表达;Shh刺激组软骨细胞的凋亡活性降低(P<0.05),Cyclopamine刺激组软骨细胞的凋亡活性增加(P<0.05),LY294002及U0126刺激组软骨细胞的BCL-2 m RNA表达水平均降低(P<0.05)。结论:Shh可通过介导PI3K/AKT和MAPK/ERK通路而抑制髁突肥大软骨细胞的凋亡,促进髁突肥大的病理进程。

骨髓间充质干细胞复合音猬因子/纳米晶胶原基骨修复骨缺损

目的:探讨骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells)复合音猬因子(sonic hedgehog,Shh)修饰的纳米晶胶原基骨(nano Hydroxyapatite/collagen,nHAC)修复大鼠股骨缺损的效果。方法:SD大鼠MSCs经成骨诱导后,种植于支架材料形成细胞支架复合物。SD大鼠30只制成股骨干5 mm节段性缺损,分为空白对照组:骨缺损处不植植入物,MSCs/nHAC组:植入MSCs/nHAC复合物,MSCs/Shh-nHAC组:植入MSCs/Shh-nHAC复合物。通过大体观察、X线放射学、组织学对比各组骨缺损修复情况。结果:SD大鼠MSCs在体外与nHAC,Shh-nHAC复合培养第7天,电镜扫描证实Shh-nHAC更有利于MSCs黏附、增殖。术后第6、12周放射学检查评价新骨生成各组间差异有统计学意义(P<0.05)。术后组织学检查各组新骨生成速度、生成量差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MSCs/Shh-nHAC复合物能够修复SD大鼠股骨缺损,修复效果明显优于MSCs/nHAC复合物。

音速波状蛋白促进骨髓间充质干细胞向多巴胺能神经元分化

目的探讨音速波状蛋白(Shh)促进人骨髓间充质干细胞(MSCs)体外定向分化为多巴胺能神经元样细胞的作用。方法体外分离、扩增和鉴定人骨髓MSCs。采用不同诱导方案诱导MSCs向神经元和多巴胺能神经元样细胞定向转化后,进行抗神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异烯醇化酶(NSE)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、酪氨酸羟化酶(TH)和多巴胺转运体(DAT)等免疫细胞化学染色,并计算阳性细胞百分率。结果实验组诱导后MSCs能分化为具有典型神经元形态的细胞,可见NSE、Nestin、GFAP、TH和DAT等神经细胞标志表达;对照组MSCs细胞形态无明显变化,上述特异性标志物表达均为阴性。实验2组(诱导方案含Shh)与1组(诱导方案不含Shh)的NSE、Nestin、GFAP阳性细胞百分率的差异无统计学意义,但实验2组TH和DAT阳性细胞百分率明显高于实验1组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论Shh可促进MSCs分化为多巴胺能神经元样细胞。

Shh信号阻断对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响

目的研究胚胎发育相关信号通路Sonic hedgehog(Shh)对人胰腺癌细胞系PANC-1生物学行为的影响。方法试验组以cyclopamine阻断Shh信号通路,并设立对照,四唑蓝(MTT)比色试验检测Shh信号通路特异性抑制剂cyclopamine对胰腺癌细胞系PANC-1增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞增殖指数(PI)和凋亡指数(AI),Transwell侵袭小室检测两组PANC-1细胞侵袭能力的变化。结果cyclopamine对PANC-1细胞株增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性。cyclopamine作用后使胰腺癌细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡增加;PANC-1的AI为15.2±0.54,PI为38.3±0.23(P<0.05)。Transwell侵袭小室检测对照组穿透细胞数为(96±4)个,而实验组穿透数为(43±5)个。结论shh信号分子对胰腺癌细胞的增殖起维持作用;通过特异性阻断该信号通路,可以抑制胰腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,并抑制癌细胞的侵袭能力。

自拟活血养肠汤治疗结肠黑变病疗效及对患者组织sHH,PTCH和GLI1表达水平影响

目的:观察自拟活血养肠汤对结肠黑变病(MC)的治疗效果及对患者组织SonicHedgehog蛋白(sHH),Patched基因(PTCH)和核转录因子1(GLI1)表达水平影响。方法:选取2017年11月~2021年1月在本院治疗的150例MC患者为研究对象,根据随机数字表法分为研究组(n=75)和对照组(n=75)。对照组给予益生菌、肠动力药物口服治疗,研究组给予自拟活血养肠治疗,两组患者疗程均为2个月。对两组患者治疗前后进行sHH,PTCH和GLI1免疫组化监测,采用Lynch半定量积分法对其进行评分;并对比两组治疗前后症状改善情况、治疗总有效率及不良反应。结果:治疗后,两组sHH、PTCH、GLI1蛋白表达程度均下降,且研究组均低于对照组(P<0.05);总有效率研究组(93.33%)高于对照组(73.33%)(P<0.05);治疗后,两组患者主要症状均有所改善,且研究组症状改善效果均优于对照组(P<0.05);治疗后,不良反应总发生率研究组(2.66%)低于对照组(13.33%)(P<0.05)。结论:综上所述,自拟活血养肠汤治疗MC,可改善患者肠胃不适等症状,减轻患者排便障碍,恢复肠胃功能,改善患者日常生活。

Sonic Hedgehog信号通路与胚胎发育和肝癌发生

Sonic hedgehog(SHH)信号通路是由SHH配体介导的信号转导途径。在哺乳动物胚胎期高度活化,调控着胚胎细胞的增殖、分化,在成体期高度保守。研究表明,成熟细胞SHH信号通路的异常激活参与了癌细胞的发生和发展,并且还发现了针对SHH通路的抑制剂。文章将回顾SHH信号通路在胚胎发育和肝癌发生中的作用,以及近几年SHH信号通路抑制剂的研究进展。从胚胎发育的角度,为寻求抗癌方法提供新的思路。

