伤寒沙门菌Ⅵ型分泌系统对SopE表达影响的初步研究

为探索伤寒沙门菌Ⅵ型分泌系统(type 6 secretion system,T6SS)对SopE表达的影响,阐明其中的分子机制,本研究利用自杀质粒同源重组法构建携带sopE∷3×Flag的伤寒沙门菌野生株(WT-pBAD33)、T6SS功能分子缺陷株(ΔsciG-pBAD33)和回补株(C-ΔsciG),用构建成功的菌株感染巨噬细胞THP-1并在模拟巨噬细胞内环境(LPM培养基、微需氧)下培养,通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)与蛋白质印迹法(Western blot,WB)试验探索T6SS对SopE表达的影响,采用β-半乳糖苷酶活性检测来进一步验证sopE基因启动子的转录水平,Ni柱纯化T6SS功能蛋白SciG,电泳迁移率变动分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)研究SciG蛋白对sopE基因启动子的调控作用。结果显示:ΔsciG-pBAD33中SopE表达水平较于WT-pBAD33明显降低;SciG蛋白不能直接与sopE基因启动子区域结合。本研究结果表明,伤寒沙门菌T6SS影响了SopE的表达,但是其功能蛋白SciG不能直接调控sopE基因的表达。

伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白SopE对晚期沙门菌液泡稳定性的影响

为探讨伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白SopE对其入侵巨噬细胞后形成的晚期沙门菌液泡(Salmonella-containing vacuole,SCV)稳定性的影响,以伤寒沙门菌GIFU10007野生株(wild type,WT)为研究对象,利用自杀质粒pGMB151介导的同源重组法构建sopE突变株(ΔsopE);以pBAD33为载体,利用质粒回补法构建ΔsopE回补株(C-ΔsopE);利用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)原核表达质粒pET28-sfGFP构建GFP表达菌株WT/pBAD33∷pET28-sfGFP、ΔsopE/pBAD33∷pET28-sfGFP和C-ΔsopE/pET28-sfGFP。通过巨噬细胞THP-1胞内生存能力实验,研究SopE对伤寒沙门菌在巨噬细胞内生存能力的影响;利用免疫荧光和实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR),探究SopE对晚期SCV稳定性的影响;进一步采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹法探究SopE与自噬的关系。结果显示,ΔsopE/pBAD33∷pET28-sfGFP菌株在巨噬细胞内的生存能力显著低于WT/pBAD33∷pET28-sfGFP和C-ΔSopE/pET28-sfGFP菌株,sopE缺失导致晚期SCV的稳定性降低,且SopE能够抑制自噬相关基因的转录和表达。以上结果提示,SopE可能通过影响自噬而调节晚期SCV的稳定性。

肠炎沙门菌非编码小RNA RyhB调控SopE蛋白的表达研究

为研究肠炎沙门菌(SE)50336非编码小RNA(RyhB-1、RyhB-2)对毒力蛋白SopE的调控作用,利用pET原核表达系统表达SE50336 SopE蛋白,免疫BALB/c小鼠获得SopE蛋白的特异性多克隆抗体(多抗)并分析制备血清的特异性。通过Western-blot检测野生株SE50336、RyhB单缺失株(SE50336 ΔryhB-1、SE50336 ΔryhB-2),以及RyhB双缺失株(SE50336 ΔryhB-1ΔryhB-2)中SopE蛋白的表达水平,分析RyhB对SopE的调控作用。结果显示:成功构建重组质粒pET28a-sopE,转化BL21(DE3)感受态细胞后,在IPTG 0.3 mmol/L、温度37℃、转速220 r/min、诱导时间4 h的条件下,SopE蛋白在包涵体中表达;Western-blot结果显示制备的多抗可特异性检测肠炎沙门菌SopE蛋白;与野生株相比,RyhB单缺失株SopE蛋白表达量下降,双缺失株下降更明显,表明RyhB-1和RyhB-2均可上调SopE蛋白的表达。以上结果为进一步研究RyhB-1和RyhB-2对SopE的调控作用机制奠定基础。