复方米诺环素奥硝唑温敏凝胶治疗老年慢性牙周炎疗效及对龈沟液中人类刺猬因子蛋白、基质金属蛋白酶-8水平的影响

目的:探讨复方米诺环素奥硝唑温敏凝胶治疗老年慢性牙周炎的疗效及对龈沟液中人类刺猬因子(Shh)蛋白、基质金属蛋白酶-8(MMP-8)水平的影响。方法:选择100例老年慢性牙周炎患者,按照随机数表法,分为研究组和对照组各50例,对照组在常规牙周基础治疗上给予米诺环素治疗,研究组在常规牙周基础治疗上给予复方米诺环素奥硝唑温敏凝胶治疗,均持续治疗4周。比较两组患者治疗4周后的临床疗效、治疗前及治疗4周后牙周袋深度(PD)、牙菌斑指数(PLI)、龈沟出血指数(SBI)、牙龈指数(GI)、龈沟液中Shh蛋白、MMP-8水平及治疗期间的不良反应。结果:治疗4周后,研究组的总有效率为96.00%,对照组为82.00%,研究组明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗4周后,两组患者PD、PLI、SBI、GI、龈沟液中Shh蛋白、MMP-8水平均明显降低,且研究组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗期间,两组不良反应情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:复方米诺环素奥硝唑温敏凝胶治疗老年慢性牙周炎的疗效显著,可有效改善牙周指标,降低龈沟液中Shh蛋白、MMP-8水平的表达。

早产新生大鼠高氧肺损伤Shh信号转导途径Smo和Gli1蛋白表达和意义

目的探讨高氧诱导新生大鼠急性肺损伤中Shh信号通路Smo和Gli1蛋白的表达及其意义。方法建立早产新生大鼠高氧肺损伤模型。实验组持续吸入氧体积分数大于95%的医用氧气,对照组吸入空气。分别留取第3、7、14天的肺组织,肺组织切片HE染色观察肺脏病理改变,应用Western blot技术检测肺组织Smo和Gli1蛋白的动态表达情况。结果实验组高氧暴露3天肺毛细血管开始充血、渗出;7天肺结构紊乱,炎性细胞浸润;14天肺泡融合,纤维增生,间隔增宽。实验组Smo和Gli1蛋白主要分布于支气管上皮、肺泡上皮细胞、血管内皮细胞及部分纤维组织。与对照组相比,实验组高氧第7天Smo蛋白表达显著增加[(0.423±0.056)比(0.061±0.008)],14天达高峰[(0.612±0.082)比(0.132±0.011)];Gli1蛋白于14天表达显著增加[(0.515±0.071)比(0.209±0.013)],P均<0.05。结论高氧可致新生大鼠肺泡结构紊乱和肺发育停滞,Smo和Gli1蛋白呈现高表达,这可能和高氧诱导的肺损伤和支气管肺发育不良的发生发展有关。

基于Sonic Hedgehog信号通路探讨化瘀通络灸促血管性痴呆大鼠髓鞘再生的作用机制

目的:观察化瘀通络灸对血管性痴呆(VD)大鼠胼胝体髓鞘再生相关SonicHedgehog(Shh)信号通路中Shh配体和Gli1转录因子的影响,探讨化瘀通络灸促VD大鼠髓鞘再生的作用机制。方法:Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、艾灸组、西药组,每组12只,采用改良的双侧颈总动脉闭塞法复制VD大鼠模型。艾灸组予以“神庭”“百会”“大椎”化瘀通络灸法治疗,每日1次,每次20min;西药组予氯马斯汀溶液(10mg/kg)灌胃,每日2次;两组均7d为1个疗程,共治疗3个疗程。Longa评分法评价各组大鼠神经功能损伤,Morris水迷宫实验检测各组大鼠学习记忆能力;实时荧光定量PCR法和Westernblot法检测各组大鼠胼胝体中Shh、Gli1mRNA和蛋白的表达;透射电镜法观察各组大鼠髓鞘超微结构和有髓神经轴突的数量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠Longa评分显著升高(P<0.01);与模型组比较,艾灸组与西药组Longa评分降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.01);与模型组比较,艾灸组及西药组大鼠逃避潜伏期显著缩短(P<0.01)。与假手术组比较,模型组Shh、Gli1mRNA和蛋白相对表达量降低(P<0.01);与模型组比较,艾灸组和西药组Shh、Gli1mRNA和蛋白相对表达量升高(P<0.01)。与假手术组比较,模型组胼胝体区髓鞘线圈样结构离散、模糊并出现部分膨出和崩解,有髓神经轴突数量显著减少(P<0.01),艾灸组和西药组髓鞘结构相比模型组得到明显修复,有髓神经轴突数量显著增加(P<0.01)。结论:化瘀通络灸可能通过调控Shh信号通路中Shh、Gli1的表达,促进脑缺血后少突胶质前体细胞的分化与成熟,从而促进VD后大鼠脑白质髓鞘再生,恢复脑白质功能。

Hedgehog信号通路在胚胎发育过程中的调控作用

Hedgehog信号通路首次在果蝇体内被发现,进化上呈高度保守状态。该通路在胚胎发育、机体组织器官的形成过程中发挥了重要作用,它的异常调节会导致一系列严重的疾病。本文主要就Hedgehog信号通路对神经系统、骨骼系统、消化系统、肺、颅面部发育的调控作用作一综述。