肠炎沙门菌sopE2基因缺失株的构建及其生物学活性的鉴定

为研究sopE 2基因对肠炎沙门菌(Salm onella enteritidis)的生物学特性的影响及其与sopE功能差异,本研究以λ-Red介导的同源重组法构建了肠炎沙门菌C50336ΔsopE 2缺失株,并构建了以p BR322质粒介导的sopE2基因回复株。测定了肠炎沙门菌野生株、sopE 2缺失株及其回复株的基本生物学特性,包括对人肠上皮细胞Caco-2 BBE及小鼠巨噬细胞RAW 264.7的黏附、侵袭能力及对小鼠的半数致死量。结果显示,肠炎沙门菌sopE 2基因缺失对其生长、生化特性无影响;肠炎沙门菌C50336对Caco-2 BBE细胞的黏附率约为20%,侵袭率约为10%,对RAW264.7细胞的黏附率约为55%,侵袭率约为20%,sopE 2基因缺失对肠炎沙门菌C50336黏附能力无影响,侵袭能力有所下降,但无统计学差异;肠炎沙门菌C50336对小鼠的半数致死量为5.0×105CF U,sopE 2基因缺失株及回复株对小鼠的半数致死量均为3.2×105 CFU,表明sopE 2基因缺失对肠炎沙门菌的毒力无显著影响。本研究为进一步探讨sopE 2基因在肠炎沙门菌感染过程中的功能奠定了基础。

地下与露天复合采动影响下边坡岩体稳定性评价方法的研究

矿产资源的开采，有些是按地下与露天复合开采方式进行。依据采区的空间对应关系，两种采动影响域中的一部分相互重叠，导致采动效应相互作用和相互叠加，从而组成一个复合动态系统，因此边坡岩体变形机理更加复杂，与单一露天开采相比有较大的差异；然而，过去在处理此类问题时近似地应用单一露天采动影响下的分析方法，结果与实际情况存在一定差异；本文在理论分析的基础上，推导出边坡稳定性的评价方法，为此类矿山后续采矿设计及安全生产提供科学依据。

腈乙基淀粉接枝阳离子聚丙烯酰胺纸张增干强剂的制备及性能

以阳离子淀粉(CS)、丙烯腈(AN)、丙烯酰胺(AM)为主要原料,采用无皂乳液两步聚合法合成了腈乙基淀粉接枝阳离子聚丙烯酰胺纸张增强剂,对合成工艺条件等的影响进行了探讨。确定了较佳的合成条件为无皂乳液聚合,m(阳离子淀粉)∶m(丙烯酰胺)=1.0∶1.0,w(GMA)=0.8%~0.9%,反应温度80~85℃进行接枝共聚,反应时间5 h,得到的乳液型腈乙基淀粉接枝阳离子聚丙烯酰胺纸张增强剂对增加纸张环压强度、耐破度有明显效果,用量为绝干浆质量的0.4%时,可使纸的环压强度相对空白原纸提高29.5%,耐破度提高45%。对这种接枝共聚物的结构与性能进行了表征。

滇东北山区坡耕地降雨侵蚀力研究

降雨侵蚀力Ｒ值是建立土壤流失方程的最基本因子之一。通过对标准径流小区的实测土壤侵蚀量和侵蚀性降雨资料进行分析，确定出滇东北山区坡耕地降雨侵蚀力（Ｒ）的最佳计算指标为Ｒ＝Ｅ６０·Ｉ３０，计算和分析了本区域降雨侵蚀力（Ｒ）的时空分布特征。

航空用低压大电流功率变换器稳定性分析

本文对航空用低压大电流功率变换器系统稳定性进行分析,该变换器采用电流型PWM控制器UC3843,使用电流模式控制的DC-DC变换器,斜坡补偿电路是保证这种控制模式稳定工作的关键所在。本文从理论上对斜坡补偿的作用进行分析,并采用Saber软件对电流模式控制的变换器进行了仿真,通过仿真分析得到斜坡补偿和系统稳定性的关系。

大戟科六种植物的新名称和一种新组合

本文根据国内植物标本和文献资料，整理和研究了亚洲和美洲部分大戟科植物，对于该科６属植物不符合国际植物命名法规的６个种给予新名称，１种放错属和１个同种异名的植物．给予重新组合和订正，现整理成文，给予报道。

模糊概率理论对岩坡稳定性的评价

本文分析了边坡稳定性评价的概率方法中存在的不合理性。指出其中不但存在随机因素,还存在有模糊不确定因素。提出了边坡失稳破坏是一模糊事件的新观点。强调边坡稳定性评价应采用概率统计和模糊数学相结合的方法,得出边坡稳定性评价的模糊破坏概率模式,并应用于江西德兴铜矿大山村高边坡的稳定性评价中。

边坡治理工程中材料运输方式探讨

将材料安全、高效且经济地从堆场运送至坡面是边坡治理工程中的关键。围绕该问题,总结了国内边坡治理技术及材料,建立了护坡技术分类系统,将常见材料归纳为两大类及七小类,同时将常见的边坡材料运输模式归纳为5种。在此基础上,提出两阶段运输方案优选方法,第一阶段根据实际工况筛选出几种合适的运输方式,第二阶段对筛选出的运输方式采用加权评分法选出最优运输方案,该方法可实现运输方案的优化。

涤纶与雅赛尔色纺高支纱研究与产品开发

为研究开发涤纶与雅赛尔色纺高支纱线,采用1.56 dtex×38 mm规格原液着色涤纶纤维、1.22dtex×38 mm规格雅赛尔纤维混纺9.8 tex高支纱。通过介绍设计理念、灵感来源、原料选择,以及雅赛尔纤维染色研究、关键工序工艺研究与质量控制,实现高支纱在高档针织女装上的应用。结果表明,色纺高支纱产品附加值高,盈利空间大,市场前景广阔,可为相关领域的研究提供参考。

论抽象行政行为的司法审查

行政诉讼受案范围的拓展,是近年来理论界和实务界十分关注的问题。在抽象行政行为进入司法审查已成为趋势的情况下,审查范围、提起主体以及审查程序和方式逐渐成为焦点问题。在探讨抽象行政行为的司法审查问题时,从其审查范围、提起主体、审查程序、处理方式等具体制度设计和可行性方面进行重点分析,可对相应立法和实践提供有益参考。

某高边坡滑塌原因分析与治理工程探析

结合广东省广州市某高边坡滑塌案例,分析边坡滑塌的主要原因及工程重难点,提出应急处置方案,并通过滑塌治理方案,选型分析确定适合于本工程的治理方案。结合稳定性分析和现场实际监测成果,该治理方案安全可靠、治理效果较为明显。

边坡安全系数预测的机器学习算法比较研究

为了对边坡安全系数进行预测,选用重度、内聚力、摩擦角、边坡角、边坡高度、孔隙压力比这6个特征,以相同的训练样本分别建立Lasso回归模型、Ridge回归模型、决策树模型、Xgboost模型,并且以相同的测试样本预测边坡的安全系数,通过比较各样本的预测值与真实值的差距、计算预测值与真实值的均方根误差评价各模型的预测性能,并且对各模型进行对比分析。结果表明Xgboost模型较其他模型更为精确,能分析边坡的稳定性,有一定的工程参考和实用价值。

减毒鼠伤寒沙门菌三型分泌表达系统的构建及其特性

为开发新型重组减毒鼠伤寒沙门菌口服活疫苗载体,本研究以pYA3493质粒为基础,用鼠伤寒沙门菌sopE_(Nt100)基因及其启动子替代原有的P_(trc)启动子,构建沙门菌三型分泌表达载体pYA-sopE_(Nt100);再将质粒pYA-sopE_(Nt100)电转入沙门菌ΔcrpΔasd SL1344,构建减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100))三型分泌表达系统,研究其生物学特性,进一步将报告基因egfp克隆入sop E基因下游,构建重组菌株ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100)-egfp),感染Vero细胞,用Western blotting分析该系统递呈外源抗原的能力。PCR、酶切及测序结果表明,减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100))三型分泌表达系统构建成功;生物学特性鉴定结果表明,其血清型与亲本株Δcrp SL1344及野生株SL1344保持一致;其生化特性与亲本株基本相近,但与野毒株相比发生明显变化;生长速度也更为缓慢;重组菌株ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100))的LD50较野生株SL1344降低了7.0×104倍;Western blotting结果发现,重组菌培养上清中能检测到Sop E_(Nt100)-egfp融合蛋白(37 k Da);重组菌株感染Vero细胞后,可以同时检测到Sop E_(Nt100)-egfp融合蛋白(37 k Da)和EGFP蛋白(27 k Da)。以上结果证实,本研究成功构建了新型减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd(p YA-sop E_(Nt100))三型分泌表达系统,其能够有效递呈外源抗原,该重组菌株有潜力作为安全、稳定、高效表达外源基因的口服重组活疫苗载体。

基于弹性滑体的边坡失稳尖点突变模型研究

针对含软弱夹层边坡,其滑面介质的应变软化和水致弱化将对边坡稳定带来不利影响.本文通过分析边坡滑体变形及能量积聚对边坡稳定的影响,并根据土剪切变形发生的机理,提出了不同滑面介质位移与滑体高度的函数关系,推导了含软弱夹层边坡的修正力学模型和尖点突变模型.在构建边坡的尖点突变模型时,通过改变势函数积分的上下限把滑体对边坡稳定的影响考虑在内,推导了滑面在不同应变状态下与边坡失稳点对应滑体高度的关系式,分析了边坡出现滑体发生整体平面滑动失稳和滑体溃屈或弯折破坏失稳两种表现形式.通过突变分析发现,考虑滑体作用的边坡系统突发失稳必要条件为k≤2-3/m,对比简化滑体为刚体的突变分析大大缩小了判定边坡突变失稳的条件范围.本文模型是考虑滑体自身变形和能量积聚的初步尝试,为进一步研究边坡稳定奠定了基础.